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1、(10)授权公告号 CN 101564469 B (45)授权公告日 2011.03.23 CN 101564469 B *CN101564469B* (21)申请号 200810104722.6 (22)申请日 2008.04.23 A61K 36/815(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (73)专利权人 北京卓越同创药物研究院 地址 100054 北京市宣武区右安门内大街 72 号 7 号楼万博商厦 803 室 (72)发明人 王爱民 李伟 孟协中等 . 枸杞多糖化学研究的现状 .宁 夏农林科技 .1999,( 第 4 期 ),22-25. (54) 发明名称 一。
2、种枸杞多糖提取物及其药用用途 (57) 摘要 本发明公开了一种枸杞多糖提取物， 其特征 在于酸性多糖含量为 85 -95， 中性多糖为 1 -5。本发明采用水提醇沉、 超滤和离子交换 有机结合的方法， 提取得到枸杞多糖提取物 ； 药 理实验表明， 本发明枸杞多糖具有很好的治疗肿 瘤的作用。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 翟羽 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 6 页 CN 101564469 B1/1 页 2 1. 一种枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 85 -95， 中性多糖为 1 -5， 其制备方法为 ： (。
3、1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 40 -60， 静置， 沉淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 70 -80， 静置， 沉淀物加水溶解 完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 80 -90， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留大于 分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 ； (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行超滤， 保留小于分子量500000的溶 液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取。
4、物。 2.根据权利要求1所述的一种枸杞子多糖提取物， 其中酸性多糖90-95， 中性多糖 1 -3。 3. 根据权利要求 1 所述的一种枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 4. 根据权利要求 1 或 2 所述的一种枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应 用。 权 利 要 求 书 CN 101564469 B1/6 页 3 一种枸杞多糖提取物及其药用用途 技术领域 0001 本发明涉及医药技术领域， 具体涉及枸杞多糖及其药用用途。 背景技术 0002 对中药多糖的研究始于 50 年代末， 经过近年来对多糖不断的深入研究， 对其作用 又有了新的认识， 它参与细胞的各种生命现象的调节， 。
5、如免疫细胞间信息的传递和感受， 与 细胞表面的多糖体的介导密切相关， 大量的药理和临床研究表明， 多糖类化合物是一种免 疫调节剂， 它能激活免疫细胞， 提高机体的免疫功能， 而对正常细胞没有毒副作用， 还具有 抗肿瘤、 降血糖、 降血脂、 抗炎、 抗凝血、 抗辐射、 抗病毒等多方面的活性。 多糖的免疫调节多 糖对抗体的免疫调节作用， 主要通过以下几种方式和途径， (1) 激活巨噬细胞 ； (2) 激活网 状内皮系统 (RES) ； (3) 激活 T 和 B 淋巴细胞 ； (4) 激活补体许多植物多糖有激活补体的作 用， 补体蛋白上存在的识别点可识别多糖的结构。抗癌活性， 抗癌活性是多糖类化合物。
6、所 显示的重要生物活性。(1) 增强机体免疫功能而发挥抗肿瘤作用 ； (2) 诱生肿瘤坏死因子 (TNF) ； (3) 改变细胞膜的生化特性 ； (4) 抗自由基作用。( 河北职工医学院学报第 15 卷第 3 期 植物多糖的药理研究概况 李建恒郑富稳 )。大量的文献和专利报道枸杞多糖都具有 很好的抗癌活性， 作为中药的有效部位不应舍弃。但现有技术中保留的枸杞多糖是多糖中 的全部， 没有针对多糖进行深入的研究， 特别是药效作用不是很好或很弱的部分进行深入 的研究。 0003 现有文献记载了多糖的提取分离和纯化方法， 但大多数采用的柱层析的方法， 而 这种方法是无法工业化生产的， 造成资源的巨大浪。
7、费。 发明内容 0004 基于上述原因， 我们通过科学的实验， 确定枸杞多糖中酸性多糖和中性多糖是其 药效活性较好的部分， 将药效作用不好的碱性多糖去除， 在尽量保留有效部位的基础上， 将 无效部位尽量去除， 同时根据保留的有效部位的物质基础， 采用超滤和离子交换有机结合 的方法， 得到枸杞多糖有效提取物。 0005 本发明通过以下技术方案实现的。 0006 一种枸杞子多糖提取物， 其中酸性多糖含量为 85 -95， 中性多糖为 1 -5。 0007 其中优选的枸杞多糖提取物为酸性多糖 90 -95， 中性多糖 1 -3。 0008 一种枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 0009 一。
8、种枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 0010 一种枸杞子多糖提取物， 其制备方法为 ： 0011 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 40 -60， 静 置， 沉淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 70 -80， 静置， 沉淀物加水溶 解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 80 -90， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0012 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 说 明 书 CN 101564469 B2/6 页 4 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液。
9、浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 ； 0013 (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 0014 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0015 一、 检测分析 0016 多糖的检测分析 0017 运用高效液相色谱法进行检测分析。 0018 各种单糖标准品均为生化试剂， 其它为分析试剂。 0019 仪器 ： Beckman-332 型高效液相色谱仪， 岛津 RID-6A 示差折光检测器， 色谱柱 MICROSORB-MVTM86-700-C5NH25m。 0020 方法 ： 。
10、取样品加乙醇沉淀， 用高速离心仪进行离心， 离心沉淀物用蒸馏水溶解后， 进样 20ul。 0021 结果 ： 见表 1 ： 0022 表 1 制剂中有效成分含量比较 0023 糖含量 0024 组别 0025 mg/ 瓶 0026 本发明水针剂 121.3 0027 本发明输液剂 119.6 0028 本发明粉针剂 121.5 0029 结论 ： 通过以上检测分析实验表明， 本发明工艺具有实际意义。 0030 二、 药理实施例 0031 实施例 1 0032 对气虚型大鼠肝肿瘤抑制作用 0033 实验动物 ： 大鼠， 150g 180g， 雌雄不分。( 由沈阳药科大学中药药理教研室根据 文献造。
11、成气虚模型 ) 0034 实验药物 ： 本发明各组枸杞多糖提取物 ( 多糖类有效部位制备而成， 北京药物药 物开发有限公司实验室提供 ) ； 黄芪多糖粉针剂 ( 山西中医研究院提供 ) ； 枸杞碱性多糖 ； 生理盐水。 0035 实验方法 ： 取大鼠作 W256 的肝内接种， 接种 7 天后， 用戊巴比妥钠按 35mg/kg 的 剂量腹腔注射麻醉， 固定， 剖腹暴露肝， 测量肝上肿瘤表面最大径 (a) 和最小径 (b)， 按 (a*b2)/2 V( 肿瘤体积 )。分离胃、 十二指肠动脉、 肝总动脉和肝固有动脉， 结扎胃、 十二 指肠动脉远端， 以银夹阻断肝总动脉， 于手术放大镜下在胃十二指肠动。
12、脉上切口并插入外 径 0.3mm 导管后再送入肝固有动脉， 然后按实验分组分别注入受试药物， 给药剂量为 12mg 有效部位 /kg， 生理盐水等容不等量， 术后拔管结扎胃十二指肠动脉， 放开肝总动脉银夹， 再 缝合切口， 将大鼠置于动物室待苏醒， 继续饲养观察， 手术后 8 天， 按上法检测肿瘤体积， 结 果见表 1 ： 0036 表 1 本发明提取物对气虚型大鼠肝肿瘤抑制作用 0037 说 明 书 CN 101564469 B3/6 页 5 0038 与生理盐水组比较 *P 0.05，*P 0.01 0039 按上述方法， 在进行实验， 观察大鼠存活天数， 见表 2 0040 表 2 大鼠。
13、存活天数比较 0041 存活天数 0042 组别 0043 ( 天 ) 0044 生理盐水 15.91.6 0045 黄芪多糖粉针剂 20.31.5 0046 本发明枸杞多糖提取物 24.62.4 0047 枸杞碱性多糖 16.21.4 0048 实施例 2 0049 物理、 化学和生物因素均能诱发癌症， 但人癌发病原因的 80 -90认为是环境 化学物质引起的。 0050 对二乙基亚硝胺 (DENA) 诱发大鼠肝癌的抑制 0051 实验动物 ： 大鼠 30 只， 120g 左右， 雌雄不分。 0052 实验药物 ： 本本发明各组枸杞多糖提取物 ( 多糖类有效部位制备而成， 北京药物 药物开发。
14、有限公司实验室提供 ) ； 黄芪多糖粉针剂 ( 山西中医研究院提供 ) ； 枸杞碱性多 糖 ； 生理盐水。 0053 实验方法 ： 用含二乙基亚硝胺 (DENA) 的饮水喂养大鼠， 36 周得原发性肝癌， 按照 实施例 1 进行实验， 实验结果见表 3 ： 0054 表 3 本发明提取物对肿瘤的抑制 0055 0056 与生理盐水组比较 *P 0.05，*P 0.01 0057 表 4 大鼠存活天数比较 0058 存活天数 说 明 书 CN 101564469 B4/6 页 6 0059 组别 0060 ( 天 ) 0061 生理盐水 9.81.9 0062 黄芪多糖粉针剂 13.62.3 0。
15、063 本发明枸杞多糖提取物 16.71.4 0064 枸杞碱性多糖 10.20.9 0065 三、 制备实施例 0066 实施例 1 0067 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 40， 静置， 沉 淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 70， 静置， 沉淀物加水溶解完全， 过 滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 80， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0068 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 。
16、； 0069 (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 0070 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0071 枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 85， 中性多糖为 5。 0072 枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 0073 枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 0074 实施例 2 0075 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 60， 静置， 沉 淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 80， 静置， 沉淀。
17、物加水溶解完全， 过 滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 90， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0076 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 ； 0077 (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 0078 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0079 枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 95， 中性多糖为 1。 0080 枸杞子多。
18、糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 0081 枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 0082 实施例 3 0083 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 50， 静置， 沉 淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 75， 静置， 沉淀物加水溶解完全， 过 滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 85， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0084 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 ； 0085 (3)。
19、洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 说 明 书 CN 101564469 B5/6 页 7 0086 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0087 枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 90， 中性多糖为 1。 0088 枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 0089 枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 0090 实施例 4 0091 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 45， 静置， 沉 淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙。
20、醇使含醇量达到 60， 静置， 沉淀物加水溶解完全， 过 滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 90， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0092 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 ； 0093 (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 0094 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0095 枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 86， 。
21、中性多糖为 4。 0096 枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 0097 枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 0098 实施例 5 0099 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 55， 静置， 沉 淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 80， 静置， 沉淀物加水溶解完全， 过 滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 90， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0100 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂。
22、， 保留洗脱液 ； 0101 (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 0102 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0103 枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 95， 中性多糖为 3。 0104 枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 0105 枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 0106 实施例 6 0107 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 60， 静置， 沉 淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 85。
23、， 静置， 沉淀物加水溶解完全， 过 滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 90， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0108 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 ； 0109 (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 0110 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0111 枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 93， 中性多糖为 2。 0。
24、112 枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 说 明 书 CN 101564469 B6/6 页 8 0113 枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 0114 实施例 7 0115 (1) 取枸杞子， 加水提取， 提取液浓缩， 浓缩液加乙醇使含醇量达到 50， 静置， 沉 淀物加水溶解完全， 过滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 70， 静置， 沉淀物加水溶解完全， 过 滤， 滤液加乙醇使含醇量达到 90， 静置， 沉淀物， 干燥， 得到干燥物 ； 0116 (2) 取干燥物， 用水溶解完全， 用截取分子量为 10000 的超滤装置进行超滤， 保留 大于分子量 10000 的溶液， 将溶液浓缩， 浓缩液上阴离子交换树脂， 保留洗脱液 ； 0117 (3)洗脱液用截取分子量为500000的超滤装置进行草绿， 保留小于分子量500000 的溶液， 浓缩， 干燥， 得到枸杞子多糖提取物。 0118 注 ： 上述离子交换树脂按照现有技术进行选择。 0119 枸杞子多糖提取物， 其特征在于酸性多糖含量为 94， 中性多糖为 1.5。 0120 枸杞子多糖提取物为活性成分制备的药物制剂。 0121 枸杞子多糖提取物在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。 说 明 书 。