一种雨生红球藻提取物制剂、 其制备方法和用途 【技术领域】
本发明涉及雨生红球藻提取物制剂、 其制备方法和用途。背景技术 雨生红球藻 (Haematococcus) 是一种单细胞绿藻， 在逆境条件下可积累大量的虾 青素， 被公认为自然界天然虾青素的主要来源。采用超临界流体 CO2 技术的雨生红球藻提 取物除富含有天然抗氧化剂虾青素外， 还含有维生素 B1、 B2、 B6、 B12、 单不饱和脂肪酸、 多不 饱和脂肪酸等人体必需的营养成分。
虾青素 (astaxanthin) 是一种红色的天然类胡萝卜素， 具有清除氧自由基的强大 能力， 其抗氧化活性是维生素的 550 倍、 类胡萝卜素的 10 倍， 被誉为 “超级抗氧化剂” (1、 Nakagawa K， Kang S， Park D， et al.Inhibition bybeta carotene and astaxanthin of NADPH dependent mi crosomal phospholipidperoxidation[J].Nutrit Sci Vitam in， 1997， 43， 3： 345 ； 2、 Naguib YMA.Antioxidant activities of astaxanthinand related carotenoids[J].Agric FoodChem， 2000， 48， 1150.)， 对 人 体 绝 对 安 全 (1、 Nishikawa Y， Minenaka Y， Ichimura M.Physiological and biochemical effects of carotenoid beta caroteneand astaxanthin on rat[J].Kashien Daigku Kiya ， 1997 ， 25 ： 19 ； 2、 AquasearchInc Technical Report TR.3005.001.Haematococcus pluvialis and astaxanthinsafety for human consumption， 1999 ； )。动物和临床试验研究证明， 虾青 素有增强免疫功能、 抑制肿瘤发生、 预防心血管疾病、 防止皮肤衰老、 维护眼睛及中枢神经 系统健康等多种生物功能 (Tanaka T， Morishita Y， Suzui M， et al.Chemoprevention of mouse urinary bladder carcinogenesisgy naturallyoccurring caroteniod astaxanthin[J].Carcing Enesis， 1994， 15(1) ： 15-19 ； Jyonouchi， et al.2000)。
维生素 B1 能促进血液循环、 辅助盐酸制造、 血流形成及糖类代谢 ； 有助于人体感 知， 并使脑功能发挥最佳状态 ； 对能量代谢、 生长、 食欲、 学习能力均起着积极的作用 ； 帮助 人体抵抗衰老及烟酒对人体的不利影响。维生素 B2 是红细胞形成、 抗体制造及细胞呼吸作 用及生长必须的。维生素 B6 有利于盐酸合成及脂肪、 蛋白质的吸收， 协助维持体内钠钾平 衡， 促进红细胞的形成 ； 另外还有利于解决体内水分滞留带来的不便， 帮助脑和免疫系统发 挥正常的生理机能 ； 控制细胞增长和分裂的 DNA、 RNA 等遗传物质的合成也离不开 B6。B6 还 可以活化体内的许多种酶， 并有助于 B12 的吸收。维生素 B12 是抗贫血所需的， 它可协助叶 酸调节红细胞的生成并有利于铁的利用 ； 而且消化机能的正常， 食物的消化和蛋白质的合 成， 脂肪和糖类的代谢均需要维生素 B12。 此外 B12 还有助于防止神经损伤， 维持生育能力， 促进正常的生长发育及防止神经脱髓鞘的作用。
单不饱和脂肪酸具有降血糖作用 ( 施万英， 徐甲芬， 蔺淑贤 . 单不饱和脂肪酸肠 内营养制剂 (Clucema) 用于 2 型糖尿病 [J]. 中国临床营养杂志， 2004， 12(1) ： 39-42) ； 调 节血脂作用 ( 王军波， 肖颖， 梁学军， 等 . 膳食脂质对中老年胆固醇血症患者血清胆固醇的 影响 . 卫生研究， 2000， 29(3)) 及降低胆固醇作用等。多不饱和脂肪酸对动脉血栓形成和
血小板功能有明显影响， 防止血栓形成 ( 钟耀光 . 功能食品 [M]. 北京 ： 化学工业出版社， 2004， 8： 121-128.)。 大量实验表明， 多不饱和脂肪酸具有较好的抗癌作用， 其能通过降低胆 固醇水平， 抑制癌细胞生长 ； 并参与细胞基因表达调控， 提高机体免疫能力， 减少肿瘤坏死 因子 ； 多不饱和脂肪酸还能大大增加细胞膜的流动性， 有利于细胞代谢和修复， 阻止肿瘤细 胞的异常增生 (1、 钟耀光 . 功能食品 [M]. 北京 ： 化学工业出版社， 2004， 8： 121-128.2、 刘冀 红， 曹伟新 .ω-3 多不饱和脂肪酸在肿瘤防治中的意义 [J]. 肠外与肠内营养， 2004， 11(1) ： 54-56.)。
由此可见， 雨生红球藻提取物中含有大量对人体有益和人体必需的功能成分， 其 用于药品、 保健品原料， 应用前景十分广阔。
文献报道的红球藻提取方法有溶剂法、 超临界法、 微波法、 超声法等， 而微波法、 超 声法很少用于规模生产。由于虾青素油是雨生红球藻中主要的功效性成分， 具有较强抗氧 化性， 对光、 热、 氧、 湿敏感不稳定， 因此采用通常溶剂的提取油工艺极易造成氧化变质， 若 改成低温浸出法， 化学试剂耗用量较大， 油中类脂物及伴随物多给精炼带来困难且有溶剂 残留。
国外利用以虾青素为主要功效成分的红球藻提取物制备保健食品及化妆品， 其产 品定位主要是眼睛、 免疫系统、 皮肤保护、 降低密度脂蛋白等方面。目前开发上市的产品主 要有口服制剂 ( 软胶囊、 硬胶囊 )、 化妆品 ( 唇膏、 面部护理霜、 防晒霜、 防皱霜 )， 其功能定 位主要是抗氧化 ( 延缓衰老 )、 营养皮肤、 缓解运动疲劳、 降低密度脂蛋白、 防止皮肤免受紫 外线损伤等。 产品主要以美国 Twinlab 公司保健胶囊、 美国 Cyanotech 公司的 Bioastin、 美 国 Aquasearch 公司的 Astafactor Sport Formula、 日本 Natureal 公司的 Astacure 系列化 妆品为代表。
但是， 由于雨生红球藻提取物中的有效成分虾青素易氧化， 目前已有的雨生红球 藻提取物口服制剂产品的稳定性还有待进一步提高。 发明内容 本发明的目的是提供一种雨生红球藻提取物软胶囊。
本发明的另一个目的是提供上述雨生红球藻提取物软胶囊的制备方法及用途。
本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。
一方面， 本发明提供一种雨生红球藻提取物软胶囊， 其内容物包括雨生红球藻提 取物和油相， 其中雨生红球藻提取物中含有的虾青素与油相的质量体积配比 (g/mL) 为 1 ～ 10 ∶ 100， 优选为 1 ～ 5 ∶ 100， 更优选为 1.5 ～ 4.5 ∶ 100， 最优选为 2.5 ～ 3.5 ∶ 100。
优选地， 所述雨生红球藻提取物中虾青素的含量为 2 ～ 20％ (w/w)， 优选为 3 ～ 15％ (w/w)， 更优选为 5 ～ 10％ (w/w)。
优选地， 所述雨生红球藻提取物是通过以 CO2 为萃取介质的超临界流体萃取方法 制备的。
优选地， 所述超临界流体萃取方法的条件如下 ： 温度为 60 ～ 80 ℃， 压力为 35 ～ 45MPa， CO2 流速为 15 ～ 25L/h， 时间为 2 ～ 4 小时。
优选地， 所述雨生红球藻提取物软胶囊内容物中的油相包括雨生红球藻提取物中 含有的自身油相和外加油相。
优选地， 所述外加油相为脂溶性食品添加剂。
优选地， 所述外加油相选自芝麻油、 大豆油、 葵花籽油、 花生油、 核桃油、 红花籽油、 橄榄油、 米糠油、 山茶籽油、 天然维生素 E、 辛葵酸甘油酯、 脂溶性迷迭香提取物中的一种或 几种。
另一方面， 本发明提供了制备上述软胶囊的方法， 所述方法包括以下步骤 ： 1) 将 雨生红球藻提取物与外加油相按配比置于容器中， 充入 N2， 于 25℃下超声 25min ； 2) 于 37℃ 下恒温水浴震荡 50min ； 3) 配制胶液并制成软胶囊。
优选地， 所述胶液包括按重量百分比计的以下组成 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯 水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊金丙酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。
此外， 本发明还提供了上述软胶囊在制备用于抗氧化、 增强免疫功能、 抑制肿瘤发 生、 预防心血管疾病、 防止皮肤衰老、 维护眼睛和中枢神经系统健康的药物或保健品中的用 途。
本发明采用超临界流体 CO2 制备的雨生红球藻提取物， 其中含有的活性成分虾青 素含量较高。可以在该雨生红球藻提取物中加入外加油相加工成软胶囊制剂， 制剂中的油 相包括雨生红球藻提取物中自身的油相 ( 提取物中除含有虾青素外， 其余为自身油相 )， 以 及外加油相两部分， 其中的外加油相采用脂溶性食品添加剂， 包括但不局限于辛葵酸甘油 酯、 脂溶性迷迭香提取物、 芝麻油、 大豆油、 葵花籽油、 花生油、 核桃油、 红花籽油、 橄榄油、 米 糠油、 山茶籽油、 天然维生素 E 等中的一种或几种。本发明所提供的软胶囊， 其内容物雨生 红球藻提取物具有抗氧化、 免疫调节、 缓解疲劳等功能， 且稳定性高、 生物利用度高， 而软胶 囊可避免内容物的不良气味和口味， 避免了内容物与空气及光照的接触， 起到了增加稳定 性、 改善生物利用度的作用， 并且所提供的制备工艺便于操作， 成本低， 便于推广应用。
与现有工艺技术比较， 本发明具有以下突出优点和效果 ：
超临界流体 CO2 法提取天然虾青素油具有操作简单、 能耗低、 质量可控、 保护易氧 化物质等特点， 适用于药品、 保健食品及食品生产原料加工， 可有效避免将藻粉中重金属、 微生物带入到提取物中， 提取物不存在溶剂残留问题， 可生产出高品质雨生红球藻提取物， 满足药品、 保健食品和普通食品研发生产需求。本发明采用的提取方法可使虾青素的收率 达到 90％以上， 同时还可提取到维生素 B1、 B2、 B6、 B12、 单不饱和脂肪酸、 多不饱和脂肪酸等 人体必需的营养成分。
将按上述方法提取的雨生红球藻提取物制备成软胶囊， 可避免内含的虾青素与空 气及光接触， 同时增加油相对虾青素的保护作用， 从而有效防止虾青素被氧化变性， 显著提 高其稳定性。此外， 本发明还对软胶囊中包含的雨生红球藻提取物中含有的虾青素与油相 的质量体积配比 (g/mL) 进行了筛选和优化， 发现当二者配比为 1 ～ 5 ∶ 100， 尤其是 1.5 ～ 4.5 ∶ 100 时， 可以显著提高软胶囊中虾青素的稳定性， 对于虾青素在抗氧化、 增强免疫功 能、 抑制肿瘤发生、 预防心血管疾病、 防止皮肤衰老、 维护眼睛和中枢神经系统健康中的应 用有重要意义。 附图说明
图 1 为本发明实施例 1 中考察的萃取温度对虾青素转移率影响的曲线。图 2 为本发明实施例 1 中考察的萃取压力对虾青素转移率影响的曲线。
图 3 为本发明实施例 2 中考察的虾青素浓度小于 1.0％ (w/v) 的样品浓度 - 时间 变化曲线。
图 4 为本发明实施例 2 中考察的虾青素浓度在 1.0 ～ 5.0％ (w/v) 之间的样品浓 度 - 时间变化曲线。
图 5 为本发明实施例 2 中考察的虾青素浓度大于 5.0％ (w/v) 的样品浓度 - 时间 变化曲线。 具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解， 这些实施例仅 用于说明本发明， 其不以任何方式限制本发明的范围。
以下各实施例中， 虾青素的含量采用以下方法来测定 ：
采用丙酮对所制备的雨生红球藻提取物中游离虾青素及虾青素酯进行提取， 提取 液以丙酮作为空白对照， 通过吸光度值估算总类胡萝卜素及虾青素含量。再将一定量的雨 生红球藻提取物经胆甾醇酯酶水解， 使其中的虾青素酯水解为游离虾青素， 经 HPLC 液相色 谱仪测定准确计算总虾青素含量。 1) 所使用的试剂如下 ：
无水硫酸钠 ： 分析纯 ；
十水硫酸钠 ： 分析纯 ；
石油醚 (60 ～ 90℃ ) ： 分析纯 ；
氯仿∶甲醇 (50 ∶ 50) ；
丙酮 ： 分析纯， 色谱纯 ；
虾青素标准品 (Sigma A 9335) ： 含量 95％ ；
Tris-HCl(0.05M pH 7.0) 配制方法如下 ： 准确称取 Tris 粉 6.057g 溶解于 800mL 去离子水中， 用稀盐酸调 pH 值至 7.0， 将调好 pH 值的 Tris-HCl 转移至 1000mL 容量瓶中， 用 纯化水定容至刻度摇匀即得 ；
荧光假单胞菌中提取的胆甾醇酯酶 (Sigma C-9281)， 其溶液 (20 单位 /mL) 配制 方法如下 ： 取 100 单位 / 瓶的胆甾醇酯酶， 用 Tris-HCl(0.05M pH7.0) 溶解并转移至 5mL 容 量瓶中， 加 Tris-HCl 稀释至刻度， 摇匀即得。配制好的胆甾醇酯酶溶液， 根据每次使用情 况采用微量移液器分装入适当避光容器中， 通常以 0.4mL 或 0.6mL 为单位进行分装， 密封 于 -20℃保存， 在规定包装及存储条件下， 有效期为 6 个月。
2) 所使用的仪器如下 ：
(1) 分光光度计 (GBC UV/VIS 916 可见紫外分光光度计， 生产厂商澳大利亚 GBC 公 司)；
(2) 高效液相色谱仪 (Agilent 1100 型高效液相色谱仪， 生产厂商美国 Agilent 公 司 )。
3) 供试品溶液的制备
(1) 样品溶液① ： 称取所制备的雨生红球藻提取物约 20mg， 精密称定。置于 25mL 容量瓶中， 加少量丙酮轻轻振摇使溶解， 加丙酮定容至刻度， 摇匀。精密吸取 1mL 至 50mL 容
量瓶中， 用丙酮定容至刻度， 摇匀即得。
(2) 样品溶液② ： 精密量取所制得样品溶液① 1.5mL， 置于 10mL 离心管中， 加 Tris-HCl 1.0mL， 混匀， 置 37℃水浴中孵育 2 分钟， 加 100μL 胆甾醇酯酶溶液， 混匀， 充氮气 15 秒排除离心管空气， 用自封口膜将离心管口密封。于 37℃水浴中孵育 45 ～ 50 分钟， 每 15 分钟摇动一次离心管。加 2.0mL 石油醚、 0.5g 十水硫酸钠， 强力涡流 30 秒， 离心 5 分钟 (3500rpm)。移取石油醚层至盛有 1.0g 无水硫酸钠的离心管中。再次加入 1.0mL 石油醚重 复提取操作。合并石油醚层至盛有 1.0g 无水硫酸钠的离心管中， 摇匀后静置， 移取石油醚 层至另一离心管， 再用 2mL 石油醚清洗盛无水硫酸钠离心管， 将石油醚层移入同一离心管， 用氮气吹干， 轻轻摇动或旋转离心管至样品完全干燥。用 1.5mL 氯仿 - 甲醇 (50 ∶ 50) 液 稀释， 超声使混合均匀， 离心 5 分钟 (3500rpm)， 0.45μm 微孔滤膜过滤， 取续滤液， 即得。
(3) 标准液 ： 精密称取虾青素标准品 7.5mg 置于 25mL 棕色容量瓶中， 用少量氯仿 溶解， 加丙酮定容至刻度， 摇匀， 制得标准品储备液。精密量取 1mL 移至 100mL 容量瓶中， 加 丙酮定容至刻度， 摇匀， 即得。
4) 分光光度法
以丙酮溶液作空白， 用分光光度计于 474nm 处读取样品溶液①吸光度， 按下式估 算类胡萝卜素和虾青素含量 ( 其中 210 为吸光系数， 92％为虾青素比例系数 ) ：
实施例 1 红球藻提取物的制备
本实施例采用本发明所提供的超临界 CO2 流体萃取方法制备雨生红球藻提取物， 具体包括以下操作步骤 ：
1) 雨生红球藻的破壁
A、 破壁设备
采用高压均质机进行破壁处理。
B、 根据现有高压均质机处理能力及处理效果， 一次藻泥最大处理量为 400 ～ 2 500kg( 相当于 3000m 培养系统一次培养所采收的全部藻泥量 )。
C、 控制参数如表 2 所示。
表 2 红球藻红色孢子破壁工艺控制参数
D、 红球藻孢子破壁过程除满足以上控制参数要求外， 须严格控制物料损耗， 具体 措施为 ：
(1) 保证高压均质机的设备性能状态 ；
(2) 因设备原因随冷却水排水管中排除的藻泥溶液用藻泥桶等容器收集后 ( 可经 过静置去除上清液 ) 合并至物料中再次进入破壁环节 ( 过程 ) ；
(3) 加料及更换接料桶时避免滴、 漏等情况。
2) 超临界 CO2 流体萃取方法中工艺条件的筛选
将已破壁的雨生红球藻粉 500g 装入超临界萃取设备 (HA121-50-02 型萃取装置， 江苏华安科研仪器有限公司 ) 的萃取釜中， 设置萃取釜和分离釜温度和压力， 开启设备， 开 通 CO2 气罐， 同时给萃取釜加温加压， 当温度达到萃取温度， 压力达到萃取压力时， 保温保 压， 同时控制 CO2 流速 (15 ～ 25L/h)， 萃取 2 ～ 4 小时。
a) 温度的影响
考虑到虾青素在高温下 ( ≥ 90℃ ) 会影响其活性， 而温度过低又不利于萃取， 故采 用 40、 45、 50、 55、 60、 65、 70、 75、 80、 90℃十个水平开展温度工艺优化考察， 在其他条件不变 的情况下 ( 压力 45MPa， CO2 流量 20L/h， 萃取时间 2 ～ 4 小时 )， 以虾青素转移率 ( 即雨生 红球藻粉中所含虾青素转移到提取物中的比例 ) 为考察指标， 结果见表 3。
表 3 温度对虾青素转移率影响研究结果
编号 1 2 3温度 (℃ ) 40 45 50虾青素转移率 (％ ) 15.1 15.2 15.78101978975 A CN 101978980说4 5 6 7 8 9 10 55 60 65 70 75 80 90明书21.3 73.1 75.4 77.9 82.7 72.3 22.47/13 页按照表 3 中的结果作出温度对虾青素转移率影响曲线图， 具体如图 1 所示。 从图 1 可知， 在其他条件不变的情况下， 温度低于 55℃时， 随温度升高， 虾青素转移率变化不明显 ； 温度在 60 ～ 75℃时， 随温度升高虾青素转移率升高明显， 温度高于 80℃， 转移率明显下降。 因此， 最佳萃取温度为 60 ～ 80℃。
b) 压力的影响
虾青素属于色素， 结构式中含有两个羟基， 在 CO2 中溶解度较低， 需要较高的操作 压力。但压力升高， 对设备要求也会提高， 成本也会随之上升。在其他条件不变的情况下 ( 温度 70℃， CO2 流量 20L/h， 萃取时间 2 ～ 4 小时 )， 选取 20、 30、 35、 40、 45、 50MPa 共 6 个水 平， 开展压力对虾青素转移率影响试验， 结果见表 4。
表 4 压力对虾青素转移率影响研究结果
编号 1 2 3 4 5 6
压力 (MPa) 20 30 35 40 45 50虾青素转移率 (％ ) 0 18.3 52.4 61.5 73.1 76.2按照表 4 中的结果作出压力对虾青素转移率影响曲线图， 具体如图 2 所示。 从图 2 可知， 在其他条件不变的情况下， 虾青素转移率随压力升高而增大， 压力低于 20MPa 时无法 提取虾青素， 压力升至 35MPa 时虾青素转移率升高明显， 至 45MPa 时趋于平缓。因此， 最佳 萃取压力应在 35 ～ 45MPa。
3) 雨生红球藻的优选制备例将破壁的雨生红球藻粉 500g 装入超临界萃取设备的萃取釜中， 设置萃取釜和分 离釜温度和压力， 开启设备， 开通 CO2 气罐， 同时给萃取釜加温加压， 当萃取温度达到 70℃， 萃取压力达到 45MPa 时， 保温保压， 同时控制 CO2 流速 (15 ～ 25L/h)， 萃取 2 ～ 4 小时后， 从 分离釜 (50℃， 45MPa) 出口阀接收雨生红球藻提取物共 125g。测定该雨生红球藻提取物中 虾青素的质量百分含量为 9.66％。
实施例 2
本实施例为本发明提供的软胶囊中， 雨生红球藻提取物与外加油相质量体积配比 的优选确定过程， 分为以下几方面说明该问题 ：
A、 雨生红球藻提取物制备软胶囊添加外加油相的目的
雨生红球藻提取物由功效成分 ( 虾青素 )+ 自身油相构成， 其中虾青素含量为 5 ～ 10％ (w/w)。 由于虾青素含量过高， 加之自身并不稳定， 不适宜直接制成软胶囊产品， 因此需 要添加外加油相， 其目的和作用如下 ：
(1) 作为稀释剂 ： 稀释提取物中虾青素含量至规定浓度， 确保符合软胶囊虾青素 含量规格 ；
(2) 作为稳定剂 ： 雨生红球藻提取物自身不稳定， 其虾青素含量受光照、 空气、 温 度影响易氧化。加入适宜种类和比例外加油相， 有效防止虾青素氧化衰竭 ； (3) 作为助溶剂 ： 雨生红球藻提取物本身为粘稠液体， 几乎没有流动性， 按 “相似 相溶” 原则， 必须加外加油相溶解增加流动性后方可包囊。
B、 本发明软胶囊处方虾青素与油相质量体积配比及优化
国外推荐的虾青素日服用剂量为 4 ～ 12mg。 据此推荐剂量设计软胶囊规格及虾青 素 - 油相配比 ：
(1) 基于生产、 包装、 服用方便考虑， 一般软胶囊内容物规格为 200 ～ 500mg/ 粒。 每日服用 1 ～ 2 次， 每次服用 1 ～ 2 粒。由此计算虾青素与油相理论配比见表 5。
表 5 处方设计虾青素与油相质量体积理论配比
表 5 可知， 虾青素与油相质量体积配比范围为 0.4 ～ 6 ∶ 100。将此配比范围分成 ＜ 1.0％、 1.0 ～ 5.0％、 ＞ 5.0％三部分， 以虾青素含量稳定性为监测指标， 开展处方优化。
(2) 在虾青素与油相质量体积配比＜ 1.0％范围内， 采用本发明指定的外加油相 配制 0.4％、 0.6％、 0.8％三个虾青素浓度梯度样品， 分别以 1、 2、 3 编号， 开展单因素单水平 加速稳定性考察， 结果见表 6， 浓度 - 时间变化曲线见图 3。
表 6 虾青素含量小于 1.0％ (w/v) 样品稳定性考察结果
从表 6 和图 3 可知， 虾青素浓度小于 1.0％时， 浓度越低， 虾青素越不稳定。含虾 青素 0.4％的样品 90 天加速考察期内， 虾青素含量直线下降， 90 天已全部衰竭 ； 含虾青素 0.6％的样品 90 天考察期内， 虾青素含量下降明显， 90 天含量下降 70.0％ ； 含虾青素 0.8％ 的样品 90 天考察期内， 虾青素含量开始下降明显， 后下降缓慢， 90 天仅下降 38％。(3) 在虾青素与油相质量体积配比 1.0 ～ 5.0％范围内， 采用本发明指定的外加油 相配制 1.25％、 1.5％、 2.5％、 3.5％、 4.5％五个虾青素浓度梯度样品， 分别以 4、 5、 6、 7、 8编 号， 开展单因素单水平加速稳定性考察， 结果见表 7， 浓度 - 时间变化曲线见图 4。
表 7 虾青素含量在 1.0 ～ 5.0％ (w/v) 样品稳定性考察结果
由表 7 和图 4 看出， 虾青素浓度在 1.0 ～ 5.0％之间时， 随虾青素浓度升高， 稳定性 逐渐提高。 浓度为 1.25％的样品 90 天考察期内虾青素含量下降 20％， 浓度为 1.5％样品 90 天考察期内虾青素含量下降 13.7％， 浓度为 2.5％、 3.5％的样品 90 天考察期内虾青素含量 变化不明显。但当样品虾青素浓度升高至 4.5％时， 其稳定性开始下降， 90 天考察期内虾青 素含量下降 12.8％。由此看出， 样品最为稳定的虾青素浓度范围为 1.50 ～ 4.50％之间。
(4) 在虾青素与油相质量体积配比大于 5.0％时， 采用本发明指定的外加油相配 制 5.0％、 5.5％、 6.0％三个虾青素浓度梯度样品， 分别以 9、 10、 11 编号， 开展单因素单水平 加速稳定性考察， 结果见表 8， 浓度 - 时间变化曲线见图 5。
表 8 虾青素含量大于 5.0％ (w/v) 样品稳定性考察结果
从表 8 和图 5 可见， 虾青素浓度大于 5.0％时， 随虾青素浓度增高， 90 天内其衰竭 越明显。到 90 天时， 3 个样品虾青素含量已没有明显差异。
综上所述， 虾青素在本发明指定的外加油相中， 其质量体积配比直接决定虾青素 稳定性， 具体如下 ：
(A) 质量体积配比小于 1.0％时， 虾青素稳定性随浓度升高而增加， 低浓度样品虾 青素极不稳定 ； 当浓度接近 1.0％， 稳定性明显提高。
(B) 质量体积配比在 1.0 ～ 5.0％时， 样品稳定性出现先升高后下降的趋势， 虾青 素浓度在 1.50 ～ 4.50％之间时样品最为稳定。
(C) 质量体积配比大于 5.0％时， 随虾青素浓度增高， 稳定性明显下降。
(D) 虾青素质量体积最佳配比为 ： 1.5 ～ 4.5％。
以下实施例 3 ～ 9 为将按照实施例 1 所述方法制备的红球藻提取物制备成包含不 同油相的红球藻提取物软胶囊。
实施例 3
本实施例中所制备的雨生红球藻提取物软胶囊制剂处方及方法如下 ：
内容物处方 ： 实施例 1 中所述方法制备的红球藻提取物 50g( 其中含虾青素 5g)、
脂溶性迷迭香提取物 0.03mL、 红花籽油 280mL。
胶液处方 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊金丙 酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。
按内容物处方量取提取物、 红花籽油、 脂溶性迷迭香提取物， 充入 N2， 25 ℃超声 25min， 37℃恒温水浴震荡 50min， 按胶液处方配置好胶液， 压制成 1000 粒软胶囊， 每粒软胶 囊内容物约为 0.3g， 含有虾青素约 5mg。
实施例 4
本实施例中所制备的雨生红球藻提取物软胶囊制剂处方及方法如下 ：
内容物处方 ： 实施例 1 中所述方法制备的红球藻提取物 290g( 其中含虾青素 20g)、 天然维生素 E 350mL、 辛葵酸甘油酯 350mL。
胶液处方如下 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊 金丙酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。
按内容物处方量取提取物、 天然维生素 E、 辛葵酸甘油酯， 充入 N2， 25℃超声 25min， 37℃恒温水浴震荡 50min， 按胶液处方配置好胶液， 压制成 2000 粒软胶囊， 每粒软胶囊内容 物约为 0.5g， 含有虾青素约 10mg。
实施例 5
本实施例中所制备的雨生红球藻提取物软胶囊制剂处方及方法如下 ：
内容物处方 ： 实施例 1 中所述方法制备的红球藻提取物 250g( 其中含虾青素 12.5g)、 脂溶性迷迭香提取物 0.05mL、 辛葵酸甘油酯 250mL。
胶液处方如下 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊 金丙酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。
按内容物处方量取提取物、 辛葵酸甘油酯、 迷迭香提取物， 充入 N2， 25 ℃超声 25min， 37℃恒温水浴震荡 50min， 按胶液处方配置好胶液， 压制成 1000 粒软胶囊， 每粒软胶 囊内容物约为 0.5g， 含有虾青素约 12mg。
实施例 6
本实施例中所制备的雨生红球藻提取物软胶囊制剂处方及方法如下 ：
内容物处方 ： 实施例 1 中所述方法制备的红球藻提取物 850g( 其中含虾青素 60g)、 花生油 2000mL、 天然维生素 E 1000mL。
胶液处方如下 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊 金丙酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。
按内容物处方量取提取物、 花生油， 充入 N2， 25 ℃超声 25min， 37 ℃恒温水浴震荡 50min， 按胶液处方配置好胶液， 压制成 10000 粒软胶囊， 每粒软胶囊内容物约 0.39g， 含有 虾青素约 6mg。
实施例 7
本实施例中所制备的雨生红球藻提取物软胶囊制剂处方及方法如下 ：
内容物处方 ： 实施例 1 中所述方法制备的红球藻提取物 1000g( 其中含虾青素 83g)、 核桃油 4400mL、 脂溶性迷迭香提取物 0.04mL。
胶液处方如下 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊 金丙酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。按内容物处方量取提取物、 核桃油、 脂溶性迷迭香提取物， 充入 N2， 25 ℃超声 25min， 37℃恒温水浴震荡 50min， 按胶液处方配置好胶液， 压制成 10000 粒软胶囊， 每粒软 胶囊内容物约为 0.5g， 含有虾青素约 8.3mg。
实施例 8
本实施例中所制备的雨生红球藻提取物软胶囊制剂处方及方法如下 ：
内容物处方 ： 实施例 1 中所述方法制备的红球藻提取物 1020g( 其中含虾青素 81g)、 橄榄油 3800mL、 辛葵酸甘油酯 600mL。
胶液处方如下 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊 金丙酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。
按内容物处方量取提取物、 橄榄油、 辛葵酸甘油酯， 充入 N2， 25℃超声 25min， 37℃ 恒温水浴震荡 50min， 按胶液处方配置好胶液， 压制成 10000 粒软胶囊， 每粒软胶囊内容物 约为 0.5g， 含有虾青素约 8.1mg。
实施例 9
本实施例中所制备的雨生红球藻提取物软胶囊制剂的处方及方法如下 ：
内容物处方 ： 实施例 1 中所述方法制备的红球藻提取物 240g( 其中含有虾青素 12g)、 大豆油 260mL、 脂溶性迷迭香提取物 0.05mL。
胶液处方如下 ： 明胶 40.5％、 甘油 19.5％、 纯水 38.17％、 尼泊金乙酯 0.16％、 尼泊 金丙酯 0.04％、 二氧化钛 0.6％、 焦糖色 1％、 苋菜红 0.03％。
按内容物处方量取提取物、 大豆油、 脂溶性迷迭香提取物， 充入 N2， 25 ℃超声 25min， 37℃恒温水浴震荡 50min， 按胶液处方配置好胶液， 压制成 1000 粒软胶囊， 每粒软胶 囊内容物约为 0.5g， 含有虾青素约 12mg。
实施例 10 红球藻提取物软胶囊制剂的稳定性考察
本实施例考察了本发明提供的红球藻提取物软胶囊制剂的稳定性。
内容物对实施例 9 所制备软胶囊内容物进行加速稳定性考察 ( 条件 ： 温度 40℃、 湿度 75％、 光照 2500LX)， 并且同时考察了实施例 1 制备的雨生红球藻提取物以及市售的雨 生红球藻软胶囊 ( 瑞典 BioReal(Sweden)AB 公司生产 AstaxinTM 产品 ) 的稳定性。以虾青 素含量变化作为稳定性指标， 具体结果见表 9。
表 9 软胶囊内容物加速稳定性试验结果
从表 9 可知， 雨生红球藻提取物 5 天时虾青素含量下降超过 50％， 90 天后虾青素含量下降大于 80％， 如果配方体系不能很好对虾青素氧化性能形成保护， 雨生红球藻提取 TM 物应用将大大受限。市售的 Astaxin 软胶囊， 在 90 天加速稳定性考察期内， 虽然虾青素含 量下降速度没有提取物明显， 但 90 天含量下降 77.5％， 表明产品稳定性也存在较大问题。 而实施例 9 所制备的软胶囊， 90 天加速稳定性考察期内， 虾青素含量仅下降 8.3％， 按稳定 性考察指导原则， 表明本品在 2 年内稳定。