门冬氨酸鸟氨酸注射液及其制备方法 技术领域 本发明属于医药领域， 涉及一种药物制剂及其制备方法， 具体涉及一种门冬氨酸 鸟氨酸注射液及其制备方法。
背景技术 门冬氨酸鸟氨酸最先于 20 世纪 70 年代在德国用于临床， 1991 年收载德国药典， 并被美国 FDA 批准用于治疗肝性脑病。门冬氨酸鸟氨酸注射液是我国首个用于临床的具有 护肝、 解毒、 能量三效合一的新药， 其主要治疗成分是门冬氨酸和鸟氨酸， 临床应用于急、 慢 性肝病的治疗， 包括肝硬化、 脂肪肝及肝炎所引起的血氨升高， 对肝性脑病尤其有效。目前 常用的剂型有粉针剂、 颗粒剂、 注射液。 颗粒剂特别适用于早期的意识失调或神经系统并发 症。注射液则特别适用于因肝脏疾患引起的中枢神经系统症状的解除及肝昏迷的抢救， 且 作用直接， 起效显著。粉针剂制备工艺复杂， 成本高， 且对医务人员的使用技能要求较高。
在 国 外， 门 冬 氨 酸 鸟 氨 酸 注 射 液 的 主 要 生 产 厂 家 有 德 国 麦 氏 公 司 (Merz PharmaceuticalsGmbH) 和印度 Win-Medicare 公司。 而在国内， 仅德国麦氏公司进口注册门 TM TM 冬氨酸鸟氨酸注射液， 其商品名为雅博司 。对雅博司 注射液进行研究分析， 其 pH 值为 6.5 ～ 7.0， 重要的是该注射液存在一个重要的杂质， 该单一杂质的含量高于 1％， 因此杂质 含量高使得注射液质量不易控制， 同时高含量的杂质会增大药物不良反应的风险， 降低了 用药的安全性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是 ： 由于现有注射液的主杂质含量高、 杂质不明确等 因素导致制剂质量不易控制， 增大了患者用药时产生不良反应的风险， 为此本发明提供了 一种门冬氨酸鸟氨酸注射液。 所述注射液含杂质含量低、 质量易于控制以及安全性更高。 通 过本发明人创造性的劳动， 明确了现有技术中主要杂质的具体结构， 并在具体实施例中给 出制备该主要杂质的一种方法。 本发明还提供了一种前述门冬氨酸鸟氨酸注射液的制备方 法。
本发明提供的技术方案是 ：
一种门冬氨酸鸟氨酸注射液， 包含门冬氨酸鸟氨酸、 注射用水和酸碱调节剂， 其特 征在于所述注射液的 pH 值为 5.2 ～ 6.0， 优选为 5.2 ～ 5.95， 更优选 5.5 ～ 5.75。
经本发明人研究发现， 门冬氨酸鸟氨酸的水溶液在高温或碱性条件下不稳定。进 一步的研究发现， 鸟氨酸在溶液状态下， 易形成内酰胺结构， 在不同的 pH 条件下， 内酰胺结 构产物的含量是不同的。鸟氨酸内酰胺结构式如下所示 ：
经过发明人大量的实验， 发现门冬氨酸鸟氨酸注射液的主要杂质为鸟氨酸的内酰 胺结构产物， 并且在 pH 越偏碱性的条件下， 鸟氨酸的内酰胺结构产物含量越高。本发明所 述的门冬氨酸鸟氨酸注射液的主杂质为鸟氨酸的内酰胺结构产物。 根据该主杂质的理化性 质， 对门冬氨酸鸟氨酸注射液在不同 pH 条件下含量、 有关物质进行试验， 发明人惊喜地发 现， pH 值为 5.2 ～ 6.0 的条件下， 注射液的杂质含量小、 注射液的质量好。
在不同 pH 值下， 对门冬氨酸鸟氨酸注射液进行了影响因素考察， 选取 pH 为 5.2、 5.5、 5.75、 6.0、 6.5、 7.0、 7.5 等 7 种条件， 处方的其他组份和制备工艺均相同， 分别经终端 灭菌后， 在 40℃、 60℃两个温度条件下放置 5 天、 10 天， 对注射液做有关物质分析， 上述主杂 质的含量结果如下表所述 ：
以上结果表明 ： 当注射液 pH 值小于 5.2 时， 有不溶物析出 ； 同一温度下， pH 值越偏 碱性， 注射液的主杂质含量越高 ； 同一 pH 值下， 温度越高， 注射液的主杂质含量越高。pH 大 于 6.0 相比 6.0 以下， 两种温度下注射液的主杂质含量都有明显地增加。
本发明将门冬氨酸鸟氨酸注射液的 pH 值控制在 5.2 ～ 6.0， 更易于控制注射液中 的主杂质。
本发明提供的注射液与市售进口产品雅博司 TM 注射液 ( 批号 ： 708081， 生产日期 ： 2007.08) 进行比较， 结果下表所示 ：
其结果是本发明提供的注射液的主杂质含量大大低于已经上市的产品。
本发明提供的门冬氨酸鸟氨酸注射液， 可以根据不同的临床用药要求， 配制成不 同浓度的注射液， 注射液中门冬氨酸鸟氨酸含量的范围为 0.01g ～ 1g/mL， 优选 0.5g/mL 或 0.1g/mL。
本发明还提供了一种门冬氨酸鸟氨酸注射液的制备方法， 包括以下步骤 ：
1) 门冬氨酸鸟氨酸用无菌注射用水溶解， 用酸碱调节剂调节 pH 为 5.2 ～ 6.0， 制 得门冬氨酸鸟氨酸溶液 ；
2) 步骤 1) 的溶液经活性炭脱色、 定容、 分装、 灭菌， 制得门冬氨酸鸟氨酸注射液。
所述酸碱调节剂包括酸类调节剂和碱类调节剂， 酸类调节剂选自盐酸、 硫酸、 醋 酸、 磷酸二氢钾、 磷酸二氢钠、 琥珀酸或柠檬酸， 优选盐酸或醋酸， 更优选醋酸 ； 碱类调节剂 选自氨水、 氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸钠、 碳酸钾、 碳酸氢钠或碳酸氢钾， 优选氨水或氢氧化
钠， 更优选氨水。
本发明提供的门冬氨酸鸟氨酸注射液可用于治疗肝性脑病。 附图说明
图 1 为实施例 1 主杂质醋酸盐的 HPLC 分析图。 图 2 为实施例 2 门冬氨酸鸟氨酸注射液的 HPLC 分析图。 图 3 为实施例 3 门冬氨酸鸟氨酸注射液的 HPLC 分析图。 图 4 为实施例 4 门冬氨酸鸟氨酸注射液的 HPLC 分析图。 图 5 为主杂质醋酸盐的质谱图。 图 6 为主杂质醋酸盐的红外光谱图。 图 7 为主杂质醋酸盐的氢核磁共振谱图。具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明， 可使本领域专业技术人员更全面地理解 本发明， 但不以任何方式限制本发明。
测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的有关物质的高效液相色谱条件
色谱柱 ： 氨基键合硅胶色谱柱 4.6mm×250mm， 5μm ；
流动相 ： 乙腈 -0.05mol/L 磷酸二氢钾 (50 ∶ 50 v/v) ；
流速 ： 1.0mL/min ；
柱温 ： 25℃ ；
检测波长 ： 200nm ；
进样量 ： 20μL ；
有关物质计算方法 ： 有关物质的其他杂质采用自身对照法， 主杂质采用外标法。
制备 1 对照品溶液的配制
取门冬氨酸鸟氨酸注射液适量， 加水稀释 10 倍后， 用流动相稀释成每 1mL 中约含 5mg 的溶液或直接用流动相稀释成每 1mL 中约含 5mg 的溶液。对照品溶液将上述溶液稀释 100 倍进行配制。
制备 2 主杂质对照品溶液的配制
取主杂质对照品适量， 加流动相稀释成每 1mL 中约含 2mg 的溶液 ( 以内酰胺 计 )， 作为主杂质对照储备液， 使用时根据样品中杂质含量配制杂质对照品溶液 ( 主杂质 含量在定量限至 0.005 ％范围内， 将储备液稀释成每 1mL 含 0.1μg 的主杂质对照溶液 ； 在 0.0025 ％至 0.05 ％范围内， 将储备液稀释成每 1mL 含 1μg 的主杂质对照溶液 ； 高于 0.05％， 将储备液稀释成每 1mL 含 20μg 的主杂质对照溶液 )。
实施例 1 主杂质醋酸盐的制备
反应式如下 ：
取鸟氨酸醋酸盐适量， 加浓氨水使完全溶解。100℃下回流 25 小时， 每隔 4 小时 补加适量浓氨水， HPLC 跟踪监测反应， 至 HPLC 中鸟氨酸峰面积归一化法计算约占 0.5％。 100℃下， 加入 0.1％的活性炭， 过滤。滤液旋转蒸发干， 加甲醇， 冷至 0℃， 过滤即得主杂质 醋酸盐， 类白色粉末。经 HPLC 分析纯度大于 99.0％， 如图 1 所示， tR( 保留时间 ) ＝ 7.643 为主杂质峰。主杂质醋酸盐的化学特征如下 ：
分子式 ： C7H14N2O3， 熔点 ： 127.9 ～ 130.9℃。 IR(νmaxcm-1) ： 3411.5， 1675.9， 1558.2， 1 1407.8。 HNMR(DMSO-d6， 400MHz) ： δ7.49(1H， brs， NH)， 5.53(3H， brs， NH3)， 3.16(1H， m， CH-NH3)， 3.08(2H， m， CH2-NH)， 1.4-2.0(4H， m， CH2-CH2)， 1.76(3H， s， CH3)。MS m/z(int) ： 115[M+H-CH3COOH](7)， 69(100)， 56(56)。以上谱图见图 5-7。
实施例 2
按以下处方制备门冬氨酸鸟氨酸注射液 ：
门冬氨酸鸟氨酸 500.6g
注射用水 600mL
1％醋酸溶液 适量
注射用水 定容至 1000mL
溶液灭菌后分装， pH ＝ 5.75 100 瓶
取门冬氨酸鸟氨酸 500.6g， 加入 600mL 注射用水， 搅拌使溶解， 加适量的 1％醋酸 溶液调节酸碱度为 pH ＝ 5.7， 加入 0.1％针用活性炭， 40℃水浴加热 45 分钟， 趁热 0.45μm 滤膜过滤， 再用少量注射用水多次荡洗活性炭滤饼， 合并收集的滤液。 将滤液定容至 1000mL 刻度， 精确量取 10mL 灌入 10mL 的安瓿瓶， 封口， 检验， 查漏， 115℃灭菌 30 分钟。取出， 自然 冷却至室温， 制得门冬氨酸鸟氨酸注射液。
产品检测 ： pH ＝ 5.75 ； HPLC 分析计算后， 主杂质含量为 0.10％， 有关物质含量为 0.21％。 如图 2 所示， 其中 tR ＝ 7.276 为主杂质峰， tR ＝ 16.496 为门冬氨酸峰， tR ＝ 26.600 为鸟氨酸峰。
实施例 3
按以下处方制备门冬氨酸鸟氨酸注射液 ：
门冬氨酸鸟氨酸 100.2g
注射用水 600mL
1％醋酸溶液 适量
注射用水 定容至 1000mL
溶液灭菌后分装， pH ＝ 5.50 100 瓶
取门冬氨酸鸟氨酸 100.2g， 加入 600mL 注射用水， 搅拌使溶解， 加适量的 1％醋酸 溶液调节酸碱度为 pH ＝ 5.4， 加入 0.05％针用活性炭， 60℃水浴加热 30 分钟， 趁热 0.45μm 滤膜过滤， 再用少量注射用水多次荡洗活性炭滤饼， 合并收集的滤液。 将滤液定容至 1000mL 刻度， 精确量取 10mL 灌入 10mL 的安瓿瓶， 封口， 检验， 查漏， 121℃灭菌 15 分钟。取出， 自然 冷却至室温， 制得门冬氨酸鸟氨酸注射液。
产品检测 ： pH ＝ 5.50 ； HPLC 分析计算后， 主杂质含量为 0.07％， 有关物质含量为
0.15％如图 3 所示， 其中 tR ＝ 7.270 为主杂质峰， tR ＝ 16.488 为门冬氨酸峰， tR ＝ 26.588 为鸟氨酸峰。
实施例 4
按以下处方制备门冬氨酸鸟氨酸注射液 ：
门冬氨酸鸟氨酸 50.8g
注射用水 600mL
1％醋酸溶液 适量
注射用水 定容至 1000mL
溶液灭菌后分装， pH ＝ 5.95 100 瓶
取门冬氨酸鸟氨酸 50.8g， 加入 600mL 注射用水， 搅拌使溶解， 加适量的 1％醋酸溶 液调节酸碱度为 pH ＝ 5.9， 加入 0.01％针用活性炭， 40℃水浴加热 45 分钟， 趁热 0.45μm 滤膜过滤， 再用少量注射用水多次荡洗活性炭滤饼， 合并收集的滤液。 将滤液定容至 1000mL 刻度， 精确量取 10mL 灌入 10mL 的安瓿瓶， 封口， 检验， 查漏， 115℃灭菌 30 分钟。取出， 自然 冷却至室温， 制得门冬氨酸鸟氨酸注射液。
产品检测 ： pH ＝ 5.95 ； HPLC 分析计算后， 主杂质含量为 0.11％， 有关物质含量为 0.25％。 如图 4 所示， 其中 tR ＝ 7.270 为主杂质峰， tR ＝ 16.489 为门冬氨酸峰， tR ＝ 26.593 为鸟氨酸峰。
实施例 5-9
配制 pH5.2、 pH5.5、 pH5.75、 pH6.0、 pH6.5、 pH7.0、 pH7.5 等七种不同 pH 值的注射 液， 门冬氨酸鸟氨酸含量均为 0.5g/mL， 115 ℃灭菌 30 分钟后测定主杂质的百分含量以及 40℃、 60℃恒温恒湿箱中放置， 5 天、 10 天分别取样测定主杂质的百分含量变化情况， 结果 如下表所示 ：