一种花生肽的提取方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201010540547.2

申请日:

2010.11.11

公开号:

CN101965898A

公开日:

2011.02.09

当前法律状态:

终止

有效性:

无权

法律详情:

未缴年费专利权终止IPC(主分类):C12P 21/06申请日:20101111授权公告日:20120627终止日期:20141111|||专利权人的姓名或者名称、地址的变更IPC(主分类):C12P 21/06变更事项:专利权人变更前:湖北远成药业有限公司变更后:湖北远成赛创科技有限公司变更事项:地址变更前:430064 湖北省武汉市武昌区中山路496号变更后:430064 湖北省武汉市武昌区中山路496号|||文件的公告送达IPC(主分类):C12P 21/06收件人:湖北远成赛创科技有限公司专利负责人文件名称:视为未提出通知书|||授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A23J 3/14申请日:20101111|||公开

IPC分类号:

A23J3/14; A23J3/34

主分类号:

A23J3/14

申请人:

湖北远成药业有限公司

发明人:

叶传发; 张小东; 胡承四; 叶思

地址:

430064 湖北省武汉市武昌区中山路496号

优先权:

专利代理机构:

武汉宇晨专利事务所 42001

代理人:

王敏锋

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内容摘要

本发明公开了一种花生肽的提取方法,该方法以花生粕为原料,加水和乙醇混合后升温回流、过滤、脂肪酶脱脂、蛋白酶酶解、灭酶、脱色、膜分离,将得到的滤液经干燥后即得花生肽。本发明方法以花生加工废弃的副产品花生粕为原料,使用生物法获取花生肽,生产周期短、成本低、操作简便、反应条件温和、不产生任何有毒有害物质,而且所得产品安全性高,可广泛应用于医药、保健品和生物合成等领域。

权利要求书

1: 一种花生肽的提取方法, 其步骤如下 : 1) 、 以花生粕为原料, 分别加入原料重量的 7-9 倍的蒸馏水和 7-10% 的 95wt% 乙醇搅拌 均匀, 在 90-95℃下回流反应 3-4h, 反应完后趁热过滤 ; 2) 、 冷却滤液至 45-60℃, 调 pH 值为 7-8, 按原料花生粕重量的 3-5% 加入 18U/mg 的脂 肪酶, 45-60℃下搅拌酶解 4-6h, 酶解过程中保持反应体系的 pH 值稳定 ; 再按原料花生粕重 量的 0.5-1.5% 加入 25U/mg 的碱性蛋白酶, 45-60℃下搅拌酶解 6-8h, 酶解过程中保持反应 体系的 pH 值稳定 ; 然后将得到的酶解液升温至 90-100℃, 保温 10-20min 以灭酶 ; 3) 、 将酶解液过滤, 得上清液 ; 4) 、 上清液中加入原料花生粕重量 2-4% 的粉末状活性炭脱色, 然后滤除活性炭 ; 5) 、 步骤 4) 所得滤液再采用膜分离手段进行分离和浓缩, 浓缩液干燥后即得花生肽干 品。
2: 如权利要求 1 所述的方法, 其特征在于 : 所述的脱色的温度和时间分别为 55 ℃和 1h。
3: 如权利要求 1 所述的方法, 其特征在于 : 所述的膜的孔径为 1nm。
4: 如权利要求 1 所述的方法, 其特征在于 : 所述的干燥为喷雾干燥。

说明书


一种花生肽的提取方法

    技术领域 本发明方法涉及花生的深加工技术领域, 具体涉及一种花生肽的提取方法, 是一 种以花生粕为原料, 利用生物复合酶酶解花生粕, 从而提取出花生肽的方法。
     背景技术 我国花生种植的地域分布非常广泛, 南起海南岛, 北到黑龙江, 东自台湾, 西达新 疆, 但主要集中在山东, 河南, 河北等省, 占全国花生产量的 60%以上。 正常年景我国花生产 量约 1000 万吨左右, 在世界上我国花生产量居第一位, 占世界总产量的 38%。花生粕是花 生仁经压榨提炼油料后的产品, 花生粕分一次粕, 二次粕。 通常花生粕的产量可以达到 44% 以上, 也就是说花生的出油率在 55%以上, 所以花生粕的产量相对是比较少的。
     花生粕富含植物蛋白, 其口感较好, 但主要用于禽畜水产饲料中, 造成了资源的极 大浪费, 而运用生物酶工程技术, 筛选出特定的酶对其进行限制性水解, 从而得到功能特性 好、 生物活性高的小分子肽, 可以在为人类的健康带来福音的同时, 也为社会带来经济效 益。花生蛋白活性肽的氨基酸组成均衡, 全面, 含人体必需的 8 种氨基酸, 特别是谷氨酸和 天门冬氨酸的含量较高, 对促进人体脑细胞发育和增加记忆力都有良好的作用。花生氨基 酸与人体氨基酸的组成非常相近, 极易被人体吸收利用, 而且不含胆固醇, 具有易于消化吸 收、 有助恢复体力、 增强免疫力、 降低血压、 促进脂肪代谢、 保健养生等功效。
     现有技术中, 关于花生肽的提取方法中均使用了大量碱处理或者一些有害的化学 溶剂, 不可避免地存在威胁人体健康的隐患。 而本发明方法采用纯生物手段, 不添加任何有 毒试剂提取出花生肽, 保证了产品的安全性和实用性, 因此具有更加广泛的推广和应用价 值。
     发明内容
     针对现有技术中存在的不足, 本发明的目的在于提供了一种花生肽的提取方法, 该法利用生物酶酶解花生粕, 然后采用膜分离技术脱盐和浓缩, 提取得到花生肽, 所得产品 的纯度高。本发明方法不仅提高了花生副产品的利用率, 同时也能为社会带来经济效益。
     为了实现上述目的, 本发明采用以下技术措施 :
     一种花生肽的提取方法, 其步骤如下 :
     1、 以市售花生粕 ( 蛋白含量≥ 46% ) 为原料, 分别加入原料重量的 7-9 倍的蒸馏 水和 7-10%的 95wt%乙醇搅拌均匀, 在 90-95℃下回流反应 3-4h, 反应完后趁热过滤 ;
     2、 冷却滤液至 45-60℃, 调 pH 值为 7-8, 按原料花生粕重量的 3-5%加入脂肪酶, 45-60℃下搅拌酶解 4-6h, 酶解过程中保持反应体系的 pH 值稳定 ; 再按原料花生粕重量的 0.5-1.5%加入碱性蛋白酶, 45-60℃下搅拌酶解 6-8h, 酶解过程中保持反应体系的 pH 值稳 定; 然后将得到的酶解液升温至 90-100℃, 保温 10-20min 以灭酶 ;
     3、 将酶解液过滤, 得上清液 ;
     4、 上清液中加入原料花生粕重量 2-4%的粉末状活性炭, 在 55℃下搅拌吸附 1h 以脱色, 然后滤除活性炭 ;
     5、 步骤 4 所得滤液再采用膜分离手段进行分离和浓缩, 浓缩液干燥后即得花生肽 干品。
     本发明方法中使用的脂肪酶和碱性蛋白酶的酶活力分别为 : 18U/mg 和 25U/mg。
     与现有技术相比, 本发明方法的优点和有益效果如下 :
     1、 采用本发明方法生产出来的花生肽的纯度高, 并且其总蛋白质中分子量在 1000 道尔顿以下的花生肽的含量均在 98%以上 ;
     2、 采用本发明方法生产出来的花生肽的分子量小, 人体易吸收, 吸收率达 90%以 上;
     3、 本发明方法中采用了活性炭脱色, 因此所得产品为白色均匀粉末, 保证了产品 的天然洁白度 ;
     4、 采用本发明的膜分离技术, 对液态物料进行分离、 浓缩和纯化, 均在常温下操 作、 无相态变化、 高效节能, 并且生产过程中不产生污染 ;
     5、 本发明方法的生产周期短、 成本低、 不产生任何有毒有害物质, 安全, 无毒副作 用, 可广泛应用于化妆品、 食品、 药品等领域。 具体实施方式 下面通过具体的实施例对本发明方法做进一步的详细说明。
     实施例 1 :
     一种花生肽的提取方法, 步骤如下 :
     市售花生粕 ( 蛋白含量≥ 46% ) 称取 1kg, 加入 95g 95wt%的乙醇和 7kg 蒸馏水, 搅拌均匀, 升温至 90℃回流 4h, 反应完后趁热过滤 ; 再冷却滤液至 45℃, 用 0.1M 食品级片 状氢氧化钠溶液调 pH 至 7-8, 加 40g 脂肪酶, 保持温度在 45℃, 搅拌酶解 6h, 酶解过程中用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的 pH 值保持在 7-8 ; 再加入 15g 碱性蛋白酶, 保持温度在 45℃, 搅拌酶解 6h, 酶解过程中用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系 pH 值在 7-8 ; 然后将得到的酶解液升温至 90℃, 保持 20min 灭酶 ; 然后将酶解液过滤, 得上 清液, 上清液中加入 20g 粉末状活性炭, 55℃搅拌吸附 1h 脱色, 滤除活性炭 ; 滤液经孔径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离, 脱盐并浓缩 ; 浓缩液经喷雾干燥, 得到 375g 白色粉末状花 生肽, 所得产品的检测报告见表 1。
     表 1 实施例 1 所得产品的检测报告
     实施例 2 :
     一种花生肽的提取方法, 步骤如下 :
     市售花生粕 ( 蛋白含量≥ 46% ) 称取 2kg, 加入 160g 95wt%的乙醇和 15kg 蒸馏 水, 搅拌均匀, 升温至 95℃回流 3h, 反应完后趁热过滤 ; 再冷却滤液至 50℃, 用 0.1M 食品级 片状氢氧化钠溶液调 pH 至 7-8, 加 60g 脂肪酶, 保持温度在 50℃, 搅拌酶解 5h, 酶解过程中 用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的 pH 值保持在 7-8 ; 再加入 10g 碱性蛋白 酶, 保持温度在 50℃, 搅拌酶解 8h, 酶解过程中用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保持反应 体系 pH 值在 7-8 ; 然后将得到的酶解液升温至 95℃, 保持 15min 灭酶 ; 然后将酶解液过滤, 得上清液, 上清液中加入 44g 粉末状活性炭, 55℃搅拌吸附 1h 脱色, 滤除活性炭 ; 滤液经孔 径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离, 脱盐并浓缩 ; 浓缩液经喷雾干燥, 得到 753g 白色粉末 状花生肽, 所得产品的检测报告见表 2。
     表 2 实施例 2 所得产品的检测报告
     实施例 3 :
     一种花生肽的提取方法, 步骤如下 :
     市售花生粕 ( 蛋白含量≥ 46% ) 称取 10kg, 加入 1kg 95wt%的乙醇和 90kg 蒸馏 水, 搅拌均匀, 升温至 93℃回流 3.5h, 反应完后趁热过滤 ; 再冷却滤液至 55℃, 用 0.1M 食品 级片状氢氧化钠溶液调 pH 至 7-8, 加 400g 脂肪酶, 保持温度在 55℃, 搅拌酶解 4.5h, 酶解过 程中用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的 pH 值保持在 7-8 ; 再加入 100g 碱性 蛋白酶, 保持温度在 55℃, 搅拌酶解 7h, 酶解过程中用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保持 反应体系 pH 值在 7-8 ; 然后将得到的酶解液升温至 100℃, 保持 10min 灭酶 ; 然后将酶解液 过滤, 得上清液, 上清液中加入 250g 粉末状活性炭, 55℃搅拌吸附 1h 脱色, 滤除活性炭 ; 滤 液经孔径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离, 脱盐并浓缩 ; 浓缩液经喷雾干燥, 得到 3.80kg 所得产品的检测报告见表 3。 白色粉末状花生肽,
     表 3 实施例 3 所得产品的检测报告
     实施例 4 :
     一种花生肽的提取方法, 步骤如下 :
     市售花生粕 ( 蛋白含量≥ 46% ) 称取 100kg, 加入 7kg 95wt%的乙醇和 800kg 蒸 馏水, 搅拌均匀, 升温至 92℃回流 4h, 反应完后趁热过滤 ; 再冷却滤液至 60℃, 用 0.1M 食品 级片状氢氧化钠溶液调 pH 至 7-8, 加 5kg 脂肪酶, 保持温度在 60℃, 搅拌酶解 4h, 酶解过程 中用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的 pH 值保持在 7-8 ; 再加入 1.5kg 碱性 蛋白酶, 保持温度在 60℃, 搅拌酶解 6.5h, 酶解过程中用 0.1M 食品级片状氢氧化钠溶液保 持反应体系 pH 值在 7-8 ; 然后将得到的酶解液升温至 96℃, 保持 15min 灭酶 ; 然后将酶解 液过滤, 得上清液, 上清液中加入 4kg 粉末状活性炭, 55℃搅拌吸附 1h 脱色, 滤除活性炭 ; 滤 液经孔径为 1nm 的纳滤膜分离系统进行分离, 脱盐并浓缩 ; 浓缩液经喷雾干燥, 得到 38.3kg 白色粉末状花生肽, 所得产品的检测报告见表 4。
     表 4 实施例 4 所得产品的检测报告
     8

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1、10申请公布号CN101965898A43申请公布日20110209CN101965898ACN101965898A21申请号201010540547222申请日20101111A23J3/14200601A23J3/3420060171申请人湖北远成药业有限公司地址430064湖北省武汉市武昌区中山路496号72发明人叶传发张小东胡承四叶思74专利代理机构武汉宇晨专利事务所42001代理人王敏锋54发明名称一种花生肽的提取方法57摘要本发明公开了一种花生肽的提取方法,该方法以花生粕为原料,加水和乙醇混合后升温回流、过滤、脂肪酶脱脂、蛋白酶酶解、灭酶、脱色、膜分离,将得到的滤液经干燥后即得花生。

2、肽。本发明方法以花生加工废弃的副产品花生粕为原料,使用生物法获取花生肽,生产周期短、成本低、操作简便、反应条件温和、不产生任何有毒有害物质,而且所得产品安全性高,可广泛应用于医药、保健品和生物合成等领域。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页CN101965898A1/1页21一种花生肽的提取方法,其步骤如下1)、以花生粕为原料,分别加入原料重量的79倍的蒸馏水和710的95WT乙醇搅拌均匀,在9095下回流反应34H,反应完后趁热过滤;2)、冷却滤液至4560,调PH值为78,按原料花生粕重量的35加入18U/MG的脂肪酶,4560下搅拌酶解4。

3、6H,酶解过程中保持反应体系的PH值稳定;再按原料花生粕重量的0515加入25U/MG的碱性蛋白酶,4560下搅拌酶解68H,酶解过程中保持反应体系的PH值稳定;然后将得到的酶解液升温至90100,保温1020MIN以灭酶;3)、将酶解液过滤,得上清液;4)、上清液中加入原料花生粕重量24的粉末状活性炭脱色,然后滤除活性炭;5)、步骤4)所得滤液再采用膜分离手段进行分离和浓缩,浓缩液干燥后即得花生肽干品。2如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的脱色的温度和时间分别为55和1H。3如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的膜的孔径为1NM。4如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的干燥为喷雾干燥。

4、。权利要求书CN101965898A1/6页3一种花生肽的提取方法技术领域0001本发明方法涉及花生的深加工技术领域,具体涉及一种花生肽的提取方法,是一种以花生粕为原料,利用生物复合酶酶解花生粕,从而提取出花生肽的方法。背景技术0002我国花生种植的地域分布非常广泛,南起海南岛,北到黑龙江,东自台湾,西达新疆,但主要集中在山东,河南,河北等省,占全国花生产量的60以上。正常年景我国花生产量约1000万吨左右,在世界上我国花生产量居第一位,占世界总产量的38。花生粕是花生仁经压榨提炼油料后的产品,花生粕分一次粕,二次粕。通常花生粕的产量可以达到44以上,也就是说花生的出油率在55以上,所以花生粕。

5、的产量相对是比较少的。0003花生粕富含植物蛋白,其口感较好,但主要用于禽畜水产饲料中,造成了资源的极大浪费,而运用生物酶工程技术,筛选出特定的酶对其进行限制性水解,从而得到功能特性好、生物活性高的小分子肽,可以在为人类的健康带来福音的同时,也为社会带来经济效益。花生蛋白活性肽的氨基酸组成均衡,全面,含人体必需的8种氨基酸,特别是谷氨酸和天门冬氨酸的含量较高,对促进人体脑细胞发育和增加记忆力都有良好的作用。花生氨基酸与人体氨基酸的组成非常相近,极易被人体吸收利用,而且不含胆固醇,具有易于消化吸收、有助恢复体力、增强免疫力、降低血压、促进脂肪代谢、保健养生等功效。0004现有技术中,关于花生肽的。

6、提取方法中均使用了大量碱处理或者一些有害的化学溶剂,不可避免地存在威胁人体健康的隐患。而本发明方法采用纯生物手段,不添加任何有毒试剂提取出花生肽,保证了产品的安全性和实用性,因此具有更加广泛的推广和应用价值。发明内容0005针对现有技术中存在的不足,本发明的目的在于提供了一种花生肽的提取方法,该法利用生物酶酶解花生粕,然后采用膜分离技术脱盐和浓缩,提取得到花生肽,所得产品的纯度高。本发明方法不仅提高了花生副产品的利用率,同时也能为社会带来经济效益。0006为了实现上述目的,本发明采用以下技术措施0007一种花生肽的提取方法,其步骤如下00081、以市售花生粕蛋白含量46为原料,分别加入原料重量。

7、的79倍的蒸馏水和710的95WT乙醇搅拌均匀,在9095下回流反应34H,反应完后趁热过滤;00092、冷却滤液至4560,调PH值为78,按原料花生粕重量的35加入脂肪酶,4560下搅拌酶解46H,酶解过程中保持反应体系的PH值稳定;再按原料花生粕重量的0515加入碱性蛋白酶,4560下搅拌酶解68H,酶解过程中保持反应体系的PH值稳定;然后将得到的酶解液升温至90100,保温1020MIN以灭酶;00103、将酶解液过滤,得上清液;00114、上清液中加入原料花生粕重量24的粉末状活性炭,在55下搅拌吸附1H以说明书CN101965898A2/6页4脱色,然后滤除活性炭;00125、步骤。

8、4所得滤液再采用膜分离手段进行分离和浓缩,浓缩液干燥后即得花生肽干品。0013本发明方法中使用的脂肪酶和碱性蛋白酶的酶活力分别为18U/MG和25U/MG。0014与现有技术相比,本发明方法的优点和有益效果如下00151、采用本发明方法生产出来的花生肽的纯度高,并且其总蛋白质中分子量在1000道尔顿以下的花生肽的含量均在98以上;00162、采用本发明方法生产出来的花生肽的分子量小,人体易吸收,吸收率达90以上;00173、本发明方法中采用了活性炭脱色,因此所得产品为白色均匀粉末,保证了产品的天然洁白度;00184、采用本发明的膜分离技术,对液态物料进行分离、浓缩和纯化,均在常温下操作、无相态。

9、变化、高效节能,并且生产过程中不产生污染;00195、本发明方法的生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质,安全,无毒副作用,可广泛应用于化妆品、食品、药品等领域。具体实施方式0020下面通过具体的实施例对本发明方法做进一步的详细说明。0021实施例10022一种花生肽的提取方法,步骤如下0023市售花生粕蛋白含量46称取1KG,加入95G95WT的乙醇和7KG蒸馏水,搅拌均匀,升温至90回流4H,反应完后趁热过滤;再冷却滤液至45,用01M食品级片状氢氧化钠溶液调PH至78,加40G脂肪酶,保持温度在45,搅拌酶解6H,酶解过程中用01M食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值保持在78。

10、;再加入15G碱性蛋白酶,保持温度在45,搅拌酶解6H,酶解过程中用01M食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后将得到的酶解液升温至90,保持20MIN灭酶;然后将酶解液过滤,得上清液,上清液中加入20G粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到375G白色粉末状花生肽,所得产品的检测报告见表1。0024表1实施例1所得产品的检测报告0025说明书CN101965898A3/6页500260027实施例20028一种花生肽的提取方法,步骤如下0029市售花生粕蛋白含量46称取2KG,加入160G9。

11、5WT的乙醇和15KG蒸馏水,搅拌均匀,升温至95回流3H,反应完后趁热过滤;再冷却滤液至50,用01M食品级片状氢氧化钠溶液调PH至78,加60G脂肪酶,保持温度在50,搅拌酶解5H,酶解过程中用01M食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值保持在78;再加入10G碱性蛋白酶,保持温度在50,搅拌酶解8H,酶解过程中用01M食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后将得到的酶解液升温至95,保持15MIN灭酶;然后将酶解液过滤,得上清液,上清液中加入44G粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到。

12、753G白色粉末状花生肽,所得产品的检测报告见表2。0030表2实施例2所得产品的检测报告00310032说明书CN101965898A4/6页60033实施例30034一种花生肽的提取方法,步骤如下0035市售花生粕蛋白含量46称取10KG,加入1KG95WT的乙醇和90KG蒸馏水,搅拌均匀,升温至93回流35H,反应完后趁热过滤;再冷却滤液至55,用01M食品级片状氢氧化钠溶液调PH至78,加400G脂肪酶,保持温度在55,搅拌酶解45H,酶解过程中用01M食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值保持在78;再加入100G碱性蛋白酶,保持温度在55,搅拌酶解7H,酶解过程中用01M食品级。

13、片状氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后将得到的酶解液升温至100,保持10MIN灭酶;然后将酶解液过滤,得上清液,上清液中加入250G粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到380KG白色粉末状花生肽,所得产品的检测报告见表3。0036表3实施例3所得产品的检测报告00370038说明书CN101965898A5/6页70039实施例40040一种花生肽的提取方法,步骤如下0041市售花生粕蛋白含量46称取100KG,加入7KG95WT的乙醇和800KG蒸馏水,搅拌均匀,升温至92回流4H,反应完后趁。

14、热过滤;再冷却滤液至60,用01M食品级片状氢氧化钠溶液调PH至78,加5KG脂肪酶,保持温度在60,搅拌酶解4H,酶解过程中用01M食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系的PH值保持在78;再加入15KG碱性蛋白酶,保持温度在60,搅拌酶解65H,酶解过程中用01M食品级片状氢氧化钠溶液保持反应体系PH值在78;然后将得到的酶解液升温至96,保持15MIN灭酶;然后将酶解液过滤,得上清液,上清液中加入4KG粉末状活性炭,55搅拌吸附1H脱色,滤除活性炭;滤液经孔径为1NM的纳滤膜分离系统进行分离,脱盐并浓缩;浓缩液经喷雾干燥,得到383KG白色粉末状花生肽,所得产品的检测报告见表4。0042表4实施例4所得产品的检测报告0043说明书CN101965898A6/6页8说明书。

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