技术领域
本发明涉及中药或天然药物领域，具体涉及新鲜当归根、茎叶榨汁液以及干燥的当归茎叶水提物在改善血虚症状中的应用；本发明还涉及新鲜当归根与新鲜当归茎叶榨汁的加工方法。
背景技术
中药当归是我国临床最常用的中药品种之一，具有“补血圣药”、“妇科要药”之称，在我国已经有二千多年的药用历史，素有“十方九归”之说，为传统的大宗药材。随着对当归药理作用及保健作用认识的不断深入，当归除供药用外，2014年11月更被列入了药食同源目录中，受到食品行业的青睐，同时也进一步加速了当归市场的需求。当归传统以根入药，即传统以干燥的当归根入药，茎叶部分多丢弃，一方面造成资源的严重浪费，另一方面也造成了环境的污染。因此，对当归药材进行不断的开发与研究迫在眉睫，也是目前研究的热点。
对当归治疗贫血的研究已有大量文献报道，如：不同提取方法的当归补血汤对化疗贫血模型的药效学研究、当归多糖铁治疗溶血性贫血小鼠的实验研究、当归补血汤干预化疗贫血模型小鼠药效学研究等；但到目前为止，尚未见有关新鲜的当归根榨汁物、新鲜的当归茎叶榨汁物、当归茎叶水提物干预贫血的研究报道。
发明内容
本发明的目的其一是提供新鲜当归根与新鲜当归茎叶榨汁的制备方法，以及当归根榨汁物、当归茎叶榨汁物在改善血虚症状中的应用。
本发明的另一目的是提供干燥当归茎叶水提物的制备方法，以及当归茎叶水提物在治疗改善血虚症状中的应用。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案分别如下所述。
一种新鲜当归根与新鲜当归茎叶榨汁的加工方法，其特征在于：取新鲜当归根或新鲜当归茎叶，剪成小段；用榨汁机进行榨汁，弃去残渣，加水定容，得当归根榨汁物或当归茎叶榨汁物，于2～10℃保存备用；所述榨汁物为2g生药·ml-1药液。
一种干燥当归茎叶水提物的制备方法，其特征在于：取干燥当归茎叶，剪成小段；用25倍量的自来水浸泡30min，煎煮2次，第一次40min，第二次30min，合并两次滤液，浓缩两次提取物并定容，得当归茎叶提取物，于2～10℃保存备用；所述提取物为2g生药·ml-1药液。
一种当归根榨汁物在治疗改善血虚症状中的应用，其特征在于：以当归根榨汁物作为活性成份，按照常规保健食品制备方法，制成临床上可以接受的片剂、胶囊剂、茶剂、饮品。
一种当归茎叶榨汁物在治疗改善血虚症状中的应用，其特征在于：以当归茎叶榨汁物作为活性成份，按照常规保健食品制备方法，制成临床上可以接受的片剂、胶囊剂、茶剂、饮品。
一种当归茎叶水提物在治疗改善血虚症状中的应用，其特征在于：以当归茎叶水提物作为活性成份，按照常规保健食品制备方法，制成临床上可以接受的片剂、胶囊剂、茶剂、饮品。
发明人经过研究发现，上述当归茎叶榨汁物与水提物、当归根榨汁物均具有保护红细胞损伤的作用，对溶血性贫血具有一定的治疗作用。本发明尚未见任何相关文献报道及使用。尤其是当归茎叶的有效功能，变废为宝；本发明实质是对于当归整体的开发利用，改变了仅以干燥当归根入药的传统方法。下述实验例为当归茎叶资源的回收利用提供一定的实验依据以及提供当归药材资源有效利用的新方法。
实验例 本发明干预溶血性贫血药效学研究结果。
1当归根、茎叶榨汁液与水提液对血虚动物模型影响
1.1实验材料受试药物：当归根水煎液、当归根榨汁物、当归茎叶水煎液、当归茎叶榨汁物；受试动物：SPF级小鼠，♀、♂各半，体重(20±2)g，由中国农业科学院兰州兽医研究所提供。
1.2造模及给药84只小鼠，随机分为空白组、阳性组、模型组、当归根水煎液组、当归根榨汁组、当归茎叶榨汁组、当归茎叶水煎液组，共7组，每组12只，雌雄各半。除空白组外，其余各组分别于实验第1，4，7天皮下注射乙酰苯肼(APH)的生理盐水，APH剂量为0.2、0.1、0.1g/kg,按体重0.01mL/g给药。同时并限制给食，给食量为每只每天5g。于造模第1天开始灌胃给予当归各部分提取物(2g生药·ml-1)。阳性对照组给予复方阿胶浆0.4ml/次，空白组和模型组给予等量生理盐水，一天一次，连续给药13天。
1.3观测指标第13天给药30min后，股动脉采血，取部分血液检测其红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)和血小板数量(PLT)，剩余的置于离心管中，室温静置30～60min,于低温离心机3000r/min，4℃离心10min，收集血清，-80℃冰箱保存，用于试剂盒检测分析。用脊椎脱臼法将小鼠全部处死，取其胸腺和脾脏、肝脏，称重，根据公式计算胸腺指数、肝脏指数和脾脏指数。
胸腺指数(TI)＝胸腺湿重(g)/体重(g)×100，脾脏指数(SI)＝脾脏湿重(g)/体重(g)×100，肝脏指数＝肝脏湿重(g)/体重(g)×100，再取各组小鼠脾脏、肝脏保存于10％甲醛中，并进行常规HE染色，以备病理组织学观察。
1.4统计学处理采用SPSS17.0统计分析软件处理数据，计量数据以表示。
2结果
2.1一般外观特征观察
与正常对照组相比，模型组中各小鼠被毛蓬乱，精神倦怠，自发活动少，眼睛暗淡，耳朵、尾均为白色，喜扎堆、进食量少。与模型组相比，各给药组喜动，耳朵、尾巴为粉红色，进食量多。
2.2血常规检测
2.2.1当归根榨汁与当归根水煎液对小鼠Hb、RBC、PLT的影响
表1.各组小鼠Hb、RBC、PLT变化的比较(n＝10)
分组 Hb(g/L) RBC(×1012/L) PLT(×109/L) 空白组 100.35±7.94 6.25±0.41 612.5±172.10 模型组 79.05±6.43△ 4.96±0.28△ 419.39±114.95△ 阳性组 106.85±8.31* 6.23±0.47* 570.6±109.51* 当归根水煎液 110.1±13.47* 6.28±0.71* 705.4±250.95* 当归根榨汁 115.15±11.84* 6.34±0.64* 846.67±341.99**
与空白组比较△P<0.05；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01
2.2.2当归茎叶榨汁与当归茎叶水煎液对小鼠Hb、RBC、PLT的影响
表2.各组小鼠Hb、RBC、PLT变化的比较(n＝10)
分组 Hb(g/L) RBC(×1012/L) PLT(×109/L) 空白组 100.35±7.94 6.25±0.41 612.5±172.10 模型组 79.05±6.43△ 4.96±0.28△ 419.39±114.95△ 阳性组 106.85±8.31* 6.23±0.47* 570.6±109.51* 当归茎叶水煎液 107±8.63* 6.05±0.40* 611.9±199.10* 当归茎叶榨汁 107.89±19.55* 6.20±0.53* 826.41±232.90*
与空白组比较△P<0.05；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01
2.3小鼠体重、胸腺指数、脾指数、肝指数的计算
2.3.1当归根榨汁与当归根水煎液对小鼠体重、胸腺指数、脾指数、肝指数的影响
表3.小鼠体重、胸腺指数、脾指数、肝脏指数的比较(n＝10)
分组 给药后体重变化(g) 肝指数 脾指数 胸腺指数 空白组 9.57±1.70 4.82±0.37 0.33±0.11 0.31±0.07 模型组 7.91±1.76△ 5.53±0.42△△ 1.05±0.23△△ 0.23±0.07△ 阳性组 10.25±2.32* 5.07±0.53* 0.86±0.14* 0.36±0.07** 当归根水煎液 11.10±3.01* 5.23±0.13* 0.84±0.06* 0.34±0.05** 当归根榨汁 9.57±2.08* 4.35±0.31** 0.65±0.08** 0.28±0.03*
与空白组比较△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01
2.3.2当归茎叶榨汁与当归茎叶水煎液对小鼠体重、胸腺指数、脾指数、肝指数的影响
表4.小鼠体重、胸腺指数、脾指数、肝脏指数的比较(n＝10)
分组 给药后体重变化(g) 肝指数 脾指数 胸腺指数 空白组 9.57±1.70 4.82±0.37 0.33±0.11 0.31±0.07 模型组 7.91±1.76△ 5.53±0.42△△ 1.05±0.23△△ 0.23±0.07△ 阳性组 10.25±2.32* 5.07±0.53* 0.86±0.14* 0.36±0.07** 当归茎叶水煎液 10.48±3.74* 5.26±0.71 0.77±0.11* 0.30±0.06* 当归茎叶榨汁 11.32±3.32** 4.77±1.37* 0.78±0.25* 0.31±0.09*
与空白组比较△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01
2.4各项生化指标的检测
2.4.1小鼠血液中G6PD含量的检测
2.4.1.1当归根榨汁与当归根水煎液对小鼠G6PD含量的影响
表5.各组小鼠血液中G6PD含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 G6PD(ng/mL) 空白组 —— 0.67±0.04* 模型组 —— 0.16±0.02 阳性组 0.4ml/次 0.82±0.03* 当归根水煎液 40g/kg 0.79±0.10* 当归根榨汁 40g/kg 0.67±0.09*
与模型组比较*P<0.05
2.4.1.2当归茎叶榨汁与当归茎叶水煎液对小鼠G6PD含量的影响
表6.各组小鼠血液中G6PD含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 G6PD(ng/mL) 空白组 —— 0.67±0.04* 模型组 —— 0.16±0.02 阳性组 0.4ml/次 0.82±0.03* 当归茎叶水煎液 40g/kg 0.76±0.003* 当归茎叶榨汁 40g/kg 0.95±0.03*
与模型组比较*P<0.05
2.4.2不同加工方法对小鼠血液中GR的影响
2.4.2.1当归根榨汁与当归根水煎液对小鼠GR含量的影响
表7.各组小鼠血液中GR含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 GR(U/L) 空白组 —— 143.71±9.40* 模型组 —— 128.26±5.51 阳性组 0.4ml/次 144.12±5.46* 当归根水煎液 40g/kg 158.76±4.95* 当归根榨汁 40g/kg 158.06±3.33*
与模型组比较*P<0.05
2.4.2.2当归茎叶榨汁与当归茎叶水煎液对小鼠GR含量的影响
表8.各组小鼠血液中GR含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 GR(U/L) 空白组 —— 143.71±9.40* 模型组 —— 128.26±5.51 阳性组 0.4ml/次 144.12±5.46* 当归茎叶水煎液 40g/kg 149.07±12.42* 当归茎叶榨汁 40g/kg 149.88±3.85*
与模型组比较*P<0.05
2.4.3不同加工方法对小鼠血液中IL-2的影响
2.4.3.1当归根榨汁与当归根水煎液对小鼠IL-2含量的影响
表9.各组小鼠血液中IL-2含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 IL-2(pg/mL) 空白组 —— 33.63±0.63* 模型组 —— 19.77±6.35 阳性组 0.4ml/次 31.12±5.83* 当归根水煎液 40g/kg 36.02±0.58* 当归根榨汁 40g/kg 43.86±3.83*
与模型组比较*P<0.05
2.4.3.2当归茎叶榨汁与当归茎叶水煎液对小鼠IL-2含量的影响
表10.各组小鼠血液中IL-2含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 IL-2(pg/mL) 空白组 —— 33.63±0.63* 模型组 —— 19.77±6.35 阳性组 0.4ml/次 31.12±5.83* 当归茎叶水煎液 40g/kg 32.01±3.75* 当归茎叶榨汁 40g/kg 37.53±1.56*
与模型组比较*P<0.05
2.4.4不同加工方法对小鼠血液中EPO的影响
2.4.4.1当归根榨汁与当归根水煎液对小鼠EPO含量的影响
表11.各组小鼠血液中EPO含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 EPO(IU/L) 空白组 —— 1.76±0.18* 模型组 —— 0.95±0.37 阳性组 0.4ml/次 2.47±0.11* 当归根水煎液 40g/kg 3.41±0.14* 当归根榨汁 40g/kg 3.72±0.59*
与模型组比较*P<0.05
2.4.4.2当归茎叶榨汁与当归茎叶水煎液对小鼠EPO含量的影响
表12.各组小鼠血液中EPO含量的测定(n＝10)
组别 给药剂量 EPO(IU/L) 空白组 —— 1.76±0.18* 模型组 —— 0.95±0.37 阳性组 0.4ml/次 2.47±0.11* 当归茎叶水煎液 40g/kg 3.23±0.29* 当归茎叶榨汁 40g/kg 3.47±0.83*
与模型组比较*P<0.05
2.5小鼠脏器病理切片结果
正常组小鼠脏器HE染色，色彩均匀，细胞排列紧密，无淤血及点状坏死。模型组小鼠脏器细胞内充盈大量血液，细胞因坏死、崩解而明显减少，并有散在的点状坏死，细胞排列疏松，部分肝脏细胞还存在水肿样变。给药组小鼠脏器结构均有不同程度的恢复，淤血及点状坏死均有所减少。
3结论
乙酰苯肼(APH)制造血虚模型属于溶血法，它是一种强氧化剂，对红细胞有缓慢的进行性氧化损伤作用，突出表现在干扰红细胞内葡萄糖--磷酸脱氢酶,使红细胞易于崩解而出现溶血性贫血，使红细胞和血红蛋白明显减少，对免疫和造血系统均有不同程度的损伤，主要表现为肝脾肿大、胸腺缩小。从表1至表4可以得出：本研究设模型组与空白组作对照，血常规检测结果、脏器指数和生化指标检测结果与文献报道一致相符。模型组小鼠在给予乙酰苯肼后，RBC、PLT、Hb、胸腺指数较空白对照组均降低，肝脏指数与脾脏指数均有所增大，且均有显著性差异(P<0.05)，说明模型复制成功。本实验结果还显示给予当归茎叶榨汁液、当归根榨汁液、当归茎叶水煎液与当归根水煎液后，各项指标均有所改善，其中榨汁效果较好。表明当归茎叶水煎液或榨汁液均可减轻APH所致小鼠红细胞氧化性损伤，对溶血性贫血具有一定的治疗作用。
从表6至表12可以得出：G6PD、GR、IL-2、EPO对红细胞均有一定的保护作用，各组小鼠血液中G6PD、GR、IL-2、EPO含量可作为衡量红细胞氧化损伤程度的重要指标，模型组血液中G6PD、GR、IL-2、EPO含量降低，表明模型组小鼠出现了溶血性贫血的病理过程。本研究结果显示当归茎叶水煎液或榨汁液均能显著提高血液中G6PD、GR、IL-2、EPO的水平，提示当归茎叶水煎液或榨汁液均对溶血性贫血具有一定的治疗作用。
从图1～图4可以得出：图1、图3均为小鼠肝脏HE染色病理切片，结果显示，与空白组相比，模型组肝脏细胞大面积发生点状坏死，细胞排列絮乱，有明显的水肿及淤血，表明APH对肝脏细胞具有一定的损伤作用；与模型组相比，当归茎叶、当归根榨汁液与水煎液组肝脏细胞点状坏死明显减少，水肿程度也有所减缓，细胞排列整齐，大小均匀，其中榨汁效果较好。表明当归茎叶水煎液或榨汁液均可减轻APH所致小鼠肝脏细胞水肿及淤血，对肝脏细胞损伤具有一定的修复作用。
图2、图4均为小鼠脾脏HE染色病理切片，结果显示，正常小鼠的脾脏HE染色，为均匀的红色，淋巴细胞排列紧密，无淤血及点状坏死。模型组小鼠的脾脏脾髓内充盈大量血液，脾脏细胞因坏死、崩解而明显减少；白髓体积明显缩小，只有少数淋巴细胞残留在中央动脉周围；红髓中的细胞成分也明显减少，含血量明显增多；有散在的点状坏死，淋巴细胞排列疏松，表明APH对脾脏细胞具有一定的损伤作用；当归茎叶、当归根榨汁液与水煎液组小鼠的脾脏结构均有不同程度的恢复，淤血及点状坏死均有所减少。表明当归茎叶水煎液或榨汁液均可减轻APH所致小鼠脾脏细胞的点状坏死及淤血，对脾脏细胞损伤具有一定的修复作用。
本实验研究均显示当归茎叶水煎液或榨汁液对APH诱导的小鼠溶血性贫血均有较好的治疗作用。提示当归茎叶水煎液或榨汁液对血虚症状具有一定的改善作用，旨在为当归资源的综合利用提供新的用途。
附图说明
图1是当归茎叶水煎液、榨汁对小鼠肝脏组织病理变化的影响(HE染色×40)；
图2是当归茎叶水煎液、榨汁对小鼠脾脏组织病理变化的影响(HE染色10)；
图3是当归根水煎液、榨汁对小鼠肝脏组织病理变化的影响(HE染色×40)；
图4是当归根水煎液、榨汁对小鼠脾脏组织病理变化的影响(HE染色×10)。
图1至图4中：A：空白组，B：模型组，C：阳性组，D：水煎液组，E：榨汁组。
具体实施方式
下述当归药材，由甘肃中医学院鉴定教研室晋玲副教授鉴定，为Radix Angelica sinensis。
实施例1制备当归茎叶汁饮品
将新鲜当归茎叶剪成小段，用榨汁机进行榨汁，弃去残渣，得当归茎叶汁；同时将苹果、山楂榨汁。按体积比例当归茎叶汁：苹果汁：山楂汁为3:1:1的制成当归茎叶汁饮品。
用法及功效：代茶频饮，具有滋阴养血，活血化瘀的功效。
实施例2制备当归根汁袋泡茶
将新鲜当归根剪成小段，用榨汁机进行榨汁，弃去残渣，得当归根汁；常规方法将当归根汁进行真空冷冻干燥得当归根汁粉末；取当归根汁粉末9g，川芎3g，用茶叶滤纸袋进行包装，得当归根汁袋泡茶。
用法及功效：用沸水冲泡代茶频饮，具有补血化瘀，通经止痛的功效。
实施例3制备当归茎叶袋泡茶
称取干燥当归茎叶粉末18g，川芎粉末3g，用茶叶滤纸袋进行包装，即得当归茎叶袋泡茶。
用法及功效：用沸水冲泡代茶频饮，具有补血活血，通经止痛的功效。
实施例4制备当归茎叶饮品
称取干燥当归茎叶10g，枸杞5g，用茶叶滤纸袋进行包装，得当归茎叶枸杞袋泡茶。
用法及功效：用沸水冲泡代茶频饮，具有补血活血，明目的功效。
实施例5制备当归根汁胶囊
按照实施例2提供的方法制备当归根汁粉末；将当归根粉末过60目筛，称取当归根汁粉末100g，加60g微粉硅胶混匀，用全自动胶囊填充机填充入0号硬胶囊，每粒装量0.5g。
用法用量：口服，一次5～6粒，一日3次。
功效：补血活血，调经止痛，润肠通便，适用于血虚便秘，经期腹痛的人群。
实施例6制备当归根汁咀嚼片
按照实施例2提供的方法制备当归根汁粉末；将30％当归根汁粉末与30％乳糖、30％糊精、1.5％柠檬酸、8％甘露醇混合均匀，过100目筛；用70％乙醇为润湿剂制软材，挤压法过18目筛制粒，干燥。在干颗粒中加入3g硬脂酸镁、30g滑石粉混匀，用14目筛整粒后压片，每片重0.5g。
用法用量：口服，一次5～6片，一日3次。
功效：补血活血，调经止痛，润肠通便，适用于血虚便秘，经期腹痛的人群。