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1、(10)授权公告号 CN 103494862 B (45)授权公告日 2015.02.18 CN 103494862 B (21)申请号 201310453837.7 (22)申请日 2013.09.29 A61K 36/32(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 39/02(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 19/10(2006.01)。
2、 A61P 31/20(2006.01) (73)专利权人 西北师范大学 地址 730070 甘肃省兰州市安宁区安宁东路 967 号 (72)发明人 孔维宝 张继 白万明 牛世全 张文 许晓卉 (74)专利代理机构 甘肃省知识产权事务中心 62100 代理人 张英荷 (54) 发明名称 从油橄榄加工废液中提取橄榄多酚的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种从油橄榄加工废液中提取 多酚的方法， 属于生物分离技术领域。本发明以 油橄榄加工废液为原料， 采用乙醇沉淀技术和大 孔吸附树脂分离技术， 得到高品质橄榄多酚， 同时 还得到了功能饲料添加剂和橄榄蛋白 - 多糖复合 物， 实现了油橄榄加工废液的。
3、综合开发利用， 并为 橄榄多酚的生产提供技术支持， 具有良好的经济 效果社会效果。 (51)Int.Cl. 审查员 左丽 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 (10)授权公告号 CN 103494862 B CN 103494862 B 1/1 页 2 1. 一种从油橄榄加工废液中提取橄榄多酚的方法， 包括以下工艺步骤 ： （1） 将油橄榄加工新鲜废液用筛网过滤， 去除废液中的固体颗粒物， 得到滤液 A 和滤渣 A， 并将滤液 A 离心分离得到上清液 B 和沉淀 B ； 滤渣 A 与沉淀。
4、 B 混合， 干燥， 粉碎后作为功 能饲料添加剂 ； 离心分离的转速为 2000 5000rpm， 时间为 10 30 min ； 所述油橄榄加工 新鲜废液是用油橄榄果实生产加工橄榄油的过程中产生的废液 ； （2） 上清液 B 用无水乙醇沉淀， 离心分离， 得到上清液 C 和沉淀 C ； 上清液 C 经真空减压 浓缩回收乙醇后得到粗多酚浓缩液， 多酚浓缩液经大孔吸附树脂吸附、 解吸， 得含橄榄多酚 的解吸液， 解吸液再经真空浓缩、 干燥， 得橄榄多酚固体产品 ； 所述离心分离的转速为 2000 5000rpm， 时间为 10 30 min ； 所述上清液 B 用乙醇沉淀的工艺条件为 ： 在上清。
5、液 B 中加入无水乙醇使混合液中乙醇 的体积分数为 20 % 50 %， 在 0 15下沉淀 2 8 h ； 所述橄榄多酚的吸附条件为 ： 将上清液 C 经真空减压浓缩至浓度为 50 200 mg/L 的 粗多酚浓缩液， 再将粗多酚浓缩液与大孔吸附树脂以 5:1 15:1 的体积 / 质量比混合， 在 20 30 下搅拌吸附 0.5 3 h 达到平衡 ； 所述多酚浓缩液的解吸工艺为 ： 以质量百分数 50% 80 % 的乙醇水溶液为解吸液， 将 解析液与吸附饱和树脂以 5:1 15:1 mL/g 比例混合， 在 35 45下搅拌解吸 1 4 h ； 所述吸附、 解析的搅拌转速为 50 200 。
6、rpm ； （3） 沉淀 C 用质量百分数 50% 80% 的乙醇水溶液洗涤， 得到洗涤液 D 和沉淀 D， 洗涤 液 D 与上清液 C 混合后经真空减压浓缩回收乙醇后得到粗多酚浓缩液， 沉淀 D 经真空干燥 后得橄榄蛋白 - 多糖复合物。 2. 如权利要求 1 所述从油橄榄加工废液中提取橄榄多酚的方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中， 过滤所用筛网的目数为 80 200 目。 3. 如权利要求 1 所述从油橄榄加工废液中提取橄榄多酚的方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 、（2） 中， 所述干燥方式为热风干燥或真空干燥。 权 利 要 求 书 CN 103494862 B 2 1/3 页 。
7、3 从油橄榄加工废液中提取橄榄多酚的方法 技术领域 0001 本发明属于生物分离技术领域， 涉及一种从油橄榄加工废液中提取多酚的方法， 特别涉及从油橄榄加工废液中分离提取橄榄多酚的方法。 技术背景 0002 植物多酚是一类广泛存在于植物体内的多元酚类物质， 主要存在于植物的皮、 根、 木、 叶、 果中， 它也是一类具有独特生理活性和药理活性的天然产物。 大量研究表明， 植物多 酚在抗诱变、 抗肿瘤、 抗病毒、 抗微生物、 抗衰老、 抗氧化等很多方面具有良好的作用， 在制 药、 生化、 日化、 食品以及精细化工等高科技领域具有广阔的应用前景。 近年来， 研究较多的 多酚产品主要以茶叶多酚和葡萄籽。
8、多酚为主。 橄榄多酚是从橄榄叶或橄榄中提取的生物活 性成分。现代理化分析研究表明， 橄榄中所含的主要成分为多酚类化合物， 如没食子酸、 并 没食子酸、 短叶苏木酚、 金丝桃苷和 3,3 - 二甲氧基并没食子酸等鞣质类多酚化合物， 其 中榄之香、 檀香、 三棱这三种多酚含量最高。现代药理学研究表明， 橄榄多酚类物质具有增 强免疫、 抗氧化、 抗病毒、 抗菌消炎镇痛、 解酒护肝， 抑制血糖升高， 增加骨密度和骨钙含量， 抗乙肝病毒等作用。荷兰 DSM 公司、 德国 Burgundy 公司和法国 La Gardonnenque 集团及我 国的广东天祥、 上海健奥、 北京华源禾等企业均有橄榄提取物或橄。
9、榄多酚相关产品的开发 和销售。 0003 在用油橄榄果实生产加工橄榄油的过程中产生大量的废液， 其中含有高浓度的多 酚类化合物、 蛋白质、 多糖和维生素等多种生物活性成分， 但是这些废液均未加以开发利 用， 不仅造成了极大的资源浪费， 而且油橄榄加工废液的直接排放造成了环境污染。因此， 油橄榄加工废液的开发利用具有十分重要的意义。 发明内容 0004 本发明的目的是针对现有技术中存在的问题， 提供一种从油橄榄加工废液中提取 橄榄多酚的方法。 0005 本发明从油橄榄加工废液中提取多酚的方法， 包括以下工艺步骤 ： 0006 （1） 将油橄榄加工新鲜废液用筛网过滤 （过滤所用筛网的目数为 80 。
10、200 目） ， 去 除废液中的固体颗粒物， 得到滤液 A 和滤渣 A， 并将滤液 A 离心分离得到上清液 B 和沉淀 B ； 滤渣 A 与沉淀 B 混合， 干燥， 粉碎后作为功能饲料添加剂 ； 0007 （2） 上清液 B 用乙醇沉淀， 离心分离， 得到上清液 C 和沉淀 C ； 上清液 C 经真空减压 浓缩回收乙醇后得到粗多酚浓缩液， 粗多酚浓缩液经大孔吸附树脂吸附、 解吸， 得含橄榄多 酚的解吸液， 解吸液再经真空浓缩、 干燥， 得橄榄多酚固体产品。 0008 上清液 B 用乙醇沉淀的工艺条件为 ： 在上清液 B 中加入无水乙醇使混合液中乙醇 的体积分数为 20 % 50 %， 在 0 。
11、15下沉淀 2 8 h。 0009 橄榄多酚的吸附条件为 ： 将上清液 C 经真空减压浓缩至浓度为 50 200 mg/L 的 粗多酚浓缩液， 再将粗多酚浓缩液与大孔吸附树脂以 5:1 15:1 的体积 / 质量比混合， 在 说 明 书 CN 103494862 B 3 2/3 页 4 20 30 下搅拌吸附 0.5 3 h 达到平衡。搅拌转速为 50 200 rpm。 0010 多酚浓缩液的解吸工艺为 ： 以质量百分数 50% 80 % 的乙醇水溶液为解吸液， 将 解析液与吸附饱和树脂以 5:1 15:1 mL/g 比例混合， 在 35 45下搅拌解吸 1 4 h。 搅拌转速为 50 200。
12、 rpm。 0011 步骤 （1） 、（2） 中， 离心分离的转速为 2000 5000rpm， 时间为 10 30 min ； 干燥 方式为热风干燥或真空干燥。 0012 （3） 沉淀 C 用质量百分数 50% 80% 的乙醇水溶液洗涤， 得到洗涤液 D 和沉淀 D， 沉淀 D 经真空干燥后得橄榄蛋白 - 多糖复合物。洗涤液 D 与上清液 C 混合后经真空减压浓 缩回收乙醇后得到粗多酚浓缩液， 再经大孔吸附树脂吸附、 解吸制备橄榄多酚产品。 0013 本发明相对现有技术具有以下优点 ： 0014 1、 本发明采用乙醇沉淀技术和大孔吸附树脂分离技术从油橄榄加工废液中提纯 得到了高品质橄榄多酚，。
13、 同时还得到了橄榄蛋白 - 多糖复合物， 实现了油橄榄加工废液中 有效成分的集成提取分离， 为油橄榄加工废弃物的综合开发利用和橄榄多酚的生产提供技 术支持 ； 0015 2、 本发明可橄榄多酚、 橄榄蛋白 - 多糖复合物， 提取分离效率高， 产品的纯度高， 0016 3、 本发明提取工艺绿色环保剂， 安全可靠， 具有良好的工业化应用潜力。 附图说明 0017 图 1 为本发明提取工艺的流程图。 具体实施方式 0018 下面通过具体实施例对本发明的提取工艺作进一步说明。 0019 实施例 1 0020 取新鲜油橄榄加工废液 1000 mL（多酚含量为 4.6 g/L） ， 用 80 目滤布过滤，。
14、 得滤 渣 A 和滤液 A， 滤液 A 经 2000 rpm 离心 30 min 后得上清液 B 和沉淀 B， 混合滤渣 A 和沉淀 B， 经热风干燥、 粉碎后得功能型饲料添加剂。 0021 在上清液 B 中加入无水乙醇使混合液中乙醇的体积百分数为 20 %， 充分搅拌后在 0下沉淀 2 h， 混合物经 2000 rpm 离心 30 min 后得上清液 C 和沉淀 C ； 沉淀 C 用 50 % 乙 醇溶液洗涤至洗涤液无色， 收集洗涤液 D 和沉淀 D， 沉淀 D 经真空干燥或冷冻干燥后得橄榄 多糖 - 蛋白复合物。 0022 合并上清液 C 和洗涤液 D， 经真空减压浓缩后回收乙醇， 得到浓。
15、度为 50 mg/L 的粗 多酚浓缩液， 将粗多酚浓缩液样品与经预处理的 AB-8 树脂按 5（mL） :1（g） 比例混合， 在 20 、 50 rpm 转速下搅拌吸附 3 h ； 吸附平衡后用 50 % 的乙醇水溶液作为解吸液， 按解吸 液与饱和树脂比例 5（mL） :1（g） ， 在 35、 50 rpm 转速下搅拌解吸 4 h， 解吸液经真空减压 浓缩、 真空冷冻干燥后得橄榄多酚样品 5.2 g， 固体样品中多酚含量为 65 %， 多酚总收率为 73.5 %。 0023 实施例 2 0024 取新鲜油橄榄加工废液 800 mL（多酚含量为 4.2 g/L） ， 用 100 目滤布过滤，。
16、 得滤 渣 A 和滤液 A， 滤液 A 经 3000 rpm 离心 20 min 后得上清液 B 和沉淀 B， 混合滤渣 A 和沉淀 说 明 书 CN 103494862 B 4 3/3 页 5 B， 经热风干燥、 粉碎后得功能型饲料添加剂。 0025 在上清液 B 中加入无水乙醇使混合液中乙醇的体积分数为 30 %， 充分搅拌后在 5 下沉淀 4 h， 混合物经 3000 rpm 离心 20 min 后得上清液 C 和沉淀 C， 沉淀 C 用 60 % 乙醇 水溶液洗涤至洗涤液无色， 收集洗涤液 D 和沉淀 D， 沉淀 D 经真空干燥或冷冻干燥后得橄榄 多糖 - 蛋白复合物。 0026 合并。
17、上清液 C 和洗涤液 D， 经真空减压浓缩回收乙醇后得到浓度为 100 mg/L 的橄 榄粗多酚浓缩液， 将粗多酚浓缩液与经预处理的 AB-8 树脂按 10（mL） :1（g） 比例混合， 在 25 、 100 rpm转速下搅拌吸附2 h ； 吸附平衡后用60 %的乙醇水溶液作为解吸液， 按解吸 液与饱和树脂比例 10（mL） :1（g） ， 在 40、 100 rpm 转速下搅拌解吸 3 h， 解吸液经真空减 压浓缩、 真空冷冻干燥后得橄榄多酚样品 3.6 g， 固体样品中多酚含量为 71.6 %， 多酚总收 率为 76.7 %。 0027 实施例 3 0028 取新鲜油橄榄加工废液 600。
18、 mL（多酚含量为 2.9 g/L） ， 用 150 目滤布过滤， 得滤 渣 A 和滤液 A， 滤液 A 经 4000 rpm 离心 15 min 后得上清液 B 和沉淀 B， 混合滤渣 A 和沉淀 B， 经热风干燥、 粉碎后得功能型饲料添加剂。 0029 在上清液B中加入无水乙醇使混合液中乙醇的体积分数为40 %， 充分搅拌后在10 下沉淀 6 h， 混合物经 4000 rpm 离心 15 min 后得上清液 C 和沉淀 C， 沉淀 C 用 70 % 乙醇 水溶液洗涤至洗涤液无色， 收集洗涤液 D 和沉淀 D， 沉淀 D 经真空干燥或冷冻干燥后得橄榄 多糖 - 蛋白复合物。 0030 合并上。
19、清液 C 和洗涤液 D， 经真空减压浓缩回收乙醇后得到浓度为 150 mg/L 的橄 榄粗多酚浓缩液， 将粗多酚浓缩液与经预处理的 X-5 树脂按 15（mL） :1（g） 比例混合， 在 30 、 150 rpm转速下搅拌吸附1 h ； 吸附平衡后用70 %的乙醇水溶液作为解吸液， 按解吸 液与饱和树脂比例 15（mL） :1（g） ， 在 45、 150 rpm 转速下搅拌解吸 2 h， 解吸液经真空减 压浓缩、 真空冷冻干燥后得橄榄多酚样品 2.0 g， 固体样品中多酚含量为 57.8 %， 多酚总收 率为 66.4 %。 0031 实施例 4 0032 取新鲜油橄榄加工废液 400 m。
20、L（多酚含量为 2.1 g/L） ， 用 200 目滤布过滤， 得滤 渣 A 和滤液 A， 滤液 A 经 5000 rpm 离心 10 min 后得上清液 B 和沉淀 B， 混合滤渣 A 和沉淀 B， 经热风干燥、 粉碎后得功能型饲料添加剂。 0033 在上清液B中加入无水乙醇使混合液中乙醇的体积分数为50 %， 充分搅拌后在15 下沉淀 8 h， 混合物经 5000 rpm 离心 10 min 后得上清液 C 和沉淀 C， 沉淀 C 用 80 % 乙醇 水溶液洗涤至洗涤液无色， 收集洗涤液 D 和沉淀 D， 沉淀 D 经真空干燥或冷冻干燥后得橄榄 多糖 - 蛋白复合物。 0034 合并上清液。
21、 C 和洗涤液 D， 经真空减压浓缩回收乙醇后得到浓度为 200 mg/L 的橄 榄粗多酚浓缩液， 将粗多酚浓缩液与经预处理的 NKA-9 树脂按 15（mL） :1（g） 比例混合， 在 20 、 200 rpm转速下搅拌吸附0.5 h ； 吸附平衡后用80 %的乙醇水溶液作为解吸液， 按解 吸液与饱和树脂比例 15（mL） :1（g） ， 在 45、 200 rpm 转速下搅拌解吸 1 h， 解吸液经真空 减压浓缩、 真空冷冻干燥后得橄榄多酚样品 0.9 g， 固体样品中多酚含量为 76.5 %， 多酚总 收率为 82 %。 说 明 书 CN 103494862 B 5 1/1 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 103494862 B 6 。