《一种精制冠心片的制备方法及应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种精制冠心片的制备方法及应用.pdf（6页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 103494898 A (43)申请公布日 2014.01.08 CN 103494898 A (21)申请号 201310467583.4 (22)申请日 2013.10.09 A61K 36/71(2006.01) A61K 9/20(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 7/00(2006.01) A61P 19/08(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 南京正亮医药科技有限公司 地址 211200 江苏省南京市溧水经济开发区 柘宁东路 369 号 (72)发明人 不公告发明人 (54) 发明名称。
2、 一种精制冠心片的制备方法及应用 (57) 摘要 本发明提供一种精制冠心片的制备方法， 由 丹 参 375g、 赤 芍 187.5g、 川 芎 187.5g、 红 花 187.5g、 降香 125g 作为原料药制成， 采用超临界 萃取制备而成， 使得含量有很大提高， 服用量减 少， 本发明还提供了精制冠心片在制备抑制小鼠 骨髓瘤 SP2/0 细胞增殖药物中的应用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 103494898 A CN 103494898 A 1/。
3、1 页 2 1. 一种精制冠心片的制备方法， 由黄丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g 作为原料药制成， 其特征在于所述的方法由下列步骤组成 ： 取丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g， 加入到 CO2超临界萃取器中， 乙醇作为 夹带剂， 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 4-6%， 萃取压力 15-30MPa， 温度 30-50， CO2 流量 1-3m1/g 生药min， 萃取时间 150-180min， 得超临界萃取物， 加入淀粉， 70% 乙醇制颗 粒， 干燥， 。
4、压片， 制成 500 片， 每片重 0.5g。 2. 根据权利要求 1 所述一种精制冠心片的制备方法， 其特征在于所述 CO2超临界萃取 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 5%。 3. 根据权利要求 1 所述一种精制冠心片的制备方法， 其特征在于所述 CO2超临界萃取 的萃取压力 20MPa， 温度 40， CO2流量 2ml/g 生药min， 萃取时间 160min。 4. 根据权利要求 1 所述一种精制冠心片在制备抑制小鼠骨髓瘤 SP2/0 细胞增殖药物 中的应用， 其特征在于精制冠心片由黄丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g 。
5、作为原料药制成， 制备方法由下列步骤组成 ： 取丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g， 加入到 CO2 超临界萃取器中， 乙醇作为夹带剂， 夹带剂占 总萃取溶剂的体积百分比为 4-6%， 萃取压力 15-30MPa， 温度 30-50， CO2 流量 1-3m1/g 生 药 min， 萃取时间 150-180min， 得超临界萃取物， 加入淀粉， 70% 乙醇制颗粒， 干燥， 压片， 制 成 500 片， 每片重 0.5g。 5.根据权利要求4所述一种精制冠心片在制备抑制小鼠骨髓瘤SP2/0细胞增殖药物中 的应用， 其特征在于精制冠。
6、心片中所述 CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为 5%。 6.根据权利要求4所述一种精制冠心片在制备抑制小鼠骨髓瘤SP2/0细胞增殖药物中 的应用， 其特征在于精制冠心片中所述 CO2超临界萃取的萃取压力 20MPa， 温度 40， CO2流 量 2ml/g 生药min， 萃取时间 160min。 权 利 要 求 书 CN 103494898 A 2 1/4 页 3 一种精制冠心片的制备方法及应用 技术领域 0001 本发明涉及中药制剂技术领域， 具体涉及一种精制冠心片的制备方法及应用。 背景技术 0002 精制冠心片记载于药典， 处方为丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川。
7、芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g， 以上五味， 降香提取挥发油， 蒸馏后的水溶液另器收集 ； 其余赤芍等四 味用 85乙醇加热回流二次， 第一次 3 小时， 第二次 2 小时， 滤过， 合并滤液， 回收乙醇， 与 上述水溶液合并， 减压浓缩至相对密度为 1.35 1.40（50） ， 加辅料适量， 制成颗粒， 干 燥， 加入降香挥发油， 混匀， 压制成 1000 片， 包糖衣， 即得， 能活血化瘀。用于心血瘀阻之冠 心病， 心绞痛。 0003 现有技术中， 尚未有精制冠心片在提取制备方面采用超临界技术的报道， 而采用 水煎煮的方法， 工艺粗糙、 落后， 杂质多， 导致患。
8、者用量过大， 不方便服用， 严重影响了本品 在临床上应用。 发明内容 0004 发明目的 ： 为了解决上述问题， 本发明的目的在于提供一种精制冠心片的制备方 法。 0005 本发明的另一个目的在于提供一种精制冠心片在制备抑制小鼠骨髓瘤 SP2/0 细 胞增殖药物中的应用。 0006 技术方案 ： 本发明的目的是通过如下的方案实现的 ： 0007 一种精制冠心片的制备方法， 由丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g 作为原料药制成， 所述的方法由下列步骤组成 ： 取丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 18。
9、7.5g、 降香 125g， 加入到 CO2 超临界萃取器中， 乙醇作为夹带 剂， 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 4-6%， 萃取压力 15-30MPa， 温度 30-50， CO2流量 1-3m1/g 生药min， 萃取时间 150-180min， 得超临界萃取物， 加入淀粉， 70% 乙醇制颗粒， 干 燥， 压片， 制成 500 片， 每片重 0.5g。 0008 上述一种精制冠心片的制备方法， 所述 CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体 积百分比为 5%。 0009 上述一种精制冠心片的制备方法， 所述 CO2超临界萃取的萃取压力 20MPa， 温度 40， CO2流量 2ml/g。
10、 生药min， 萃取时间 160min。 0010 上述一种精制冠心片在制备抑制小鼠骨髓瘤 SP2/0 细胞增殖药物中的应用， 精制 冠心片由黄丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g 作为原料药 制 成， 制备方法由下列步骤组成 ： 取丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g， 加入到 CO2超临界萃取器中， 乙醇作为夹带剂， 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 4-6%， 萃取压力15-30MPa， 温度30-50， CO2流量1-3m1/g生药 min， 萃取时间150-18。
11、0min， 得超临界萃取物， 加入淀粉， 70% 乙醇制颗粒， 干燥， 压片， 制成 500 片， 每片重 0.5g。 说 明 书 CN 103494898 A 3 2/4 页 4 0011 上述一种精制冠心片在制备抑制小鼠骨髓瘤 SP2/0 细胞增殖药物中的应用， 精制 冠心片中所述 CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 5%。 0012 上述一种精制冠心片在制备抑制小鼠骨髓瘤 SP2/0 细胞增殖药物中的应用， 精制 冠心片中所述 CO2超临界萃取的萃取压力 20MPa， 温度 40， CO2流量 2ml/g 生药min， 萃 取时间 160min。 0013 现有技术中， 精。
12、制冠心片每片0.5g， 每次4片， 一日2-3次， 采用本发明制备成的精 制冠心片每片0.5g， 但含有的药材量是原来的2倍， 因此每次仅需2片， 一日服用2次， 在具 有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。 具体实施方式 0014 以下通过实施例形式， 对本发明的上述内容再作进一步的详细说明， 但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例， 凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。 0015 实施例 1 0016 取丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g， 加入到 CO2 超临 界萃取器中， 乙醇作为夹带剂。
13、， 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 4%， 萃取压力 15MPa， 温度 30， CO2流量 1m1/g 生药min， 萃取时间 150min， 得超临界萃取物， 加入淀粉， 70% 乙 醇制颗粒， 干燥， 压片， 制成 500 片， 每片重 0.5g。 0017 实施例 2 0018 取丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g 加入到 CO2超临 界萃取器中， 乙醇作为夹带剂， 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 6%， 萃取压力 30MPa， 温度 50， CO2流量 3m1/g 生药min， 萃取时间 180min， 得超临界萃取。
14、物， 加入淀粉， 70% 乙 醇制颗粒， 干燥， 压片， 制成 500 片， 每片重 0.5g。 0019 实施例 3 0020 取丹参 375g、 赤芍 187.5g、 川芎 187.5g、 红花 187.5g、 降香 125g 加入到 CO2超临 界萃取器中， 乙醇作为夹带剂， 夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为 5%， 萃取压力 20MPa， 温度 40， CO2流量 2m1/g 生药min， 萃取时间 160min， 得超临界萃取物， 加入淀粉， 70% 乙 醇制颗粒， 干燥， 压片， 制成 500 片， 每片重 0.5g。 0021 实施例 4 ： 精制冠心片抑制 SP2/0 细胞增殖。
15、的实验研究资料 0022 1 实验材料 0023 1.1 实验用细胞株 0024 小鼠骨髓瘤 SP2/0 细胞， 南京正亮医药科技有限公司实验室细胞库， DMEM+10%FBS 常规培养。 0025 1.2 实验药物 0026 研究药物 ： 本发明精制冠心片 ： 按实施例 3 方法制备。 0027 药液储液 ： 称取 100mg 精制冠心片， 溶于 5ml 无水乙醇中， 0.2m 滤器过滤， 500ldoff 管分装， -20存储， 同时 0.2m 滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。 0028 1.3 实验试剂 0029 DMEM（GIBCO 公司 Cat.No.12100-061Lot.No.。
16、758137） ； 胎牛血清 （浙江天杭生物科 说 明 书 CN 103494898 A 4 3/4 页 5 技有限公司 Lot.No.100419） ； NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司 Cat.No.11810-033Lot. No.1088387） ； Trypsin（AMRESCO 公司批号 ： 2010/04） ； EDTA（AMRESCO 公司批号 ： 2009/10） ； Penicillin G Sodium Salt （AMRESCO公司批号 ： 2010242） ； Streptomycin Sulfate （AMRESCO 公司批号 ： 2010382） ； 无水乙。
17、醇 （南京化学试剂有限公司批号 ： 080310182） ； MTT(Biosharp 批 号 ： 0793);PBS（实验室自配） ； 0030 1.4 实验器材 0031 莱卡倒置显微镜 （德国 Leica 型号 ： DM1L） ； 可见 - 紫外光微孔板检测仪 （美国 MD 公司型号 ： SPECTRA MAX190） ； CO2 培养箱 （FORMA 型号 ： 3111） ； 超净台 （苏净集团安泰公 司制造型号 ： SW-CJ-ZFD） ； 纯水仪 （美国 Spring 公司型号 ： S/N020579） ； 精密移液器 （法国 吉尔森公司型号 ： P2） ； 电子天平 （德国赛多利。
18、斯有限公司型号 ： BT323S） ； 全自动高压灭菌 锅 （日本 SANYO 公司型号 ： MLS-3020） ； 台式电热鼓风干燥箱 （上海精密实验设备公司型号 ： DHG9123A） ； 冰箱 （西门子公司型号 ： KG18V21TI） ； 液氮罐 （CBS 型号 ： 2001） ； 低速离心机 （上 海安亭科学仪器厂型号 ： KA-1000） ； 0.2m 滤器 （MILLIPORE 型号 ： SLGP033RB） ； 10cm 培养 皿 (NEST 公司 )、 96 孔培养板 （NEST 公司） ； 细胞计数板 ； 离心管、 移液管、 Tips 若干。 0032 2 实验方法 003。
19、3 1） SP2/0 细 胞 用 DMEM+10%FBS 于 37 、 5%CO2 进 行 常 规 培 养 （10cm 培 养 皿） ， 当细胞生长至对数期时， 收集细胞， 弃去培养液， PBS 轻洗 3 遍， 加入 3ml0.25% 胰蛋白 酶-0.04%EDTA， 37消化2min后， 向其中加入5ml完全培养基中和反应， 吹打细胞后将其转 入离心管中， 1000rpm 离心 5min， 调整细胞悬液浓度 3104 个 /ml。 0034 2） 将细胞种入 96 孔培养板中， 每孔加入细胞悬液 180l， 培养板放入细胞培养箱 中 （37， 5%CO2） 常规培养。 0035 3） 根据细。
20、胞生长情况， 一般长至 50%-70%， 加入精制冠心片溶液， 继续培养 24h。 0036 4） 24h 后加入 20l MTT 溶液 （5mg/ml， 即 0.5%MTT） ， 继续培养 4h。 0037 5） 4h 后扣板法倒去上清， 用吸水纸轻轻拍干， 每孔加入 200l 二甲基亚砜， 置摇 床上低速振荡10min， 使结晶物充分溶解。 在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。 0038 6） 同时设置本底 （不加细胞， 只加培养液） ， 对照孔 （细胞、 相同浓度的药物溶解介 质、 培养液、 MTT、 二甲基亚砜） ， 每组设定 6 个复孔。 0039 7） 结果以药物对细胞的。
21、抑制率表示 ： 0040 细胞增值抑制率 （%） =（对照孔 OD 值 - 给药孔 OD 值） / 对照孔 OD 值 100%。实 验重复 3 次。 0041 3 统计处理 0042 采 用 Microsoft Excel2003 软 件 中 的 相 关 分 析 和 Student t 检 验， 数 据 以 meanS.D. 表示。 0043 4 实验结果 0044 MTT 法实验后统计结果显示， 与对照组比较， 当剂量达到 5mg/ml 时， 对 SP2/0 细 胞增殖抑制有差异 （P0.05） ， 剂量在 10mg/ml 时该差异具有显著性 （P0.01） ， 当剂量达到 15-20mg/ml 时有极显著性差异 （P0.001） 。 0045 表 1 精制冠心片对 SP2/0 细胞增殖抑制影响研 0046 说 明 书 CN 103494898 A 5 4/4 页 6 0047 注 ： 与对照组比较， *P0.01 ； *P0.001 0048 5 实验结论 0049 精制冠心片可以抑制SP2/0细胞增殖， 减少SP2/0细胞的细胞生长数目， 该作用呈 剂量依赖性。 说 明 书 CN 103494898 A 6 。