技术领域
本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其用途。
背景技术
癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，每年都有大量的人死于癌症。抗癌药物的研发一直是药学研究的热点。抗肿瘤药物中有74％是天然产物或其衍生物，如紫杉醇及其衍生物就是目前临床上应用效果比较好的抗肿瘤药物。因此，从天然产物中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物最有重要价值。
本发明涉及的化合物I是一个2011年发表(AntonellaMaggioetal.,2011.Artalbicacid,asesquiterpenewithanunusualskeletonfromArtemisiaalba(Asteraceae)fromSicily.TetrahedronLetters,52(2011)4543–4545)的化合物，我们对化合物I进行了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制备了组合物并对该组合物抗肿瘤活性进行了评价，其具有抗肿瘤活性。
发明内容
本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为50％和50％。
药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗肿瘤作用。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
具体实施方式
实施例1化合物Artalbicacid的制备
化合物Artalbicacid(I)的制备方法参照AntonellaMaggio等人发表的文献(AntonellaMaggioetal.,2011.Artalbicacid,asesquiterpenewithanunusualskeletonfromArtemisiaalba(Asteraceae)fromSicily.TetrahedronLetters,52(2011)4543–4545)的方法。
实施例2Artalbicacid的O-溴乙基衍生物(II)的合成
将化合物I(266mg，1.00mmol)溶于10mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氢氧化钠溶液。混合物在40摄氏度搅拌16h。16h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤5次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73％)。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.41(s,1H),6.06(s,1H),5.76(s,1H),4.99(s,1H),4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H),2.10(s,1H),1.64(s,3H),1.54(s,1H),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05(s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s),33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforC17H26BrO4:373.1014；found373.1017.
实施例3Artalbicacid的O-(二乙胺基)乙基衍生物(III)的合成
将化合物II(187mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(345mg，2.5mmol)，碘化钾(84mg，0.5mmol)和二乙胺(1460mg，20mmol)，混合物加热回流12h。反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物III的棕色粉末(111.3mg,61％)。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.52(s,1H),δ6.13(s,1H),5.81(s,1H),4.73(s,1H),4.62(d,J＝10.9Hz,2H),3.59(s,2H),2.92(s,4H),2.68(d,J＝10.5Hz,3H),2.56(s,2H),2.48(s,2H),2.22(s,1H),1.70(s,3H),1.54(d,J＝10.2Hz,3H),1.16(s,6H),1.00(s,3H).
13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05(s),109.43(s),81.86(s),67.06(s),57.68(s),52.53(s),47.72(s),41.30(s),39.06(s),38.85(s),35.68(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s),12.35(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdforC21H36NO4:366.2644；found:366.2640。
实施例4Artalbicacid的O-(四氢吡咯基)乙基衍生物(IV)的合成
将化合物II(187mg，0.5mmol)溶于15mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(345mg，2.5mmol)，碘化钾(84mg，0.5mmol)和吡咯烷(1420mg，20mmol)，混合物加热回流8h。反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物IV的棕色粉末(107.1mg,59％)。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ14.01(s,1H),6.15(s,1H),5.83(s,1H),4.75(s,1H),4.63(s,1H),3.96(s,1H),3.58(s,2H),2.70(d,J＝6.1Hz,3H),2.56–2.49(m,8H),2.09(s,1H),1.68(d,J＝10.0Hz,7H),1.58(s,2H),1.44(s,1H),1.02(s,3H).
13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ201.85(s),175.85(s),149.07(s),148.11(s),117.03(s),109.33(s),81.78(s),67.00(s),57.64(s),54.44(d,J＝17.1Hz),41.20(s),38.98(s),38.79(s),35.64(s),30.70(s),25.21(s),20.35(s),18.36(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdforC21H34NO4:364.2488；found:364.2491。
实施例5体外抗肿瘤活性筛选
筛选细胞株为HepG2(人肝癌细胞)，PANC-1(人胰腺癌)，MCF-7(人乳腺癌细胞)，SW620(人结肠癌细胞)，A549(人肺癌细胞)，HGC-27(人胃癌细胞)，LO2(人正常肝实质细胞)。
组合物的制备：将50mg化合物III的粉末和50mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组合物。
实验方法：
取对数生长期状态良好的细胞，胰蛋白酶消化，制成5×104细胞/mL的悬液。将细胞悬液移入96孔培养板，每孔100μL，置37℃、5％CO2条件下培养24h。
将受试化合物III、化合物IV和组合物分别用DMSO配制成一定浓度的母液，再用RPMI1640培养基将衍生物母液稀释成不同作用浓度的稀释液。移去旧培养基，加入不同浓度的含药培养基，每孔100μL。另设空白对照组。药物作用48h后，吸弃含药培养基，于每孔加入无血清、无酚红1640培养基100μL，再加入MTT溶液(5mg/mL)10μL，继续温育4h。
吸去各孔内上清液，每孔加入DMSO150μL，暗处振荡10min，使结晶物充分溶解，酶标仪测定490nm处各孔的光吸收值(OD值)，计算细胞的增殖抑制率：抑制率(％)＝(1-用药组平均OD值/空白对照组平均OD值)×100％。应用SPSS16.0软件进行数据处理并计算癌细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)，结果见表1。
表1化合物或组合物对7种癌细胞的体外增殖抑制作用
如表1结果所示，组合物对不同的肿瘤细胞均具有一定的增殖抑制作用；而对于正常的肝实质细胞LO2的IC50非常大(>40μM)、没有增殖抑制作用，说明安全性非常高。化合物III和化合物IV对于所有肿瘤细胞没有增殖抑制作用。组合物表现出较好的抗癌活性，具有开发抗癌药物的潜力。
实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备
取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备
取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100粒。