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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810928553.1 (22)申请日 2018.08.15 (71)申请人 广东省计划生育科学技术研究所 （广东省计划生育专科医院） 地址 510000 广东省广州市梅东路17号 (72)发明人 闫威 唐运革 秦卫兵 刘晓华 伍嘉宝 韩璐 张欣宗 (74)专利代理机构 广州市越秀区海心联合专利 代理 事 务 所( 普 通 合 伙 ) 44295 代理人 蔡国 马赟斋 (51)Int.Cl. A61K 31/585(2006.01) A61P 15/00(2006.01) 。
2、A61P 15/16(2006.01) (54)发明名称 雷公藤内酯酮在制备食蟹猴避孕节育药物 中的应用 (57)摘要 本发明涉及雷公藤内酯酮的用途， 尤其涉及 雷公藤内酯酮在制备食蟹猴避孕节育药物中的 应用。 雷公藤内酯酮具有良好避孕效应， 有效剂 量低， 且没有明显的副作用， 安全有效， 具有良好 的应用前景。 权利要求书1页 说明书4页 附图9页 CN 108938649 A 2018.12.07 CN 108938649 A 1.雷公藤内酯酮作为制备食蟹猴避孕节育药物中的应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108938649 A 2 雷公藤内酯酮在制备食蟹猴避孕节育药物中。
3、的应用 技术领域 0001 本发明涉及雷公藤内酯酮的用途， 尤其涉及雷公藤内酯酮在制备食蟹猴避孕节育 药物中的应用。 背景技术 0002 非激素类避孕主要包括外用杀精子剂、 中草药类避孕药和免疫避孕疫苗。 杀精子 剂作为一种新型药物， 由于人们对它缺乏了解， 对产品的可接受度低等， 都将影响杀精子剂 的最终使用效果。 而免疫避孕疫苗的开发由于其避孕效果难以达到临床要求而被迫停止。 近年来中草药类避孕药如棉酚、 山海棠、 雷公藤多甙等的研究引起人们极大关注。 虽然棉酚 的抗生育作用是肯定的， 但会引起部分受试者不可逆的无精子症和低钾性麻痹， 导致棉酚 无法应用于临床。 实验表明昆明山海棠主要作用。
4、于精子细胞和精子， 且变态期精子细胞和 附睾内的精子对昆明山海棠最敏感。 然而有研究认为昆明山海棠对人精子染色体有诱变作 用， 其能否作为避孕药尚待研究。 雷公藤提取物可致男性精子计数下降， 停药后可恢复正 常， 这种避孕方法既不干扰精子发生， 也不影响内分泌系统， 是一种理想避孕方法。 然而， 雷 公藤提取物中雷公藤总甙、 雷公藤多甙、 雷公藤内酯醇具有良好的避孕效应， 但同时可产生 免疫抑制效应， 影响其进一步应用。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供雷公藤内酯酮的用途， 即雷公藤内酯酮在制药中的应用。 0004 具体地， 本发明提供雷公藤内酯酮作为制备食蟹猴避孕节育药物中的应用。 。
5、0005 雷公藤提取物中雷公藤总甙、 雷公藤多甙、 雷公藤内酯醇具有良好的避孕效应， 但 同时可产生免疫抑制效应， 影响其进一步应用。 雷公藤中的一种单体雷公藤内酯酮 (SD-1)， 本发明人研究发现8-9岁雄性食蟹猴口服0.1mg/kg的剂量雷公藤内酯酮具有良好 避孕效应， 且没有明显的副作用， 显示出良好的应用前景。 0006 (1)非激素男性避孕药SD-1在食蟹猴中有很好的避孕效果： 雄性成年食蟹猴在服 用剂量0.1mg/kg SD-1第5周， 食蟹猴精子几乎100发生变形、 死亡。 目前最长服药时间已 达480多天， 其长期避孕效果也很好。 0007 (2)SD-1有效剂量低： 食蟹猴。
6、以0.1mg/kg剂量服药， 其精子在服药第5周时几乎 100发生严重变形、 死亡。 0008 (3)SD-1避孕是可逆的： 4只食蟹猴服药后精子几乎100变形、 死亡后， 停药5周左 右， 精子基本恢复正常， 表明SD-1的避孕是可逆性的。 0009 (4)SD-1是安全的避孕药： SD-1没有明显的毒副作用， 食蟹猴服药期间血液常规、 生化、 肝功能、 激素、 免疫功能均没有显著变化， 是安全有效剂量。 附图说明 0010 图1是口服SD-1后食蟹猴精子形态变化图， (A)对照组； (B)服药35天； (C)服药180 说 明 书 1/4 页 3 CN 108938649 A 3 天； (。
7、D)服药418天。 0011 图2是食蟹猴精子前向运动百分数(PR)变化图。 0012 图3是食蟹猴精子浓度变化图。 0013 图4停药后精子形态变化图， (A)长期服药组； (B)停药35天； (C)停药106天。 0014 图5喂药前后食蟹猴的体重变化图。 0015 图6喂药前后食蟹猴的红细胞计数变化图。 0016 图7喂药前后食蟹猴的白细胞计数变化图。 0017 图8喂药前后食蟹猴的血红蛋白变化图。 0018 图9喂药前后食蟹猴的谷丙转氨酶变化图。 0019 图10喂药前后食蟹猴的谷草转氨酶变化图。 0020 图11喂药前后食蟹猴的白蛋白/球蛋白比变化图。 0021 图12喂药前后食蟹猴。
8、血液中的肌酐变化图。 0022 图13喂药前后食蟹猴血液中的尿素变化图。 0023 图14喂药前后食蟹猴血液中的尿酸变化图。 0024 图15喂药前后食蟹猴的血糖变化图。 0025 图16喂药前后食蟹猴血液中的黄体生成素变化图。 0026 图17喂药前后食蟹猴血液中的睾酮变化图。 具体实施方式 0027 下面结合具体实施例及附图对本发明作进一步详细说明， 但本发明的保护范围不 限于以下的实施例。 0028 实施例1最低有效剂量 0029 取5只8-10岁食蟹猴分别按5种不同的剂量服用雷公藤内酯酮， 分别为5mg/kg、 0.8mg/kg、 0.2mg/kg、 0.1mg/kg、 0.05mg/。
9、kg， 服用5周后， 除0.05mg/kg外， 其余剂量， 食蟹猴 精子在服药第5周时几乎100发生严重变形、 死亡。 可见， 雷公藤内酯酮的最低有效剂量为 0.1mg/kg。 0030 实施例2SD-1具有良好的避孕效果 0031 将12只雄性食蟹猴分成2组， 实验组9只(编号00298G、 00336G、 00340G、 00339G、 00299G、 00300G、 00337G、 00341G、 00301G)， 其中雄性食蟹猴00301G在实验前长期口服 0.1mg/kg SD-1超过7个月， 对照组3只(编号00343G、 00338G、 00342G)。 实验前， 分别对12只 。
10、食蟹猴电刺激取精和抽外周血， 记录精液参数基线值和外周血血常规、 生化、 肝肾功能、 激 素等基线值， 同时对12只食蟹猴进行睾丸穿刺， 标本用于做病理检测。 0032 开始实验后， 实验组每天按0.1mg/kg剂量口服SD-1溶液(0.5ml， 含SD-1+DMSO+无 水乙醇)， 对照组仅服同体积的溶剂(DMSO+无水乙醇),从服药第5周开始每周电刺激取精、 抽外周血6mL， 分别观察精液参数改变、 精子形态变化和外周血血常规、 生化、 肝肾功能、 激 素变化。 服药104天左右， 实验组分成两组： 一组为长期服药组， 共5只食蟹猴(00340G、 00339G、 00300G、 0029。
11、9G)， 继续服药； 另一组为停药组， 共4只食蟹猴(00336G、 00341G、 00337G、 00298G)， 不再服药， 改为口服同体积溶剂。 0033 如图1所示， 从服药第5周起， 实验组食蟹猴精子几乎100发生变形(断头、 颈部弯 说 明 书 2/4 页 4 CN 108938649 A 4 曲、 尾部卷曲等)、 失去运动能力； 服药180天后， 精子100变形、 死亡； 服药418天后， 精子仍 然100变形、 死亡。 0034 服药后， 如图2所示， 对照组精子前向运动百分数(PR)一直处于较高水平。 长期喂 药组食蟹猴服药第5周后精子PR接近0， 期间精子PR有一点反弹，。
12、 可能与食蟹猴服药不完全 有关(食蟹猴有时将含药物的食物咬碎吐出， 并没有完全将药物吃完)。 喂药-停药组食蟹猴 在服药第5周精子PR降低接近0， 停药后第8周， 精子PR又恢复正常水平。 如图3所示， 长期喂 药组食蟹猴精子浓度与对照组相比明显降低； 而喂药-停药组食蟹猴精子浓度在服药第5周 明显降低， 停药后第8周， 精子浓度又恢复正常水平。 经过雌雄食蟹猴交配实验， 发现与长期 喂药组交配的2只雌性食蟹猴全部没有怀孕， 而与对照组交配的2只雌性食蟹猴全部怀孕， 表明SD-1在食蟹猴中具有良好的长期避孕效果。 0035 实施例3SD-1的避孕具有可逆性 0036 实验组的停药组不再服药， 。
13、改为口服同体积溶剂。 停药5周后， 食蟹猴精液参数基 本恢复正常， 精子形态也基本正常(图4)。 从图2、 图3可以看出精子PR和浓度在停药8周后基 本恢复正常。 经雌雄食蟹猴交配试验， 停药8周后雄猴与2只雌性食蟹猴交配， 发现2只雌性 食蟹猴全部怀孕， 以上结果表明SD-1的避孕具有可逆性。 0037 实施例4SD-1的安全性 0038 1研究方案 0039 取3只8-9岁雄性食蟹猴， 按5mg/kg、 0.8mg/kg和0.2mg/kg三种剂量每天给食蟹猴 口服， 其中5mg/kg剂量过大， 食蟹猴口服1天后出现食欲不振、 精神欠佳， 3天后死亡； 0.2mg/ kg和0.1mg/kg剂。
14、量口服至第4周开始每周给食蟹猴取精、 抽血、 称体重、 测量睾丸大小， 在第 5周开始几乎100精子发生严重变形、 死亡， 一直观察到用药第10周， 停药。 0040 之后取2只8-10岁雄性食蟹猴， 一只给0.1mg/kg剂量， 一只给0.05mg/kg剂量， 同样 第4周开始取精观察精子变化， 0.1mg/kg在第5周时100精子发生严重变形、 死亡， 而 0.05mg/kg在第7周时精子没有明显变化， 一直观察到第10周也没有显著变化。 为排除个体 差异， 将之前的2只食蟹猴(停药3个月后， 精子完全恢复)分别给0.1mg/kg SD-1和对照(不 加SD-1， 只有溶剂： DMSO+无。
15、水酒精)， 口服至第4周开始观察精子变化， 在第5周0.01mg/kg食 蟹猴100精子发生严重变形、 死亡， 而对照组精子没有显著变化。 至此证明了SD-1对食蟹 猴的避孕是有效的， 且最小有效剂量是0.1mg/kg。 应用最小有效剂量是0.1mg/kg进行正式 实验。 每次抽取的外周血， 进行血常规、 生化、 肝肾功能、 激素检测， 观察其对血液及激素的 影响， 探讨其毒副作用。 0041 2.SD-1对食蟹猴的毒副作用研究 0042 2.1SD-1对食蟹猴体重的影响 0043 在实验过程中密切监测食蟹猴的体重变化， 每两周测量一次体重， 发现服药前后 食蟹猴的体重并没有显著下降， 表明S。
16、D-1对食蟹猴的体重没有影响， 结果如图5所示。 0044 2.2SD-1对食蟹猴血常规的影响 0045 在实验过程中密切监测食蟹猴的血常规变化， 每两周测量一次血常规， 发现服药 前后食蟹猴的红细胞、 白细胞、 血红蛋白并没有显著改变， 表明SD-1对食蟹猴的血液常规没 有影响， 结果如图6-图8所示。 0046 2.3SD-1对食蟹猴肝肾功能的影响 说 明 书 3/4 页 5 CN 108938649 A 5 0047 在实验过程中密切监测食蟹猴的肝肾功能变化， 每两周测量一次肝肾功能， 发现 服药前后食蟹猴的谷丙转氨酶、 谷草转氨酶、 白蛋白/球蛋白、 肌酐、 尿素、 尿酸并没有显著 改。
17、变， 表明SD-1对食蟹猴的肝肾功能没有影响， 结果如图9-图14所示。 0048 2.4SD-1对食蟹猴血糖的影响 0049 在实验过程中密切监测食蟹猴的血糖变化， 每两周测量一次血糖， 发现服药前后 食蟹猴的血糖并没有显著改变， 表明SD-1对食蟹猴的血糖没有影响， 结果如图15所示。 0050 2.5SD-1对食蟹猴激素的影响 0051 在实验过程中密切监测食蟹猴的激素变化， 每两周测量一次血清激素， 发现服药 前后食蟹猴的黄体生成素、 睾酮并没有显著改变， 表明SD-1对食蟹猴的激素水平没有影响， 结果如图16及图17所示。 说 明 书 4/4 页 6 CN 108938649 A 6。
18、 图1 图2 说 明 书 附 图 1/9 页 7 CN 108938649 A 7 图3 图4 说 明 书 附 图 2/9 页 8 CN 108938649 A 8 图5 图6 说 明 书 附 图 3/9 页 9 CN 108938649 A 9 图7 图8 说 明 书 附 图 4/9 页 10 CN 108938649 A 10 图9 图10 说 明 书 附 图 5/9 页 11 CN 108938649 A 11 图11 图12 说 明 书 附 图 6/9 页 12 CN 108938649 A 12 图13 图14 说 明 书 附 图 7/9 页 13 CN 108938649 A 13 图15 图16 说 明 书 附 图 8/9 页 14 CN 108938649 A 14 图17 说 明 书 附 图 9/9 页 15 CN 108938649 A 15 。