一种罗米地辛脂微球制剂及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510148655.8 (22)申请日 2015.03.31 A61K 9/19(2006.01) A61K 9/107(2006.01) A61K 38/07(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 深圳翰宇药业股份有限公司 地址 518057 广东省深圳市南山区高新技术 工业园中区翰宇生物医药园办公大楼 四层 (72)发明人 颜携国 陶安进 袁建成 (74)专利代理机构 北京北翔知识产权代理有限 公司 11285 代理人 张广育 钟守期 (54) 发明名称 一种罗米地辛脂微球制剂及其制备方法 (。

2、57) 摘要 本申请涉及一种罗米地辛脂微球制剂及其制 备方法。 其可包含罗米地辛、 注射用油、 乳化剂、 稳 定剂、 等渗调节剂、 pH 调节剂和注射用水。本发明 的罗米地辛脂微球制剂具有良好的稳定性和缓释 特性， 提高了罗米地辛的靶向性， 降低了其毒副作 用。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书8页 附图2页 CN 106137980 A 2016.11.23 CN 106137980 A 1/2 页 2 1.一种罗米地辛脂微球制剂， 其特征在于， 包含罗米地辛、 注射用油、 乳化剂和注射 用水 ； 优选各组分的重量百分。

3、比为 ： 罗米地辛 0.05 6.0， 注射用油 2 40， 乳化剂 0.2 10； 更优选各组分的重量百分比为 ： 罗米地辛 0.1 3.0， 注射用油 5 25， 乳 化剂 0.5 5。 2.根据权利要求 1 的罗米地辛脂微球制剂， 其特征在于， 还包含稳定剂 ； 优选稳定剂的 重量百分比为 0.01 5， 更优选 0.05 1 ； 或者还包含等渗调节剂和 / 或 pH 调节剂 ； 优选等渗调节剂的重量百分比为 0.05 20， 更优选 0.1 10。 3.根据权利要求 1 的罗米地辛脂微球制剂， 其特征在于， 由以下重量百分比的物质组 成 ： 罗米地辛 0.05 6.0， 注射用油 2 。

4、40， 乳化剂 0.2 10， 稳定剂 0.01 5， 等渗调节剂 0.05 20， pH 调节剂， 余量为注射用水 ； 优选由以下重量百分比的物质组成 ： 罗米地辛 0.1 3.0， 注射用油 5 25， 乳化 剂 0.5 5， 稳定剂 0.05 1， 等渗调节剂 0.1 10， pH 调节剂， 余量为注射用水 ； 且优选 所述注射用油选自矿物油、 植物油、 中性类脂、 甾醇衍生物、 动物油和合成油中的一种 或多种的混合物 ； 更优选玉米油、 大豆油、 红花油、 橄榄油、 蓖麻油、 棉籽油、 茶油、 薏苡仁油、 麻油、 鱼油、 鸦胆子油和中链脂肪酸甘油三酯中的一种或多种的混合物 ； 最优选大。

5、豆油、 中 链脂肪酸甘油三酯或者二者的混合物 ； 所述乳化剂选自大豆卵磷脂、 蛋黄卵磷脂、 氢化大豆卵磷脂、 氢化蛋黄卵磷脂和合成磷 脂中的一种或者多种的混合物 ； 更优选大豆卵磷脂、 蛋黄卵磷脂或者二者的混合物 ； 所述稳定剂选自油酸或其盐如油酸钠、 乙醇、 丙二醇、 抗坏血酸、 亚硫酸钠、 亚硫酸氢 钠、 胆酸或其盐、 脱氧胆酸或其盐中的一种或多种的混合物 ； 更优选乙醇、 丙二醇或二者的 混合物 ； 所述等渗调节剂选自甘油、 葡萄糖、 氯化钠、 山梨醇、 甘露醇、 木糖醇、 蔗糖或海藻糖中 的一种或多种的混合物 ； 所述 pH 调节剂选自氢氧化钠、 磷酸二氢钠、 磷酸氢二钠、 磷酸、 盐。

6、酸、 枸橼酸、 枸橼酸 钠、 醋酸和醋酸钠中的一种或多种的混合物 ； 更优选氢氧化钠。 4.根据权利要求 1-3 中任一项的罗米地辛脂微球制剂， 其特征在于， 所述脂微球制剂 是含水的液体制剂形式， 例如脂微球注射液， 或者是临用前复溶为液体制剂的干燥形式， 例 如脂微球冻干制剂。 5.一种制备权利要求 1-4 中任一项所述的罗米地辛脂微球制剂的方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： (1) 油相的制备 ： 称取处方量的罗米地辛、 注射用油和乳化剂以及任选的稳定剂置于 容器中， 高速剪切， 加热搅拌， 使各组分完全溶解， 制得油相 ； (2) 水相的制备 ： 称取处方量的注射用水作为水相 ； 。

7、或者将处方量的等渗调节剂加入 处方量的注射用水中， 使其完全溶解， 制成水相 ； (3) 初乳的制备 ： 在高速搅拌下， 将油相和水相混合， 值得初乳 ； 并任选采用 pH 调节剂 调节初乳的 pH 值 ； (4) 亚微乳的制备 ： 将初乳进行高压均质， 制得亚微乳 ； (5) 分装和灭菌 ： 充氮气分装， 热压灭菌或过滤灭菌后， 得罗米地辛脂微球液体制剂 ； 权 利 要 求 书 CN 106137980 A 2 2/2 页 3 以及任选地 (6) 冷冻干燥 ： 将步骤 (5) 所得罗米地辛脂微球制剂冷冻干燥， 得到罗米地辛脂微球冻 干制剂。 6.根据权利要求 5 所述的方法， 其特征在于， 。

8、步骤 (1) 油相的制备为 ： 称取处方量的罗米地辛、 注射用油和乳化剂以及任选的稳定 剂置于容器中， 高速剪切 1 10 分钟， 在 30 80下加热搅拌， 使其完全溶解， 制得油相。 7.根据权利要求 5 的方法， 其特征在于， 步骤 (2) 水相的制备为 ： 称取处方量的等渗调节剂， 加入处方量的注射用水， 在 30 80下加热搅拌， 使其完全溶解， 制得水相。 8.根据权利要求 5 的方法， 其特征在于， 步骤 (4) 亚微乳的制备为 ： 将初乳转移至高压均质机中， 采用 300 800bar 的压力高 压均质化， 制得亚微乳。 9.根据权利要求 4 的方法， 其特征在于， 步骤 (6。

9、) 冷冻干燥具体为 ： 匀速降温至 -30至 -60， 保持该温度 2-6 小时， 然后在 15至 30进行干燥， 得罗米地辛脂微球冻干制剂。 10.根据权利要求 4 所述的方法， 其特征在于， (1) 油相的制备 ： 称取处方量的罗米地辛、 注射用油、 乳化剂和稳定剂置于烧杯中， 采 用高速剪切机进行高速剪切 1 10 分钟， 在 30 80下加热搅拌， 搅拌速度为 300 1000rpm， 使其完全溶解， 制得油相 ； (2) 水相的制备 ： 称取处方量的等渗调节剂置于烧杯中， 加入处方量的注射用水， 在 30 80下加热搅拌， 搅拌速度为 300 800rpm， 使其完全溶解， 制得水相。

10、 ； (3) 初乳的制备 ： 高速搅拌下， 将油相和水相混合， 采用 pH 调节剂调节 pH 值， 制得初 乳 ； (4) 亚微乳的制备 ： 将初乳转移至高压均质机中， 采用 300 800bar 的压力高压均质 化， 制得亚微乳 ； (5) 分装和灭菌 ： 充氮气分装， 热压灭菌或过滤灭菌后， 得罗米地辛脂微球液体制剂 ； 以及任选地 (6)冷冻干燥 ： 在0条件下， 以5/min匀速降温至-45， 保持该温度4小时， 超真 空干燥， 以 5 /min 升温至 20进行干燥， 直至冻干结束， 得罗米地辛脂微球冻干制剂。 权 利 要 求 书 CN 106137980 A 3 1/8 页 4 一。

11、种罗米地辛脂微球制剂及其制备方法 技术领域 0001 本申请涉及药物制剂领域， 具体而言， 涉及一种罗米地辛脂微球制剂及其制备方 法。 背景技术 0002 罗米地辛， 英文名为 Romidepsin， 其化学名称为 (1S,4S,7Z,10S,16E,21R)-7- 乙 叉基 -4,21- 二异丙基 -2- 氧杂 -12,13- 二硫 -5,8,20,23- 四氮杂双环 8,7,6 二十三 碳 -16- 烯 -3,6,9,19,22- 五酮， 分子式为 C24H36N4O6S2， 是一种双环四肽， 具有稳定的疏水 结构， 其结构中特有的二硫键是发挥活性的关键基团。罗米地辛是一种组蛋白脱乙酰化酶。

12、 (HDACs) 抑制剂， 作为孤儿药于 2009 年 11 月 5 日获得美国 FDA 批准上市， 是继皮肤 T 细胞 淋巴瘤 (CTCL) 治疗药伏立诺他 (vorinostat) 之后在美国获准上市的第 2 个 HDACs 抑制 剂， 主要用于至少接受过 1 种其他类型全身性治疗的同时或之后的进行性、 持续性、 复发性 皮肤 T 细胞淋巴瘤。其化学结构如下 ： 0003 0004 罗米地辛能特异性地与 HDACs 结合， 抑制 HDAC1 和 HDAC2 的活性， 且对两者的选 择性相似 ； 催化组蛋白或非组蛋白中已被乙酰化的赖氨酸残基脱乙酰基 ； 调控肿瘤细胞基 因的表达 ； 诱导肿瘤。

13、细胞分化、 阻滞肿瘤细胞生长、 促进肿瘤细胞凋亡。罗米地辛在体内增 加组蛋白 H3 和 H4 的乙酰化， 抑制 H-a ras 激活的 N H3T3 的细胞生长水 平， 并能有效诱 导 p21WAF1/CIP1的表达， 阻滞肿瘤细胞周期。p21 WAF1/CIP1是细胞周期依赖性蛋白激酶 (CDKs) 的 天然抑制剂， 能抑制 CDKs 的活性， 导致细胞周期 G1/S 期的停滞。罗米地辛还诱导 H sp90 乙酰化， 降低肿瘤蛋白水平和突变异种的表达， 抑制 E rbB1 和 E rbB2 以及类风湿性因子 (Raf1)， 对多种血液肿瘤和实体瘤都具有明显的杀伤作用。 0005 现已上市的注。

14、射用罗米地辛冻干药物组合物是粉针剂， 商品名为 Istodax， 其以 28 天为一个疗程， 在第 1、 8 和 15 天分别在 4 小时过程中静脉输注给药， 病人用药的顺应性 差 ； 容易引起心室激动总时间 (Q-T 间期 ) 比基线水平值延长的风险。因此， 降低罗米地辛 副作用、 改善病人顺应性且便于工业化生产对于罗米地辛药物的研究和开发而言具有重要 意义。 0006 脂微球， 也称为亚微乳， 是一种以脂肪油为软基质并被磷脂膜包封的微粒分散体 说 明 书 CN 106137980 A 4 2/8 页 5 系， 其平均粒径为 200nm 左右。脂微球可以提高药物的稳定性、 延长药物作用时间和。

15、降低毒 副作用， 并具有良好的靶向性等特点。 0007 据检索， 目前尚且没有关于罗米地辛脂微球制剂的相关报道。 发明内容 0008 本发明一方面提供一种罗米地辛脂微球(亚微乳)制剂。 其可通过注射途径给药， 例如静脉注射、 皮下注射或肌内注射等途径。 此外， 本发明的脂微球制剂可以是含水的液体 制剂形式即脂微球液体制剂， 例如脂微球注射液， 也可以是临用前复溶为液体制剂的干燥 形式， 例如脂微球冻干制剂。 0009 在一个实施方案中， 本发明提供一种罗米地辛脂微球制剂， 其包含罗米地辛、 注射 用油、 乳化剂和注射用水。 优选， 各组分的重量百分比为 ： 罗米地辛0.056.0， 注射用油 。

16、2 40， 乳化剂 0.2 10。更优选， 各组分的重量百分比为 ： 罗米地辛 0.1 3.0， 注 射用油 5 25， 乳化剂 0.5 5。 0010 在另一实施方案中， 本发明的罗米地辛脂微球制剂中还包含稳定剂。优选稳定剂 的重量百分比为 0.01 5， 更优选 0.05 1。 0011 在另一实施方案中， 本发明的罗米地辛脂微球制剂中还包含等渗 调节剂和 / 或 pH 调节剂。优选等渗调节剂的重量百分比为 0.05 20， 更优选 0.1 10。 0012 在另一实施方案中， 本发明的罗米地辛脂微球制剂， 由以下重量百分比的物质组 成 ： 罗米地辛 0.05 6.0， 注射用油 2 40。

17、， 乳化剂 0.2 10， 稳定剂 0.01 5， 等渗调节剂 0.05 20， pH 调节剂， 余量为注射用水。 0013 作为优选， 本发明的罗米地辛脂微球制剂， 由以下重量百分比的物质组成 ： 罗米地 辛 0.1 3.0， 注射用油 5 25， 乳化剂 0.5 5， 稳定剂 0.05 1， 等渗调节剂 0.1 10， pH 调节剂， 余量为注射用水。 0014 其中， 所述注射用油选自矿物油、 植物油、 中性类脂、 甾醇衍生物、 动物油和合成油 中的一种或多种的混合物 ； 优选玉米油、 大豆油、 红花油、 橄榄油、 蓖麻油、 棉籽油、 茶油、 薏 苡仁油、 麻油、 鱼油、 鸦胆子油和中链。

18、脂肪酸甘油三酯中的一种或多种的混合物 ； 更优选大 豆油、 中链脂肪酸甘油三酯或者二者的混合物。 0015 所述乳化剂选自大豆卵磷脂、 蛋黄卵磷脂、 氢化大豆卵磷脂、 氢化蛋黄卵磷脂和合 成磷脂中的一种或者多种的混合物， 优选大豆卵磷脂、 蛋黄卵磷脂或者二者的混合物。 优选 大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂的混合比例为 1:3 到 3:1， 更优选 1:2-1:1。 0016 所述稳定剂选自油酸或其盐如油酸钠、 乙醇、 丙二醇、 抗坏血酸、 亚硫酸钠、 亚硫酸 氢钠、 胆酸或其盐、 脱氧胆酸或其盐中的一种或多种的混合物。优选乙醇、 丙二醇或二者的 混合物。 0017 所述等渗调节剂选自甘油、 葡萄糖、 。

19、氯化钠、 山梨醇、 甘露醇、 木糖醇、 蔗糖或海藻 糖中的一种或多种的混合物。 0018 所述 pH 调节剂选自氢氧化钠、 磷酸二氢钠、 磷酸氢二钠、 磷酸、 盐酸、 枸橼酸、 枸橼 酸钠、 醋酸和醋酸钠中的一种或多种的混合物， 优选氢氧化钠。 0019 本发明的罗米地辛脂微球， 其粒径范围为 100 300nm， pH 值为 5.0 8.0， Zeta 电位绝对值为 10 50mV。优选粒径范围为 150 250nm， pH 值为 6.5 7.5， Zeta 电位绝 说 明 书 CN 106137980 A 5 3/8 页 6 对值为 20 30mV。 0020 本发明另一方面提供上述罗米地。

20、辛脂微球制剂的制备方法， 包括 如下步骤 ： 0021 (1) 油相的制备 ： 称取处方量的罗米地辛、 注射用油和乳化剂以及任选的稳定剂 置于容器中， 高速剪切， 加热搅拌， 使各组分完全溶解， 制得油相 ； 0022 (2) 水相的制备 ： 称取处方量的注射用水作为水相 ； 或者将处方量的等渗调节剂 加入处方量的注射用水中， 使其完全溶解， 制成水相 ； 0023 (3) 初乳的制备 ： 在高速搅拌下， 将油相和水相混合， 制得初乳 ； 并任选采用 pH 调 节剂调节初乳的 pH 值 ； 0024 (4) 亚微乳的制备 ： 将初乳进行高压均质， 制得亚微乳 ； 0025 (5) 分装和灭菌 。

21、： 充氮气分装， 热压灭菌或过滤灭菌后， 得罗米地辛脂微球液体制 剂 ； 以及任选地 0026 (6) 冷冻干燥 ： 将步骤 (5) 所得罗米地辛脂微球制剂冷冻干燥， 得到罗米地辛脂微 球冻干制剂。 0027 在一优选实施方案中， 步骤 (1) 油相的制备具体为 ： 称取处方量的罗米地辛、 注射 用油和乳化剂以及任选的稳定剂置于容器中， 高速剪切110分钟， 在3080下加热搅 拌， 使其完全溶解， 制得油相。 0028 在一优选实施方案中， 步骤 (2) 水相的制备具体为 ： 称取处方量的等渗调节剂， 加 入处方量的注射用水， 在 30 80下加热搅拌， 使其完全溶解， 制得水相。 0029。

22、 在一优选实施方案中， 步骤 (4) 亚微乳的制备具体为 ： 将初乳转移至高压均质机 中， 采用 300 800bar 的压力高压均质化制得亚微乳 ； 0030 在一优选实施方案中， 步骤(6)冷冻干燥具体为 ： 匀速降温至-30至-60， 保持 该温度 2-6 小时， 然后在 15至 30进行干燥， 得罗米地辛脂微球冻干制剂。 0031 在另一具体实施方案中， 本发明的罗米地辛脂微球制剂的制备方法， 包含以下步 骤 ： 0032 (1) 油相的制备 ： 称取处方量的罗米地辛、 注射用油、 乳化剂和稳定剂置于烧杯 中， 采用高速剪切机进行高速剪切110分钟， 在磁力搅拌水浴锅中在3080下加热。

23、搅 拌， 搅拌速度为 300 1000rpm， 使其完全溶解， 制得油相 ； 0033 (2) 水相的制备 ： 称取处方量的等渗调节剂置于烧杯中， 加入处 方量的注射用 水， 在磁力搅拌水浴锅中在 30 80下加热搅拌， 搅拌速度为 300 800rpm， 使其完全溶 解， 制得水相 ； 0034 (3) 初乳的制备 ： 高速搅拌下， 将油相和水相混合， 采用 pH 调节剂调节 pH 值， 制得 初乳 ； 0035 (4) 亚微乳的制备 ： 将初乳转移至高压均质机中， 采用 300 800bar 的压力高压 均质化制得亚微乳 ； 0036 (5) 分装和灭菌 ： 充氮气分装， 热压灭菌或过滤灭。

24、菌后， 得罗米地辛脂微球液体制 剂 ； 以及任选地 0037 (6) 冷冻干燥 ： 在 0条件下， 以 5 /min 匀速降温至 -45， 保持该温度 4 小 时， 超真空干燥， 以 5 /min 升温至 20进行干燥， 直至冻干结束， 得罗米地辛脂微球冻 干制剂。 说 明 书 CN 106137980 A 6 4/8 页 7 0038 在本文中， 术语 “重量百分比” 为相对于注射用罗米地辛脂微球制剂的重量百分 比。此外， 如无特殊说明， 本文中的各种操作以及下面的各种测定均在常温、 常压下进行。 0039 本发明的罗米地辛脂微球与注射用罗米地辛(商品名为Istodax)比较， 具有如下 优。

25、势 ： 0040 (1) 提高罗米地辛的靶向性。本发明的罗米地辛脂微球可将罗米地辛靶向于 T 淋 巴细胞的主要定居场所胸腺和周围淋巴结， 而在其他组织分布很少。 因此， 一方面可以 增强治疗皮肤 T 细胞淋巴瘤的效果， 另一方可降低毒副作用， 特别是对心脏的副作用， 提高 用药安全性。 0041 (2) 实现罗米地辛的缓释给药。本发明的罗米地辛脂微球可缓慢持续地释放罗米 地辛， 减少了给药次数和给药时间， 提高患者的顺应性。 0042 (3) 制备工艺简单、 成本低， 便于实现工业化大生产。 附图说明 0043 图 1 ： 实施例 1 制备的罗米地辛脂微球的体外累积释放曲线， 纵坐标 : 累积。

26、释放百 分率 ( )， 横坐标 : 时间 ( 小时 ) ； 0044 图 2 ： 实施例 2 制备的罗米地辛脂微球的体外累积释放曲线， 纵坐标 : 累积释放百 分率 ( )， 横坐标 : 时间 ( 小时 ) ； 0045 图 3 ： 实施例 3 制备的罗米地辛脂微球的体外累积释放曲线， 纵坐标 : 累积释放百 分率 ( )， 横坐标 : 时间 ( 小时 ) ； 以及 0046 图 4 ： 实施例 1 制备的罗米地辛脂微球制剂的粒径分布图， 粒径分布曲线和累积分 布曲线显示制剂的粒度 D90 小于 1.32m。 具体实施方式 0047 实施例 0048 下面的实施例仅仅是示例性的， 并不意图限制。

27、本发明的范围。在不背离本发明精 神的前提下， 可以作出多种修改。 0049 实施例 1 0050 (1)称取1.0g罗米地辛、 5.0g大豆油和5.0g中链脂肪酸甘油三酯、 1.5g大豆卵磷 脂、 0.4g 丙二醇和 0.05g 乙醇置于烧杯中， 采用高速剪切机进行高速剪切 3 分钟， 在磁力搅 拌水浴锅中在 60下加热搅拌， 搅拌速度为 500rpm， 使其完全溶解， 制得油相 ； 0051 (2) 称取 0.9g 氯化钠置于烧杯中， 加入 86.2g 注射用水， 在磁力搅拌水浴锅中在 60下加热搅拌， 搅拌速度为 500rpm， 使其完全溶解， 制得水相 ； 0052 (3) 高速搅拌下，。

28、 将油相和水相混合， 调节 pH 值至 7.0， 制得初乳 ； 0053 (4) 将初乳转移至高压均质机中， 采用 500bar 压力高压均质化， 制得亚微乳 ； 0054 (5) 充氮气分装， 热压灭菌后， 得罗米地辛脂微球注射液。 0055 实施例 2 0056 (1) 称取 1.5g 罗米地辛、 6.5g 大豆油和 10.5g 中链脂肪酸甘油三酯、 2.0g 蛋黄卵 磷脂、 0.8g丙二醇和0.2g乙醇置于烧杯中， 采用高速剪切机进行高速剪切5分钟， 在磁力搅 拌水浴锅中在 65下加热搅拌， 搅拌速度为 500rpm， 使其完全溶解， 制得油相 ； 说 明 书 CN 106137980 。

29、A 7 5/8 页 8 0057 (2) 称取 0.9g 氯化钠置于烧杯中， 加入 77.4g 注射用水， 在磁力搅拌水浴锅中在 65下加热搅拌， 搅拌速度为 400rpm， 使其完全溶解， 制得水相 ； 0058 (3) 高速搅拌下， 将油相和水相混合， 调节 pH 值至 7.2， 制得初乳 ； 0059 (4) 将初乳转移至高压均质机中， 采用 350bar 压力高压均质化， 制得亚微乳 ； 0060 (5) 充氮气分装， 热压灭菌后， 得罗米地辛脂微球注射液。 0061 实施例 3 0062 (1) 称取 2.5g 罗米地辛、 4.5g 红花油和 15.5g 中链脂肪酸甘油三酯、 2.0。

30、g 氢化蛋 黄卵磷脂、 1.0g 丙二醇置于烧杯中， 采用高速剪切机进行高速剪切 8 分钟， 在磁力搅拌水浴 锅中在 45下加热搅拌， 搅拌速度为 700rpm， 使其完全溶解， 制得油相 ； 0063 (2) 称取 4.5g 甘露醇置于烧杯中， 加入 70g 注射用水， 在磁力搅拌水浴锅中在 45下加热搅拌， 搅拌速度为 700rpm， 使其完全溶解， 制得水相 ； 0064 (3) 高速搅拌下， 将油相和水相混合， 调节 pH 值至 6.7， 制得初乳 ； 0065 (4) 将初乳转移至高压均质机中， 采用 650bar 压力高压均质化， 制得亚微乳 ； 0066 (5) 充氮气分装， 热。

31、压灭菌后， 得罗米地辛脂微球注射液。 0067 实施例 4 0068 将实施例1所制得罗米地辛脂微球注射液分装到西林瓶中， 在0条件下， 以2/ min 匀速降温至 -30， 保持温度 5 小时， 超真空干燥， 以 2 /min 升温至 20进行干燥， 直 至冻干结束， 得罗米地辛脂微球冻干制剂。 0069 实施例 5 0070 将实施例1所制得罗米地辛脂微球注射液分装到西林瓶中， 在0条件下， 以3/ min 匀速降温至 -45， 保持温度 4 小时， 超真空干燥， 以 2 /min 升温至 25进行干燥， 直 至冻干结束， 得罗米地辛脂微球冻干制剂。 0071 实施例 6 0072 将实施。

32、例2所制得罗米地辛脂微球注射液分装到西林瓶中， 在0条件下， 以4/ min 匀速降温至 -55， 保持温度 3 小时， 超真空干燥， 以 5 /min 升温至 20进行干燥， 直 至冻干结束， 得罗米地辛脂微球冻干制剂。 0073 实施例 7 0074 理化检测 0075 (1) 平均粒径 0076 采用英国马尔文公司的 Nano 90 激光粒度分析仪来测定粒度和粒度分布。实施例 1、 2 和 3 所得脂微球的平均粒径分别为 18020nm、 19121nm 和 17713nm。 0077 (2)Zeta 电位 0078 采用英国贝马尔文司的 Nano 90 激光粒度分析仪的测定 Zeta 。

33、电位。实施例 1、 2 和 3 所得脂微球的 Zeta 电位分别为 ： -25.10mV、 -26.90mV 和 -24.60mV。结果表明， 三批样 品的平均 Zeta 电位为 -25.53mV， 满足稳定的微粒液体体系对 Zeta 电位控制 -20 -50mV 范围内的要求， 也表明本发明的制剂具有很好的稳定性。 0079 (3)pH 值 0080 使用 METTLE TOLEDO SK20pH 计测定 pH 值， 实施例 1、 2 和 3 所得脂微球的 pH 值分 别为 7.00、 7.28 和 6.79。 说 明 书 CN 106137980 A 8 6/8 页 9 0081 (4) 。

34、包封率 0082 精密量取实施例 1 制备的罗米地辛脂微球 1ml 于离心管中， 以 20000rpm 超高速 离心， 取上清液 0.1ml 于 50ml 容量瓶中， 加入甲醇破乳并稀释定容至刻度， 混合均匀， 精密 量取 20L， 注入高效液相色谱仪， 记录图谱。精密量取实施例 1 制备的罗米地辛脂微球 0.1ml 于 50ml 容量瓶中， 加入甲醇破乳并稀释定容至刻度， 混合均匀， 作为供试品， 精密量 取 20L， 注入高效液相色谱仪， 记录图谱。另取对照品对照瓶溶液， 同法测定 ； 外标法以峰 面积计算罗米地辛脂微球含量。 0083 根据以下公式计算罗米地辛脂微球制剂的包封率 ： 00。

35、84 EN (1-Cf/Ct)100 0085 其中， Cf为游离药物的量， C t为脂微球悬液中药物的总量。 0086 实施例 1 的罗米地辛脂微球制剂的包封率为约 84 ； 0087 实施例 2 的罗米地辛脂微球制剂的包封率为约 82。 0088 (5) 粒径分布 0089 按马尔文 Nano 90 的设备操作规程测定样品粒径分布。 0090 实施例 8 0091 稳定性考察 0092 (1) 离心稳定性 0093 取罗米地辛脂微球样品， 以 4,000rpm 离心 15min 后， 实施例 1、 2 和 3 所得脂微球 仍为乳白色均匀乳状液体， 未出现絮凝、 分层、 破乳等现象 ； 以 。

36、15,000rpm 离心 10min 后， 上 述三批样品仍为乳白色均匀乳状液体， 均未出现絮凝、 分层、 破乳等现象。可见本发明的罗 米地辛脂微球具有良好的离心稳定性。 0094 (2) 冻融稳定性 0095 冻融试验用于考察分散体系对温度变化的耐受性， 其基本原理是通过改变分散体 系所处环境的温度， 引起自身能量的变化， 观察由此产生的粒径等形态变化， 以严格控制药 物的储存条件。 0096 将实施例1的罗米地辛脂微球注射液放入-20冰箱中冷冻12h， 取出放置于室温 中融化， 放置12h， 此为一个冻融循环。 如此反复进行三次冻融循环， 观察其外观并测定其粒 径和粒径分布。 0097 表。

37、 1 罗米地辛脂微球注射液的冻融实验结果 0098 说 明 书 CN 106137980 A 9 7/8 页 10 0099 0100 经过冷冻的脂微球制剂颜色变黄， 但是， 融化后颜色恢复， 未出现破乳、 出油或絮 凝的现象。由表 1 结果可以看出， 冻融后脂微球制剂的粒径变化不大， 仍然处于注射用脂 微球制剂的安全范围内， 而且随着冻融次数的增加， 粒径基本不再变大， 粒径分布也不再变 宽。这说明冻融次数对罗米地辛脂微球的粒径并无显著影响， 表明该制剂能经受剧烈的环 境温度变化， 反映了根据本发明的配方和制备方法所制备的罗米地辛脂微球具有良好的稳 定性。 0101 实施例 9 0102 释。

38、放性能 0103 测试方法和条件 0104 采用 CE7smart 全自动流池法， 溶剂体积 1000ml， 温度范围 ： 37.50.5， 泵流速 ： 8ml/min， 闭环， 取样时间 1、 2、 3、 4、 5 和 6 小时各取样 1ml。 0105 测试结果 ： 根据图13的累计释放曲线可以看出， 本发明的罗米地辛脂微球可基 本上均匀地释放罗米地辛。 0106 实施例 10 0107 罗米地辛体内组织分布研究 0108 胸腺 T 细胞淋巴瘤动物模型的建立 0109 实验组小鼠根据体重腹膜腔内注射N-甲基-N-亚硝基脲诱导液(50mg/kg体重) ； 对照组腹膜腔内注射等量生理盐水， 共。

39、注射 2 次 ( 分别于第 0、 8 周 )。注射开始后继续基础 饮食， 并观察动物体重、 饮食、 毛色、 活动度等一般情况变化。 对自由活动明显减少的濒死小 鼠及自行死亡小鼠进行解剖观察。注射 N- 甲基 -N- 亚硝基脲诱导液开始后第 20 周， 建立 实验动物模型。 模型小鼠尾静脉实施例2的罗米地辛脂微球， 4周后将所有小鼠颈椎脱位法 处死， 解剖检测胸腺肿瘤及其他脏器的药 物分布。 0110 标本采集 0111 将胸腺、 心、 肺、 肝、 脾、 肾、 周围淋巴结 ( 包括颈部、 腋下、 腹股沟、 主动脉旁等淋巴 结 ) 组织分离， 匀浆， 提取罗米地辛， 离心， 取离心液， 采用高效液。

40、相色谱法测定组织分布浓 度。 0112 血浆样品处理 0113 精密量取血浆样品 100L， 置于 2ml 聚乙烯离心管中， 涡旋混匀 10s， 加入乙腈 500L， 涡旋 10s， 高速离心 (10000r m-1)10min， 吸取上清液 200L 置于干净的聚乙烯管 内， 30氮气吹干， 乙腈 - 水 (25 ： 75， v/v)200L 复溶， 高速离心 (10000rm-1)5min， 取上 清液 20L 进行高效液相色谱法分析。 0114 罗米地辛在小鼠体内的组织分布结果在表 1 中给出。 0115 表 2 罗米地辛的体内组织分布浓度图 说 明 书 CN 106137980 A 1。

41、0 8/8 页 11 0116 0117 由以上结果可以看出， 经由本发明的罗米地辛脂微球给药后， 0118 (1) 罗米地辛主要分布于胸腺和周围淋巴结中， 而这两种组织是 T 淋巴细胞的主 要定居场所， 表明本发明的罗米地辛脂微球制剂具有很好的靶向作用， 有利于提高罗米地 辛治疗皮肤 T 细胞淋巴瘤的作用 ； 0119 (2) 罗米地辛在心脏中几乎没有分布， 因此， 可大大降低其引起心室激动总时间 (Q-T 间期 ) 比基线水平延长的风险， 大大降低对心脏的副作用， 而这是现有技术中的注射 用罗米地辛粉针剂无法比拟的 ； 以及 0120 (3) 罗米地辛在肺、 肝、 脾和肾几乎没有分布或分布浓度较低， 这可大大降低罗米 地辛全身给药引起对各脏器的毒副作用。 0121 一方面提高疗效， 另一方面降低毒副作用， 因此， 本发明的罗米地辛脂微球制剂可 大大提高用药安全性和患者的顺应性。 说 明 书 CN 106137980 A 11 1/2 页 12 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 106137980 A 12 2/2 页 13 图 4 说 明 书 附 图 CN 106137980 A 13 。