技术领域
本发明涉及用于预防和/或治疗肾炎的药物组合物和保健食品，其包 含至少一种选自山楂(Crataegi Fructus)提取物、肉桂(Cinnamomi Cortex) 提取物、夏枯草(Prunella Spica)提取物和木贼(Equiseti Herba)提取物的 药草提取物，和使用所述药草提取物预防和/或治疗肾炎的方法，以及所 述药草提取物在制备用于预防和/或治疗肾炎的组合物中的用途。
背景技术
肾是行使多种功能的器官，是代表性的排泄器官之一。肾不仅作为 排泄器官，调控体液量、排泄废物和调节电解质含量，而且作为内分泌 器官，分泌激素例如促红细胞生成素(用于红细胞产生)和凝乳酶(用 于血压控制)并且调节维生素D3的代谢以调节甲状旁腺功能和钙代谢。 而且，肾还作为代谢器官，破坏肽激素、重吸收低分子量蛋白和调控葡 萄糖/脂代谢。肾病的实例为肾炎、肾衰竭、肾癌等，其中肾炎是最典型 的肾病。当肾炎患者持续患有肾炎时，由于肾功能的丧失而导致慢性肾 衰竭或高血压等疾病，也导致其他器官的破坏、代谢异常等并发症。肾 功能的丧失不引人注意，直至70％或更多的肾功能丧失。如果肾衰竭一 直未引起注意而未得到合适的治疗，那么透析或肾移植是对所述患者的 仅有的治疗手段。在韩国，进行透析的患者数量每年增加4,000到5,000， 肾移植患者的人数也在增加。在肾移植完成之前需要连续进行透析，这 对患者造成极大的痛苦或经济负担。对于肾移植，缺少肾捐献者导致长 时间的等待，甚至引起涉及器官交易的社会问题。
对于在70％的肾炎患者中发现的免疫复合体介导的肾炎，体内/外的 抗原与体内产生的抗体结合以形成抗原-抗体复合体，其沉积在肾小球基 底膜和肾小球膜细胞内，引起炎症而导致肾小球的破坏。对于类似的免 疫反应引起的抗肾小球基底膜抗体肾炎的情况，体内形成的抗肾小球基 底膜抗体沉积在肾小球基底膜而导致急性炎症，并5％的肾炎患者属于 这种情况。尿道、膀胱等泌尿器官被其他链球菌等病原菌或病毒所感染， 由此病原进入肾以引起肾炎。
肾炎的药物包括免疫抑制药物、抗炎药物、高血压/血管作用药物、 抗生素等。免疫抑制药物抑制促使肾炎发生的抗体的形成，从而抑制抗 原-抗体复合体在肾小球的沉积，由此改善肾炎的症状；抗炎药物抑制炎 症的发生从而改善肾炎症状。用作高血压/血管作用药物的血管紧张素II 拮抗剂加快基底膜的产生以激活肾功能，所述基底膜是作为肾小球过滤 器的血管细胞壁。对于感染引起的肾炎，喹诺酮类抗生素用于杀死引起 肾炎的病原细菌。
肾炎患者大部分患有自免疫肾小球性肾炎，其主要用免疫抑制药物、 抗炎药物和高血压/血管作用药物治疗。感染引起的肾盂肾炎用喹诺酮类 抗生素治疗。用于肾炎的免疫抑制药物的实例包括他克莫司 (tacrolimus)、依库珠单抗(eculizumab)、麦考酚酸莫酯(mycophenolate mofetil)、环孢霉素A(cyclosporine A)等。所述抗免疫药物的实例包 括地塞米松(dexamethasone)、泼尼松龙(prednisolone)等。用于肾 小球性肾炎的高血压/血管作用药物为例如具有抗肿瘤活性的坎地沙坦 (candesartan)、利妥昔单抗(lituximab)和阿巴西普(abatacept)。 另外，用于肾盂肾炎的代表性药物为基于喹啉的左氧氟沙星 (levofloxacin)和加替沙星(gatifloxacin)。韩国以外的其他国家的肾 炎患者大部分用免疫抑制药物，特别是占高市场占有率的他克莫司 (tacrolimus)、麦考酚酸莫酯(mycophenolate mofetil)或依库珠单抗 (eculizumab)等。但在韩国，抗生素是最常用的用于肾炎的药物，近 年来也在增加用于肾炎的免疫抑制药物的使用。
然而，免疫抑制药物或抗生素的长期使用导致包括溃疡、浮肿、感 染加重、高血压、肝性毒血病等的副作用。因此，需要开发副作用比现 有的用于肾炎的药物的小、并且安全性有保证的用于肾炎的新药。
为此原因，最近已开发了使用天然物质的用于肾炎的新药。
发明内容
发明要解决的课题
在开发用于预防和治疗肾炎的组合物的尝试中，本发明的发明人发 现至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物 的药草提取物对肾炎具有预防性和治疗性作用，从而完成本发明。
本发明的一个实施方案提供用于预防和/或治疗肾炎的组合物，所述 组合物含有至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木 贼提取物的药草提取物作为有效成分。
本发明的另一实施方案提供用于预防和/或治疗肾炎的方法，所述方 法包括对需要预防和/或治疗肾炎的患者给予治疗有效量的至少一种选 自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物的药草提取物。
本发明的另一实施方案提供至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、 夏枯草提取物和木贼提取物的药草提取物用于预防和/或治疗肾炎的用 途。
解决课题的方法
本发明的发明人发现至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯 草提取物和木贼提取物的药草提取物对庆大霉素诱导的或顺铂诱导的肾 炎模型具有良好的治疗效果并且对肾的肾小球膜细胞的生长具有优秀的 抑制效应，从而完成本发明。
因此，本发明的特征在于组合物用于预防和治疗肾炎的用途，所述 组合物含有至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木 贼提取物的药草提取物作为有效成分。
下文将对本发明做如下进一步详述。
首先，依照本发明的一个实施方案，提供用于预防和/或治疗肾炎的 组合物，所述组合物含有至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯 草提取物和木贼提取物的药草提取物作为有效成分。在本发明的另一实 施方案中，提供用于预防和/或治疗肾炎的方法，所述方法包括对需要预 防和/或治疗肾炎的患者给予治疗有效量的至少一种选自山楂提取物、肉 桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物的药草提取物。在本发明的另一 实施方案中，提供至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取 物和木贼提取物的药草提取物用于预防和/或治疗肾炎的用途，或在制备 用于预防和/或治疗肾炎的组合物中的用途。
山楂(Crataegi Fructus)是蔷薇科(Rosaceae)山楂树(Crataegus pinnatifida)及其同属物种的果实，在英语中通常称为“Hawthorn”。在高 地生长、具有灰色树皮和有刺枝条、高度为3-6米。树叶近似蛋形，在 茎上按互生叶序排列，长6-8cm，宽5-6cm。叶缘以羽毛状裂开，在基 部划分得更深。树叶在两侧的中脉上都有毛，并且边缘呈不规则的锯齿 状，叶柄长2-6cm。已知山楂具有例如血管舒张、降低血压、抗微生物 作用、抗氧化等药效。
肉桂(Cinnamomi Cortex)是樟科(Lauraceae)肉桂(Cinnamomum cassia)及其同属物种的树皮。肉桂树为观赏树，高度为8m以上，枝叶茂 盛，树枝呈绿色，花色为浅绿色，花萼分成短的6个萼片而排列成两行。 已知此药草具有例如血管舒张、加快血液循环、刺激胃活动、消除疼痛、 抗氧化等治疗作用。作为药草，其已被用于治疗头痛、发热、神经性心 悸、剧痛、感冒等。韩国专利申请公开2006-0030535(2006年4月11 日提交)公开了一种具有抗焦虑活性的肉桂提取物以及含有所述提取物 的组合物，其中所述肉桂提取物被报告作为用于预防和治疗由脑神经系 统病变引起的焦虑的医疗产品或保健食品使用。
夏枯草(Prnella Spica)是唇形科(Labiatae)夏枯草(Prunella vulgaris) 及其同属物种的多年生草本。此药草全身被白毛覆盖，高度为20-30cm， 茎呈方形。在花落后开始生出枝条，叶一直生长至约2-5cm长，叶缘是 光滑的或略微为锯齿形。在夏天，将半枯萎的草切断并在阳光下干燥而 使用、是无毒药草。已知此药草具有例如利尿作用、抗微生物作用、降 低血压、抗肿瘤、抗氧化等治疗效果。作为药草，其已被用于治疗慢性 脓肿、痂病、急性乳腺炎、结核性淋巴结炎等。其还已被用于破坏下腹 中由液体阻滞或血块引起的肿块、治疗脚气和治疗麻木和麻刺。
木贼(Equiseti Herba)是木贼科(Equisetaceae)木贼(Equisetum hiemale)及其同属物种的多年生草。此草高度为20cm以上，并具有短的 地面匍匐的根茎，根节点长出长的深褐色根。其茎刚硬且圆，直径为4-8 cm，在节点之间具有10-20条线，并且直立而无枝条。此草外表面呈灰 绿或黄绿色，具有8-30个竖向槽，组织松软，重量很轻。已知其具有例 如利尿作用、抗氧化等治疗效果。作为药草，其已被用于治疗头痛、发 热、肠出血和止血剂。
然而，山楂、肉桂、夏枯草和木贼的药草提取物各自对肾炎的预防 和/或治疗效果尚未弄清。
本文使用的术语“提取物”是包括性地指选自山楂、肉桂、夏枯草和 木贼中的至少一种的提取物，以及通过常规方法经浓缩和/或干燥该提取 物获得的浓缩物和/或干燥产物。当所述提取物为至少两种选自山楂、肉 桂、夏枯草和木贼的药草的提取物时，可以是通过用相同或相互不同的 溶剂提取至少两种所述药草、并混合所得提取物而获得的“药草提取物的 混合物”，或通过混合至少两种所述药草并提取所述药草混合物而获得的 “药草混合物的提取物”。从下面的实验实施例1可看出，药草提取物的 混合物和药草混合物的提取物均对肾炎表现出良好的预防和/或治疗效 果而无任何显著差异，因此可纳入本发明的范围。
本发明界定的提取物优选地通过用水、直链或支链C1-C6醇、直链 或支链C1-C6醇的水溶液或其混合物提取而制备。用于提取的溶剂可为 10-90％(v/v)、优选10-70％(v/v)、更优选50-70％(v/v)的直链或支链 C1-C6醇的水溶液。更特别地，用于提取的溶剂可为10-90％(v/v)、优 选10-70％(v/v)、更优选50-70％(v/v)的乙醇的水溶液。
下文将对制备本发明提取物的方法进行详细描述。
本发明的山楂、肉桂、夏枯草和木贼的每种提取物均可通过以下步 骤获得：切碎每种干药草；将所述药草的碎片用量为所述干药草重量(g) 的约3-20倍、优选约5-15倍的水、直链或支链C1-C6醇或醇的水溶液 (例如，10-90％(v/v)、优选10-70％(v/v)、更优选50-70％(v/v)的直链 或支链C1-C6醇的水溶液；优选地，10-90％(v/v)、优选10-70％(v/v)、 更优选50-70％(v/v)的乙醇的水溶液)或其混合物，在40-110℃、优选 55-90℃下，进行约0.5-20小时、优选1-10小时的渗滤、热水提取、超 声提取，或回流冷凝提取；然后将所获得的提取物进行过滤、在减压下 浓缩和/或干燥。
如果提取使用的溶剂的量小于所述干药草重量的3倍，则造成难以 搅拌而使所述提取物的溶解度降低，并且提取效率也降低；如果使用的 溶剂的量大于所述干药草重量的20倍，则导致在后续纯化步骤中需要更 大量的低级醇，这带来经济和处理问题。另外，当使用醇溶液作为用于 提取的溶剂时，小于10％(v/v)的醇含量可导致从所述药草提取的极性物 质例如糖过量，导致后续过滤步骤出现问题，而醇含量超过90％(v/v) 可相对增加所述溶剂的非极性，从而降低所需活性物质的提取效率。另 外，提取温度低于40℃时提取效率降低，提取温度高于110℃时由于有 限的提取效率而增加提取成本、不经济。提取时间少于30分钟时会降低 提取效率，而提取时间多于20小时会带来不想要的杂质提取，从而降低 最终提取物的纯度。
将所述提取物进行过滤后收集滤出液，将残留物浸没在量为所述药 草重量的约4-7倍的水、直链或支链C1-C6醇、醇的水溶液(例如，直 链或支链C1-C6醇的10-90％(v/v)、优选10-70％(v/v)、更优选50-70％ (v/v)的水溶液；优选地，乙醇的10-90％(v/v)、优选10-70％(v/v)、更优 选50-70％(v/v)的水溶液)中。将所得溶液加热(例如在55-90℃)并进 行再提取(二次提取)2-5小时。二次过滤后，收集滤出液并与之前的滤 出液混合以增加提取效率。本发明的一个实施方案包括连续进行第一次 提取后再次进行第二次提取的方法，这是为了防止以下情况，大规模生 产中即使进行有效过滤，但药草的含水量高而发生损失，因此只通过第 一次提取将会导致提取效率的降低。但所述二次提取的进行只是为了提 取效率，而与最终提取物的治疗作用无关。因此应理解，作为本发明有 效成分的药草提取物不受上述制备方法的限制。
另外，对各步提取效率的评估揭示了占总量约80-90％的提取物是在 二次提取中获得的，也可进行三次提取但在经济方面不利。将二次提取 后混合的滤出液在50-60℃下减压浓缩以除去留在样品中的溶剂。将在减 压下完全浓缩后的样品浓缩物与所述浓缩物总重的25-50倍的水进行两 次或三次共沸浓缩，然后再与相同量的另外的水混合以形成均质悬浮液。 然后将所述悬浮液冻干为最终提取物。以这种方式使用水进行共沸浓缩 是为了有效地控制残留在所述药草提取物中的低级醇的含量，从而使用 所述药草提取物作为用于医药产品的材料。
依照本发明的一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含有山 楂提取物和肉桂提取物的组合物，所述山楂提取物与肉桂提取物以 10∶1-1∶5、优选5∶1-1∶5、更优选1∶1-1∶5的重量比(即山楂提取物的重量： 肉桂提取物的重量)混合。
依照本发明的另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含有 山楂提取物和夏枯草提取物的组合物，所述山楂提取物和夏枯草提取物 以10∶1-1∶5的重量比(即山楂提取物的重量：夏枯草提取物的重量)混 合。
依照本发明的又另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有山楂提取物和木贼提取物的组合物，所述山楂提取物和木贼提取物以 10∶1-1∶5的重量比(即山楂提取物的重量：木贼提取物的重量)混合。
依照本发明的又另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有肉桂提取物和夏枯草提取物的组合物，所述肉桂提取物和夏枯草提取 物以10∶1-1∶5、优选1∶1-1∶3的重量比(即肉桂提取物的重量：夏枯草提 取物的重量)混合。
依照本发明的又另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有肉桂提取物和木贼提取物的组合物，所述肉桂提取物和木贼提取物以 7∶1-1∶7的重量比(即肉桂提取物的重量：木贼提取物的重量)混合。
依照本发明的又另一实施方案，所述药草提取物包含一种含有夏枯 草提取物和木贼提取物的组合物，所述夏枯草提取物和木贼提取物以 10∶1-1∶10的重量比(即夏枯草提取物的重量：木贼提取物的重量)混合。
依照本发明的再另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物的组合物，所述山楂提取物、 肉桂提取物和夏枯草提取物以10∶1∶1-1∶1∶5的重量比(即山楂提取物的重 量：肉桂提取物的重量：夏枯草提取物的重量)混合。
依照本发明的再另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有山楂提取物、肉桂提取物和木贼提取物的组合物，所述山楂提取物、 肉桂提取物和木贼提取物以10∶1∶1-1∶1∶5的重量比(即山楂提取物的重 量：肉桂提取物的重量：木贼提取物的重量)混合。
依照本发明的再另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有山楂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物的组合物，所述山楂提取物、 夏枯草提取物和木贼提取物以7∶1∶1-1∶1∶5的重量比(即山楂提取物的重 量：夏枯草提取物的重量：木贼提取物的重量)混合。
依照本发明的再另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有肉桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物的组合物，所述肉桂提取物、 夏枯草提取物和木贼提取物以7∶1∶1-1∶1∶7的重量比(即肉桂提取物的重 量：夏枯草提取物的重量：木贼提取物的重量)混合。
依照本发明的再另一个优选实施方案，所述药草提取物包含一种含 有山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物的组合物，所 述山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物以 5∶1∶1∶1-1∶1∶1∶5的重量比(即山楂提取物的重量：肉桂提取物的重量：夏 枯草提取物的重量：木贼提取物的重量)混合。
所述提取物的重量比以所述提取物的干重计，“所述提取物的干重” 是指通过从所述提取物去除溶剂得到的干提取物的重量(下文同上)。
本文界定的术语“肾炎”可包括至少一种选自以下的肾病：肾小球性 肾炎、肾盂肾炎、间质性肾炎、狼疮性肾炎、糖尿病肾病、蛋白尿症、 肾小管腔萎缩、肾小球硬化症、肾衰竭等。
本发明的用于预防和治疗肾炎的组合物包含以所述组合物的总重计 0.001-99wt.％、优选0.1-50wt.％的所述提取物，但不限于此，并可根据 要治疗的疾病的类型和程度、患者的情况、需要的效果等而进行适当的 调节。
包含本发明提取物的组合物还可包含常用于制备药物组合物的合适 的载体、赋形剂或稀释剂。
包含本发明提取物的组合物可根据常规方法制剂成口服剂型(例如 粉剂、粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等)、局 部用药剂、直肠制剂或可注射制剂。 可纳入包含所述提取物的组合物的载体、赋形剂或稀释剂可为乳糖、葡 萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、 阿拉伯橡胶()、海藻酸盐/酯、明胶、磷酸钙、硅酸钙 、纤维素、甲基纤维素、无定形纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯 甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油等。所述组合物 的制剂可包括使用常用稀释剂或赋形剂例如填充料、填充剂、粘合剂、 润湿剂、崩解剂、表面活性剂等。用于口服给药的固体制剂可包括片剂、 丸剂、粉剂、粒剂、胶囊剂等。所述固体制剂可通过将所述提取物与至 少一种赋形剂例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等混合而制备。另 外，除了所述常用赋形剂以外，还可使用润滑剂例如硬脂酸镁或滑石。 用于口服给药的液体制剂可包括悬浮剂、溶液剂、油剂、糖浆剂等。除 了常用稀释剂例如水和液体石蜡以外，还可使用不同赋形剂，例如润湿 剂、调味剂、香料、防腐剂等。非经肠给药的制剂可包括无菌水溶液、 非水溶剂、悬浮剂、油剂、冻干制剂或直肠制剂。非水溶液和悬浮液可 包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)、可注射酯(例如油酸 乙酯)等。直肠制剂的基料可包括witepsol、聚乙二醇(macrogol)、 吐温61、可可脂、月桂精黄油()、甘油明胶等。
例如，为获得所需效果，所述组合物可按照以所述提取物的干重计 1-1000mg/kg、优选50-500mg/kg、更优选150-300mg/kg的每日剂量给 药。所述给药一日可进行一次，也可分几次进行。但所述每日剂量由本 领域技术人员根据患者的情况和体重、疾病的严重程度、剂型和给药途 径及时间可进行恰当的调节。因此，上面规定的每日剂量不欲在任何方 面限制本发明的范围。
本发明的组合物可给予所有哺乳动物，优选啮齿类、家畜、人等， 更优选人。所述给药途径可包括所有类型的途径，包括口服途径，直肠 途径，或者静脉内、肌肉内、皮下、子宫内、硬膜外或脑室内注射途径， 但不限于此。
在另一个实施方案中，本发明提供用于预防和/或改善肾炎的保健食 品，所述保健食品含有至少一种选自山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草 提取物和木贼提取物的药草提取物作为有效成分。
含有本发明提取物的组合物可用于多种用途，例如用于预防和改善 肾炎的药品或保健食品。可加入本发明提取物的食品可包括例如任何种 类的食品、饮料、口香糖、茶、维生素复合物、保健食品，并可以以粉 末、颗粒、片、胶囊或饮料的形式使用。
本发明提取物几乎没有毒性和副作用，并可用作出于预防目的长期 给药的安全医药物质。
在此，保健食品中的提取物含量可以是以所述食品总重计0.01-15 wt.％，作为用于本发明保健食品的组合物；或者以100ml所述食品计 0.02-10g、优选0.3-1g，作为用于保健饮料的组合物。
用于所述保健食品中的保健饮料的组合物可包含作为必需成分的所 述提取物和液体成分，所述液体成分不受具体限制，可额外地包括多种 用于常规饮料的调味剂或天然烃类。天然烃类的实例可包括一般糖类例 如单糖(如葡萄糖、果糖等)，双糖(如麦芽糖、蔗糖等)，或多糖(如 糊精、环糊精等)以及糖醇类例如木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇等。本文 使用的调味剂可优选地包括天然调味剂(例如，奇甜蛋白、甜叶菊(Stevia) 提取物、莱鲍迪苷(rebaudioxide A)、甘草皂苷等)和合成调味剂(例如 糖精、阿斯巴甜等)。所述天然碳水化合物的量为每100ml的本发明组 合物中约1-20g、优选约5-12g。
除上述成分以外，本发明组合物还可包含多种营养补充物、维生素、 矿物质(电解质)、调味剂(例如合成调味剂、天然调味剂等)、色素、 填充料(例如干酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、 保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、用于碳酸 饮料的碳酸化剂等。除此之外，本发明组合物还可包含天然果汁，以及 用于制备果汁或植物汁的果浆。这些成分可单独或结合使用。所述添加 剂的量并不是很多，但每100重量份的本发明组合物中可为0-20重量份。
在本发明的另一实施方案中，提供了用于制备预防和/或治疗肾炎的 组合物的方法，所述方法包括：
进行提取至少一种选自山楂、肉桂、夏枯草和木贼的药草的第一次 提取，所述提取用量为所述药草重量(g)的约3-20倍、优选5-15倍的 水、直链或支链C1-C6醇或醇的水溶液(例如，直链或支链C1-C6醇的 10-90％(v/v)、优选10-70％(v/v)、更优选50-70％(v/v)的水溶液；优选 地，乙醇的10-90％(v/v)、优选10-70％(v/v)、更优选50-70％(v/v)的 水溶液)或其混合物，在40-110℃、优选55-90℃下，进行0.5-20小时、 优选1-10小时的浸透、热水提取、超声提取，或通过加热回流冷凝提取 得到药草提取物。
在本发明的一个优选实施方案中，所述方法还可在所述第一次提取 后包括：
过滤所述第一次提取得到的提取物以收集滤出液；
进行提取所述滤出液以外的残留物的第二次提取，在所述残留物中 再次添加量为所述残留物重量的4-7倍的水、直链或支链C1-C6醇或醇 的水溶液(例如，直链或支链C1-C6醇的10-90％(v/v)、优选10-70％ (v/v)、更优选50-70％(v/v)的水溶液；优选地，乙醇的10-90％(v/v)、 优选10-70％(v/v)、更优选50-70％(v/v)的水溶液)，并进行加温(例 如55-99℃)，然后进行2-5小时的再提取；并且
过滤所述第二次提取得到的提取物并将得到的滤出液与所述第一次 提取的滤出液混合。
通过进行所述第一次和第二次提取增加了提取效率，这对大规模药 草提取物的生产是有利的。
当所述提取物来自至少两种选自山楂、肉桂、夏枯草和木贼的药草 时，所述提取物可通过获得各药草提取物然后混合所述提取物制备；或 混合所述至少两种药草、然后根据上述方法制备所述混合物的提取物制 备。所述各药草提取物的混合比例如上所述。
附图说明
图1示出了单一药草提取物对庆大霉素诱导的肾炎模型的肾炎抑制 活性。
图2示出了对庆大霉素诱导的肾炎模型的组织病理学研究结果。
图3示出了单一药草提取物对顺铂诱导的肾炎模型的肾炎抑制活 性。
图4示出了对顺铂诱导的肾炎模型的组织病理学研究结果。
具体实施方案
下面，根据以下实施例对本发明进行更加详细的描述，但是所述实 施例仅为了说明，而不意图限制本发明的范围。
[实施例1：单一药草提取物的制备(A)]
1.1：山楂提取物的制备
用水清洗山楂(Crataegi Fructus，购自韩国的Kyung-dong市场) 的叶和花以除去杂质并完全干燥。在以这种方式得到的250g的山楂中 添加将2.0L的60％(v/v)乙醇水溶液。在80℃下进行两次每次3小时的 回流，之后将得到的液体提取物过滤并在减压下浓缩。大部分水已蒸发 的状态下，将0.2L水加至所述浓缩的提取物，并对其加热以进行共沸 浓缩。将此过程再重复两次。再次将相同体积的水加至所述共沸浓缩物 以形成均质悬浮液，然后将其冻干以得到45.0g(相对于初始药草18％ 的收率)粉末形态的山楂提取物。
1.2：肉桂提取物的制备
用水清洗肉桂(Cinnamomi Cortex，购自韩国的Kyung-dong市场) 以除去杂质并完全干燥。在以这种方式得到的250g的肉桂中添加2.0L 的60％(v/v)乙醇水溶液。在80℃下进行两次每次3小时的回流，之后将 得到的液体提取物过滤并在减压下浓缩。大部分水已蒸发的状态下，将 0.2L水加至所述浓缩的提取物，并对其加热以进行共沸浓缩。将此过程 再重复两次。再次将相同体积的水加至所述共沸浓缩物以形成均质悬浮 液，然后将其冻干以得到28.5g(相对于初始药草11.4％的收率)粉末 形态的肉桂提取物。
1.3：夏枯草提取物的制备
用水清洗夏枯草(Punella Spica)以除去杂质并完全干燥。在以这 种方式得到的250g的夏枯草中添加2.0L的60％(v/v)乙醇水溶液。在 80℃下进行两次每次3小时的回流，之后将得到的液体提取物过滤并在 减压下浓缩。大部分水已蒸发的状态下，将0.2L水加至所述浓缩的提 取物，并对其加热以进行共沸浓缩。将此过程再重复两次。再次将相同 体积的水加至所述共沸浓缩物以形成均质悬浮液，然后将其冻干以得到 27.3g(相对于初始药草10.9％的收率)粉末形态的夏枯草提取物。
1.4：木贼提取物的制备
用水清洗木贼(Equiseti Herba)以除去杂质并完全干燥。在以这种 方式得到的250g的木贼中添加2.0L的60％(v/v)乙醇水溶液。在80℃ 下进行两次每次3小时的回流，之后将得到的液体提取物过滤并在减压 下浓缩。大部分水已蒸发的状态下，将0.2L水加至所述浓缩的提取物， 并对其加热以进行共沸浓缩。将此过程再重复两次。再次将相同体积的 水加至所述共沸浓缩物以形成均质悬浮液，然后将其冻干以得到52.0g (相对于初始药草20.8％的收率)粉末形态的木贼提取物。
[实施例2：药草混合物的提取物的制备]
用水清洗山楂、肉桂和夏枯草以除去杂质并完全干燥。在以这种方 式得到的山楂(97g)和肉桂(153g)、或肉桂(92g)和夏枯草(96g)中添加2.0 L的60％(v/v)乙醇水溶液。在80℃下进行两次每次3小时的回流，之后 将得到的液体提取物过滤并在减压下浓缩。大部分水已蒸发的状态下， 将0.2L水加至所述浓缩的提取物，并对其加热以进行共沸浓缩。将此 过程再重复两次。再次将相同体积的水加至所述共沸浓缩物以形成均质 悬浮液，然后将其冻干以得到35.2g(相对于初始药草14.1％的收率) 粉末形态的山楂和肉桂的复合提取物，以及22.0g(相对于初始药草 11.7％的收率)粉末形态的肉桂和夏枯草的复合提取物。
[实施例3：药草提取物的混合物的制备]
实施例3.1：山楂提取物和肉桂提取物的混合物的制备
将实施例1.1的山楂提取物和实施例1.2的肉桂提取物以10∶1、5∶1、 3∶1、1∶1、1∶3和1∶5的重量比(山楂提取物的重量：肉桂提取物的重量) 混合在一起。为均匀混合，向混合物中加入体积为所述混合物重量2-3 倍的水，然后在50-60℃进行减压浓缩。将相同体积的水加至所得的浓缩 物以形成均质悬浮液，然后将其冻干以得到粉末状混合物。
实施例3.2：山楂提取物和夏枯草提取物的混合物的制备
将实施例1.1的山楂提取物和实施例1.3的夏枯草提取物以10∶1、 5∶1、3∶1、1∶1、1∶3和1∶5的重量比(山楂提取物的重量：夏枯草提取物 的重量)混合在一起，并以与实施例3.1相同的方式进行所述过程以制 备混合物。
实施例3.3：山楂提取物和木贼提取物的混合物的制备
将实施例1.1的山楂提取物和实施例1.4的木贼提取物以10∶1、5∶1、 3∶1、1∶1、1∶3和1∶5的重量比(山楂提取物的重量：木贼提取物的重量) 混合在一起，并以与实施例3.1相同的方式进行所述过程以制备混合物。
实施例3.4：肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物的制备
将实施例1.2的肉桂提取物和实施例1.3的夏枯草提取物以10∶1、 5∶1、4∶1、3∶1、1∶1、1∶3和1∶5的重量比(肉桂提取物的重量：夏枯草 提取物的重量)混合在一起，并以与实施例3.1相同的方式进行所述过 程以制备混合物。
实施例3.5：肉桂提取物和木贼提取物的混合物的制备
将实施例1.2的肉桂提取物和实施例1.4的木贼提取物以7∶1、5∶1、 3∶1、2∶1、1∶1、1∶3、1∶5和1∶7的重量比(肉桂提取物的重量：木贼提 取物的重量)混合在一起，并以与实施例3.1相同的方式进行所述过程 以制备混合物。
实施例3.6：夏枯草提取物和木贼提取物的混合物的制备
将实施例1.3的夏枯草提取物和实施例1.4的木贼提取物以10∶1、 5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5和1∶10的重量比(夏枯草提取物的重量：木贼 提取物的重量)混合在一起，并以与实施例3.1相同的方式进行所述过 程以制备混合物。
实施例3.7山楂提取物、肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物的制 备
将实施例1.1的山楂提取物、实施例1.2的肉桂提取物和实施例1.3 的夏枯草提取物以10∶1∶1、2∶2∶3和1∶1∶5的重量比(山楂提取物的重量： 肉桂提取物的重量：夏枯草提取物的重量)混合在一起，并以与实施例 3.1相同的方式进行所述过程以制备混合物。
实施例3.8山楂提取物、肉桂提取物和木贼提取物的混合物的制备
将实施例1.1的山楂提取物、实施例1.2的肉桂提取物和实施例1.4 的木贼提取物以10∶1∶1、2∶5∶2和1∶1∶5的重量比(山楂提取物的重量： 肉桂提取物的重量：木贼提取物的重量)混合在一起，并以与实施例3.1 相同的方式进行所述过程以制备混合物。
实施例3.9：山楂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物的混合物的制 备
将实施例1.1的山楂提取物、实施例1.3的夏枯草提取物和实施例 1.4的木贼提取物以7∶1∶1、3∶2∶4和1∶1∶5的重量比(山楂提取物的重量： 夏枯草提取物的重量：木贼提取物的重量)混合在一起，并以与实施例 3.1相同的方式进行所述过程以制备混合物。
实施例3.10：肉桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取物的混合物的 制备
将实施例1.2的肉桂提取物、实施例1.3的夏枯草提取物和实施例 1.4的木贼提取物以7∶1∶1、3∶2∶5和1∶1∶7的重量比(肉桂提取物的重量： 夏枯草提取物的重量：木贼提取物的重量)混合在一起，并以与实施例 3.1相同的方式进行所述过程以制备混合物。
实施例3.11：山楂提取物、肉桂提取物、夏枯草提取物和木贼提取 物的混合物的制备
将实施例1.1的山楂提取物、实施例1.2的肉桂提取物、实施例1.3 的夏枯草提取物和实施例1.4的木贼提取物以5∶1∶1∶1、3∶2∶2∶2和1∶1∶1∶5 重量比(山楂提取物的重量：肉桂提取物的重量：夏枯草提取物的重量： 木贼提取物的重量)混合在一起，并以与实施例3.1相同的方式进行所 述过程以制备混合物。
[实验实施例：药理活性的评估]
实验实施例1：药草提取物的混合物与药草混合物的提取物之间的 活性对比
根据评估方法(Amin et al.，Environmental Health Perspectives vol.112，No.4，March，2004，465-479)进行试验以对比和评估实施例2的 来自山楂与肉桂的药草混合物以及肉桂与夏枯草的药草混合物的提取 物、以及实施例3.1的山楂提取物与肉桂提取物的1∶1混合物、以及实施 例3.4中的肉桂提取物与夏枯草提取物的1∶1混合物对肾炎的治疗作用。 结果示于表1。
无阳性对照组，对正常组进行试验。对雄性SD大鼠(7周龄，195-205 g，Orient)将240mg/kg的剂量的肾炎诱导因子庆大霉素(购自Whail Pharma.Co.，Ltd.)进行6天的腹膜内注射以诱导肾炎。在被诱导肾炎的 试验大鼠中，除阴性对照组以外的试验组以400mg/kg的每日剂量口服 实施例2的2种试验药物和实施例3.1或3.4的试验药物。口服后7天进 行尸检，采集血样以检测血液脲氮(B.U.N.，blood urea nitrogen)和肌 酸酐(creatinine)。其结果示于表1。
[表1]
从上表1可看出，实施例3.1或3.4的药草提取物的混合物和实施例 2的药草混合物的提取物均对肾炎有很好的治疗效果。特别是，没有显 著的依赖于制备方法的活性差异。
实验实施例2：对庆大霉素诱导的肾炎模型的治疗效果试验
根据评估方法(Amin et al.，Environmental Health Perspectives vol.112，No.4，March，2004，465-479)进行评估试验以研究实施例1的单 一药草提取物和实施例3.1-3.11的药草提取物的混合物对肾炎的治疗效 果。对实施例1的单一药草提取物的评估结果示于表1，药草提取物的 混合物的结果示于表2。
无阳性对照组，对正常组进行试验，对雄性SD大鼠(7周龄，195-205 g，Orient)将240mg/kg注射剂量的肾炎诱导因子庆大霉素(购自Whail Pharma.Co.，Ltd.)进行6天的腹膜内注射以诱导肾炎。在被诱导肾炎的 试验大鼠中，对除阴性对照组以外的试验组以400mg/kg的每日剂量口 服实施例1的4种试验药物和实施例3的11种试验药物。口服后7天进 行尸检。采集血样以测量血液脲氮(B.U.N.，blood urea nitrogen)和肌 酸酐(creatinine)。
[表2]
从上表2可看出，不仅是实施例1.1到1.4的单一药草提取物，具有 上述组成的实施例3.1到3.11的药草提取物的混合物也均对肾炎有很好 的治疗效果。特别是，能够确定具有所述各种成分混合比例的具有良好 活性的组合物，含有山楂或肉桂的复合药物对庆大霉素诱导的肾炎模型 表现出总体良好活性。
实验实施例3：对庆大霉素诱导的肾炎模型的组织病理学研究
从以实施例3.1的山楂提取物和肉桂提取物的5∶1混合物治疗的试验 组中，采收肾组织并进行组织病理学研究。
将采收的肾组织进行福尔马林固定并以常规组织处理的方式制作切 片。将所述肾组织切片用苏木精(hematoxylin，Sigma)和曙红(eosin， Sigma)染色并观察。根据观察到的异常组织病理学现象，将损伤的严 重程度分为从极轻到显著严重度的4级。
所述肾组织的病理变化示于图2。在图2(a)的正常组中(G为肾小球， T为肾小管)，没有与肾炎有关的明显损伤。在图2(b)的阴性对照组(即 不用试验药物治疗的患有肾炎的试验组)中，存在严重损伤，例如肾小 管坏死(N)为显著(4+)、肾小管再生(R)为中度(3+)和间质性炎 症(＊)为中度(3+)。在肾小管腔中观察到透明管型(→)，除此之外 还观察到肾小管扩张、透明小滴、间质性纤维化等。以实施例3.1的试 验药物治疗的图2(c)的试验组中，肾小管坏死(N)为极轻(1+)、肾小 管再生(R)为中度(3+)和间质性炎症(＊)为轻度(2+)。
从图2结果可看出，根据所述组织病理学观察结果，确认相对阴性 对照组，所述试验组对肾炎的治疗效果具有显著的改善。
实验实施例4：对顺铂诱导的肾炎模型的治疗效果试验
根据评估方法(Shirwaikar et al.，Journal of Ethnopharmacology 90， 2004，81-86)进行评估试验以研究实施例1的单一药草提取物和实施例 3.1-3.11的药草提取物的混合物对肾炎的治疗效果。实施例1的单一药草 提取物的评估结果示于图3和表3，药草提取物的混合物的结果示于表3。
无阳性对照组，对正常组进行试验。对雄性SD大鼠(7周龄，195-205 g，Orient)将3mg/kg的注射剂量的肾炎诱导因子庆顺铂(Sigma)进 行3天的腹膜内给药以诱导肾炎。在被诱导肾炎的试验大鼠中，除阴性 对照组以外的试验组以400mg/kg的每日剂量口服实施例1的4种试验 药物(单一药草提取物)和实施例3的11种试验药物(药草提取物的混 合物)。所述试验大鼠在经口给药7天后进行尸检。采集血样以测量血 液脲氮(B.U.N.，blood urea nitrogen)和肌酸酐(creatinine)。
[表3]
从上表3可看出，不仅是实施例1.1到1.4的单一药草提取物，具有 上述组成的实施例3.1到3.11的药草提取物的混合物也均对肾炎有很好 的治疗效果。特别是，能够确定具有所述各种成分混合比例的具有良好 活性的组合物，含有山楂或木贼的复合药物对顺铂诱导的肾炎模型表现 出总体良好活性。
实验实施例5：对顺铂诱导的肾炎模型的组织病理学研究
从以实施例3.4的肉桂提取物和夏枯草提取物的3∶1、1∶1或1∶3混 合物治疗的实验实施例4的试验组中，采收肾组织并进行组织病理学研 究。
将采收的肾组织进行福尔马林固定并以常规组织处理的方式制作切 片。将所述肾组织切片用苏木精和曙红染色并观察。根据观察到的异常 组织病理学发现，将损伤的严重程度分为从极轻到显著严重度的4级。
所述肾组织的病理学变化示于图4和表4。
[表4]
在图4的正常组中(G为肾小球，T为肾小管)，没有与肾炎有关 的明显损伤。在图4的阴性对照组中，肾组织具有极轻的肾小管坏死和 显著的肾小管再生。除此之外，还观察到肾小管扩张、间质性炎症、透 明管型和间质性纤维化。用所述试验药物治疗的组中观察到肾小管坏死、 肾小管再生和肾小管扩张，但程度小于阴性对照组，并且未观察到透明 管型和间质性纤维化。
所述结果中，与所述阴性对照组相比，根据组织病理学观察，所述 试验组表现出对肾炎具有治疗效果。特别是，如表4所示，实施例3.4 的1∶3混合物的活性优于3∶1或1∶1混合物。
实验实施例6：对环孢霉素A诱导的肾炎模型的治疗效果试验
根据评估方法(So Young Lee et al.，Experimental transplantation 78， 2004，1756-1764)进行活性试验以评估实施例3.1、3.3、3.4和3.5的药草 提取物的3∶1、1∶1和1∶3混合物对慢性肾炎的治疗效果。
无阳性对照组，对正常组进行试验。对雄性SD大鼠(7周龄，195-205 g，Orient)将50mg/kg的注射剂量的肾炎诱导因子环孢霉素A (cyclosporine A，CsA，Chong Kun Dang Pharm.Corp.)进行8周的腹 膜内给药以诱导肾炎。在被诱导肾炎的试验大鼠中，除阴性对照组以外 的试验组以400mg/kg的每日剂量口服实施例3.1、3.3、3.4和3.5的药 草提取物的3∶1、1∶1和1∶3混合物3天，然后再对其给予环孢霉素A。 所述试验大鼠在诱发肾炎后8周进行尸检，采集血样以测量血液脲氮 (B.U.N.，blood urea nitrogen)和肌酸酐(creatinine)。
[表5]
从上表5可看出，以环孢霉素A处理的阴性对照组和试验组的B.U.N. 和肌酸酐的水平相对于正常组升高，但是所有治疗组的B.U.N.和肌酸酐 的水平相对于阴性对照组降低。特别是，对环孢霉素A诱导的肾炎模型 (其为慢性肾炎模型)，实施例3.4的肉桂提取物和夏枯草提取物的1∶3 混合物具有最佳活性。
实验实施例7：对顺铂诱导的肾炎模型的治疗效果试验
为评估在上面的评估中显示了良好结果的实施例3.4的药草提取物 的3∶1、1∶1和1∶3混合物对顺铂诱导的肾炎模型的肾炎治疗效果，根据 评估方法(Shirwaikar et al.，Journal of Ethnopharmacology 90，2004， 81-86)进行评估试验，并表示在以下表6中。
无阳性对照组，对正常组进行试验，其中对试验组将3mg/kg的注射 剂量的肾炎诱导因子顺铂(Whail Pharma.Co.，Ltd.)进行3天的腹膜内 给药(参照实验实施例4)，之后除了阴性对照组以外的试验组以100、 200和400mg/kg的每日剂量口服实施例3.4的药草提取物的3∶1、1∶1和 1∶3混合物。经口给药7天后对实验动物进行尸检，采集血样以测量血液 脲氮血液脲氮(B.U.N.，blood urea nitrogen)和肌酸酐(creatinine)。 结果示于表6。
[表6]
从上表6可看出，实施例3.4的具有不同混合比例的所有试验药物 均对肾炎表现出良好的治疗效果。特别是，肉桂提取物和夏枯草提取物 的混合比为1∶3时活性最佳。
实验实施例8：对大鼠肾小球膜细胞的细胞毒性测试
为评估上述的实施例1的4种单一药草提取物和实施例3的11种药 草提取物的混合物对肾小球膜细胞的细胞毒性，根据评估方法(R.Wang et al.，Life Sciences 80，2007，2481-2488)进行评估试验。实施例1的单一 药草提取物和实施例3的药草提取物的混合物的评估结果示于表7。
对于实施例1的4种单一药草提取物和实施例3的11种混合物，各 取10mg溶于合适量的DMSO以制备终浓度为40mg/ml的样品。将在 96孔板中培养的肾小球膜细胞(1x104，24小时)用样品以400μg/ml 的最大浓度处理，公比为2。培养24小时后，用含有0.5mg/ml MTT的 另一培养基置换培养基。再经过4小时后，替换为100μl的DMSO。15 分钟后，测量540nm的吸收值以确定所述肾小球膜细胞的毒性。
[表7]
从表7可看出，不仅是实施例1的4种单一药草提取物，而且实施 例3的11种具有不同组成的的药草提取物混合物也均对肾小球膜细胞的 生长有很好的抑制作用。特别是，确定了具有良好活性的基于成分的混 合比例，并且夏枯草、木贼、或者含有夏枯草和木贼的复合药物对肾小 球膜细胞的生长具有总体良好抑制活性。
实施例9：药草提取物的活性馏分和成分鉴定
为获得药草提取物的活性馏分和进行成分鉴定，通过小鼠耳肿胀抑 制试验进行了活性引导的分馏(activity-guided sub-fractionation)。
将实施例1的每种药草提取物悬浮在体积为所述提取物重量的2-10 倍的蒸馏水中，然后使用体积为所述悬浮的提取物2-5倍(v/v)的二氯甲 烷(MC，methylene chloride)、乙酸乙酯(EA，ethyl acetate)和丁醇(BuOH， butanol)进行2-3次连续溶剂分馏。这样获得的活性馏分用HPLC进行模 式分析。为鉴定所述馏分的有效成分，将实施例1.2的提取物的MC馏 分使用己烷和EA(10∶1-1∶10，v/v)的混合溶剂进行硅胶柱色谱并使用 MeOH作为溶剂进行Sephadex LH-20柱色谱以分离化合物1和2。将实 施例1.3的提取物的BuOH馏分使用60％MeOH作为溶剂进行C18柱色 谱、使用CH2Cl2和MeOH(1∶1，v/v)的混合溶剂进行Sephadex LH-20柱 色谱以分离化合物3。所分离的化合物通过用LC-MS/MS、1H-NMR、 13C-NMR、UV光谱仪等的仪器分析并参照文献进行鉴定。结果示于表8。
[表8]
类别 成分 化合物1 肉桂酸(Cinnamic acid) 化合物2 香豆素(Coumarine) 化合物3 迷迭香酸(Rosmarnic acid)
鉴定数据如下：
肉桂酸(Cinnamic acid)：白色粉末。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)：δ7.79(1H，d，J＝16Hz，H-7)，7.56(2H， m，H-2，6)，7.40(3H，m，H-3，4，5)，6.45(1H，d，J＝16Hz，H-8)；13C-NMR (63MHz，CDCl3)：δ173.2(C-9)，147.6(C-7)，134.4(C-1)，131.2(C-4)， 129.4(C-3，5)，128.8(C-2，6)，117.7(C-8)
香豆素(Coumarine)：白色粉末。
1H-NMR(250MHz，CD3OD)：δ7.89(1H，d，J＝9.6Hz，H-4)， 7.51-7.58(2H，m，H-5，7)，7.25-7.31(2H，m，H-6，8)，6.46(1H，d，J＝9.6Hz， H-3)；13C-NMR(63MHz，CD3OD)：δ162.7(C-2)，155.2(C-9)，145.6(C-4)， 133.1(C-7)，129.4(C-5)，125.8(C-6)，120.3(C-10)，117.5(C-3)，117.1(C-8)
迷迭香酸(Rosmarnic acid)：淡黄色无定形粉末。
1H-NMR(250MHz，DMSO)：δ7.46(1H，d，J＝16.0Hz，H-7)，7.05 (1H，d，J＝2.0Hz，H-2)，7.00(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6)，6.76(1H，d，J＝8.0 Hz，H-5)，6.67(1H，d，J＝2.0Hz，H-2′)，6.63(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，6.52 (1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，H-6′)，6.23(1H，d，J＝16.0Hz，H-8)，5.02(1H，m， H-8′)，2.99(1H，m，H-7′b)，2.90(1H，m，H-7′a)；13C-NMR(63MHz， DMSO)：δ170.7(C-9′)，165.8(C-9)，148.5(C-4)，145.8(C-7)，145.5(C-3)， 144.8(C-3′)，143.9(C-4′)，127.2(C-1′)，125.3(C-1)，121.5(C-6)，120.0 (C-6′)，116.6(C-2′)，115.7(C-5′)，115.3(C-5)，114.8(C-8)，113.2(C-2)，72.7 (C-8′)，36.1(C-7′)
为评估实施例1.2和1.3的药草提取物的MC、EA和BuOH馏分和 上面所鉴定的三种化合物的肿胀抑制作用，根据Hee Kee Kim等人的方 法[Hee Kee Kim et al.，Arch.Pharm.Res.16(1)，1993，18-24]进行活性试 验。
阳性对照组接受20mg/kg的剂量的吲哚美辛(Indomethacin， Sigma)。MC、EA和BuOH馏分的浓度均为200mg/kg，化合物1、2 或3的浓度为20mg/kg。
经口给药1小时后，将浓度为2.5％的巴豆油(Croton oil，Sigma) 涂敷于雄性ICR小鼠(7周龄、28-32g、Orient)的一只耳以诱导急性 炎症。4小时后测量耳的肿胀厚度。结果示于表9。
[表9]
从表9可看出，所述阳性对照组对巴豆油诱导的急性炎症显示出 39％的抑制功效，实施例1.2的MC和实施例1.3的EA、BuOH馏分显 示出大于30％的显著的抑制功效。三种化合物也对所述急性炎症的抑制 有效。例如，化合物1和2分别显示出42％和39％的高抑制活性。
实验实施例10：对庆大霉素诱导的肾炎模型的治疗效果试验
为评估实验实施例9的三种化合物对肾炎的治疗效果，以与实验实 施例1相同的方式测量庆大霉素诱导的肾炎模型中的B.U.N.和肌酸酐含 量。试剂为所述化合物1、2和3，其是肉桂和夏枯草的药草提取物中的 活性馏分。结果示于表10。
[表10]
如表10所示，在肉桂提取物和夏枯草提取物的混合物的成分中，肉 桂酸和香豆素显示出降低庆大霉素诱导的肾炎模型中血液脲氮(B.U.N.) 含量的作用，该结果相对于阴性对照组是统计学显著的。肉桂酸降低肌 酸酐含量并具有最高的改善肾炎症状的活性。
下面对包含本发明提取物的组合物的示例性制剂进行描述，给出所 述示例性制剂仅出于说明的目的而不意图限制本发明的范围。
制剂实施例1：粉剂的制备
实施例1-3的提取物 80mg
乳糖 100mg
滑石 10mg
将上述成分混合在一起并包装在气密性小袋中。
制剂实施例2：片剂的制备
将上述成分混合在一起并根据常规制片方法制成片剂。
制剂实施例3：胶囊剂的制备
将上述成分混合在一起并根据常规胶囊制备方法包装在明胶胶囊 中。
制剂实施例4：可注射制剂的制备
根据可注射制剂的常规制备方法以每小瓶(2ml)上述含量使用所述 成分。
制剂实施例5：溶液剂的制备
根据溶液剂的常规制备方法，将所述各成分溶解于纯水中并在加入 柠檬调味剂后混合在一起。向所述混合物中加入适量的纯水以制成总量 100ml的溶液。将所述溶液装入褐色瓶中并灭菌以制成溶液剂。
制剂实施例6：保健食品的制备
本文所述的维生素-矿物质混合物的组合物通过以优选例的混合比 例混合对保健食品比较合适的成分制备，但所述成分的混合比例可进行 任一改变。根据保健食品的常规制备方法，将所有成分混合在一起并制 成颗粒，通过常规的方法其可用于制备保健食品。
制剂实施例7：保健饮料的制备
根据保健饮料的常规制备方法，将所有成分混合在一起并在80℃搅 拌加热约1小时。将这样得到的溶液过滤并注入无菌2L容器中，并进 行密封灭菌，之后冷冻保存并用于制备用于本发明保健饮料的组合物。
本文所述的组合物通过以优选例的混合比例混合对保健饮料比 较合适的成分制备组成，但所述成分的混合比例可根据目标客户、目 标国家、用法等地理和种族偏好而可进行任一改变。