技术领域
本发明主要涉及化妆品技术领域，具体地说，本发明涉及白梅花鲜加工技术领域。
背景技术
白梅花,又名绿萼梅，是一种药用梅花，为蔷薇科植物梅Prunusmume的花蕾，收载于《中国药典》,具有开郁和中，化痰，解毒之功效，用于郁闷心烦，肝胃气痛，梅核气，凛痈疮毒等。
同时，在化妆品领域，白梅花也有着悠久的使用历史，如《赤水玄珠》中记载“治唇上生疮白梅瓣贴之，如开裂出血者即止。”又如《采珍集》中记载“梅花瓣,雪水煮粥,解热毒，专供疏肝解郁，美容艳体。”
白梅花主要含有挥发油类,绿原酸，黄酮类，苷类等物质(张清华.白梅花化学成分研究及生物活性预试[D].山东大学,2008.)。据张清华等报道，白梅花黄酮类物质具有抑制酪氨酸酶的活性；日本学者NakamuraS等报道了白梅花含有的绿原酸类似物，具有抑制黑色素生产的作用(NakamuraS,etc.Acylated sucroses and acylated quinic acids analogsfrom theflower buds ofPrunus mume andtheirinhibitoryeffecton melanogenesis.Phytochemistry.2013Aug；92:128-36.)近年来，白梅花的护肤功得到更多的挖掘。如方兆华等就绿萼梅提取物的抗羰基化反应、促成纤维细胞增殖、防晒作用，申请了发明专利(CN104173220、CN104173221、CN104173222)。
但是，关于白梅花的提取加工方法，仅有少数的现有技术。徐正东等公开了一种从绿梅花中提取纯化总黄酮的方法(CN103330764)，以干燥的绿梅花，采用回流提取，结合大孔吸附树脂分离技术，可以快速将绿梅花中总黄酮类功效成分提取纯化，总黄酮类物质达到80％以上含量。徐正东等公开的技术，主要针对黄酮类化合物的提取。但是，白梅花是一种珍贵的原料，年产量仅100吨左右，除了黄酮类化合物，白梅花还含有挥发油类,绿原酸、绿原酸类似物等成分，该专利技术没能对其他有效成分充分利用，造成很大浪费。
更重要的是，白梅花花期短，仅有15天左右；而且花朵娇弱，储存保鲜困难。因此，农户在白梅花采摘后，马上将其投入干燥环节。鲜花干燥过程中，挥发油类的香味物质大部分损失，所以市场上很难见到能够保留白梅花香味的产品。
同时，绿原酸类物质稳定性差，在加热、光照过程中容易降解(林丽洋等.增强绿原酸水溶液稳定性的方法研究[J].华西药学杂志，2005，20(3):225-227.)。
如果能够开发新型的白梅花加工方法，充分保留香味物质、绿原酸、黄酮类等，将对白梅花的深度利用具有重大的现实意义。
发明内容
针对现有技术现状，特别是现有白梅花加工方法造成白梅花有效成分不能综合利用，难以保留原有香味物质的现状，本发明提供了一种白梅花的鲜加工方法，利用冷冻、挤压技术，低温挤压提取白梅花细胞液，充分保留了白梅花的香味及不稳定物质，而且全程无需加热，能耗低；细胞破碎提取，效率高；挤压提取剩余的花渣，乙醇-水溶液作为溶剂进行提取即可获得高纯度的黄酮类物质，在白梅花加工领域具有广泛的适用性。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：
本发明提供了一种白梅花的鲜加工方法，所述的加工方法包括如下步骤：
(1)冷冻-挤压破壁：新鲜采摘的白梅花，冷冻成硬质的冰冻白梅花；冰冻状态下的硬质白梅花进行挤压，使白梅花细胞破碎。
(2)挤压提取分离：细胞破碎的白梅花加入水，搅拌均匀，挤压分离细胞液和花渣。
(3)花渣提取：在步骤(2)所得白梅花花渣中加入乙醇-水溶液作为溶剂，室温搅拌提取，得白梅花提取液。
本发明中，所述的挤压方法，优选螺杆式挤压。
本发明中，所述的一种白梅花的鲜加工方法，经过两次挤压：一次为冷冻后的挤压，可将细胞壁充分破坏，提高后续加工效率；一次为挤压提取分离，快速获取细胞液，同时分离出花渣，可作为下一步的黄酮提取原料。
本发明中，所述步骤(2)获得的细胞液，其定义是，原本处于新鲜白梅花细胞内的液体，经过冷冻-破壁方法破坏细胞结构，加水挤压提取得到的溶液。
本发明中，所述步骤(2)获得的细胞液，通过离心、膜过滤、明胶法、吸附、电荷中和法中的任意一种澄清技术，澄清细胞液。
本发明中，所述新鲜采摘的白梅花冷冻温度为-196℃--10℃。
优选的，本发明中，新鲜采摘的白梅花冷冻温度为-30℃--10℃。
本发明中，挤压分离前的加水量为鲜白梅花质量的0.5倍-2倍。
本发明中，所述乙醇浓度为20％-95％。
本发明中，所述乙醇浓度优选40％-80％。
本发明中，所述白梅花提取液进一步浓缩、干燥、粉碎，得到富含黄酮的白梅花提取物粉末。
本发明白梅花的鲜加工方法制备的白梅花细胞液或富含黄酮的白梅花提取物在化妆品中的应用。
本发明白梅花的鲜加工方法制备的白梅花细胞液或富含黄酮的白梅花提取物在护肤溶液中的应用。
本发明白梅花的鲜加工方法制备的白梅花细胞液或富含黄酮的白梅花提取物在护肤乳化剂型中的应用。
本发明的有益效果:
本发明提供的一种白梅花的鲜加工方法，以新鲜白梅花为原料，鲜花采摘后进行冷冻，细胞液的水分凝固成冰，冰晶可使白梅花细胞壁部分破坏；冷冻后的白梅花立即进行挤压，进一步促进白梅花细胞壁的破碎，使得有效成分极易溶出。本发明使用的破壁方法为物理破壁，不需使用化学试剂或酶等其他耗材，而且可连续操作，能耗低，效率高。
破碎后的白梅花加水进行挤压提取，提取温度低、效率高，获得的白梅花细胞液具有浓郁的白梅花香味；低温提取，使得绿原酸得到充分保护，所以白梅花细胞液含有大量绿原酸；冷冻破碎后的白梅花花渣持水率下降，使得细胞液得率显著提高。
由于白梅花花渣中的细胞已经破碎，加入乙醇-水溶液，室温搅拌，即可获得满意的提取率；且挤压提取过程，已将水溶性的糖类等从白梅花中分离出去，但仍含有许多水溶性较弱的成分，如黄酮等，因此白梅花花渣加乙醇-水溶液提取即可获得含高纯度黄酮的白梅花提取物，将白梅花中的芳香物质、细胞液、绿原酸和总黄酮都能充分分离提取，大大提高了白梅花的利用率，有利于节约珍贵稀少的白梅花资源。
本发明的提取方法，全程无需加热，高效节能，并且能充分保留白梅花的有效成分；获得的白梅花细胞液和白梅花提取物产品品质高，可广泛适用于于化妆品领域提供白梅花的香味和活性。对于白梅花的加工和使用具有重大的现实意义。
附图说明
图1显示为本发明的工艺流程。
图2显示为不同工艺的细胞液得率。
图3显示为不同工艺的细胞液固含量。
图4显示为不同工艺下的绿原酸得率。
图5显示为不同工艺下的总黄酮纯度。
图6显示为冷冻温度和加水量对绿原酸得率影响的响应面图。
图7显示为冷冻温度和乙醇浓度对绿原酸得率影响的响应面图。
图8显示为乙醇浓度和加水量对绿原酸得率影响的响应面图。
图9显示为冷冻温度和加水量对总黄酮纯度影响的响应面图。
图10显示为冷冻温度和乙醇浓度对总黄酮纯度影响的响应面图。
图11显示为乙醇浓度和加水量对总黄酮纯度影响的响应面图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细描述，但本发明的方法不限于下述实施例。
本发明中新鲜白梅花，为新鲜的含苞待放的花苞，采摘后未经干燥，含水量70％-93％；白梅花干花，指的是白梅花花苞采摘后，自然晒干的花苞，含水量低于15％；绿原酸、芦丁标准品纯度98％；螺杆式挤压装置，高效液相色谱仪，紫外可见分光光度计为常规渠道市售设备。
实施例一：白梅花的鲜加工方法
参见附图1，本发明提供了一种白梅花的鲜加工方法，所述的加工方法包括如下步骤：
(1)冷冻-挤压破壁：新鲜采摘的白梅花，冷冻成硬质的冰冻白梅花；冰冻状态下的硬质白梅花进行挤压，使白梅花细胞破碎。
(2)挤压提取分离：细胞破碎的白梅花加入水，搅拌均匀，挤压分离细胞液和花渣，计算细胞液得率、细胞液固含量、绿原酸得率。
(3)花渣提取：在步骤(2)所得白梅花花渣中加入乙醇-水溶液作为溶剂，室温搅拌提取，得白梅花提取液，计算绿原酸得率总黄酮纯度。
细胞液得率＝(细胞液质量/新鲜白梅花质量)*100％。
细胞液固含量＝((M3-M1)/M2)*100％,M1为容器质量，M2为细胞液质量，M3为细胞液干燥后连同容器的质量；固含量的测试方法为：铝箔杯称重得M1，取溶液质量M2于铝箔杯，105℃烘箱，干燥3h，铝箔杯放置于干燥器内冷却至室温，称重得M3。
绿原酸得率＝(提取物中绿原酸质量/原料质量)*100％，鲜白梅花的原料质量＝实际质量*(1-鲜花含水量)，白梅花干花的原料质量＝实际质量*(1-干花含水量)；绿原酸测试方法为高效液相色谱法，参照文献方法(白俞.UV法及HPLC法测定重庆地区金银花中绿原酸和木犀草苷含量比较研究[D].西南大学,2013.)；含水量＝((m1+m2-m3)/m1)*100％；测试方法为：取原料质量m1，置于质量为m2的容器，于105℃烘箱，干燥3h，放置于干燥器内冷却至室温，称重得容器和干燥原料的总质量m3。
总黄酮纯度＝(总黄酮质量/提取物质量)*100％，测试方法为UV法，以芦丁为对照，参照文献方法(张清华.白梅花化学成分研究及生物活性预试[D].山东大学，2008.)。
实施例二：不同加工方法细胞液得率及固含量对比
参见附图2和附图3：
工艺1：取新鲜白梅花1Kg，-20℃冷冻12h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加0.6Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，所得溶液3000rpm离心5min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经计算，细胞液得率为75.2％，细胞液固含量为3.0％。
工艺2：取新鲜白梅花1Kg，加0.6Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，所得溶液3000rpm离心5min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经计算，细胞液得率为56.7％，细胞液固含量为1.8％。
实施例三：不同加工方法绿原酸得率
参见附图4：
工艺3：取新鲜白梅花1Kg(经测试含水量为82.5％)，-20℃冷冻12h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加2Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，所得溶液3000rpm离心5min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经测试计算，绿原酸得率为4.6％(以干燥原料计)。
工艺4：取白梅花干花200g(经测试含水量为12.6％)，粉碎，过40目筛，加2.8Kg去离子水，煮沸后微沸提取1h；进行螺杆式挤压提取，所得溶液3000rpm离心5min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经测试计算，绿原酸得率为3.1％(以干燥原料计)。
实施例四：不同加工方法总黄酮纯度对比
参见附图5：
工艺5：取新鲜白梅花1Kg，-10℃冷冻12h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加1Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，获得的花渣,加入5L 70％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为57.1％。
工艺6：取新鲜白梅花1Kg,进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加入5L 70％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为18.0％。
工艺7：取白梅花干花200g,粉碎，过40目筛，加入800ml水，5L 70％乙醇，回流提取2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为20.7％。
工艺8：取白梅花干花200g,粉碎，过40目筛，加入800ml水，5L 70％乙醇，回流提取2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩至600g，加入500g D101树脂，静态吸附12h，2L去离子水洗涤树脂，水洗后的树脂用3L 80％乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液60℃减压浓缩、冷冻干燥得白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为60.2％。
本发明所述的提取方法(工艺5)，总黄酮纯度为57.1％，纯度接近大孔树脂纯化的提取方法(工艺8)所得总黄酮纯度60.2％，显著高于工艺6(18.0％)和工艺7(20.7％)，参见说明书附图5；更重要的是本发明所述的提取方法无需后续的纯化过程，即可达到类似大孔树脂纯化的总黄酮纯度，不需其他材料及试剂，废液排放少，效率高。
实施例五：响应面法优化本发明加工方法
分别称取多组1Kg新鲜白梅花，按照本发明所述方法冷冻12h至质地坚硬，挤压破碎，加去离子水，搅拌5min，螺杆式挤压提取，获得的花渣和细胞液，检测并计算细胞液中的绿原酸得率；花渣加入5L乙醇-水溶液，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；检测并计算该提取物中总黄酮纯度。
响应面法对上述工艺参数的优化过程如下：
表1：响应面因素水平表
工艺条件 单位 最小值 最大值 冷冻温度 ℃ -30 -10 加水量 倍 0.5 2 乙醇浓度 ％ 20 95 绿原酸得率 ％ Response 0.10556 总黄酮纯度 ％ Response 1.97238
冷冻温度、加水量和乙醇浓度对本发明绿原酸得率和总黄酮纯度的影响。
表2：Box-bohnken实验设计结果
响应面法优化实验结果，参见附图6-11可知，冷冻温度、加水量和乙醇浓度对本发明绿原酸得率和总黄酮纯度影响均具有显著性,而且冷冻温度、加水量和乙醇浓度对绿原酸得率和总黄酮纯度的影响趋势略有不同。最佳组合即为冷冻温度-20℃、加水量为1.25倍的鲜白梅花质量和乙醇浓度57.5％，获得绿原酸得率和总黄酮纯度最高，可以达到绿原酸得率5.0％左右，总黄酮纯度在58％左右。
实施例六：白梅花细胞液和富含黄酮的白梅花提取物的制备
取新鲜白梅花1Kg，-20℃冷冻8h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加1Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，得到白梅花细胞液和白梅花花渣。
所得白梅花细胞液经4000rpm离心10min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经检测，细胞液固含量为2.6％，绿原酸得率为4.8％，具有浓郁的白梅花芳香；白梅鲜花细胞液可应用于化妆品所有剂型；
白梅花花渣加入4L 80％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为57.6％；富含黄酮的白梅花提取物可应用于化妆品所有剂型。
实施例七：白梅花细胞液和富含黄酮的白梅花提取物的制备
取新鲜白梅花1Kg，-30℃冷冻8h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加0.5Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，得到白梅花细胞液和白梅花花渣。
所得白梅花细胞液经4000rpm离心10min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经检测，细胞液固含量为3.4％，绿原酸得率为4.4％，具有浓郁的白梅花芳香；白梅鲜花细胞液可应用于化妆品所有剂型；
白梅花花渣加入4L 20％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为46.6％；富含黄酮的白梅花提取物可应用于化妆品所有剂型。
实施例八：白梅花细胞液和富含黄酮的白梅花提取物的制备
取新鲜白梅花1Kg，-10℃冷冻8h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加2Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，得到白梅花细胞液和白梅花花渣。
所得白梅花细胞液经4000rpm离心10min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经检测，细胞液固含量为1.6％，绿原酸得率为4.1％，具有浓郁的白梅花芳香；白梅鲜花细胞液可应用于化妆品所有剂型；
白梅花花渣加入4L 95％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为48.7％；富含黄酮的白梅花提取物可应用于化妆品所有剂型。
实施例九：白梅花细胞液和富含黄酮的白梅花提取物的制备
取新鲜白梅花1Kg，-15℃冷冻8h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加1.25Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，得到白梅花细胞液和白梅花花渣。
所得白梅花细胞液经4000rpm离心10min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经检测，细胞液固含量为2.8％，绿原酸得率为4.7％，具有浓郁的白梅花芳香；白梅鲜花细胞液可应用于化妆品所有剂型；
白梅花花渣加入4L40％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为55.7％；富含黄酮的白梅花提取物可应用于化妆品所有剂型。
实施例十：白梅花细胞液和富含黄酮的白梅花提取物的制备
取新鲜白梅花1Kg，装于容器，置于液氮罐(-196℃)15min，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加1.25Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，得到白梅花细胞液和白梅花花渣。
所得白梅花细胞液加入10ml0.05％壳聚糖溶液，搅拌15min，经4000rpm离心10min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经检测，细胞液固含量为2.7％，绿原酸得率为4.6％，具有浓郁的白梅花芳香；白梅鲜花细胞液可应用于化妆品所有剂型；
白梅花花渣加入4L 50％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为56.6％；富含黄酮的白梅花提取物可应用于化妆品所有剂型。
实施例十一：白梅花细胞液和富含黄酮的白梅花提取物的制备
取新鲜白梅花1Kg，装于容器，-80℃冷冻1h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加1.25Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，得到白梅花细胞液和白梅花花渣。
所得白梅花细胞液加入10ml0.05％壳聚糖溶液，搅拌15min，经4000rpm离心10min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经检测，细胞液固含量为2.8％，绿原酸得率为4.7％，具有浓郁的白梅花芳香；白梅鲜花细胞液可应用于化妆品所有剂型；
白梅花花渣加入4L 50％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为57.1％；富含黄酮的白梅花提取物可应用于化妆品所有剂型。
实施例十二：白梅花细胞液和富含黄酮的白梅花提取物的制备
取新鲜白梅花1Kg，装于容器，置于-40℃冷冻2h，取出立即进行螺杆式挤压破碎，白梅花花泥加1.25Kg去离子水，搅拌5min；进行螺杆式挤压提取，得到白梅花细胞液和白梅花花渣。
所得白梅花细胞液加入10ml0.05％壳聚糖溶液，搅拌15min，经4000rpm离心10min，得澄清的白梅鲜花细胞液，经检测，细胞液固含量为2.6％，绿原酸得率为4.8％，具有浓郁的白梅花芳香；白梅鲜花细胞液可应用于化妆品所有剂型；
白梅花花渣加入4L 50％乙醇，室温搅拌2h，过滤得白梅花提取液，60℃减压浓缩、冷冻干燥得富含黄酮的白梅花提取物；经检测，该提取物中总黄酮纯度为57.4％；富含黄酮的白梅花提取物可应用于化妆品所有剂型。
实施例十三：白梅花细胞液护肤精华
表3：白梅花细胞液护肤精华
制备方法：将海藻酸钠和透明质酸分散于水中60min，加入其他成分，充分溶解为A相；搅匀后加入B相，搅拌均匀即得白梅花细胞液护肤精华。
实施例十四：白梅花润肤霜
表4：白梅花润肤霜
制备方法：将海藻酸钠分散于水中60min，加入其他成分，搅拌充分溶解为A相；另称取B相内的所有成分混合均匀；将B相加入到A相中，均质5分钟，加入C相，搅匀即得白梅花润肤霜。
白梅花先冷冻获得冰冻白梅花，在未融化前，立即进行挤压，可实现细胞壁的充分破碎；该方法简单高效，且能耗低；破壁后得到的白梅花花泥，加水搅拌均匀后可立即进行挤压提取，操作时间短，且温度低，能够保留白梅花的芳香和绿原酸等热不稳定物质；萃取白梅花细胞液剩余的花渣，仍含有许多水溶性较弱的成分，如黄酮等，因此可作为白梅花黄酮的提取原料，充分利用白梅花药材；而且挤压提取已经转移了很大部分的非黄酮类物质，使得花渣加乙醇-水提取，无需其他纯化步骤，即可获得含有高纯度黄酮的白梅花提取物；整体工艺连贯，可操作性强，效率高且过程中能耗低、废液排放少，适合工业化生产。
如上所述，即可较好地实现本发明,上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。