固定化黄色短杆菌新技术生产L苹果酸.pdf

本发明属酶工程领域，具体说是一种固定化黄色短杆菌新技术生产L-苹果酸。
    目前生产L-苹果酸的固定化细胞技术中一般采用单一的聚合有机电解质，如聚丙稀酰胺，海藻酸钙，卡拉胶等，迄今为止，已公开发表了卡拉胶固定黄色短杆菌与产氨短杆菌的方法，并认为以卡拉胶固定细胞的转化率最高。

    卡拉胶是一种含有许多硫酸根基团的多糖化合物，作为固定化细胞的材料具有稳定性好的优点，但它的固定化温度太高，这不但给固定化成形带来困难，而且影响被包埋细胞的活性。

    本发明的目的在于避免上述现有技术中不足之处而提供一种为降低卡拉胶的固定化温度，使固定化细胞成形过程中细胞中酶不失活，在卡拉胶中加入明胶，羧甲基纤维素钠共同溶解后，此复合有机电解质的凝固点将大大降低的固定化黄色短杆菌新技术生产L-苹果酸。

    本发明的目的可以通过以下措施来达到：

    一种固定化黄色短杆菌新技术生产L-苹果酸，其工艺是在卡拉胶溶液中混入菌泥，充分搅拌，进行机械成形或手工成型，在0.3M的Kcl溶液中固化，用胆汁酸与富马酸钠的溶液活化后，将固定化细胞装入酶柱中，通以富马酸盐，本发明其特征是在卡拉胶中加入5%～20%（重量百分比）明胶与1%～5%（重量百分比）羧甲基纤维素钠混合溶解后形成复合电解质溶液，混入将富马酸盐转化为苹果酸盐的菌体后，形成固定化细胞（酶）用于生产L-苹果酸。

    本发明下面将结合实施例作进一步描述：

    1、定量卡拉胶与明胶及羧甲基纤维素钠的混合物加水后，加热至80℃溶解，加入黄色短杆菌菌泥在38℃～42℃混合后，在细胞成型机中加工为φ5mm的圆球，或手工切成5×5×5mm的颗粒经Kcl溶液固化与胆汁酸活化后，装入8l固定化细胞反应器中，以＝0.23h-1地流速通入富马酸盐溶液，酶的半衰期为90～120天，平均转化率为80%。

    2、定量卡拉胶与明胶的混合物加水后，加热至80℃溶解，加入黄色短杆菌菌泥50g在38℃～40℃混合后，倒入浅盘，加入0.3MKcl溶液固化，切成小方块后，放入陶瓷盆中用胆汁酸活化，装入250ml的固定化细胞柱中，以＝0.23h-1的流速通入富马酸盐溶液，酶的半衰期为100天，平均转化率为75%。

    本发明比现有技术具有如下优点：

    本发明的固定化过程降低了卡拉胶的凝固点，从而减少了酶失活，提高了固定化细胞的酶活。