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1、(10)申请公布号 CN 102178730 A (43)申请公布日 2011.09.14 CN 102178730 A *CN102178730A* (21)申请号 201110123221.4 (22)申请日 2011.05.13 A61K 36/52(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 11/02(2006.01) A61K 131/00(2006.01) (71)申请人 西北大学 地址 710069 陕西省西安市太白北路 229 号 (72)发明人 李冬 李稳宏 刘庆超 李珍 延绥宏 (74)专利代理机构 西安西达专利代理有限责任 公司 61202 代理。
2、人 谢钢 (54) 发明名称 化香树果序多酚类提取物及其提取方法和用 途 (57) 摘要 本发明公开了一种化香树果序多酚类化合物 的提取方法， 先将化香树果序粉碎， 将质量体积比 为 1 （5 8） 的化香树果序与 40-60wt% 乙醇水 溶液在 40-50超声强化提取， 提取物固液分离， 将上清液浓缩为原体积的 1/5-1/3， 将浓缩液用 乙酸乙酯萃取， 挥干乙酸乙酯得到粗多酚， 粗多酚 经 LS-46 大孔吸附树脂洗脱分离纯化， 洗脱液减 压回收乙醇， 得到酚类化合物浸膏， 烘干、 粉碎得 产品， 分光光度法检测其多酚含量大于 70%。本发 明提取温度低、 时间短能耗小， 使用 LS-。
3、46 大孔吸 附树脂分离提纯， 所得的产品多酚含量大于 70%， 可用于制备治疗鼻窦炎药物。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 102178732 A1/1 页 2 1. 化香树果序多酚类提取物， 其特征在于通过以下步骤提取得到 ： （1） 将化香树果序粉碎 ； （2）将质量体积比 （g/ml）为 1 （5 8）的化香树果序与 40-60wt% 乙醇水溶液在 40-50超声强化提取 ； （3） 提取物固液分离， 将上清液浓缩为原体积的 1/5-1/3 ； （4） 将浓缩液用乙酸乙酯萃取， 挥干乙酸乙酯得。
4、到粗多酚 ； （5） 粗多酚经 LS-46 大孔吸附树脂洗脱分离纯化 ； （6） 洗脱液减压回收乙醇， 得到酚类化合物浸膏， 烘干、 粉碎得产品， 分光光度法检测其 多酚含量大于 70%。 2.根据权利要求1所述的化香树果序多酚类提取物， 其特征在于 ： 步骤 （5） 大孔吸附树 脂吸附条件为乙醇浓度 60%， 上样液浓度为 4-8 mg/mL， 流速为 2-4 BV/h ； 以 60-80% 的乙醇 为洗脱剂， 在流速为 3-5 BV 的条件下洗脱分离纯化。 3. 权利要求 1 所述的化香树果序酚类提取物的提取方法， 包括以下步骤 ： （1） 将化香树果序粉碎 ； （2）将质量体积比 （g/。
5、ml）为 1 （5 8）的化香树果序与 40-60wt% 乙醇水溶液在 40-50超声强化提取 ； （3） 提取物固液分离， 将上清液浓缩为原体积的 1/5-1/3 ； （4） 将浓缩液用乙酸乙酯萃取， 挥干乙酸乙酯得到粗多酚 ； （5） 粗多酚经 LS-46 大孔吸附树脂洗脱分离纯化 ； （6） 洗脱液减压回收乙醇， 得到酚类化合物浸膏， 烘干、 粉碎得产品， 分光光度法检测其 多酚含量大于 70%。 4.根据权利要求1所述的化香树果序多酚类提取物的提取方法， 其特征在于 ： 步骤 （5） 大孔吸附树脂吸附条件为乙醇浓度 60%， 上样液浓度为 4-8 mg/mL， 流速为 2-4 BV/h。
6、 ； 以 60-80% 的乙醇为洗脱剂， 在流速为 3-5 BV 的条件下洗脱分离纯化。 5. 根据权利要求 3 所述的化香树果序多酚类提取物的提取方法， 其特征在于 ： 化香树 果序粉碎成粒径为 3-5mm。 6. 根据权利要求 3 所述的化香树果序多酚类提取物的提取方法， 其特征在于 ： 超声提 取频率 30-50KHz， 超声强度 0.3-50W/cm2。 7. 权利要求 1 所述的化香树果序多酚类提取物在抑制金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假单胞菌中的应用。 8. 权利要求 1 所述的化香树果序多酚类提取物在制备治疗鼻窦炎药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102。
7、178730 A CN 102178732 A1/5 页 3 化香树果序多酚类提取物及其提取方法和用途 技术领域 0001 本发明涉及一种植物活性成分提取物及提取方法， 特别涉及化香树果序药用活性 成分多酚类提取物及其提取方法。 背景技术 0002 化香树 （Platycarya Strobilacea Sieb. et Zucc.） 属于植物界种子植物门被子 植物亚门双子叶植物纲金缕梅亚纲胡桃目胡桃科化香树属。化香树我国分布面积广泛， 产 于黄河流域及以南地区， 如 ： 赣、 鄂、 皖、 豫、 粤、 桂、 苏、 浙、 滇、 黔等地广泛分布， 朝鲜、 日本也 有生长。 目前， 世界上唯一的胡桃。
8、目和胡桃科单叶化香树在广西发现， 其除了药用价值外还 具有植物进化系统学术上的价值。化香树果序是化香树的干燥果序， 一般在秋季果实成熟 时采收， 除去种子， 拣去杂质， 晒干即可。化香树果序呈卵状直长卵圆形球果， 长约 1.5cm 5cm， 直径 1cm 3.5cm， 黄棕色或棕褐色， 卵状披针形苞片， 质硬， 长尖， 反曲呈鱼鳞状分布。 小尖果端平， 圆形， 有 2 狭翅， 长 0.5cm 左右， 生于披针形包片叶下， 气芬芳， 味辛苦。入药时 以当年成熟、 饱满、 外观新鲜、 颜色金黄者为佳品。 0003 化香树在我国民间的应用广且历史悠久， 多以叶、 果序入药。 化香树果序具有清热 解毒。
9、， 散风止痛， 活血化瘀、 通窍排脓的功效， 主要用于鼻渊、 头痛、 内伤胸胀、 腹痛、 筋骨疼 痛、 痈肿、 疥癣等病症。 湖南药物志 记载化香树果序性辛、 温， 具有理气和中， 顺气化痰， 消 肿止痛， 燥湿杀虫的功效。 化香树果序煎水洗可治癣疥， 化香树果序、 枫树球、 硫黄混合均匀 研末， 茶抽调搽可治小儿头疮， 化香树果序和盐研末搽可治脚生湿疮。 草药手册 记载化香 树干果序五至六钱， 加山查根等量， 煎汁冲烧酒， 早、 晚空腹服可治鼻渊、 内伤胸胀， 腹痛及 筋骨疼痛。化香树果数枚， 水煎含服可治鼻渊、 牙痛。 常用中草药配方 记载化香树叶性 苦、 寒， 具有解毒， 止痒， 杀虫之。
10、功能， 煎水洗或嫩叶搽患处， 用于疮疖肿毒， 阴囊湿疹， 顽癣。 化香树熏烟可以驱蚊 ； 投入粪坑、 污水可以灭蛆杀孑孓。 化香树果十斤， 桉树叶五斤， 鸭儿芹 五斤， 白叶野桐叶五斤， 煎汁， 熬缩成膏， 净重二斤， 再用凡士林配成 10软膏备用可作为消 肿药膏。 贵州民间药物 记载对骨痈流脓日久不收口， 可用化香树叶半斤捣烂泡冷水， 将患 处浸入药水中数小时， 用镊子拔出多骨， 随用药水洗之。综上， 化香树果序具有抗炎、 镇痛、 抗病毒、 提高免疫力等多方面药理作用， 同时还具有祛邪扶正， 标本兼顾， 既能解除全身症 状， 调整全身机能， 又能治疗局部感染之病灶 ； 对导致鼻窦炎最主要的原。
11、发病伤风感冒也有 速效之功能， 对鼻窦炎的并发病、 急、 慢性咽喉炎、 扁桃体炎也有良好的疗效。 0004 由于化香树有非常多的民间用途， 因而引起了众多学者的兴趣， 不少植物化学工 作者对化香树各部位的化学成分进行了研究， 结果汇总于表 1。 说 明 书 CN 102178730 A CN 102178732 A2/5 页 4 0005 如上所述， 国内外文献资料中有关化香树树种及生长等方面的研究较多， 对从化 香树的叶、 枝干、 树皮中分离有关化合物进行一些相关研究。发明人曾采用常规方法研究 了化香树果序多酚提取纯化技术， 该方法存在提取时间较长， 提取温度高， 提取率低， 多酚 纯度低等。
12、缺点。而利用超声波产生的强烈震动、 高加速度、 强烈空化效应及搅拌作用等， 能 加速药物有效成分进入溶剂， 从而提高提取率， 缩短提取时间， 并且免去高温对活性成分的 影响。本发明利用超声辅助提取技术提取得到了多酚含量大于 70% 的化香树果序酚类提取 物， 降低了提取温度、 减少了有机溶剂消耗。 发明内容 0006 本发明的目的之一是提供一种多酚含量大于 70% 的化香树果序酚类提取物 ； 本发明的另一目的在于提供一种提取温度较低、 有机溶剂消耗较少的化香树果序多酚 类提取物的提取方法。 0007 本发明的实现过程如下 ： 化香树果序多酚类提取物， 通过以下步骤提取得到 ： （1） 将化香树。
13、果序粉碎， 最好为粉碎成粒径为 3-5mm ； （2）将质量体积比 （g/ml）为 1 （5 8）的化香树果序与 40-60wt% 乙醇水溶液在 40-50超声强化提取 1-2h ； 超声提取频率 30-50KHz， 超声强度 0.3-50W/cm2； 说 明 书 CN 102178730 A CN 102178732 A3/5 页 5 （3） 提取物固液分离， 将上清液浓缩为原体积的 1/5-1/3 ； （4） 将浓缩液用乙酸乙酯萃取， 挥干乙酸乙酯得到粗多酚 ； （5） 粗多酚经 LS-46 大孔吸附树脂洗脱分离纯化， 吸附条件为乙醇浓度 60%， 上样液浓 度为 4-8 mg/mL， 流。
14、速为 2-4 BV/h ； 以 60-80% 的乙醇为洗脱剂， 在流速为 3-5 BV 的条件下 洗脱分离纯化 ； （6） 洗脱液减压回收乙醇， 得到酚类化合物浸膏， 烘干、 粉碎得产品， 分光光度法检测其 多酚含量大于 70%。 0008 本发明提取的化香树果序多酚类提取物多酚含量大于70%， 根据 抗菌药物敏感性 试验执行标准 ； 第十八版信息增刊 M100-S18 和 抗菌药物敏感性试验执行标准 ； 第十八 版信息增刊 M100-S18 的标准方法， 对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假 单胞菌的抑菌圈直径分别为 16.5mm、 10.5mm、 14.5mm 和 16.5。
15、mm， 最小抑菌浓度 （MIC） 分别 为 1.5mg/mL， 1.25mg/mL， 1.25mg/mL 和 1.25mg/mL， 最小杀菌浓度 （MBC） 分别为 2.5mg/mL， 2.5mg/mL， 2mg/mL 和 2mg/mL， 可用于制备治疗鼻窦炎药物。 0009 本发明经大量筛选， 使用西安蓝晓科技有限公司生产的大孔吸附树脂 LS-46， 其具 有如下性质 ： 本发明的效果及优点 ： 本发明提取工艺简单， 可操作性强， 提取温度低、 时间短能耗小， 使用 LS-46 大孔吸附树脂分离提纯， 所得的产品多酚含量大于 70%， 提取物对金黄色葡萄球 菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜。
16、绿假单胞菌具有好的抑制效果， 含量达到药用需要， 可用 于制备治疗鼻窦炎药物。 具体实施方式 0010 本具体实施例仅是对本发明的解释， 并不是对本发明的限制， 本领域技术人员在 阅读完本说明书后可根据需要对本实施例作出没有创造性贡献的修改， 但只要在本发明的 权利要求范围内都受到专利法的保护。 0011 实施例 1 将 10kg 原料化香树果序阴干至水分为 7%， 用流水漂洗 3 分钟， 除杂及泥沙， 沥干残水， 粉碎至 3-5mm。加入 60% 乙醇水溶液 50L 在 45、 超声频率 30KHz、 超声强度 10W/cm2下提 取 1h， 将提取液离心得到的固液进行离心， 弃去固体， 留。
17、上清液， 将上清液在 5-7kPa 下浓缩 至 10L。将浓缩液用乙酸乙酯萃取 2 次， 挥干有机溶剂得到粗多酚。粗多酚溶入 60% 的乙 醇， 在上样液浓度为 5g/L， 流速为 3BV/h 下， 经 LS-46 大孔吸附树脂吸附。以 70% 的乙醇为 洗脱剂， 在流速为 4BV 的条件下洗脱分离。洗脱液减压回收乙醇后， 得到多酚浸膏， 50烘 干并粉碎得产品。 0012 产品用分光光度法检测， 其多酚纯度为 75%。根据 抗菌药物敏感性试验执行标 准 ； 第十八版信息增刊 M100-S18 和 抗菌药物敏感性试验执行标准 ； 第十八版信息增刊 说 明 书 CN 102178730 A CN。
18、 102178732 A4/5 页 6 M100-S18 的标准方法， 对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假单胞菌的抑 菌情况检测结果为 ： 抑菌圈直径分别为 17mm、 10mm、 14.5mm 和 16.5mm， 最小抑菌浓度 （MIC） 分别为 1.5mg/mL、 1.25mg/mL、 1.25mg/mL 和 1.25mg/mL， 最小杀菌浓度 （MBC） 分别为 2.5mg/ mL、 2.5mg/mL、 1.5mg/mL 和 1.5mg/mL。 0013 实施例 2 将 25kg 原料化香树果序阴干至水分 8%， 用流水漂洗 3 分钟， 除杂及泥沙， 沥干残水， 粉 碎。
19、至 3-5mm。加入 50% 乙醇水溶液 200L 在 40、 超声频率 50KHz、 超声强度 50W/cm2下提取 1h， 将提取液离心得到的固液进行离心， 弃去固体， 留上清液， 将上清液在 5-7kPa 下浓缩至 40L。将浓缩液用乙酸乙酯萃取 3 次， 挥干有机溶剂得到粗多酚。粗多酚溶入 60% 的乙醇， 在上样液浓度为 8g/L， 流速为 3BV/h 下， 经 LS-46 大孔吸附树脂吸附。以 75% 的乙醇为洗脱 剂， 在流速为 4BV 的条件下洗脱分离。洗脱液减压回收乙醇后， 得到多酚浸膏， 50烘干并 粉碎得产品。 0014 产品用分光光度法检测， 其多酚纯度为 72%。根据。
20、 抗菌药物敏感性试验执行标 准 ； 第十八版信息增刊 M100-S18 和 抗菌药物敏感性试验执行标准 ； 第十八版信息增刊 M100-S18 的标准方法， 对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假单胞菌的抑 菌情况检测结果为 ： 抑菌圈直径分别为 17mm、 10mm、 14mm 和 15mm， 最小抑菌浓度 （MIC） 分别 为 1.5mg/mL、 1.5mg/mL、 1.25mg/mL 和 1.25mg/mL， 最小杀菌浓度 （MBC）分别为 2.5mg/mL、 2.5mg/mL、 1.5mg/mL 和 1.5mg/mL。 0015 实施例 3 将 15kg 原料化香树果序阴。
21、干至水分 8%， 用流水漂洗 3 分钟， 除杂及泥沙， 沥干残水， 粉 碎至 3-5mm。加入 40% 乙醇水溶液 80L 在 40、 超声频率 45KHz、 超声强度 5W/cm2下提取 1h， 将提取液离心得到的固液进行离心， 弃去固体， 留上清液， 将上清液在 5-7kPa 下浓缩至 20L。将浓缩液用乙酸乙酯萃取 1 次， 挥干有机溶剂得到粗多酚。粗多酚溶入 40% 的乙醇， 在上样液浓度为 7g/L， 流速为 4BV/h 下， 经 LS-46 大孔吸附树脂吸附。以 80% 的乙醇为洗脱 剂， 在流速为 5BV 的条件下洗脱分离。洗脱液减压回收乙醇后， 得到多酚浸膏， 50烘干并 粉碎。
22、得产品。 0016 产品用分光光度法检测， 其多酚纯度为 70%。根据 抗菌药物敏感性试验执行标 准 ； 第十八版信息增刊 M100-S18 和 抗菌药物敏感性试验执行标准 ； 第十八版信息增刊 M100-S18 的标准方法， 对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假单胞菌的抑 菌情况检测结果为 ： 抑菌圈直径分别为 16.5mm、 10.5mm、 14.5mm 和 16.5mm， 最小抑菌浓度 （MIC） 分别为 1.5mg/mL， 1.25mg/mL， 1.25mg/mL 和 1.25mg/mL， 最小杀菌浓度 （MBC） 分别为 2.5mg/mL， 2.5mg/mL， 2mg。
23、/mL 和 2mg/mL。 0017 实施例 4 与实施例 1 类似， 不同之处在于用 AB-8 代替 LS-46 大孔吸附树脂， 产品的多酚纯度为 53%。 对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假单胞菌的抑菌情况检测结果为 ： 抑菌圈直径分别为 13.5mm、 11.5mm、 11.5mm 和 12mm， 最小抑菌浓度 （MIC） 分别为 2.5mg/mL， 3.25mg/mL， 2.5mg/mL 和 2.25mg/mL， 最小杀菌浓度 （MBC） 分别为 4.5mg/mL， 7.5mg/mL， 3mg/ mL 和 3mg/mL。使用 AB-8 大孔吸附树脂的纯化效果和抑菌效果。
24、均较 LS-46 差。 0018 实施例 5 说 明 书 CN 102178730 A CN 102178732 A5/5 页 7 与实施例 1 类似， 不同之处在于用 D101B 代替 LS-46 大孔吸附树脂， 产品的多酚纯度为 58%。 对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假单胞菌的抑菌情况检测结果为 ： 抑菌圈直径分别为 13.5mm、 12.5mm、 12.5mm 和 12.5mm， 最小抑菌浓度 （MIC） 分别为 2.5mg/ mL， 3.5mg/mL， 3.5mg/mL 和 2.5mg/mL， 最小杀菌浓度 （MBC） 分别为 4mg/mL， 5.5mg/mL， 。
25、2.5mg/ mL 和 3mg/mL。说明使用 D101B 大孔吸附树脂的纯化效果和抑菌效果均较 LS-46 差。 0019 实施例 6 与实施例 3 类似， 不同之处在于用 D101B 代替 LS-46 大孔吸附树脂， 产品的多酚纯度为 50%。 对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、 肺炎链球菌和铜绿假单胞菌的抑菌情况检测结果为 ： 抑菌圈直径分别为 12.5mm、 10.5mm、 10.5mm 和 10.5mm， 最小抑菌浓度 （MIC） 分别为 2.5mg/ mL， 4.5mg/mL， 3mg/mL和3mg/mL， 最小杀菌浓度 （MBC） 分别为5mg/mL， 7.5mg/mL， 3.5mg/mL和 3.5mg/mL。说明使用 D101B 大孔吸附树脂的纯化效果和抑菌效果均较 LS-46 差。 说 明 书 CN 102178730 A 。