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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610155476.1 (22)申请日 2016.03.18 A61K 8/97(2006.01) A61Q 19/02(2006.01) (71)申请人 常州市阿曼特化工有限公司 地址 213155 江苏省常州市天宁区劳动西路 32 号 (72)发明人 陈兴权 张帆 (54) 发明名称 一种氨酸酶抑制剂的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种氨酸酶抑制剂的制备方 法， 属于氨酸酶抑制剂制备技术领域。 本发明将茶 叶籽粕脱脂后利用乙醇提取， 并将提取物与餐后 废气食用油混合， 每天淋洗风干后的茶果皮， 使得 茶果皮长菌， 之后再。
2、用双氧水对长菌的茶果皮进 行灭菌， 最后将灭菌后出现黑色霉菌的茶果皮再 次利用乙醇水溶液进行提取， 提取液浓缩后， 即可 得到氨酸酶抑制剂的制备方法。 实例证明， 本发明 操作简单易行， 原料天然易得， 不仅制得的氨酸酶 抑制剂活性强， IC50值为 42.5g/mL， 而且大大提 高了氨酸酶抑制剂的提取效率， 增强了氨酸酶抑 制剂的溶解性和有效性， 用于美白化妆品、 预防和 治疗人体黑色素过多导致的沉着性疾病， 具有极 好的商业前景。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 CN 105581949 A 2016.05.。
3、18 CN 105581949 A 1.一种氨酸酶抑制剂的制备方法， 其特征在于具体操作步骤为： （1） 称取5001000g茶果皮， 放入清水中反复冲洗， 去除表面残留污物后， 倒入钢筛中， 在阳光下暴晒， 直至完全晒干为止， 备用； （2） 称取100150g茶叶籽粕， 放入粉碎机中， 粉碎后过100105目筛， 得茶叶籽粕粉 末， 置于2L的烧杯中， 并向烧杯中以2030mL/min的速率滴加正乙烷， 2225min后停止滴 加， 在3045下浸提11.5h， 待浸提结束， 将浸提物取出移入高速离心机中， 在1200 1500r/min的转速下离心处理1520min， 去液留渣， 置于烘。
4、箱中， 在105110下烘干至恒 重； （3） 将上述烘干至恒重后的茶叶籽粕渣放入1L的烧杯中， 并向其中加入500600mL质 量浓度为85的乙醇溶液， 混合均匀后， 放置在超声振荡仪中， 在超声频率为2528KHz， 超 声功率为100120W下振荡反应12h， 待反应结束， 过滤去渣， 得到滤液， 之后将得到的滤 液放入索式抽提器中， 抽提4050min， 收集滤液抽提液， 随后将得到的滤液抽提液移入蒸 馏装置， 在6575下加热3035min， 蒸馏去除乙醇， 得到茶叶籽粕提取液； （4） 在上述得到的茶叶籽粕提取液中加入茶叶籽粕提取物质量12倍的餐厅废弃食用 油， 充分搅拌均匀， 调。
5、节pH值为5.56.2后， 每隔一天对上述步骤 （1） 晒干的茶果皮进行淋 洗， 淋洗35天， 使得茶果皮变质长出霉菌， 随后再次调节淋洗液pH值为5.76.3， 每隔3h 对已变质长出霉菌的茶果皮进行淋洗， 直至茶果皮表面生长出35cm的白色菌丝时， 停止 淋洗， 选取质量浓度为30的双氧水对长出的白色菌丝进行均匀喷洒， 每天喷洒35次， 直 至白色菌丝完全消失， 出现黑色霉菌； （5） 将上述长出黑色霉菌的茶果皮放入搅拌器中， 并向其中加入质量浓度为80的乙 醇溶液， 直至完全浸没茶果皮为止， 之后启动搅拌器， 以200250r/min的转速对混合物进 行搅拌， 搅拌1015min， 使其。
6、完全混合， 待搅拌结束， 静置1012h， 过滤， 去渣， 得滤液； （6） 将上述得到的滤液放入浓缩罐中， 降低罐内压力为10001100Pa， 减压浓缩至浓缩 罐内滤液体积为原有体积的1/31/2时， 停止浓缩， 即可得到一种氨酸酶抑制剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105581949 A 2 一种氨酸酶抑制剂的制备方法 技术领域 0001 本发明公开了一种氨酸酶抑制剂的制备方法， 属于氨酸酶抑制剂制备技术领域。 背景技术 0002 酪氨酸酶又称酚氧化酶、 多酚氧化酶、 儿茶酚氧化酶， 是结构复杂的多亚基的含铜 氧化还原酶， 广泛存在于微生物、 动植物及人体中。 它是生物体。
7、内催化黑色素生成的关键限 速酶， 而且与果蔬褐化、 人体色素沉着性疾病(如雀斑、 黄褐斑、 老年斑等)及黑色素瘤的发 生与治疗有重要关系。 酪氨酸酶抑制剂可通过抑制酪氨酸酶的活性来切断黑色素的生物合 成反应链， 以此达到阻碍黑色素生成、 防止果蔬褐变等目的。 目前酪氨酸酶抑制剂已广泛应 用于美白护肤化妆品、 害虫调控剂以及食品添加剂等各个方面。 因此， 对医药、 化妆品和食 品工业等多个领域而言， 酪氨酸酶抑制成分的研究与开发均具有广阔的应用前景。 0003 酪氨酸酶抑制剂可以抑制酪氨酸酶的活性， 从而降低酪氨酸酶引起的不利影响。 到目前为止， 人们从低等菌类到高等植物中发现了许多天然酪氨酸酶。
8、抑制剂， 如曲酸和壬 二酸； 从高等植物中获得的酪氨酸酶抑制剂多数属于多酚类物质， 主要分为黄酮类和二苯 乙烯类。 0004 当前， 酪氨酸酶抑制剂的来源以有机合成、 商品化合物筛选以及天然植物或微生 物次级代谢产物的分离提取三个途径为主； 化学合成产物具有毒副作用强、 成本较高、 操作 难度大等弊端， 寻求天然来源的酪氨酸酶抑制剂仍然是引起食品科学家和药物化学家高度 兴趣的研究课题， 但是从天然植物中虽然可以提取得到一些具有很强活性的酪氨酸酶制 剂， 但是由于它几乎不溶或难溶于水等缺点， 难于广泛得到应用。 发明内容 0005 本发明主要解决的技术问题： 针对目前传统化学合成法合成酪氨酸酶抑。
9、制剂时毒 副作用强， 成本高， 操作难度大， 而天然植物分离提取虽可以得到具有很强活性的酪氨酸酶 制剂， 无毒副作用， 但是由于其几乎不溶或难溶于水， 难于广泛得到应用的现状， 提供了一 种将茶叶籽粕脱脂后利用乙醇提取， 并将提取物与餐后废气食用油混合， 每天淋洗风干后 的茶果皮， 使得茶果皮长菌， 之后再用双氧水对长菌的茶果皮进行灭菌， 最后将灭菌后出现 黑色霉菌的茶果皮再次利用乙醇水溶液进行提取， 提取液浓缩后， 即可得到氨酸酶抑制剂 的制备方法。 该方法操作简单易行， 原料天然易得， 不仅制得的氨酸酶抑制剂活性强， IC50值 为42.5 g/mL， 而且大大提高了氨酸酶抑制剂的提取效率。
10、， 增强了氨酸酶抑制剂的溶解性和 有效性， 用于美白化妆品、 预防和治疗人体黑色素过多导致的沉着性疾病， 具有极好的商业 前景。 0006 为了解决上述技术问题， 本发明所采用的技术方案是： （1） 称取5001000g茶果皮， 放入清水中反复冲洗， 去除表面残留污物后， 倒入钢筛中， 在阳光下暴晒， 直至完全晒干为止， 备用； （2） 称取100150g茶叶籽粕， 放入粉碎机中， 粉碎后过100105目筛， 得茶叶籽粕粉 说 明 书 1/5 页 3 CN 105581949 A 3 末， 置于2L的烧杯中， 并向烧杯中以2030mL/min的速率滴加正乙烷， 滴加2225min后停 止滴加，。
11、 在3045下浸提11.5h， 待浸提结束， 将浸提物取出移入高速离心机中， 在1200 1500r/min的转速下离心处理1520min， 去液留渣， 置于烘箱中， 在105110下烘干至 恒重； （3） 将上述烘干至恒重后的茶叶籽粕渣放入1L的烧杯中， 并向其中加入500600mL质 量浓度为85的乙醇溶液， 混合均匀后， 放置在超声振荡仪中， 在超声频率为2528KHz， 超 声功率为100120W下振荡反应12h， 待反应结束， 过滤去渣， 得到滤液， 之后将得到的滤 液放入索式抽提器中， 抽提4050min， 收集滤液抽提液， 随后将得到的滤液抽提液移入蒸 馏装置， 在6575下加热。
12、3035min， 蒸馏去除乙醇， 得到茶叶籽粕提取液； （4） 在上述得到的茶叶籽粕提取液中加入茶叶籽粕提取物质量12倍的餐厅废弃食用 油， 充分搅拌均匀， 调节pH值为5.56.2后， 每隔一天对上述步骤 （1） 晒干的茶果皮进行淋 洗， 淋洗35天， 使得茶果皮变质长出霉菌， 随后再次调节淋洗液pH值为5.76.3， 每隔3h 对已变质长出霉菌的茶果皮进行淋洗， 直至茶果皮表面生长出35cm的白色菌丝时， 停止 淋洗， 选取质量浓度为30的双氧水对长出的白色菌丝进行均匀喷洒， 每天喷洒35次， 直 至白色菌丝完全消失， 出现黑色霉菌； （5） 将上述长出黑色霉菌的茶果皮放入搅拌器中， 并向。
13、其中加入质量浓度为80的乙 醇溶液， 直至完全浸没茶果皮为止， 之后启动搅拌器， 以200250r/min的转速对混合物进 行搅拌， 搅拌1015min， 使其完全混合， 待搅拌结束， 静置1012h， 过滤， 去渣， 得滤液； （6） 将上述得到的滤液放入浓缩罐中， 降低罐内压力为10001100Pa， 减压浓缩至浓缩 罐内滤液体积为原有体积的1/31/2时， 停止浓缩， 即可得到一种氨酸酶抑制剂。 0007 本发明的应用方法是： 将本发明制得的氨酸酶抑制剂放入化妆品乳液中， 其中加 入量为810mL化妆品乳液中加入0.50.8mL氨酸酶抑制剂， 充分混合均匀， 在每天早晚洁 面后， 取23。
14、mL混合液均匀涂抹在脸部， 轻轻拍打直至完全吸收为止， 坚持连续使用1015 天， 可以明显感觉皮肤变得细腻柔嫩， 脸部的色斑明显淡化， 且美白程度比未添加氨酸酶抑 制剂的化妆品的美白程度高70以上， 对皮肤没有任何危害， 适合大规模生产使用。 0008 本发明的有益效果是： （1） 本发明以茶果皮和茶叶籽粕为原料， 天然无毒， 避免了化学合成的毒副作用强、 成 本较高的弊端； （2） 本发明方法独特新颖， 不仅提高了氨酸酶抑制剂的提取效率， 而且增强了氨酸酶抑 制剂溶解性和有效性， 可广泛进行应用， 具有极好的商业前景。 具体实施方式 0009 首先称取5001000g茶果皮， 放入清水中反。
15、复冲洗， 去除表面残留污物后， 倒入钢 筛中， 在阳光下暴晒， 直至完全晒干为止， 备用； 然后称取100150g茶叶籽粕， 放入粉碎机 中， 粉碎后过100105目筛， 得茶叶籽粕粉末， 置于2L的烧杯中， 并向烧杯中以2030mL/ min的速率滴加正乙烷， 滴加2225min后停止滴加， 在3045下浸提11.5h， 待浸提结 束， 将浸提物取出移入高速离心机中， 在12001500r/min的转速下离心处理1520min， 去 液留渣， 置于烘箱中， 在105110下烘干至恒重； 接下来将上述烘干至恒重后的茶叶籽粕 渣放入1L的烧杯中， 并向其中加入500600mL质量浓度为85的乙醇。
16、溶液， 混合均匀后， 放 说 明 书 2/5 页 4 CN 105581949 A 4 置在超声振荡仪中， 在超声频率为2528KHz， 超声功率为100120W下振荡反应12h， 待 反应结束， 过滤去渣， 得到滤液， 之后将得到的滤液放入索式抽提器中， 抽提4050min， 收 集滤液抽提液， 随后将得到的滤液抽提液移入蒸馏装置， 在6575下加热3035min， 蒸 馏去除乙醇， 得到茶叶籽粕提取液； 在上述得到的茶叶籽粕提取液中加入茶叶籽粕提取物 质量12倍的餐厅废弃食用油， 充分搅拌均匀， 调节pH值为5.56.2后， 每隔一天对上述晒 干的茶果皮进行淋洗， 淋洗35天， 使得茶果皮。
17、变质长出霉菌， 随后再次调节淋洗液pH值为 5.76.3， 每隔3h对已变质长出霉菌的茶果皮进行淋洗， 直至茶果皮表面生长出35cm的 白色菌丝时， 停止淋洗， 选取质量浓度为30的双氧水对长出的白色菌丝进行均匀喷洒， 每 天喷洒35次， 直至白色菌丝完全消失， 出现黑色霉菌； 随后将上述长出黑色霉菌的茶果皮 放入搅拌器中， 并向其中加入质量浓度为80的乙醇溶液， 直至完全浸没茶果皮为止， 之后 启动搅拌器， 以200250r/min的转速对混合物进行搅拌， 搅拌1015min， 使其完全混合， 待搅拌结束， 静置1012h， 过滤， 去渣， 得滤液； 最后将上述得到的滤液放入浓缩罐中， 降低。
18、 罐内压力为10001100Pa， 减压浓缩至浓缩罐内滤液体积为原有体积的1/31/2时， 停止 浓缩， 即可得到一种氨酸酶抑制剂。 0010 实例1 首先称取500g茶果皮， 放入清水中反复冲洗， 去除表面残留污物后， 倒入钢筛中， 在阳 光下暴晒， 直至完全晒干为止， 备用； 然后称取100g茶叶籽粕， 放入粉碎机中， 粉碎后过100 目筛， 得茶叶籽粕粉末， 置于2L的烧杯中， 并向烧杯中以20mL/min的速率滴加正乙烷， 滴加 22min后停止滴加， 在30下浸提1 h， 待浸提结束， 将浸提物取出移入高速离心机中， 在 1200r/min的转速下离心处理15min， 去液留渣， 置。
19、于烘箱中， 在105下烘干至恒重； 接下来 将上述烘干至恒重后的茶叶籽粕渣放入1L的烧杯中， 并向其中加入500mL质量浓度为85 的乙醇溶液， 混合均匀后， 放置在超声振荡仪中， 在超声频率为25KHz， 超声功率为100W下振 荡反应1h， 待反应结束， 过滤去渣， 得到滤液， 之后将得到的滤液放入索式抽提器中， 抽提 40min， 收集滤液抽提液， 随后将得到的滤液抽提液移入蒸馏装置， 在65下加热30min， 蒸 馏去除乙醇， 得到茶叶籽粕提取液； 在上述得到的茶叶籽粕提取液中加入茶叶籽粕提取物 质量1倍的餐厅废弃食用油， 充分搅拌均匀， 调节pH值为5.5后， 每隔一天对上述晒干的茶。
20、果 皮进行淋洗， 淋洗3天， 使得茶果皮变质长出霉菌， 随后再次调节淋洗液pH值为5.7， 每隔3h 对已变质长出霉菌的茶果皮进行淋洗， 直至茶果皮表面生长出3cm的白色菌丝时， 停止淋 洗， 选取质量浓度为30的双氧水对长出的白色菌丝进行均匀喷洒， 每天喷洒3次， 直至白 色菌丝完全消失， 出现黑色霉菌； 随后将上述长出黑色霉菌的茶果皮放入搅拌器中， 并向其 中加入质量浓度为80的乙醇溶液， 直至完全浸没茶果皮为止， 之后启动搅拌器， 以200r/ min的转速对混合物进行搅拌， 搅拌10min， 使其完全混合， 待搅拌结束， 静置10h， 过滤， 去 渣， 得滤液； 最后将上述得到的滤液放。
21、入浓缩罐中， 降低罐内压力为1000Pa， 减压浓缩至浓 缩罐内滤液体积为原有体积的1/3时， 停止浓缩， 即可得到一种氨酸酶抑制剂。 0011 本实例方法独特新颖， 使用时， 将本发明制得的氨酸酶抑制剂放入化妆品乳液中， 其中加入量为8mL化妆品乳液中加入0.5mL氨酸酶抑制剂， 充分混合均匀， 在每天早晚洁面 后， 取2mL混合液均匀涂抹在脸部， 轻轻拍打直至完全吸收为止， 坚持连续使用10天， 可以明 显感觉皮肤变得细腻柔嫩， 脸部的色斑明显淡化， 且美白程度比未添加氨酸酶抑制剂的化 妆品的美白程度高70， 对皮肤没有任何危害， 适合大规模生产使用。 说 明 书 3/5 页 5 CN 1。
22、05581949 A 5 0012 实例2 首先称取800g茶果皮， 放入清水中反复冲洗， 去除表面残留污物后， 倒入钢筛中， 在阳 光下暴晒， 直至完全晒干为止， 备用； 然后称取130g茶叶籽粕， 放入粉碎机中， 粉碎后过103 目筛， 得茶叶籽粕粉末， 置于2L的烧杯中， 并向烧杯中以25mL/min的速率滴加正乙烷， 滴加 23min后停止滴加， 在40下浸提1.3h， 待浸提结束， 将浸提物取出移入高速离心机中， 在 1350r/min的转速下离心处理18min， 去液留渣， 置于烘箱中， 在108下烘干至恒重； 接下来 将上述烘干至恒重后的茶叶籽粕渣放入1L的烧杯中， 并向其中加入。
23、550mL质量浓度为85 的乙醇溶液， 混合均匀后， 放置在超声振荡仪中， 在超声频率为27KHz， 超声功率为110W下振 荡反应1.5h， 待反应结束， 过滤去渣， 得到滤液， 之后将得到的滤液放入索式抽提器中， 抽提 45min， 收集滤液抽提液， 随后将得到的滤液抽提液移入蒸馏装置， 在70下加热33min， 蒸 馏去除乙醇， 得到茶叶籽粕提取液； 在上述得到的茶叶籽粕提取液中加入茶叶籽粕提取物 质量1.5倍的餐厅废弃食用油， 充分搅拌均匀， 调节pH值为5.8后， 每隔一天对上述晒干的茶 果皮进行淋洗， 淋洗4天， 使得茶果皮变质长出霉菌， 随后再次调节淋洗液pH值为6.0， 每隔 。
24、3h对已变质长出霉菌的茶果皮进行淋洗， 直至茶果皮表面生长出4cm的白色菌丝时， 停止淋 洗， 选取质量浓度为30的双氧水对长出的白色菌丝进行均匀喷洒， 每天喷洒4次， 直至白 色菌丝完全消失， 出现黑色霉菌； 随后将上述长出黑色霉菌的茶果皮放入搅拌器中， 并向其 中加入质量浓度为80的乙醇溶液， 直至完全浸没茶果皮为止， 之后启动搅拌器， 以230r/ min的转速对混合物进行搅拌， 搅拌13min， 使其完全混合， 待搅拌结束， 静置11h， 过滤， 去 渣， 得滤液； 最后将上述得到的滤液放入浓缩罐中， 降低罐内压力为1050Pa， 减压浓缩至浓 缩罐内滤液体积为原有体积的5/12时， 。
25、停止浓缩， 即可得到一种氨酸酶抑制剂。 0013 本实例方法独特新颖， 使用时， 将本发明制得的氨酸酶抑制剂放入化妆品乳液中， 其中加入量为9mL化妆品乳液中加入0.65mL氨酸酶抑制剂， 充分混合均匀， 在每天早晚洁面 后， 取2.5mL混合液均匀涂抹在脸部， 轻轻拍打直至完全吸收为止， 坚持连续使用13天， 可以 明显感觉皮肤变得细腻柔嫩， 脸部的色斑明显淡化， 且美白程度比未添加氨酸酶抑制剂的 化妆品的美白程度高75， 对皮肤没有任何危害， 适合大规模生产使用。 0014 实例3 首先称取1000g茶果皮， 放入清水中反复冲洗， 去除表面残留污物后， 倒入钢筛中， 在阳 光下暴晒， 直至。
26、完全晒干为止， 备用； 然后称取150g茶叶籽粕， 放入粉碎机中， 粉碎后过105 目筛， 得茶叶籽粕粉末， 置于2L的烧杯中， 并向烧杯中以30mL/min的速率滴加正乙烷， 滴加 25min后停止滴加， 在45下浸提1.5h， 待浸提结束， 将浸提物取出移入高速离心机中， 在 1500r/min的转速下离心处理20min， 去液留渣， 置于烘箱中， 在110下烘干至恒重； 接下来 将上述烘干至恒重后的茶叶籽粕渣放入1L的烧杯中， 并向其中加入600mL质量浓度为85 的乙醇溶液， 混合均匀后， 放置在超声振荡仪中， 在超声频率为28KHz， 超声功率为120W下振 荡反应2h， 待反应结束。
27、， 过滤去渣， 得到滤液， 之后将得到的滤液放入索式抽提器中， 抽提 50min， 收集滤液抽提液， 随后将得到的滤液抽提液移入蒸馏装置， 在75下加热35min， 蒸 馏去除乙醇， 得到茶叶籽粕提取液； 在上述得到的茶叶籽粕提取液中加入茶叶籽粕提取物 质量2倍的餐厅废弃食用油， 充分搅拌均匀， 调节pH值为6.2后， 每隔一天对上述晒干的茶果 皮进行淋洗， 淋洗5天， 使得茶果皮变质长出霉菌， 随后再次调节淋洗液pH值为6.3， 每隔3h 对已变质长出霉菌的茶果皮进行淋洗， 直至茶果皮表面生长出5cm的白色菌丝时， 停止淋 说 明 书 4/5 页 6 CN 105581949 A 6 洗， 。
28、选取质量浓度为30的双氧水对长出的白色菌丝进行均匀喷洒， 每天喷洒5次， 直至白 色菌丝完全消失， 出现黑色霉菌； 随后将上述长出黑色霉菌的茶果皮放入搅拌器中， 并向其 中加入质量浓度为80的乙醇溶液， 直至完全浸没茶果皮为止， 之后启动搅拌器， 以250r/ min的转速对混合物进行搅拌， 搅拌15min， 使其完全混合， 待搅拌结束， 静置12h， 过滤， 去 渣， 得滤液； 最后将上述得到的滤液放入浓缩罐中， 降低罐内压力为1100Pa， 减压浓缩至浓 缩罐内滤液体积为原有体积的1/2时， 停止浓缩， 即可得到一种氨酸酶抑制剂。 0015 本实例方法独特新颖， 使用时， 将本发明制得的氨酸酶抑制剂放入化妆品乳液中， 其中加入量为10mL化妆品乳液中加入0.8mL氨酸酶抑制剂， 充分混合均匀， 在每天早晚洁面 后， 取3mL混合液均匀涂抹在脸部， 轻轻拍打直至完全吸收为止， 坚持连续使用15天， 可以明 显感觉皮肤变得细腻柔嫩， 脸部的色斑明显淡化， 且美白程度比未添加氨酸酶抑制剂的化 妆品的美白程度高80， 对皮肤没有任何危害， 适合大规模生产使用。 说 明 书 5/5 页 7 CN 105581949 A 7 。