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1、10申请公布号CN104193753A43申请公布日20141210CN104193753A21申请号201410424925922申请日20140826C07D487/2220060171申请人江苏红豆杉药业有限公司地址214199江苏省无锡市锡山区东港镇红豆工业园区江苏红豆杉药业有限公司72发明人王琼喻琼林蔡强葛月兰74专利代理机构北京品源专利代理有限公司11332代理人巩克栋侯潇潇54发明名称一种由红豆杉枝叶提取物制备光敏剂HPPH的方法57摘要本发明涉及一种由红豆杉枝叶提取物制备光敏剂HPPH的方法，包括如下步骤1叶绿素A的提取；2脱镁叶绿酸A甲酯的制备；3焦脱镁叶绿酸A甲酯的合成；4。
2、21氧正己基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯的合成；521氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸AHPPH的合成。本发明通过对红豆杉枝叶的再提取综合利用获得叶绿素作为HPPH的合成原料，实现了红豆杉枝叶的合理利用。51INTCL权利要求书2页说明书8页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书8页10申请公布号CN104193753ACN104193753A1/2页21一种由红豆杉枝叶提取物制备光敏剂HPPH的方法，所述方法包括如下步骤1叶绿素A的提取从红豆杉枝叶中提取叶绿素A；2脱镁叶绿酸A甲酯的制备取叶绿素A加入硫酸甲醇溶液中溶解，室温搅拌，然后加饱和碳酸氢钠水溶液及碳。
3、酸氢钠粉末，并调节PH至78，然后蒸发去除甲醇，分离得到有机相，干燥，过滤，浓缩得到墨绿色油状物，重结晶，得到墨绿色固体，即脱镁叶绿酸A甲酯；3焦脱镁叶绿酸A甲酯的合成将脱镁叶绿酸A甲酯溶于2,4,6三甲基吡啶，在惰性气体保护下加热回流，待反应结束后，去除溶剂，层析，将得到的洗脱液去除溶剂，抽滤，得到蓝黑色固体粉末，即焦脱镁叶绿酸A甲酯；421氧正己基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯的合成向反应容器中加入HBR/HOAC溶液，然后在搅拌的条件下将焦脱镁叶绿酸A甲酯缓慢加入，室温下进行水解反应，待反应结束后，将去除冰醋酸后的产物冷却至室温，然后向其中加入正己醇搅拌溶解，在惰性气体保护下，置于冰。
4、箱中冷藏过夜进行反应，待反应结束后，再将产物放置于室温下进行反应，至21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸甲酯全部转化为21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯；521氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A的合成在惰性气体保护下，将21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯加入THF中，搅拌溶解，然后加入13氢氧化钠/甲醇/水混合溶液，在室温下进行反应，待反应结束后，得到21氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A。2如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1叶绿素A的提取方法为将红豆杉枝叶提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物加入丙酮中，控制提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物的重量G与丙酮的体积M。
5、L比为11110，加热回流814H，然后经过氧化铝层析，由二氯甲烷洗脱获得叶绿素A。3如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤2中每160G叶绿素A加入24升的硫酸甲醇溶液；优选地，步骤2室温搅拌的时间为1420H，优选16H；优选地，步骤2分离过程为加入二氯甲烷，分液，水层用二氯甲烷萃取，至水层无色，将有机相合并，得到有机相；优选地，水层用二氯甲烷萃取3次。4如权利要求13之一所述的方法，其特征在于，步骤2采用无水硫酸钠干燥；优选地，步骤2利用甲醇和二氯甲烷的混合溶剂重结晶。优选地，甲醇和二氯甲烷的体积比为51。5如权利要求14之一所述的方法，其特征在于，步骤3中每16G脱镁叶绿酸A甲酯。
6、溶于240480ML2,4,6三甲基吡啶；优选地，步骤3中减压蒸发去除溶剂；优选地，步骤3中采用中性氧化铝减压柱和二氯甲烷洗脱剂进行层析；优选地，步骤3中将去除溶剂后的产物加入甲醇搅拌均匀，抽滤，得到蓝黑色固体粉权利要求书CN104193753A2/2页3末。6如权利要求15之一所述的方法，其特征在于，步骤4中HBR/HOAC溶液的浓度为33；优选地，步骤4中HBR/HOAC溶液的体积ML和焦脱镁叶绿酸甲酯的重量G比为2030；优选地，步骤4中正己醇的体积ML和焦脱镁叶绿酸甲酯的重量G比为2030；优选地，采用HPLC监控反应进程，直至原料消失，视为反应结束。7如权利要求16之一所述的方法，其。
7、特征在于，步骤4还包括如下分离过程向室温下的反应产物中加入880ML15L二氯甲烷稀释反应液，依次用水和10碳酸氢钠水溶液洗涤反应液至中性，将有机层加入无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，采用水泵减压浓缩去除二氯甲烷后，以油泵减压浓缩去除正己醇，将残余物溶于二氯甲烷，中性氧化铝拌样，过200300目的硅胶柱，以乙酸乙酯和石油醚梯度洗脱，得到21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯；优选地，以乙酸乙酯和石油醚体积比1/71/4梯度洗脱。8如权利要求17之一所述的方法，其特征在于，步骤5采用TLC监控反应进程，其中，展开剂为体积比为131的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂；优选地，步骤5中THF的体积ML。
8、和21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯的重量G比为100120；优选地，氢氧化钠/甲醇/水混合溶液的体积ML和21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯的重量G比为30625。9如权利要求18之一所述的方法，其特征在于，步骤5反应结束后，还包括如下分离过程待反应结束后，加入05的水，并用2的HOAC水溶液调节PH为60，然后加入THF，用二氯甲烷萃取反应液至水相无色，有机相加入无水硫酸钠干燥，约2小时后过滤去除干燥剂，减压蒸干，将残物溶于二氯甲烷，硅胶柱层析，以二氯甲烷15甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，再以甲醇重结晶，得到21氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A。10如权利要求9所述的方法。
9、，其特征在于，冷水的体积ML和21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯G的重量比为100120；优选地，所述HOAC水溶液的浓度为1825，优选2；优选地，梯度洗脱得到的产品的重量G和甲醇的体积ML比为125。权利要求书CN104193753A1/8页4一种由红豆杉枝叶提取物制备光敏剂HPPH的方法技术领域0001本发明涉及一种由红豆杉枝叶提取物制备光敏剂HPPH的方法。背景技术0002一类新药新型抗肿瘤光敏剂21HEXYLOXYETHYL2DEVINYLPYROPHEOPHORBIDEA，HPPHPHOTOCHLOR，又名红光吩，其为第二代光敏剂，属于二氢卟酚类化合物，其结构式如下所示。
10、00030004RPCI研究人员从绿色植物中提取、纯化以及半合成的二氢卟酚类化合物，通过检测这些化合物的光谱学特性、光毒性、暗毒性和体外抑癌试验，进行构效关系研究，得到结构单一、长激发波长和暗毒性小的二氢卟酚类化合物HPPH。0005HPPH具有很好的光动力活性、理想的作用光谱以及很好的靶向性，对肿瘤组织的穿透率高，临床用于肺癌、食管癌、头面颈癌、膀胱癌、胃癌等多种实体肿瘤的治疗；较第一代光敏剂相比，其光毒性明显降低，基本不需要避光，用量小，使用方便，是一种极富市场潜力的PDT治疗癌症用光敏剂。发明内容0006在已有技术的基础上，本发明的目的在于提供一种由红豆杉枝叶提取物制备光敏剂HPPH的方。
11、法。0007为了达到上述目的，本发明采用了如下技术方案0008一种由红豆杉枝叶提取物制备光敏剂红光吩HPPH的方法，所述方法包括如下步骤00091叶绿素A的提取0010从红豆杉枝叶中提取叶绿素A；00112脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPHEOPHORBIDEA的制备0012取叶绿素A加入硫酸甲醇溶液中溶解，室温搅拌，然后加饱和碳酸氢钠水溶液及碳酸氢钠粉末，并调节PH至78，然后蒸发去除甲醇，分离得到有机相，干燥，过滤，浓缩得到墨绿色油状物，重结晶，得到墨绿色固体，即脱镁叶绿酸A甲酯METHYL说明书CN104193753A2/8页5PHEOPHORBIDEA；00133焦脱镁叶绿酸A甲酯MET。
12、HYLPYROPHEOPHORBIDEA的合成0014将脱镁叶绿酸A甲酯溶于2,4,6三甲基吡啶，在惰性气体保护下加热回流，待反应结束后，去除溶剂，层析，将得到的洗脱液去除溶剂，抽滤，得到蓝黑色固体粉末，即焦脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPYROPHEOPHORBIDEA；0015421氧正己基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯HPPHHEXYLEASTER的合成0016向反应容器中加入HBR/HOAC溶液，然后在搅拌的条件下将焦脱镁叶绿酸A甲酯缓慢加入，室温下进行水解反应，待反应结束后，将去除冰醋酸后的产物冷却至室温，然后向其中加入正己醇搅拌溶解，在惰性气体保护下，置于冰箱中冷藏过夜进行反应，。
13、待反应结束后，再将产物放置于室温下进行反应，至21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸甲酯全部转化为21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯；0017521氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸AHPPH的合成0018在惰性气体保护下，将21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯加入THF中，搅拌溶解，然后加入13氢氧化钠/甲醇/水混合溶液，在室温下进行反应，待反应结束后，得到21氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸AHPPH。0019优选地，步骤1叶绿素A的提取方法为0020将红豆杉枝叶提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物加入丙酮中，控制提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物的重量G与丙酮的体积ML比。
14、为11110例如11、12、13、14、15、16、17、18或19，加热回流814H例如85H、9H、95H、10H、105H、11H、115H、12H、125H、13H或135H，然后经过氧化铝层析，由二氯甲烷洗脱获得叶绿素A。0021优选地，步骤2中每160G叶绿素A加入24升例如22升、24升、26升、28升、3升、32升、34升、36升或38的硫酸甲醇溶液。0022优选地，室温搅拌的时间为1420H，例如145H、15H、155H、16H、165H、17H、175H、18H、185H、19H或195H，优选16H。0023在本发明中，通过加入饱和碳酸氢钠水溶液和碳酸氢钠粉末调节PH至。
15、78，例如71、72、73、74、75、76、77、78或79。0024所述分离过程为加入二氯甲烷，分液，水层用二氯甲烷萃取，至水层无色，将有机相合并，得到有机相。0025优选地，水层用二氯甲烷萃取3次。0026优选地，采用无水硫酸钠干燥。0027优选地，然后利用甲醇和二氯甲烷的混合溶剂重结晶。0028优选地，甲醇和二氯甲烷的体积比为51。0029所述反应时间可以通过HPLC检测原料完全消失的时间来确定。0030优选地，步骤3中每16G脱镁叶绿酸A甲酯溶于240480ML例如260ML、280ML、300ML、320ML、340ML、360ML、380ML、400ML、420ML、440ML或。
16、460ML2,4,6三甲基吡啶。0031优选地，步骤3中采用中性氧化铝减压柱和二氯甲烷洗脱剂进行层析。说明书CN104193753A3/8页60032优选地，步骤3中减压蒸发去除溶剂。0033优选地，步骤3中将去除溶剂后的产物加入甲醇搅拌均匀，抽滤，得到蓝黑色固体粉末。0034优选地，在步骤4中，HBR/HOAC溶液的浓度为33。0035优选地，在步骤4中，HBR/HOAC溶液的体积ML和焦脱镁叶绿酸甲酯的重量G比为2030，例如21、22、23、24、25、26、27、28或29。0036优选地，在步骤4中，正己醇的体积ML和焦脱镁叶绿酸甲酯的重量G比为2030，例如21、22、23、24、。
17、25、26、27、28或29。0037在上述反应中，采用HPLC监控反应进程，直至原料消失，视为反应结束。0038优选地，步骤4还包括如下分离过程向室温下的反应产物中加入880ML15L二氯甲烷稀释反应液，依次用水和10碳酸氢钠水溶液洗涤反应液至中性，将有机层加入无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，采用水泵减压浓缩去除二氯甲烷后，以油泵减压浓缩去除正己醇，将残余物溶于二氯甲烷，中性氧化铝拌样，过200300目的硅胶柱，以乙酸乙酯和石油醚梯度洗脱，得到纯度为99及以上的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯。0039优选地，以乙酸乙酯和石油醚体积比1/71/4梯度洗脱。0040优选地，步骤5采。
18、用TLC监控反应进程，其中，展开剂为体积比为131的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂。0041优选地，步骤5THF的体积ML和21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯G的重量比为100120，例如102、104、106、108、110、112、114、116或118。0042优选地，氢氧化钠/甲醇/水混合溶液的体积ML和21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯的重量G比为30625。0043优选地，步骤5反应结束后，还包括如下分离过程0044待反应结束后，加入05的水，并用2的HOAC水溶液调节PH为60，然后加入THF，用二氯甲烷萃取反应液至水相无色，有机相加入无水硫酸钠干燥，约2小时后。
19、过滤去除干燥剂，减压蒸干，将残物溶于二氯甲烷，硅胶柱层析，以二氯甲烷15甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，再以甲醇重结晶，得到21氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A。0045优选地，冷水的体积ML和21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯的重量G比为100120，例如102、104、106、108、110、112、114、116或118。0046优选地，所述HOAC水溶液的浓度为1825，例如19、2、21、22、23或24，优选2。0047优选地，梯度洗脱得到的产品的重量G和甲醇的体积ML比为125。0048上述方法的反应式如下所示0049说明书CN104193753A4/8页70050与已有技术。
20、相比，本发明具有如下有益效果0051红豆杉枝叶目前作为紫杉醇和10去乙酰基巴卡丁III的主要原料，在紫杉醇与10DAB提取完后，红豆杉枝叶还富含叶绿素，是HPPH的主要合成起始原料。本发明通过对红豆杉枝叶的再提取综合利用获得叶绿素作为HPPH的合成原料，实现了红豆杉枝叶的合理利用。0052采用本发明所述方法得到的HPPH的纯度高，可达到99及以上，收率可达到70及以上。具体实施方式0053下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。0054实施例100551叶绿素A的提取0056取红豆杉枝叶提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物16公斤粉末，将其加入丙酮中，控制提取10去乙酰基巴卡丁III。
21、后的产物的重量与丙酮的体积比为1115，加热回流814H，然后经过氧化铝层析，由二氯甲烷洗脱获得墨绿色膏状物叶绿素A170G；00572脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPHEOPHORBIDEA的制备0058取叶绿素A160克加入20升5硫酸甲醇溶液溶解，室温搅拌16小时，加饱和碳酸氢钠水溶液及碳酸氢钠粉末，调PH78，然后蒸发去除甲醇，加入二氯甲烷，分液，水层用适量二氯甲烷萃取3次，至水层无色，合并有机相，将其采用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得墨绿色油状物52克，然后利用体积比为51的甲醇/二氯甲烷混合溶剂重结晶，得说明书CN104193753A5/8页8184克墨绿色固体，重量收率为115。00。
22、593焦脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPYROPHEOPHORBIDEA的合成0060取16G脱镁叶绿酸A甲酯溶于240ML2,4,6三甲基吡啶，氮气保护，加热回流2小时后HPLC检测原料消失，视为反应结束，减压浓缩掉反应试剂，采用中性氧化铝减压柱和1L二氯甲烷洗脱剂进行层析，收集洗脱液，减压蒸掉大部分溶剂。向残余物中加入40ML甲醇搅拌均匀，抽滤，得蓝黑色固体粉末118克，收率为8155。对该蓝黑色固体粉末进行核磁共振测试，具体结果为1HNMRCDCL3500MHZPPM950S,1H,938S,1H,855S,1H,804798M,1H,630D,1H,615D,1H,530509Q,2H,。
23、450M,1H，430M,1H，371Q,2H，367S,3H，361S,3H，341S,3H，324S,3H，273269M,1H，260254M,1H，234226M,1H，182D,3H，170T,3H，341S,3H，168S,2H。0061421氧正己基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯HPPHHEXYLEASTER的合成0062在配有机械搅拌、干燥管的三口瓶中加入220ML33的HBR/HOAC，搅拌条件下下将11G焦脱镁叶绿酸甲酯分批缓缓加入，室温下进行反应，HPLC监控反应进程直至原料消失，然后水浴加热减压蒸除冰醋酸。将得到的残余物冷至室温后加入220ML正己醇搅拌溶解，N2保。
24、护下，置于冰箱中冷藏过夜，HPLC检测原料消失后，再将产物置于室温下反应，用HPLC监控反应进程，至反应生成的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸甲酯全部转化为21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸己酯。然后加入880ML二氯甲烷稀释反应液，依次用水和10碳酸氢钠水溶液洗涤反应液至中性，有机层加入无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，水泵减压浓缩净二氯甲烷后，以油泵减压浓缩掉正己醇。将残余物溶于二氯甲烷，中性氧化铝拌样，过硅胶200300目柱，以乙酸乙酯/石油醚体积比1/71/4梯度洗脱得99纯度的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯83克，收率为5743。0063521氧正己基2去乙烯基。
25、焦脱镁叶绿酸AHPPH0064在N2保护下，将8克21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯加入960MLTHF中，搅拌溶解，加入事先配好的13氢氧化钠/甲醇/水2450ML混合溶液，保持室温进行反应，TLC监控反应进程展开剂为体积比为131的二氯甲烷甲醇混合溶剂，反应完毕后，加入960ML的05的水，用2的HOAC水溶液调节PH60，然后加入260MLTHF，用二氯甲烷萃取反应液至水相无色。有机相加入无水硫酸钠干燥，约2小时后过滤去除干燥剂，减压蒸干。将残物溶于二氯甲烷，硅胶柱层析，以二氯甲烷15甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得纯度97左右的产品，再以甲醇重结晶其中，G/ML1/25，得到纯度9。
26、9的产品492克。收率696。1HNMRCDCL3500MHZPPM976S,1H,952S,1H,854S,1H,590Q,1H,521Q,2H,450Q,1H,434D,2H,373358M,7H，337S,3H，327S,3H，272258M,2H，232230M,2H，211D,3H，182D,3H，172168M,5H，141134M,2H，121S,4H，077S,3H。0065实施例200661叶绿素A的提取0067取红豆杉枝叶提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物16公斤粉末，将其加入丙酮说明书CN104193753A6/8页9中，控制提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物的重量与。
27、丙酮的体积比为1115，加热回流814H，然后经过氧化铝层析，由二氯甲烷洗脱获得墨绿色膏状物叶绿素A170G；00682脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPHEOPHORBIDEA的制备0069取叶绿素A160克加入20升5硫酸甲醇溶液溶解，室温搅拌16小时，加饱和碳酸氢钠水溶液及碳酸氢钠粉末，调PH78，然后蒸发去除甲醇，加入二氯甲烷，分液，水层用适量二氯甲烷萃取3次，至水层无色，合并有机相，将其采用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得墨绿色油状物52克，然后利用体积比为51的甲醇/二氯甲烷混合溶剂重结晶，得184克墨绿色固体，重量收率为115。00703焦脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPYROPHEOPH。
28、ORBIDEA的合成0071取16G脱镁叶绿酸A甲酯溶于240ML2,4,6三甲基吡啶，氮气保护，加热回流2小时后HPLC检测原料消失，视为反应结束，减压浓缩掉反应试剂，采用中性氧化铝减压柱和1L二氯甲烷洗脱剂进行层析，收集洗脱液，减压蒸掉大部分溶剂。向残余物中加入50ML甲醇搅拌均匀，抽滤，得蓝黑色固体粉末118克，收率为8155。0072421氧正己基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯HPPHHEXYLEASTER的合成0073在配有机械搅拌、干燥管的三口瓶中加入330ML33的HBR/HOAC，搅拌条件下下将11G焦脱镁叶绿酸甲酯分批缓缓加入，室温下进行反应，HPLC监控反应进程直至原料。
29、消失，然后水浴加热减压蒸除冰醋酸。将得到的残余物冷至室温后加入330ML正己醇搅拌溶解，N2保护下，置于冰箱中冷藏过夜，HPLC检测原料消失后，再将产物置于室温下反应，用HPLC监控反应进程，至反应生成的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸甲酯全部转化为21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸己酯。然后加入880ML二氯甲烷稀释反应液，依次用水和10碳酸氢钠水溶液洗涤反应液至中性，有机层加入无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，水泵减压浓缩净二氯甲烷后，以油泵减压浓缩掉正己醇。将残余物溶于二氯甲烷，中性氧化铝拌样，过硅胶200300目柱，以乙酸乙酯/石油醚体积比1/71/4梯度洗脱得99纯度的21正。
30、己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯85克，收率为6025。0074521氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸AHPPH0075在N2保护下，将8克21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯加入960MLTHF中，搅拌溶解，加入事先配好的13氢氧化钠/甲醇/水2450ML混合溶液，保持室温进行反应，TLC监控反应进程展开剂为体积比为131的二氯甲烷甲醇混合溶剂，反应完毕后，加入960ML05的水，用2的HOAC水溶液调节PH60，然后加入260MLTHF，用二氯甲烷萃取反应液至水相无色。有机相加入无水硫酸钠干燥，约2小时后过滤去除干燥剂，减压蒸干。将残物溶于二氯甲烷，硅胶柱层析，以二氯甲烷15。
31、甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得纯度97左右的产品，再以甲醇重结晶其中，G/ML1/25，得到纯度99的产品502克。收率712。0076实施例300771叶绿素A的提取0078取红豆杉枝叶提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物16公斤粉末，将其加入丙酮中，控制提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物的重量与丙酮的体积比为1115，加热说明书CN104193753A7/8页10回流814H，然后经过氧化铝层析，由二氯甲烷洗脱获得墨绿色膏状物叶绿素A170G；00792脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPHEOPHORBIDEA的制备0080取叶绿素A160克加入20升5硫酸甲醇溶液溶解，室温搅拌16小时，加饱和碳。
32、酸氢钠水溶液及碳酸氢钠粉末，调PH78，然后蒸发去除甲醇，加入二氯甲烷，分液，水层用适量二氯甲烷萃取3次，至水层无色，合并有机相，将其采用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得墨绿色油状物52克，然后利用体积比为51的甲醇/二氯甲烷混合溶剂重结晶，得184克墨绿色固体，重量收率为115。00813焦脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPYROPHEOPHORBIDEA的合成0082取16G脱镁叶绿酸A甲酯溶于240ML2,4,6三甲基吡啶，氮气保护，加热回流2小时后HPLC检测原料消失，视为反应结束，减压浓缩掉反应试剂，采用中性氧化铝减压柱和1L二氯甲烷洗脱剂进行层析，收集洗脱液，减压蒸掉大部分溶剂。向残余物中。
33、加入50ML甲醇搅拌均匀，抽滤，得蓝黑色固体粉末118克，收率为8155。0083421氧正己基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯HPPHHEXYLEASTER的合成0084在配有机械搅拌、干燥管的三口瓶中加入280ML33的HBR/HOAC，搅拌条件下下将11G焦脱镁叶绿酸甲酯分批缓缓加入，室温下进行反应，HPLC监控反应进程直至原料消失，然后水浴加热减压蒸除冰醋酸。将得到的残余物冷至室温后加入280ML正己醇搅拌溶解，N2保护下，置于冰箱中冷藏过夜，HPLC检测原料消失后，再将产物置于室温下反应，用HPLC监控反应进程，至反应生成的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸甲酯全部转化为21正。
34、己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸己酯。然后加入880ML二氯甲烷稀释反应液，依次用水和10碳酸氢钠水溶液洗涤反应液至中性，有机层加入无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，水泵减压浓缩净二氯甲烷后，以油泵减压浓缩掉正己醇。将残余物溶于二氯甲烷，中性氧化铝拌样，过硅胶200300目柱，以乙酸乙酯/石油醚体积比1/71/4梯度洗脱得99纯度的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯85克，收率为6025。0085521氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸AHPPH0086在N2保护下，将8克21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯加入960MLTHF中，搅拌溶解，加入事先配好的13氢氧化钠/甲醇/水2。
35、450ML混合溶液，保持室温进行反应，TLC监控反应进程展开剂为体积比为131的二氯甲烷甲醇混合溶剂，反应完毕后，加入960ML05的水，用2的HOAC水溶液调节PH60，然后加入260MLTHF，用二氯甲烷萃取反应液至水相无色。有机相加入无水硫酸钠干燥，约2小时后过滤去除干燥剂，减压蒸干。将残物溶于二氯甲烷，硅胶柱层析，以二氯甲烷15甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得纯度97左右的产品，再以甲醇重结晶其中，G/ML1/25，得到纯度99的产品502克。收率712。0087实施例400881叶绿素A的提取0089取红豆杉枝叶提取10去乙酰基巴卡丁III后的产物16公斤粉末，将其加入丙酮中，控制提取10去。
36、乙酰基巴卡丁III后的产物的重量与丙酮的体积比为15110，加热回流814H，然后经过氧化铝层析，由二氯甲烷洗脱获得墨绿色膏状物叶绿素A170G；说明书CN104193753A108/8页1100902脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPHEOPHORBIDEA的制备0091取叶绿素A160克加入4升5硫酸甲醇溶液溶解，室温搅拌20小时，加饱和碳酸氢钠水溶液及碳酸氢钠粉末，调PH78，然后蒸发去除甲醇，加入二氯甲烷，分液，水层用适量二氯甲烷萃取3次，至水层无色，合并有机相，将其采用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得墨绿色油状物52克，然后利用体积比为51的甲醇/二氯甲烷混合溶剂重结晶，得194克墨绿色固体。
37、，重量收率为115。00923焦脱镁叶绿酸A甲酯METHYLPYROPHEOPHORBIDEA的合成0093取16G脱镁叶绿酸A甲酯溶于480ML2,4,6三甲基吡啶，氮气保护，加热回流2小时后HPLC检测原料消失，视为反应结束，减压浓缩掉反应试剂，采用中性氧化铝减压柱和1L二氯甲烷洗脱剂进行层析，收集洗脱液，减压蒸掉大部分溶剂。向残余物中加入50ML甲醇搅拌均匀，抽滤，得蓝黑色固体粉末118克，收率为8155。0094421氧正己基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯HPPHHEXYLEASTER的合成0095在配有机械搅拌、干燥管的三口瓶中加入280ML33的HBR/HOAC，搅拌条件下下将。
38、11G焦脱镁叶绿酸甲酯分批缓缓加入，室温下进行反应，HPLC监控反应进程直至原料消失，然后水浴加热减压蒸除冰醋酸。将得到的残余物冷至室温后加入280ML正己醇搅拌溶解，N2保护下，置于冰箱中冷藏过夜，HPLC检测原料消失后，再将产物置于室温下反应，用HPLC监控反应进程，至反应生成的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸甲酯全部转化为21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸己酯。然后加入15L二氯甲烷稀释反应液，依次用水和10碳酸氢钠水溶液洗涤反应液至中性，有机层加入无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，水泵减压浓缩净二氯甲烷后，以油泵减压浓缩掉正己醇。将残余物溶于二氯甲烷，中性氧化铝拌样，过硅胶20。
39、0300目柱，以乙酸乙酯/石油醚体积比1/71/4梯度洗脱得99纯度的21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸正己酯85克，收率为6025。0096521氧正己基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸AHPPH0097在N2保护下，将8克21正己氧基乙基2去乙烯基焦脱镁叶绿酸A正己酯加入800MLTHF中，搅拌溶解，加入事先配好的13氢氧化钠/甲醇/水2450ML混合溶液，保持室温进行反应，TLC监控反应进程展开剂为体积比为131的二氯甲烷甲醇混合溶剂，反应完毕后，加入800ML05的水，用25的HOAC水溶液调节PH60，然后加入260MLTHF，用二氯甲烷萃取反应液至水相无色。有机相加入无水硫酸钠干燥，约2小时后过滤去除干燥剂，减压蒸干。将残物溶于二氯甲烷，硅胶柱层析，以二氯甲烷15甲醇/二氯甲烷梯度洗脱得纯度97左右的产品，再以甲醇重结晶其中，G/ML1/25，得到纯度99的产品502克。收率712。0098申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。说明书CN104193753A11。