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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510057649.1 (22)申请日 2015.02.04 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104666295 A (43)申请公布日 2015.06.03 (73)专利权人 广东省农业科学院动物卫生研究 所 地址 510640 广东省广州市天河区五山白 石岗街 (72)发明人 李娟 孙铭飞 林栩慧 戚南山 廖申权 吴彩艳 吕敏娜 (74)专利代理机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 44205 代理人 胡辉 (51)Int.Cl. A61K 31/36。
2、5(2006.01) A61P 33/02(2006.01) A23K 20/126(2016.01) 审查员 王芳菲 (54)发明名称 土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物中 的应用 (57)摘要 本发明公开了土木香内酯在制备抗微小隐 孢子虫药物中的应用， 土木香内酯与可接受的辅 料， 制成散剂， 添加至饲料中， 混匀， 按日常饲料 量喂食小鼠； 或将土木香内酯制成土木香内酯水 溶性粉剂， 溶于水中， 按日常饮水量喂食小鼠。 通 过动物感染实验证实土木香内酯可使微小隐孢 子虫感染后的排卵囊数减少75%以上， 具有较好 的抗微小隐孢子虫作用。 权利要求书1页 说明书4页 CN 104666295。
3、 B 2017.01.11 CN 104666295 B 1.土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物或饲料添加剂中的应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 104666295 B 2 土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物中的应用 技术领域 0001 本发明涉及一种化合物的新应用， 特别涉及土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药 物中的应用。 背景技术 0002 微小隐孢子虫 （ Cryptosporidium parvum） 引起人和动物发生严重水样腹泻的 人兽共患寄生性原虫之一。 呈世界性分布， 由其引起的隐孢子虫病已被列入世界最常见的6 种腹泻病之内。 对婴幼儿及免疫缺陷病人有极大的生命威胁。
4、。 0003 隐孢子虫病的主要传染源是人或动物排出的含大量卵囊的粪便和呕吐物, 卵囊 排出周期可持续几天至几周。 卵囊通过生活污水的排放和降水的地表径流， 被带入生活水 水源， 使隐孢子虫成为一种重要的水源性病原体。 微小隐孢子虫感染性卵囊对于公共饮用 水源所用的氯化物类消毒剂都具备很强的抵抗能力， 在最严重的一次由于饮水污染隐孢子 虫卵囊而爆发的病例中， 40多万人受感染而且死亡100人。 在我国江苏、 浙江、 安徽、 福建、 内 蒙古、 云南、 四川及山东等省均已证实有该病存在。 0004 尽管隐孢子虫病给任何动物的健康所带来的危害已经达成全球共识， 但目前尚 未发现对其完全有效的药物。 。
5、文献报道大蒜素、 巴龙霉素治疗， 有一定疗效。 0005 土木香内酯 （化学名为： 3a,5,6,7,8,8a,9,9a-八氢-5,8a-二甲基-3-亚甲基萘并 2,3-b呋喃-2(3H)-酮， Helenine)， 该化合物的分子式是C15H20O2， 分子量232.32， CAS登录 号： 546-43-0， 其化学结构如式为。 0006 土木香内酯天然存在于菊科植物木香根中， 木香水提液、 挥发油和总生物碱对小 鼠离体小肠先有轻度兴奋作用， 随后紧张性与节律性明显降低。 对乙酰胆碱、 组胺与氯化钡 所致肠肌痉挛有对抗作用。 小剂量煎剂对离体小肠的作用无一定规律性， 大剂量则呈抑制 作用。。
6、 挥发油亦可抑制离体兔小肠运动， 使其节律变慢， 收缩不规则。 近年来有研究显示其 具有抗菌、 抗病毒和杀虫等生物活性， 越来越受到人们的重视。 其挥发油1:3000浓度能抑制 链球菌、 金黄色与白色葡萄的生长。 0007 目前为止尚未有土木香内酯具有抗微小隐孢子虫作用的报导， 通过土木香内脂已 知的性质无法推断其是否具有抗微小隐孢子虫的作用。 发明内容 0008 本发明的目的在于提供土木香内酯在制备抗微小隐孢子虫药物的应用。 0009 发明人通过将土木香内酯与可接受的辅料， 制成散剂， 添加至饲料中， 混匀， 按日 常饲料量喂食小白鼠， 土木香内酯的添加量为每100kg饲料中添加3.8g土木。
7、香内酯； 或将土 木香内酯制成土木香内酯水溶性粉剂， 溶于水中， 按日常饮水量喂食小白鼠， 土木香内酯的 添加量为每100kg水中溶于1.9g土木香内酯。 通过动物感染实验证实添加土木香内酯可使 说 明 书 1/4 页 3 CN 104666295 B 3 微小隐孢子虫排卵囊量降低75%以上， 具有较好的抗隐孢子虫作用。 具体实施方式 0010 下面结合具体的实施例及实验对本说明作进一步的说明， 但并不局限如此。 0011 实施例1 0012 土木香内酯散剂的制备： 取3.8g 土木香内酯 （含量不低于98%） 和96.2g淀粉混匀， 即可。 土木香内酯购自上海纯优生物技术有限公司， 货号： 。
8、P0182。 0013 散剂的用法用量： 将上述100g散剂拌入100 kg饲料中， 按日常食量喂食。 0014 实施例2 0015 土木香内酯水溶性粉剂的制备： 取1.9 g土木香内酯 （含量不低于98%） 和98.1g葡 萄糖混匀， 即可。 0016 水溶性粉剂的用法用量： 将上述100g粉剂溶于100升水中， 按正常饮水量喂食。 0017 下面结合具体的实验说明土木香内酯的抗微小隐孢子虫实验。 0018 实验材料： 0019 对照药物： 文献报道的具有抗微小隐孢子虫效果的巴龙霉素 （98%， 上海抚生生物 技术有限公司， 批号001010） ， 使用量为5mg/kg体重。 0020 土木。
9、香内酯： 实施例1的土木香内酯散剂， 实施例2的土木香内酯水溶性粉剂。 0021 微小隐孢子虫卵囊： 微小隐孢子虫 （C.parvum） 广东株卵囊， 由广东省农业科学院 动物卫生研究所保存， 使用前在SPF级昆明鼠体内复壮 （SPF鼠购于南方医科大学实验动物 中心， 品种： BALB/c-SPF鼠） 。 0022 小鼠： 清洁级昆明鼠， 6周龄， 雄性； 由南方医科大学实验动物中心提供， 饲养于已 消毒的专用动物房内； 鼠笼和所用器皿均严格消毒， 自由采食和饮用纯净水。 试验前观察小 鼠有无临床症状及连续2d检查粪便有无隐孢子虫卵囊， 备用。 0023 饲料： 由南方医科大学实验动物中心提供。
10、专用鼠料， 不含任何抗隐孢子虫药物。 0024 实验方法： 0025 分组： 按试验分组及处理将50只SPF级昆明鼠， 随机分成5组， 每组10只， 并适当调 整使每组小鼠总体重大致相等。 0026 处理： 除第I （空白对照） 组外， 其余各组小鼠均经口灌服微小隐孢子虫卵囊l105 个 只； 除第I组和第 （阳性对照） 组外， 其余各组小鼠均于感染后立即饲喂或饮用含抗隐 孢子虫药物的饲料或水， 第组饲喂含巴龙霉素的饲料， 第组饲喂实施例1的土木香内酯 散剂与饲料制成的土木香内酯拌料， 第组饮用实施例2的土木香内酯水溶性粉剂与饮水 制成的土木香内酯饮水， 各组饮水和饲料的用量均相同。 试验小鼠。
11、的分组情况见表1。 0027 表1 试验小鼠分组 说 明 书 2/4 页 4 CN 104666295 B 4 0028。 0029 每天观察并记录小鼠的精神状况、 粪便情况等； 对死亡小鼠称重， 剖检。 0030 药效判定方法主要依据感染后卵囊减少率； 如下进行： 感染后第3天开始每日收集 粪便， 连续监测15天。 每日取粪便淘洗， 260目筛过滤， 滤液经3000r/min离心10min， 弃上清 加15mL饱和蔗糖溶液， 摇匀， 1200/min离心10min； 离心后立即小心沾取上层清夜20uL于红 细胞计数板上， 显微镜 （1040倍） 观察卵囊并计数。 0031 实验结果： 003。
12、2 临床症状观察： 0033 接种微小隐孢子虫卵囊的对照组第3天， 小鼠出现精神沉郁， 被毛粗乱， 第5天起腹 泻症状明显， 期间未见小鼠死亡。 0034 分别计算各组的平均每只小鼠排卵囊数及卵囊减少率， 结果见表2所示。 0035 表2 各组抗隐孢子虫效果 0036 0037 由表2可知， 第、 、 组的平均每只小鼠排卵囊数均低于第组， 第、 组的 平均每只小鼠排卵囊数明显低于第组， 故实验证实土木香内酯可使微小隐孢子虫感染后 的卵囊数减75%以上， 饮水组效果好于饲料添加组， 具有较好的抗微小隐孢子虫作用， 且明 显优于巴龙霉素。 0038土木香内酯在体内可形成其类似物， 同样具有较好的抗微 说 明 书 3/4 页 5 CN 104666295 B 5 小隐孢子虫作用。的药用盐 （如钾、 钙、 钠、 镁、 铝、 铁、 锌盐） 、 药用酯 （如C2C4的酯） 在体内可以转化为， 同样具有较好的抗微小隐孢子 虫作用。 说 明 书 4/4 页 6 CN 104666295 B 6 。