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1、(10)授权公告号 CN 101816773 B (45)授权公告日 2011.04.20 CN 101816773 B *CN101816773B* (21)申请号 201010101834.3 (22)申请日 2010.01.27 A61K 36/9068(2006.01) A61P 1/08(2006.01) A61P 1/14(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 15/00(2006.01) G01N 30/36(2006.01) (73)专利权人 湖南中医药大学 地址 410208 湖南省长沙市含浦镇含浦科教 园区 专利权人 蔡光先 (72)发明人 蔡。
2、光先 王宇红 匡建军 蔡萍 (74)专利代理机构 长沙正奇专利事务所有限责 任公司 43113 代理人 卢宏 (54) 发明名称 一种用于五积散超微粉体制剂含量测定的方 法 (57) 摘要 本发明涉及一种中成药超微粉体制剂的含量 测定方法。其特征在于选择了 11 种含量控制指 标， 采用高效液相色谱法采用同一种含量测定方 法同时进行五积散中 11 种化学成分的指标的含 量测定， 该方法包括色谱条件与系统适用性试验、 对照品溶液的制及含量限度。本方法优点在于相 对简单、 准确、 重现性好， 适于全面评价五积散复 方制剂的质量。 (51)Int.Cl. 审查员 张忠会 (19)中华人民共和国国家知。
3、识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 8 页 附图 1 页 CN 101816773 B1/1 页 2 1. 一种用于五积散超微粉体制剂含量测定的方法，其特征在于采用高效液相色谱法 进行含量测定 ；所述含量控制指标为麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮 苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚 11 种成分 ；所述色谱条件 ：填充剂 为十八烷基键合硅胶 ；流动相A为0.35(v/v)磷酸水溶液 ；B为乙腈 ；梯度洗脱 ：0 15min，7-18 B ；15 38min，18-30 B ；38 42min，30-41 B ；42 45min， 41-55 B ；4。
4、6 65min，55-62 B ；65 75min，62-75 B ；75 80min，75-90 B ；80 85min，90-93 B ；85 95min，93-93 B ；柱温 30；流速为 1ml/min ；各 控制指标的检测波长见表 1。 表 1 五积散超微粉体制剂中 11 种指标成分的检测波长 2.如权利要求1所述的五积散超微粉体制剂含量测定方法，其特征在于所述供试品溶 液的制备方法为 ：以甲醇为溶剂，4冷浸 12 小时。 3. 如权利要求 1 所述的五积散超微粉体制剂含量测定方法，其特征在于测定标准 为 ：每袋重量 9g 的药物中含麻黄以盐酸麻黄碱计，不得少于 5.0mg ；含白。
5、芍以芍药苷 计，不得少于 3.8mg ；含甘草以甘草苷与甘草酸计，分别不得少于 8.6mg 与 21.9mg ；含 当归以阿魏酸计，不得少于 2.72mg ；含枳壳和陈皮以柚皮苷与橙皮苷计，分别不得少于 24.2mg 与 40.7mg ；含桂枝以桂皮醛计，不得少于 1.6mg ；含白芷以欧前胡素计，不得少 于 0.3mg ；含厚朴以厚朴酚和和厚朴酚计，分别不得少于 8.1mg 与 7.0mg。 权 利 要 求 书 CN 101816773 B1/8 页 3 一种用于五积散超微粉体制剂含量测定的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种超微粉体制剂的中成药含量测定方法，特别是涉及五积散超微 粉体制。
6、剂中指标成分的含量测定。 背景技术 0002 药品质量标准是药品检验和技术监督法定性依据，从一定意义上讲，药品质量 的好坏与其质量标准的质量存在密切的相关性，含量测定作为中药质量标准中的关键内 容之一，可在很大程度上控制药品质量。 中药复方往往含多类、多种成分，仅建立某单 一成分的含量测定在很大程度上带有较大的片面性。 因此，有必要在中药复方质量标准 中建立多指标含量测定，实现对多数成份指标的控制，多方面控制产品质量，提高现代 中药制剂的质量控制水平。 0003 五积散源于宋朝 太平惠民和济局方 . 伤寒门，现收载于卫生部药品标准 中药成方制剂 第 21 册，标准编号 WS3-B-2475-9。
7、7，处方为麻黄 40g、白芷 30g、 桂枝 50g、干姜 30g、茯苓 30g、当归 30g、白芍 30g、桔梗 60g、苍术 80g、厚朴 40g、 陈皮 50g、枳壳 50g、法半夏 30g、甘草 30g、川芎 20g，功能发表温中、燥湿化痰、理 气活血，为消除寒、食、气、血、痰五积之剂。 多用于外感寒湿，内伤生冷而致的头痛 身疼、项背拘急、发热无汗、恶心呕吐、脘腹胀满以及风寒湿痹，妇人气血不和，痛经 等证。 现代研究表明，麻黄中的麻黄碱，白芍中的芍药苷，当归中的阿魏酸，甘草中的 甘草苷与甘草酸，枳壳与陈皮中的柚皮苷、橙皮苷，桂枝中的桂皮醛，白芷中的欧前胡 素，厚朴中的厚朴酚与和厚朴酚，。
8、分别具有松弛支气管平滑肌、收缩血管与子宫 1，2、 抗病毒 3-9、抗菌10-15、抗炎16-18、抗氧化19-23、镇静24、抗血栓形成25、抗肿瘤26，27 等药理作用。 上述成分协同作用才能发挥五积散的发表温中、燥湿化痰、理气活血之功 效。 0004 五积散作为应用历史上千年的经典名方，其质量标准仅有鉴别项，未使用含量 对成品质量进行控制，质量标准单一。 很显然，鉴于中药组合物成分的复杂性，现有技 术中没有提供一种对该方剂中多种成分同时进行检测的方法。 发明内容 0005 本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种同时检测五积散超微粉体制剂 多种指标成分的含量测定方法，以便更好的、全面的。
9、控制该产品的质量，保障用药安 全、有效、可靠，具有实际意义。 0006 本发明的另一目的是确定五积散超微粉体制剂的含量限度。 0007 本发明提供的技术方案是采用高效液相色谱法进行含量测定 ；所述含量控制 指标为麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草 酸、厚朴酚、和厚朴酚11种成分 ；所述色谱条件为 ：色谱条件 ：填充剂为十八烷基键合 硅胶 ；流动相A为0.35(v/v)磷酸水溶液 ；B为乙腈 ；梯度洗脱 ：015min，7-18 说 明 书 CN 101816773 B2/8 页 4 B ；15 38min，18-30 B ；38 42min，30-41 B 。
10、；42 45min，41-55 B ；46 65min，55-62 B ；65 75min，62-75 B ；75 80min，75-90 B ；80 85min， 90-93 B ；85 95min，93-93 B。 柱温 30；流速为 1ml/min ；各控制指标的检测 波长见表 1。 0008 表 1 五积散超微粉体制剂中 11 种指标成分的检测波长 0009 0010 所述对照品溶液的制备方法 ：取麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、 橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，以甲 醇溶解，配制成一定比例的溶液。 0011 所述供试品溶液的制备方法为 。
11、：以甲醇为溶剂，冷浸12h，用0.45m微孔滤膜 滤过，制备而得。 0012 五积散超微粉体制剂是按照五积散处方制成的超微粉体颗粒，为了更好的控制 本品质量，保障安全用药，本发明以制剂中麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮 苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚 11 种成分作为控制指标进 行含量测定，并对含量测定方法学进行线性关系、稳定性、重复性、加样回收等方法学 考察，结果表明该方法可行，重现性好，通过多批样品的含量测定，拟定了本品适当的 含量测定限度，结果证明所指定的超微粉体制剂的质量标准专属性强、可控性好，可以 更好的、全面的控制本品的内在质量，保证了制剂工艺稳定剂质量。
12、可控。 0013 所述含量限度为本品每袋含麻黄以盐酸麻黄碱计，不得少于 5.0mg ；含白芍 以芍药苷计，不得少于 3.8mg ；含甘草以甘草苷与甘草酸计，分别不得少于 8.6mg 与 21.9mg ；含当归以阿魏酸计，不得少于 2.72mg ；含枳壳和陈皮以柚皮苷与橙皮苷计，分 别不得少于 24.2mg 与 40.7mg ；含桂枝以桂皮醛计，不得少于 1.6mg ；含白芷以欧前胡素 计，不得少于 0.3mg ；含厚朴以厚朴酚和和厚朴酚计，分别不得少于 8.1mg 与 7.0mg。 附图说明 0014 图 1 是对照品与供试品溶液的高效液相色谱图 ； 0015 其中 (A) 为对照品溶液，(B。
13、) 为五积散微米粉体制剂溶液 . 0016 (1)盐酸麻黄碱 ；(2)芍药苷 ；(3)甘草苷 ；(4)阿魏酸 ；(5)柚皮苷 ；(6)橙皮 苷 ；(7) 桂皮醛 ；(8) 甘草酸 ；(9) 欧前胡素 ；(10) 厚朴酚 ；(11) 和厚朴酚 . 说 明 书 CN 101816773 B3/8 页 5 具体实施方式 0017 通过以下具体实施方式实现对本发明的进一步具体说明，但不应被理解为对本 发明的任何限制。 0018 实施例 1 五积散超微粉体制剂中 11 种指标的含量测定 0019 1、色谱条件 ： 0020 色谱柱 ：十八烷基健合硅胶柱 (5.0m，250mm4.6mm) 0021 流动。
14、相 A 为 0.35 (v/v) 磷酸水溶液 ；B 为乙腈 ；梯度洗脱 ：0 15min， 7-18 B ；15 38min，18-30 B ；38 42min，30-41 B ；42 45min，41-55 B ；46 65min，55-62 B ；65 75min，62-75 B ；75 80min，75-90 B ；80 85min，90-93 B ；85 95min，93-93 B。 柱温 30 ；流速为 1ml/min ；各控制指 标的检测波长见表 1。 流速 ：1.0mlmin-1。 0022 检测波长 ：采用可变波长的方法，即分别在各指标成分的保留时间位置采用相 应指标成分的最大。
15、吸收波长。 见表 1。 0023 表 1 同时检测五积散超微粉体制剂 11 种指标成分高效液相色谱法的检测波长 0024 0025 柱温 ：30。 0026 理论板数 ：按含量最高的柚皮苷峰计算，应不低于 2000. 0027 2、对照品溶液的制备 ：精密称取经五氧化二磷干燥的盐酸麻黄碱、芍药苷、 甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚 适量，用甲醇定容至 100ml，得到每 1ml 含盐酸麻黄碱 25g、芍药苷 180g、甘草 苷 148g、阿魏酸 38g、柚皮苷 85g、橙皮苷 13.5g、桂皮醛 6.9g、欧前胡素 2.37g、甘草酸 99.6g、厚朴。
16、酚 32g、和厚朴酚 29.5g 的混合对照品储备液，冰箱 中 4下避光保存。 0028 3、供试品溶液的制备 ：取五积散微米粉体制剂 0.35g，精密称定，置具塞锥形 瓶中，加甲醇 25ml，称定重量，于冰箱 (4 ) 中冷浸 12h，再称定重量，用甲醇补足减 失的重量，摇匀，滤过，再用微孔滤膜 (0.45m) 滤过，即得。 0029 4、测定法 ：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各 5l，注入液相色谱仪， 测定。 说 明 书 CN 101816773 B4/8 页 6 0030 5、计算法 ：按照外标法计算，即得。 0031 分别测定 3 批五积散微米粉体制剂样品，每 mg 五积散微米粉。
17、体制剂含盐酸 麻黄碱 700ng、芍药苷 539ng、甘草苷 1193ng、阿魏酸 374ng、柚皮苷 3377ng、橙皮 苷 5652ng、桂皮醛 220ng、欧前胡素 36ng、甘草酸 3045ng、厚朴酚 1125ng、和厚朴酚 970ng。 0032 实施例 2 线性关系考察 0033 将 11 种对照品的混合溶液并稀释至 6 个浓度水平，精密吸取 5l 注入液相色谱 仪，记录色谱图。 分别以盐酸麻黄碱、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、柚皮苷、橙皮苷、桂 皮醛、欧前胡素、甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚的峰面积为纵坐标 (Y)、对照品溶液进样 浓度 (l/ml) 为横坐标 (X) 进行线性回归，得回归。
18、方程见表 2。 所有回归方程均表明在 检测范围内线性关系良好 (r2 0.9993)。 0034 表 211 种成分的回归数据与最低检测限 (n 6). 0035 0036 实施例 3 精密度考察 0037 取五积散超微粉体制剂溶液在上述色谱条件下，进行日内精密度与日间精密度 试验。 日内精密度试验采用三个浓度的样品溶液一日内重复检测 5 次，日间精密度则连 续三日分别检测一次。 结果见表 3，11 种主要成分的 R.S.D. 均小于 5。 表明，该方法 具有良好的精密度。 0038 表 3 精密度试验 0039 说 明 书 CN 101816773 B5/8 页 7 0040 实施例 4 稳。
19、定性考察 0041 取供试品溶液在 4下避光放置，分别于 0，24，48h 测定。 11 种主要有效成分 的峰面积与保留时间的 R.S.D. 分别小于 4.9、2.0。 结果表明，样品溶液在 4下 48h 内稳定。 0042 实施例 5 回收率试验 说 明 书 CN 101816773 B6/8 页 8 0043 采用加样回收法，精密称取已知含量的五积散适量，共 3 份，按样品中相 应成分含量的 50、100、150，分别准确加入上述对照品，制成溶液，在分别 测定 11 种指标成分的含量，并计算回收率，结果见表 4，平均加样回收率范围均在 96.56-103.85，R.S.D. 小于 4.87。
20、。 表明，该方法准确性好。 0044 表 4 回收率试验 0045 0046 0047 参考文献 0048 1Tong C，Eisenach JC.The vascular mechanism of ephedrines benefi cial effect on uterine perfusion duringpregnancy.Anesthesiology.1992 ；76(5) ：792-8. 说 明 书 CN 101816773 B7/8 页 9 0049 2BilckovL， Bauer V， Kolena J.The effects of methylxanthines， ethy。
21、mizol， ephedrine and papaverine onguinea pig and dog trachea.Gen Physiol Biophys.1987 ；6(2) ： 137-48. 0050 3Hirabayashi T， Ochiai H， Sakai S.Inhibitory effect of fertulic acid and isoferulic acid on murine interleukin-8 production in response to infl uenza virus infections in vitro and in vivo.Plant。
22、a Med.1995 ；61(3) ：221. 0051 4Chan WS， Wen PC， Chiang HC， et al.Structure-activity relationship of caffeic acid analogs on xanthineoxidase inhibition.Antica-ncer Res.1995 ；15(3) ：703. 0052 5Lee JH.Antiviral activity of some flavonoids on Heroessimplex virus.Korean Pharnuog.1999，30(1) ：49. 0053 6Bae 。
23、EA.In vitro inhibitory efects of some fl avonoids on rotavirus infectivity.Biol PharmBull.2000，23(5) ：1112. 0054 7Kim DH， Song MJ， Bae EA.Inhibotory effects of herbal medicines on rotavirus infectivity.Biol PharmBull.2000，23(3) ：356. 0055 8Pompei R，Flore O，M arccialis M A，et al.Glycyrrhizic acid inh。
24、ibits virus growth and inactivates virusparticles.Nature.1979，281(5733) ：689-690. 0056 9Il ina T V， Fediuk N V， Bachinskii A G， et al.Determination of glycyrrhizic acid binding sites by a phagedisplay method.Mol Biol(Mosk).2003，37(5) ：861-867. 0057 10Tsou Mei F， Hung Chi F， Lu Hsu F.Effects of caffe。
25、ic acid， chlorogenic acid and ferulic acid on growthand arylamine N-acetyltransfera se ac tivity in Shigella sonne i(group D).Microbios.2000 ；101(398) ：37. 0058 11A.Ortuno，et al.Citrus paradisi and Citrus sinensis fl avonoids ：Their infl uence in the defence mechanismagainst Penicillium digitatum.Fo。
26、od Chemistry.2006 ；98 ：351-358. 0059 12Chang ST.Chen PF，Chang SC.Antibacterial activity of leaf essential oils and their constituentsCinnamomum osmophloeum.Ethnopharmacol.2001 ；77(1) ：123-7. 0060 13Widelski J， Popova M， Graikou K.Coumarins from Angelica lucida L.Antibacterial activities.2009 ；14(8) 。
27、：2729-34. 0061 14Rosselli S， Maggio A， Bellone G.Antibacterial and anticoagulant activities of coumarins isolated from theflowers of Magydaris tomentosa.Planta Med.2007 ；73(2) ： 116-20. 0062 15Clark AM，EI-Feraly FS，Li WS.Antimicrobial activity of phenolic constituents of Magnolia grandifl omL.J Pham。
28、l Sci.1981.70 ：951-2. 0063 16Lee JY，Kang HS，Park BE，Moon HJ，Sim SS，Kim CJ.Inhibitory effects of Geijigajakyak-Tang ontrinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.J Ethnopharmacol.2009 Aug 28. 0064 17Jayaprakasam B， Doddaga S， Wang R， Holmes D， Goldfarb J， Li XM.Licorice flavonoids inhibit eotaxin-1。
29、 secretion by human fetal lung fibroblasts in vitro.J Agric Food Chem.2009 ；57(3) ：820-5. 0065 18Shih HC， Wei YH.Magnolol alter the course of endotoxin tolerance and provides 说 明 书 CN 101816773 B8/8 页 10 early protecion agaiustendotoxin challenge following sublethal hemorrhage in rats.Shock.2004， 22。
30、(4) ：358-363. 0066 19Kim SH，Lee MK，Lee KY，Sung SH，Kim J，Kim YC.Chemical constituents isolated from Paeonialactifl ora roots and their neuroprotective activity against oxidative stress in vitro.J Enzyme Inhib Med Chem.2009 ；24(5) ：1138-40. 0067 20Deon SM， Bok SH， Jang MK， et al.Comparison of antioxid。
31、ant effects of naringin and p robucol incholesterol-fed rabbits.Clinica Chimica Acta.2002，317(1-2)181-190. 0068 21Lo YC，Teng CM，C，hen CF，Chen CC，Hong CY.Magnolol and honokiol isolated from Magnolia oficinalispmtect rat heart mitochondriaagainst lipid peroxidation. Biochem Pharmacol.1994，47 ：549-53. 。
32、0069 22Bao ZJ，Yang XQ，Ding ZT，et al.Simultaneous determination of magnolol and honokiol by UVspectrophotometry and study on free radical searenger activity.Natural Product ResDevelop.2004，16(5) ：435-438. 0070 23Yao K， Zhang L， Ye PP.Protective effect of magnolol against hydrogen peroxide-induced oxi。
33、dative stressin human lens epithelial cells.Am J Chin Med.2009 ；37(4) ： 785-96. 0071 24Zhang XJ，Chen HL，Li Z，Zhang HQ，Xu HX，Sung JJ，Bian ZX.Analgesic effect of paeonifl orin in ratswith neonatal maternal separation-induced visceral hyperalgesia is mediated through adenosine A(1)receptorby inhibiting。
34、 the extracellular signal-regulated protein kinase(ERK)pathway.Pharmacol Biochem Behav.2009 ；94(1) ：88-97. 0072 25Teng CM，Chen CC，Ko FN，Lee LG，Huang TF，Chen YP，Hsu HY.Two antiplatelet agents from Magnoliaofi cinalis.Thromb Res.1988，50 ：757-65. 0073 26Ganapathy Ekambaram， Peramaiyan Rajendran， MAGESH。
35、 Yenkataraman， et al.Naringeninreducestumor size and weight lost in N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine-indu ced gastric carcinogenesis in rats.Nutrition Research.2008，28(2) ：106-112. 0074 27Moon KH， Pack MY.Cytotoxicity of cinnamicaldehyde on leukemia L1210 cells. Drug Chem Toxicol.1983 ；6(6) ：521-35. 说 明 书 CN 101816773 B1/1 页 11 图 1 说 明 书 附 图 。