技术领域
本发明涉及一种用于缓解体力疲劳的中药胶囊及其制备方法。
背景技术
在中医脏腑中与免疫和体力疲劳有关的包括肺、肝、肾三个脏腑。中医的“气”与人体 防御功能有关，如果“气”充沛，脏腑功能健全，抗病能力也强。中医的“气”包括肺吸入 的精气、肾的先天精气。与免疫关系最密切的为“肾”，“肾为先天之本”，肾主藏精，纳气。 中医认为“肾主骨”，“骨生髓”，肾与免疫活性细胞生成有关。肾虚病人补肾后免疫功能可以 改善。肺主气，肺气充足与否和人体免疫防御作用强弱有关。中医认为“肺主皮毛”，肺气充 沛则腠理固密，外邪不易侵入，肺气虚弱则人体防卫功能削弱，外邪易入侵，现代医学研究， 发现肺气虚病人免疫功能易降低。疲劳是机体复杂的生理生化变化过程，是机体生理过程不 能将其机能持续在一特定水平或器官不能维持其预定的运动强度的状态。疲劳是由于体力、 脑力过度，不合理的生活方式，不良的精神，情绪刺激，干扰了人体的正常活动产生的，这 和现代对于疲劳的研究认识是一致的。从病机分析，中医认为气血不足，脏腑功能衰弱是产 生疲劳的基础。根据《素问·三部九侯论》“虚则补之”，“衰则补之”。
灵芝，为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.的干燥子实体。性味，甘， 平。归心、肺、肝、肾经。具有补气安神，止咳平喘的功能。灵芝被视为珍贵的中药材，是中医 药宝库中的珍品。自古以来就有“仙草”、“瑞草”之称。灵芝含有人体所需的多种营养成分和调 节生理活动的活性物质。其中主要成分为灵芝多糖。
西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根。甘、微苦，凉。归心、肺、肾 经。具有补气养阴，清热生津的功能。药典规定用量为6-12g。现代研究表明，西洋参皂苷具有 明显的增强免疫力和抗疲劳作用。
枸杞子提取物为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实，性味：甘，平。归 肝、肾经。具有滋肝补肾，益精明目的功能。枸杞是我国重要的植物资源之一，枸杞果实的利用 价值最高，它既是名贵的中药材，又是良好的滋补品。
综合以上论述，灵芝提取物具有补气安神，止咳平喘的作用，西洋参具有补气养阴，清 热生津的功能，枸杞子提取物具有滋肝补肾，益精明目的功能。现代药理研究灵芝提取物、 西洋参、枸杞子提取物都具有增强免疫力和缓解体力疲劳的作用。根据上述各种原料的药效 特点，合理组合，即符合中医药理论，又有现代药理及临床研究依据，但是以它们为组合的 中药目前尚无。
发明内容
本发明旨在采用补肝肾、益精血的方法，提供一种用于缓解体力疲劳的中药胶囊及其制 备方法，以恢复体内正常脏器功能，从而消除疲劳。
本发明为实现上述目的，采用如下技术方案：
本发明用于缓解体力疲劳的中药胶囊，其特点在于：各原料按质量份的配比为：
灵芝提取物 6～10份；
西洋参 18～22份；
枸杞子提取物 15～19份；
将各原料加工成粉末后混合均匀，装入胶囊即得用于缓解体力疲劳的中药胶囊，每粒胶 囊的装量为0.45g。
本发明用于缓解体力疲劳的中药胶囊中各原料按质量份的优选配比为：
灵芝提取物 8份；
西洋参 20份；
枸杞子提取物 17份；
本发明所述用于缓解体力疲劳的中药胶囊的制备方法，其特点在于按如下步骤进行：
a、将枸杞子提取物过80目筛，得枸杞子提取物细粉；
将灵芝提取物过80目筛，得灵芝提取物细粉；
将西洋参饮片粉碎后过80目筛，得西洋参细粉；
b、按配比将枸杞子提取物细粉15～19份、灵芝提取物细粉6～10份和西洋参细粉18～22 份混合均匀，得总混合细粉；
c、将总混合细粉装入胶囊，每粒胶囊的装量为0.45g，即得用于缓解体力疲劳的中药胶 囊。
本发明用于缓解体力疲劳的中药胶囊的制备方法优选为：
a、将枸杞子提取物过80目筛，得枸杞子提取物细粉；
将灵芝提取物过80目筛，得灵芝提取物细粉；
将西洋参饮片粉碎后过80目筛，得西洋参细粉；
b、按配比将枸杞子提取物细粉17份、灵芝提取物细粉8份和西洋参细粉20份混合均匀， 得总混合细粉；
c、将总混合细粉装入胶囊，每粒胶囊的装量为0.45g，即得用于缓解体力疲劳的中药胶 囊。
本发明中的灵芝提取物和枸杞子提取物可以直接购买，也可以按照如下方式进行制备：
所述灵芝提取物的制备方法：将灵芝粉碎，加8倍质量的水在100℃提取3次，第1次2 小时，第2次1.5小时，第3次1小时，过滤，合并3次滤液，得灵芝水提取液；将灵芝水 提取液减压浓缩至相对密度在60℃时为1.25-1.30，得灵芝浓缩液；将灵芝浓缩液喷雾干燥或 在-0.07～-0.08Mpa下以60～70℃真空干燥4～6小时，然后粉碎，即得灵芝提取物；
所述枸杞子提取物的制备方法：将枸杞子粉碎，加8倍质量的水在100℃提取3次，每 次2小时，过滤，合并3次滤液，得枸杞子水提取液；将枸杞子水提取液减压浓缩至相对密 度在60℃时为1.25-1.30，得枸杞子浓缩液；将枸杞子浓缩液喷雾干燥或在-0.07～-0.08Mpa 下以60～70℃真空干燥4～6小时，然后粉碎，即得枸杞子提取物。
与已有技术相比，本发明的有益效果体现在：
本发明以灵芝提取物、西洋参、枸杞子提取物为主要原料，合理设计各原料的配比，使 各原料协同作用，制成的保健食品中药胶囊经试验证明具有增强免疫力和缓解体力疲劳的保 健功能；此外本发明的中药胶囊无任何毒性，也无任何药物依赖性，适用于睡眠状况不佳者， 易于推广。
本发明的中药胶囊的服用方法是：每日2次，每次2粒。
具体实施例
实施例1
本实施例中：
灵芝提取物：购自西安奥晶科技发展有限公司；
西洋参饮片：购自河北祁新中药颗粒饮片有限公司；
枸杞子提取物：购自西安奥晶科技发展有限公司。
本实施例按如下步骤制备用于缓解体力疲劳的中药胶囊：
a、将枸杞子提取物过80目筛，得枸杞子提取物细粉；
将灵芝提取物过80目筛，得灵芝提取物细粉；
将西洋参饮片粉碎后过80目筛，得西洋参细粉；
b、按配比将枸杞子提取物细粉200g、灵芝提取物细粉80g和西洋参细粉170g置混合机 中混合，混合时间为20min，混合均匀，得总混合细粉；
c、将总混合细粉置全自动硬胶囊充填机进行充填胶囊，每粒胶囊的装量为0.45g，即得 用于缓解体力疲劳的中药胶囊。
用本实施例的中药胶囊进行毒理学安全性试验：对雌雄小鼠和雌雄大鼠经口急性毒性 (MTD)均大于15.0g/Kg·BW，属无毒级。三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓细胞 微核试验和小鼠睾丸染色体畸变试验)结果均为阴性。
用本实施例的中药胶囊进行30天喂养实验：
选用体重65-80g，SPF级Wistar大鼠80只，随机分成四组，每组20只，雌雄各半，分 别作为样品三个剂量组(0.75g/Kg·BW、1.50g/Kg·BW、3.00g/Kg·BW)及空白对照组，将样 品掺入基础饲料饲喂，单笼喂养，自由饮食，连续喂养30天，每周称重一次。连续喂养30 天后，逐只称重，取血进行血液学检查和生化指标测定，处死小鼠，大体解剖，观察有无明 显病变，取肝脏、肾脏、脾脏、睾丸(或卵巢)进行称重并计算脏器系数，并对肝脏、肾脏、 脾脏、睾丸(或卵巢)、胃及十二指肠进行组织学检查。
结果：以0.75g/Kg·BW、1.50g/Kg·BW、3.00g/Kg·BW(分别相当于人拟用剂量的25倍、 50倍、100倍)的中药胶囊内容物掺入饲料中喂饲大鼠30天，在试验期间，各组动物体重、 增重、食物利用率及脏体比值与对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)；血液学指标、 生化指标均在正常范围内，大体解剖未见异常，未发现与受试样品相关的病理组织学改变。 本品经大鼠30天喂养试验未见明显的毒性作用。
用本实施例的中药胶囊进行增强免疫力功能动物实验：
1材料和方法
1.1受试样品：本发明中药胶囊的内容物，棕色粉末，样品核准净含量为0.45g/粒，人 体推荐剂量为：1.8g/60kgBW。
1.2实验动物：18～22g昆明中国SPF级雌性小鼠192只，共分为四批进行实验，每批随 机分为4组，每组12只。实验一批进行脏器/体重比值测定、迟发型变态反应实验、半数溶 血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数的测定；实验二批进行碳廓清实验；实验三批进行小 鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；实验四批进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和 NK细胞活性测定。
1.3剂量：本发明中药胶囊的推荐剂量为成人(按60kg体重计)每日1.8g相当于0.03g/ 日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.15g/kgBW、0.30g/kgBW、 0.90g/kgBW为低、中、高剂量组。受试样品以无菌水配制，每日一次经口给予，连续灌胃 33天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.1ML/10g鼠重。同时设一空白对照组(0g/kgBW)，用 无菌水代替受试样品，每日灌胃体积与各受试样品组相同。各剂量组均给予基础饲料。
1.4实验方法：
1.4.1脏器体重比值的测定
小鼠称重后颈椎脱臼处死，取脾脏和胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称 重，计算脾脏体重比值和胸腺体重比值。
1.4.2迟发型变态反应(DTH)实验(足跖增厚法)
取养血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC (2000r/min，10min)0.2mL，致敏后4h，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均 值。然后在测量部位皮下注射20％(v/v，用生理盐水配制)压积SRBC20μL，于注射后24h 测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。受试样品组的差值显 著高于对照组的差值，可判定该实验结果为阳性。
1.4.3ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细 胞悬液。经过200目筛网过滤，制成细胞悬液。用Hank’s液洗3次，每次离心10min (1000r/min)。然后将细胞悬浮于1ml的完全培养液中，镜检计数，调整细胞浓度为3×106个/ml。再将脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，在其中一孔加75μl ConA液 (相当于7.5μg/ml)另一孔作为对照，置5％CO2，37℃CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h， 每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT (5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫 色结晶完全溶解。然后将此液体移入比色杯中，在755分光光度计上比色测定，波长 570nm。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴 细胞的增殖能力。受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验 结果阳性。
1.4.4抗体生成细胞数的测定(Jeren改良玻片法)
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配置)压积 SRBC0.2ml。将SRBC免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏，轻轻磨碎脾脏，制成细 胞悬液。离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮在8ml Hank’s液中。 将琼脂糖加热溶解后，与等量双倍Hank’s混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加10％ (v/v，用SA液配置)压积SRBC50μl、脾细胞悬液8μl，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄 层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中 37℃温育1h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后， 计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞来表示。受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑 数，可判定该项实验结果阳性。
1.4.5半数溶血值(HC50)的测定
取羊血，生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(V/V,用生理盐水配制)压积 SRBC0.2ml进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥 离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为300 倍，取1ml置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配置)压积SRBC0.5ml，补体1ml (用SA缓冲液按1:8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水 浴中保温15min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清1ml，加都氏试剂至3ml。 同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)的压积SRBC0.25ml，加都氏试剂至4ml于另一试管 中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管做空白，分别测定各管光密度值。溶血 素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算：
样品半数溶血值＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数
受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50，可判定该项实验结果阳性。
1.4.6小鼠碳廓清实验
按体重从小鼠尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁(0.05ml/10g)。待墨汁注入，立即计时、 注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并将其加到2ml0.1％Na2CO3溶液中。 用755分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD)，以Na2CO3溶液做空白对照。将小鼠 处死，取肝脏和脾脏称重。以碳廓清指数(a)表示小鼠碳廓清的能力按下式计算a：
K＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1) a＝体重÷(肝重+脾重)×K1/3
受试样品组的碳廓清指数显著高于对照组的碳廓清指数，可判定该项实验结果阳性。
1.4.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)
小鼠腹腔注射20％(v/v，用生理盐水配置)鸡红细胞(2000r/min,10min)悬液1ml，间 隔30min，颈椎脱臼处死，将其仰位固定于鼠板上，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板 1min。取腹腔巨噬细胞洗液1ml，分别滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移 至37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1:1丙酮 甲醇溶液固定，Gicmsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数100 个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：
吞噬百分率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100
吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
得出的吞噬百分率再按下式进行数据转换，式中P为吞噬百分率，用小数 表示。所得数据为计量资料，受试样品组的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组的吞噬 百分率和吞噬指数，可判定该项实验结果阳性。
1.4.8NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)
实验前24h将靶细胞YAC-1进行传代培养，应用前以Hank’s液洗3次，用含10％小牛 血清的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/ml。受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取 脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆 弹起，加入0.5ml灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5ml2倍Hank’s液及8ml Hank’s液， 1000r/min，10min离心，用1ml含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，镜检计数， 用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/ml。使效靶比为50:1。取靶细胞和效应细 胞各100μL，加入U形96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细 胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，37℃、5％CO2培养 箱中培养4h，将96孔板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中， 加入LDH基质液100μL，反应3-10min，然后每孔加入1mol/L的HCI溶液30μL终止反应， 在酶标仪490nm处侧光密度值(OD)，计算NK细胞活性：
NK细胞活性(％)＝(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD) ×100
得出的NK细胞活性按下式进行数据转换，式中P为NK细胞活性，用小数表 示。所得数据为计量资料，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，可 判定该项试验结果阳性。
1.5数据处理
用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检 验，方差齐，计算F值，F值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05， 用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进 行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后 仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
1.6结果判定依据
《保健食品检验和评价技术规范》(2003版)规定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、 单核－巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有 增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个试验结果均为阳性，或任一个实 验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的 两个试验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结 果阳性。单核－巨噬细胞功能测定项目中的两个试验结果均为阳性，或任一个实验的两个剂 量组结果阳性，可判定单核－巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂 量组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。
2结果
2.1受试样品对小鼠体重的影响
表1各组小鼠的初始体重
由表1可见，小鼠的初始体重在四批实验动物各剂量组与0g/kgBW组间比较，差异均无 显著性(p>0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
表2受试样品对小鼠体重的影响
由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，小鼠体重在四批各剂量组与 0g/kgBW组间比较，差异均无显著性(p>0.05)。即受试样品对小鼠体重无不良影响。
2.2受试样品对小鼠脏器/体重比值的影响
表3受试样品对小鼠脾脏/体重比值的影响
由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，各剂量组脾脏/体重比值与 0g/kgBW组比较，差异均无显著性(P>0.05)。即受试样品对小鼠的脾脏/体重比值无特别影 响。
表4受试样品对小鼠胸腺/体重比值的影响
由表4可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，各剂量组胸腺/体重比值与 0g/kgBW组比较，差异均无显著性(P>0.05)。即受试样品对小鼠的胸腺/体重比值无特别影 响。
2.3受试样品对小鼠细胞免疫功能的影响
表5受试样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
﹡：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW 组与0g/kgBW组比较，小鼠足跖肿胀度有显著性差异(P<0.05)。即受试样品在0.30g/kgBW 组、0.90g/kgBW组能提高小鼠足跖肿胀度。
表6受试样品对小鼠淋巴细胞转化实验的影响
﹡：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW 组与0g/kgBW组比较，小鼠淋巴细胞增殖能力有显著性差异(P<0.05)。即受试样品在 0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW组能提高小鼠淋巴细胞增殖能力。
2.4受试样品对体液免疫的影响
表7受试样品对小鼠抗体生成细胞数的影响
﹡：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW 组与0g/kgBW组比较，抗体生成细胞数有显著性差异(P<0.05)。即受试样品在0.30g/kgBW 组、0.90g/kgBW组能提高小鼠抗体生成细胞数。
表8受试样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响
由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，各剂量组小鼠半数溶血值与 0g/kgBW组比较，差异均无显著性(P<0.05)。即受试样品对小鼠半数溶血值无影响。
2.5受试样品对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
表9受试样品对小鼠碳廓清能力的影响
﹡：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，0.30g/kgBW组与0g/kgBW组 比较，小鼠的碳廓清能力有显著性差异(P<0.05)。0.90g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠 的碳廓清能力有显著性差异(P<0.01)。即受试样品在0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW组能提 高小鼠的碳廓清能力。
表10受试样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响
﹡：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表10可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，0.30g/kgBW组与0g/kgBW 组比较，吞噬率有显著性差异(P<0.05)。即受试样品在0.30g/kgBW组能提高小鼠巨噬细胞 吞噬鸡红细胞吞噬率。
表11受试样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响
﹡：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表11可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW 组与0g/kgBW组比较，吞噬指数有显著性差异(P<0.05)。即受试样品在0.30g/kgBW组、 0.90g/kgBW组能提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数。
2.6受试样品对小鼠NK细胞活性的影响
表12受试样品对小鼠NK细胞活性的影响
由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品33天后，各剂量组NK细胞活性与 0g/kgBW组比较，差异均无显著性(P>0.05)。即受试样品对小鼠NK细胞活性无影响。
3总结
经口给予小鼠不同剂量的受试样品(本发明中药胶囊的内容物)33天后，与0g/kgBW组 比较，该受试样品在0.30g/kgBW组能提高小鼠足跖肿胀度(P<0.05)、提高小鼠淋巴细胞增 殖能力(P<0.05)、提高小鼠抗体生成细胞数(P<0.05)、提高小鼠的碳廓清能力(P<0.05)、 提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率(P<0.05)和吞噬指数(P<0.05)；在0.90g/kgBW组 能提高小鼠足跖肿胀度(P<0.05)、提高小鼠淋巴细胞增殖能力(P<0.05)、提高小鼠抗体 生成细胞数(P<0.05)、提高小鼠的碳廓清能力(P<0.01)、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细 胞吞噬指数(P<0.05)。受试样品对小鼠体重增长无不良影响。根据《保健食品检验与评价 技术规范》(2003版)对增强免疫力保健食品的判定标准可知，本实施例的中药胶囊具有增 强免疫力的功能。
用本实施例的中药胶囊进行缓解体力疲劳功能动物实验：
1材料和方法
1.1受试样品：本发明中药胶囊的内容物，棕色粉末，样品核准净含量为0.45g/粒，人 体推荐剂量为：1.8g/60kgBW。
1.2实验动物：18～22g昆明种健康清洁级雄性小鼠204只，共分为四批进行实验，每 批随机分为4组，实验一批每组15只，其余三批每组12只。实验一批进行负重游泳实验， 实验二批进行血清尿素的测定，实验三批进行肝糖原的测定，实验四批进行血乳酸的测定。
1.3剂量：本发明中药胶囊的推荐剂量为成人(按60kg体重计)每日1.8g相当于0.03g/ 日/kg体重。实验设人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即每日0.15g/kgBW、0.30g/kgBW、 0.90g/kgBW为低、中、高剂量组。受试样品以无菌水配制，每日一次经口给予，连续灌胃 32天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.1ML/10g鼠重。同时设一空白对照组(0g/kgBW)，用 无菌水代替受试样品，每日灌胃体积与各受试样品组相同。各剂量组均给予基础饲料。
1.4实验方法：
负重游泳实验：末次给小鼠受试样品30min后，将尾根部负荷5％体重铅丝的小鼠置于 游泳箱中游泳。水深30cm，水温25.0℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小 鼠负重游泳时间。游泳时间为计量资料，若受试样品组游泳时间明显长于空白对照组游泳时 间，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试样品有延长小鼠负重游泳时间的作用。
血清尿素测定：末次给小鼠受试样品30min后，在温度为30℃的水中游泳90min，休息 60min后立即拔眼球采血0.5mL。置4℃冰箱约3h，血凝固后2000r/min离心15min，取血 清。于VITALAB SELECTRA-E型生化分析仪上测定。所得数据为计量资料，若受试样品组 血清尿素含量明显低于空白对照组，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试样品有减少 疲劳小鼠尿素产生的作用。
肝糖原测定(蒽酮法)：末次给小鼠受试样品30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水 漂洗后用滤纸吸干，称取肝脏约100mg，加入4mLTCA，匀浆1min，将匀浆液倒入离心管， 以3000r/min离心15min，取上清液0.5mL，加95％乙醇2Ml，充分混匀至两种液体间不留有 界面，用干净塞子塞上，室温下竖立放置过夜。次日以3000r/min离心15分钟。小心倒掉上 清液并使试管倒立放置10min。用2ml蒸馏水溶解糖原待测。取0.25mL待测液和0.25mL蒸 馏水放入试管中，混匀。试剂空白管：吸0.5mL蒸馏水到干净试管。标准管：吸0.125mL葡 萄糖标准液(50mg/dL)和0.375mL蒸馏水放入试管中，混匀。
将2.5mL蒽酮试剂用力加入各管，冷水冲凉后，沸水浴15min，然后移到冰水浴，冷却 后在620min波长下，用试剂空白管调零后测定吸光度。按下式计算肝糖原含量：
DU：样品管吸光度； V：提取液体积(mL)；16为稀释倍数；
DS：标准管吸光度； 0.0625:0.125mL葡萄糖标准液中的葡萄糖含量；
G：肝组织重量(g)； 0.9：将葡萄糖换算成糖原的系数。
所得数据为计量资料，若受试样品组肝糖原含量明显高于空白对照组，且差异有显著性 (P<0.05)，可判定该受试样品有促进小鼠肝糖原储备的作用。
血乳酸测定：末次给小鼠受试样品30min后，采血20μL加入40μL破膜液中，振荡均 匀。然后使小鼠在温度为30℃的水中游泳10min后停止，立即采血20μL，加入40μL破膜 液中，振荡均匀。休息20min后，再各采血20μL，加入40μL破膜液中，振荡均匀。用乳 酸测定仪测定，所得值乘3即为血乳酸值(mmol/L)。按下式计算三个时间点血乳酸曲线下 面积：
血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息 20min的血乳酸值)。
所得数据为计量资料，若受试样品组血乳酸曲线下面积明显低于空白对照组，且差异有 显著性(P<0.05)，可判定该受试样品有减少小鼠游泳后血乳酸曲线下面积的作用。
1.5数据处理：用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先 进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值 ≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方 差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统 计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
1.6结果判定依据：若负重游泳实验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原三项生化 指标中任二项指标阳性，即可判定该受试样品具有缓解体力疲劳的功能。
2结果
2.1受试样品对小鼠体重的影响
表13各组小鼠的初始体重
由表13可见，小鼠的初始体重在四批实验动物各剂量组与0g/kgBW组间比较，差异均 无显著性(P>0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
表14受试样品对小鼠体重的影响
由表14可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品32天后，小鼠体重在四批实验动物各 剂量组与0g/kgBW组间比较，差异均无显著性(P>0.05)。即受试样品对小鼠的体重无不良 影响。
2.2受试样品对小鼠负重游泳时间的影响
表15受试样品对小鼠负重游泳时间的影响
﹡：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表15可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品32天后，0.90g/kgBW组与0g/kgBW 组比较，负重游泳时间有显著性差异(P<0.05)。即受试样品在0.90g/kgBW组能延长小鼠的 负重游泳时间。
2.3受试样品对小鼠游泳后血清尿素水平的影响
表16受试样品对小鼠游泳后血清尿素含量的影响
*:与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表16可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品32天后，0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW 组与0g/kgBW组比较，血清尿素含量有显著性差异(P<0.05)。既受试样品在0.30g/kgBW 组、0.90g/kgBW组能减少疲劳小鼠血清尿素产生。
2.4受试样品对小鼠肝糖原含量的影响
表17受试样品对小鼠肝糖原含量的影响
由表17可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品32天后，各剂量小鼠肝糖原含量与 0g/kgBW组比较，差异均无显著性((P＞0.05)。即受试样品对小鼠肝糖原含量无影响
2.5受试样品对小鼠游泳后血乳酸值的影响
表18受试样品对小鼠游泳后血乳酸值的影响
*：与0g/kgBW组比较有显著性差异
由表18可见，经口给予小鼠不同剂量的受试样品32天后，0.150g/kgBW组、 0.30g/kgBW组与0g/kgBW组比较，小鼠游泳后血乳酸曲线下面积有显著性差异(P<0.05)； 0.90g/kgBW组与0g/kgBW组比较，下述游泳后血乳酸曲线下面积有显著性差异(P<0.01)。 即受试样品在0.15g/kgBW组、0.30g/kgBW组、0.90g/kgBW组能减少小鼠游泳后血乳曲线下 面积。
3.结论
经口给予小鼠不同剂量的受试样品32天后，与0g/kgBW组比较，该受试样品在 0.15g/kgBW组能减少小鼠游泳后血乳酸曲线下面积(p<0.05)；该受试样品在0.30g/kgBW 组能减少疲劳小鼠血清尿素产生(P<0.05)、减少小鼠游泳后血乳酸曲线下面积(P<0.05)； 在0.90g/kgBW组均能延长小鼠的负重游泳时间(P<0.05)、减少疲劳小鼠血清尿素产生 (P<0.05)、减少小鼠游泳后血乳酸曲线下面积(P<0.01)。受试样品对小鼠体重增长无不 良影响。根据《保健食品检验与评价计数规范》(2003)版)对缓解体力疲劳保健食品的判定 标准可知，受试样品具有缓解体力疲劳的功能。
实施例2
本实施例用于缓解体力疲劳的中药胶囊中各原料按质量份的配比为：
灵芝提取物 6份；
西洋参 22份；
枸杞子提取物 15份；
本实施例用于缓解体力疲劳的中药胶囊的制备方法是：
a、制备灵芝提取物：将灵芝粉碎，加8倍质量的水在100℃提取3次，第1次2小时， 第2次1.5小时，第3次1小时，过滤，合并3次滤液，得灵芝水提取液；将灵芝水提取液 减压浓缩至相对密度在60℃时为1.28，得灵芝浓缩液；将灵芝浓缩液在-0.07Mpa下以65℃ 真空干燥5小时，然后粉碎，即得灵芝提取物；
制备枸杞子提取物：将枸杞子粉碎，加8倍质量的水在100℃提取3次，每次2小时， 过滤，合并3次滤液，得枸杞子水提取液；将枸杞子水提取液减压浓缩至相对密度在60℃时 为1.28，得枸杞子浓缩液；将枸杞子浓缩液在-0.07Mpa下以65℃真空干燥5小时，然后粉碎， 即得枸杞子提取物；
b、将枸杞子提取物过80目筛，得枸杞子提取物细粉；
将灵芝提取物过80目筛，得灵芝提取物细粉；
将西洋参饮片粉碎后过80目筛，得西洋参细粉；
c、按配比将枸杞子提取物细粉150g、灵芝提取物细粉60g和西洋参细粉220g混合均匀， 得总混合细粉；
d、将总混合细粉装入胶囊，每粒胶囊的装量为0.45g，即得用于缓解体力疲劳的中药胶 囊。
本实施例所得样品经毒理学安全性试验和30天喂养实验证明为无毒级，经增强免疫力功 能动物实验证明具备增强免疫力的功能，经缓解体力疲劳功能动物实验证明具备具有缓解体 力疲劳的功能。
实施例3
本实施例中：
灵芝提取物：购自西安奥晶科技发展有限公司；
西洋参饮片：购自河北祁新中药颗粒饮片有限公司；
枸杞子提取物：购自西安奥晶科技发展有限公司。
本实施例用于缓解体力疲劳的中药胶囊中各原料按质量份的配比为：
灵芝提取物 10份；
西洋参 18份；
枸杞子提取物 19份；
本实施例用于缓解体力疲劳的中药胶囊的制备方法是：
a、将枸杞子提取物过80目筛，得枸杞子提取物细粉；
将灵芝提取物过80目筛，得灵芝提取物细粉；
将西洋参饮片粉碎后过80目筛，得西洋参细粉；
b、按配比将枸杞子提取物细粉190g、灵芝提取物细粉100g和西洋参细粉180g混合均 匀，得总混合细粉；
c、将总混合细粉装入胶囊，每粒胶囊的装量为0.45g，即得用于缓解体力疲劳的中药胶 囊。
本实施例所得样品经毒理学安全性试验和30天喂养实验证明为无毒级，经增强免疫力功 能动物实验证明具备增强免疫力的功能，经缓解体力疲劳功能动物实验证明具备具有缓解体 力疲劳的功能。