技术领域
本发明涉及一种脂质体固体制剂，具体涉及一种奥沙碘铵脂质体固体制剂及其制备方法，属于医药技术领域。
背景技术
奥沙碘铵，化学名为1-(2-环己基-2-苯基-1，3-二氧戊环-4-基-甲基)-1-甲基哌啶碘化物，分子式为C22H34INO2，分子量471.42，结构式为：
奥沙碘铵是日本Taisho Toyama制药公司开发的一种解痉药，它是在二苯基哌啶甲基二氧戊环碘化物的基础上以环己基替代其中的一个苯基而开发出来一种抗胆碱药，但是他的作用功效是二苯基哌啶甲基二氧戊环碘化物数倍，奥沙碘铵的散瞳作用和唾液抑制作用要较远远小于阿托品，奥沙碘铵对中枢神经的无作用，也未见奥沙碘铵的其他副作用发生。日本临床研究机构对968名使用奥沙碘铵的患者的研究调查发现，奥沙碘铵对因下列疾病引起的疼痛的治疗有效率分别是：胃炎、胃与十二指肠溃疡、肠炎的总有效率为77.2％(563/729)；胆囊炎和胆道疾病的总有效率为72.5％(50/69)，尿结石的总有效率为68.8％(117/170)。同时对2587名应用奥沙碘铵的患者做的调查发现，共有207例发生不良反应，不良反应发生率是8.00％，其中主要的不良反应是口干，占83例(3.21％)，其次是便秘，占54例(2.09％)，最后是腹胀，占16例(0.62％)。由此可见奥沙碘铵临床应用是安全有效的。奥沙碘铵的作用机理是直接作用于平滑肌，能够抑制运动机能亢进、舒缓痉挛性疼痛、改善微循环。临床上应用于因痉挛引起的疼痛，以及运动机能紊乱症，主要用于治疗胃炎，胃与十二指肠溃疡，肠炎，胆囊和胆汁疾病，泌尿结石等疾病。
脂质体(liposomes)最早是1965年被英国Banghan等作为研究生物膜的模型提出的。Banghan等发现，当磷脂分散在水中时形成多层囊泡，而且每一层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开。后来将这种由脂质双分子组成，内部为水相的闭合囊泡称为脂质体。
人们通过研究发现，脂质体作为药物的载体能够控制药物的释放，提高药物靶向性，减少药物毒性和副作用，提高药物疗效。
如果能将奥沙碘铵制成脂质体，则有望克服现有的奥沙碘铵制剂存在的一系列问题，提高 药物的稳定性，延长药物在体内的保留时间，长久发挥药效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反应的发生率，改进治疗速度和治疗效果。
不过，制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如包封率、稳定性、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的奥沙碘铵脂质体是亟待解决的课题。
发明内容
本发明人经过长期认真地研究，发现可以将奥沙碘铵、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、泊洛沙姆188和大豆甾醇按照特定的比例制备成脂质体，再将脂质体和药学可接受的载体或赋形剂制成颗粒剂，从而完成了本发明。
本发明提供的奥沙碘铵脂质体包封率高，稳定性好，生物利用度高，可解决脂质体的稳定性和包封率不佳的技术问题，获得了意想不到的效果，从而提高了制剂的产品质量。
本发明的目的在于提供一种奥沙碘铵脂质体固体制剂及其制备方法，通过将活性成分奥沙碘铵、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、泊洛沙姆188和大豆甾醇制备成脂质体，再和药学可接受的载体或赋形剂制成固体制剂。
作为本发明的目的之一，奥沙碘铵脂质体制剂包括以下重量配比的组分的原辅料制成：
作为本发明一优选实施方案，上述所述的奥沙碘铵脂质体制剂包括以下重量配比的组分的原辅料制成：
更优选地，所述原辅料包括以下重量配比的组分：
在本发明的奥沙碘铵脂质体中，使用的磷脂材料为大豆磷脂酰肌醇。
用于形成的常用磷脂材料种类繁多，包括大豆卵磷脂、卵磷脂、蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、大豆磷脂酰肌醇、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、棕榈酰肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、棕榈酰硬脂酰磷脂酰胆碱、硬脂酰棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、和二棕榈酰磷脂酰丝氨酸等。
本发明人经过锐意研究发现，在通常的磷脂材料中，适当量的作为天然磷脂的大豆磷脂酰肌醇能用于形成品质优良的奥沙碘铵脂质体，通过本发明中提供的方法能形成适当大小、适当结构成分的包封率高的脂质体，而且这些成分，尤其是奥沙碘铵，在所形成的脂质体中不渗漏。
本发明的奥沙碘铵脂质体中，基于1重量份奥沙碘铵而言，如果大豆磷脂酰肌醇的量低于2.2重量份，则无法形成稳定的脂质体，如果大豆磷脂酰肌醇的量高于17重量份，则奥沙碘铵的包封率降低，而且脂质体的稳定性有所下降。
本发明的奥沙碘铵脂质体中，胆固醇调节脂质体的膜结构，调节膜结构的流动性和通透性。基于1重量份奥沙碘铵而言，0.6-8重量份的胆固醇能形成稳定性良好的脂质体。
在本发明的奥沙碘铵脂质体中，泊洛沙姆188进一步增强脂质体的稳定性。基于1重量份奥沙碘铵而言，1.5-7重量份的泊洛沙姆188能形成稳定性良好的脂质体。
在本发明的奥沙碘铵脂质体中，大豆甾醇进一步增强脂质体的稳定性。基于1重量份奥沙碘铵而言，0.5-4重量份的大豆甾醇能形成稳定性良好的脂质体。
所述大豆甾醇是大豆甾醇葡萄糖苷去葡萄糖残基的水解产物，而大豆甾醇葡萄糖苷是从经提炼豆油的大豆残渣中分离出来的甾醇葡萄糖苷的混合物，是天然来源的产物，安全性高，易于获得，且价格便宜。
在本发明的奥沙碘铵脂质体中，通过适量配比的胆固醇、泊洛沙姆188和大豆甾醇的对膜结构的协同调节促进作用，能形成包封率高、稳定性高的奥沙碘铵脂质体。
作为本发明的目的之二，还提供了一种奥沙碘铵脂质体制剂的制备方法，步骤如下：
(a)将奥沙碘铵、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、泊洛沙姆188和大豆甾醇溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到磷脂膜；
(b)加入缓冲溶液使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化，通过微孔滤膜进行过滤，制得脂质体混悬液；
(c)将上述脂质体混悬液喷雾干燥，制得奥沙碘铵脂质体粉末。
优选地，上述制备方法步骤(a)中，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇、乙腈、正丁醇、叔丁醇、苯甲醇、正己烷和二氯甲烷中的一种或几种，优选体积比为1∶5的甲醇和异丙醇的混合溶剂；
优选地，上市制备方法步骤(b)中，所述缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液中的一种，优选为pH为5.4的醋酸-醋酸钠缓冲溶液；
优选地，上市制备方法步骤(b)中，用于过滤的微孔滤膜孔径为0.45μm。
优选地，上市制备方法步骤(b)中，具体步骤如下：
加入缓冲溶液，振摇，搅拌30分钟，转速为500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5-10分钟，转速5000-10000r/min，用孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液。
通过本发明提供的方法制备的奥沙碘铵脂质体粉末粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。
本发明的目的之三，还提供了一种奥沙碘铵脂质体固体制剂，由奥沙碘铵脂质体以及药学可接受的载体或赋形剂20-85重量份，基于1重量份奥沙碘铵；
优选地，奥沙碘铵脂质体固体制剂由以下重量配比的原辅料制成：
上述所述的奥沙碘铵脂质体固体制剂为颗粒剂，规格为10mg、20mg和40mg。
上述所述的奥沙碘铵脂质体固体制剂，其特征在于所述的药学可接受的载体或赋形剂选自稀释剂、甜味剂、粘合剂、芳香剂、酸度调节剂、崩解剂及其组合。各种药用辅料的用量可以由本领域技术人员根据各辅料在固体制剂中的一般用量进行选择，这在本领域技术人员的能力范围内。
进一步地，作为优选，稀释剂可以选自淀粉、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素、糊精、甘露醇、氧化镁中的一种或几种，优选为微晶纤维素。其用量可以为所述颗粒剂总重量的5％-15％(重量/重量)，优选为6％-12％(重量/重量)。
进一步地，作为优选，甜味剂可以选自蔗糖、甘露醇、三氯蔗糖、甜菊素、阿斯帕坦中的一种或多种的组合，优选为蔗糖。其用量可以为所述固体制剂总重量的30％-80％(重量/重量)，优选为40％-75％(重量/重量)。
进一步地，作为优选，崩解剂可以选自羧甲淀粉钠、干淀粉、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮中的一种或多种的组合，优选为低取代羟丙纤维素。其用量可以为所述固体制剂总重量的2％-8％(重量/重量)，优选为3％-6％(重量/重量)。
进一步地，作为优选，粘合剂可以选自羟丙甲纤维素、聚维酮K30、羧甲基纤维素钠、黄原胶、阿拉伯胶、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素中的一种，优选为羟丙甲纤维素。其用量可以为所述固体制剂总重量的0.1％-1％(重量/重量)，优选为0.3％-0.5％(重量/重量)。
进一步地，作为优选，芳香剂可以选自草莓香精、桔子香精、柠檬香精、薄荷香精中的一种，优选为草莓香精，其用量可以为所述固体制剂总重量的0.2％-0.1％(重量/重量)，优选为0.4％-0.6％(重量/重量)。
进一步地，作为优选，酸度调节剂可以选自枸橼酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、含水硅酸中的一种，优选为枸橼酸，其用量可以为所述固体制剂总重量的0.05％-0.5％(重量/重量)，优选为0.15％-0.4％(重量/重量)。
本发明目的之四，还提供了一种奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)奥沙碘铵脂质体的制备：将奥沙碘铵、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、泊洛沙姆188、大豆甾醇一起制成脂质体粉末；
(2)奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备：将步骤(1)中所得奥沙碘铵脂质体和药学上可接受的载体或赋形剂混合，制备奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
作为优选，上述所述的方法中，步骤(2)包括如下步骤：
(d)将奥沙碘铵脂质体粉末和稀释剂、甜味剂、崩解剂、酸度调节剂混合，过60目筛混合均匀，加入溶有芳香剂的粘合剂溶液制备软材，过20-30目筛制粒，干燥；
(e)将干颗粒过18目筛整粒，总混；
(f)装袋，制得奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
在本发明的方法中，还可以根据需要对脂质体和/或脂质体颗粒剂进行灭菌。灭菌方法没有特殊要求，可以使用制药领域中常用的脂质体灭菌方法，如加热灭菌、过滤除菌、辐射灭菌或无菌操作等。
本发明先通过活性成分奥沙碘铵、大豆磷脂酰肌醇、胆固醇、泊洛沙姆188、大豆甾醇的特定的组合制备成脂质体，再和药学上可接受的载体或赋形剂混合制成颗粒剂。所得脂质体制剂的粒径小，分布均匀，包封率高，稳定性好，在水中的溶解性大，药物在血液循环中保留时间长，疗效显著；所用辅料简单廉价，利用度高，污染小，经济价值高；本发明提供的奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备方法提高了产品质量，降低了毒副作用，并且制备方法的设备简单，易于操作，极有利于工业化大生产。
在本文中，如果没有特别地说明，含量或用量都以重量份计，所采用的装置、仪器、原料、物质、用量、方法、时间、适度及其他条件都为本领域众所周知的，或者是本领域技术人员根据申请的描述结合现有技术可以获得的。
附图说明
图1是实施例1的奥沙碘铵脂质体颗粒剂和对比例1的奥沙碘铵脂质体颗粒剂的平均血药浓度与时间的关系曲线。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但是本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。
实施例1奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备
处方：
制备工艺
(a) 将10g奥沙碘铵、67g大豆磷脂酰肌醇、35g胆固醇、30g泊洛沙姆188和17g大豆甾醇溶于体积比为1∶5的甲醇和异丙醇的混合溶剂600ml中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到磷脂膜；
(b)加入pH为5.4的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，振摇，搅拌30分钟，转速为800r/min，使磷 脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5分钟，转速8000r/min，用孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液。
(c)将上述脂质体混悬液喷雾干燥，制得奥沙碘铵脂质体粉末。
(d)将奥沙碘铵脂质体粉末和720g蔗糖、60g微晶纤维素、1.5g枸橼酸和40g低取代羟丙纤维素混合，过60目筛混合均匀，加入溶有5g草莓香精的2％羟丙甲纤维素80％乙醇溶液制备软材，过20目筛制粒，50℃干燥；
(e)将干颗粒过18目筛整粒，总混；
(f)装袋，制得奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
对比例1 奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备
处方：
采用不同的脂质体组分，制备工艺同实施例1，制得奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
实施例2 奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备
处方：
制备工艺
(a)将20g奥沙碘铵、70g大豆磷脂酰肌醇、24g胆固醇、40g泊洛沙姆188和16g大豆甾醇溶于体积比为1∶5的甲醇和异丙醇的混合溶剂700ml中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到磷脂膜；
(b)加入pH为5.4的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，振摇，搅拌30分钟，转速为1000r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化10分钟，转速10000r/min，用孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液。
(c)将上述脂质体混悬液喷雾干燥，制得奥沙碘铵脂质体粉末。
(d)将奥沙碘铵脂质体粉末和700g蔗糖、80g微晶纤维素、3g枸橼酸和40g低取代羟丙纤维素混合，过60目筛混合均匀，加入溶有5g草莓香精的2％羟丙甲纤维素60％乙醇溶液制备软材，过30目筛制粒，60℃干燥；
(e)将干颗粒过18目筛整粒，总混；
(f)装袋，制得奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
对比例2 奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备
处方：
脂质体组分采用本发明限度范围之外，制备工艺同实施例2，制得奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
实施例3 奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备
处方：
制备工艺
(a)将40g奥沙碘铵、280g大豆磷脂酰肌醇、200g胆固醇、160g泊洛沙姆188和100g大豆甾醇溶于体积比为1∶5的甲醇和异丙醇的混合溶剂2000ml中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到磷脂膜；
(b)加入pH为5.4的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，振摇，搅拌30分钟，转速为500r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化8分钟，转速5000r/min，用孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液。
(c)将上述脂质体混悬液喷雾干燥，制得奥沙碘铵脂质体粉末。
(d)将奥沙碘铵脂质体粉末和850g蔗糖、200g微晶纤维素、6g枸橼酸和100g低取代羟丙纤维素混合，过60目筛混合均匀，加入溶有10g草莓香精的2％羟丙甲纤维素70％乙醇溶液制备软材，过24目筛制粒，55℃干燥；
(e)将干颗粒过18目筛整粒，总混；
(f)装袋，制得奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
对比例3 奥沙碘铵脂质体颗粒剂的制备
处方同实施例3，制备工艺不同于本发明，具体如下：
(a)将40g奥沙碘铵、280g大豆磷脂酰肌醇、200g胆固醇、160g泊洛沙姆188和100g大豆甾醇溶于体积比为1∶5的甲醇和异丙醇的混合溶剂2000ml中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到磷脂膜；
(b)加入pH为5.4的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，振摇，搅拌30分钟，置于超声波仪器中超声15分钟，用孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，制得脂质体混悬液。
(c)将上述脂质体混悬液喷雾干燥，制得奥沙碘铵脂质体粉末。
(d)将奥沙碘铵脂质体粉末和850g蔗糖、200g微晶纤维素、6g枸橼酸和100g低取代羟丙纤维素混合，过60目筛混合均匀，加入溶有10g草莓香精的2％羟丙甲纤维素70％乙醇溶液制备软材，过24目筛制粒，55℃干燥；
(e)将干颗粒过18目筛整粒，总混；
(f)装袋，制得奥沙碘铵脂质体颗粒剂。
试验例1 脂质体包封率的测定
采用超速离心的方法测定奥沙碘铵脂质体的包封率，具体操作步骤如下：
(1)离心样品溶液的制备：精密量取实施例1-3以及对比例1-3中于步骤(b)中制得的奥沙碘铵脂质体混悬液3ml，置于冷冻超速离心机中，15000r/min，4℃离心30分钟，取上清液，用于脂质体溶液中游离药物的含量测定。
(2)未离心的样品溶液的制备：精密量取实施例1-3和对比例1-3中于步骤(b)中制得的奥沙碘铵脂质体混悬液3ml，置于10ml棕色容量瓶中，加入5％的Triton X-100的乙醇溶液5ml破乳，用蒸馏水稀释并定容至刻度，摇匀，用于脂质体中总药物的含量测定。
(3)分别取上述(1)中所得奥沙碘铵脂质体的离心样品溶液与上述(2)中所得奥沙碘铵脂质体的未离心样品溶液，按相应色谱条件测定峰面积，并计算奥沙碘铵脂质体的离心样品溶液中药物浓度(C游离)及奥沙碘铵脂质体的未离心样品溶液中药物浓度(C总)，再分别乘以各自稀释倍数即得未包封药物的重量(W游离)及脂质体中药物的总重量(W总)，通过下式计算包封率，包封率＝(W总-W游离)/W总×100％。
分别对实施例1-3以及对比例1-3中的脂质体混悬液测量包封率，结果如下表1中所示。
表1 脂质体的包封率
由表1可知，与比较例中的脂质体相比，本发明的奥沙碘铵脂质体的包封率要高出很多。
通过比较实施例1与对比例1可知，在使用不同的脂质体组分时，本发明的包封率更高，说明奥沙碘铵脂质体包封率与脂质体组分的选择密切相关。
通过比较实施例2与重量配比不在本发明范围内的对比例2可知，本发明的脂质体具有更高的包封率。这表明，奥沙碘铵脂质体的包封率不仅与用于形成脂质体的成分有关，还与各成分的用量直接相关。
通过比较实施例3与对比例3可知，在使用同样的原辅料时，通过本发明方法制得的脂质体的包封率更高。
试验例2 脂质体粒径的测定
用电子显微镜观察实施例1-3和对比例1-3中制得的奥沙碘铵脂质体的粒径，结果如下表2中所示。
表2 脂质体的粒径
由表2可知，本发明实施例1-3中所得脂质体的平均粒径比对比例1-3中所得脂质体的平均粒径小很多，而且粒径大小均一。
现有研究表明，脂质体颗粒大小和分布均匀程度与其包封率和稳定性以及在人体内的停留时间有关，脂质体颗粒越小、粒径分布越均匀，其包封率和稳定性越高，在人体循环系统内的停留时间越长(参见药物新剂型，第一版，第十八章，408-468页，朱盛山主编，化学工业出版社)。将该文献全文引入此处作为参考。
因此，本发明的奥沙碘铵脂质体平均粒径小、粒径分布均匀是进一步促进其包封率、稳定性、在体内的保留时间时间长、生物利用度等性能优异的一个因素。
试验例3 测定本发明的奥沙碘铵脂质体颗粒剂在比格犬体内的血药浓度
将12条雄性比格犬(体重10-12kg，来自山东大学实验动物中心)随机分成2组。在其中一组中，每条比格犬分别灌胃给予实施例1中制备的奥沙碘铵脂质体颗粒剂，每天灌胃一次，每次40mg；在另外一组中，以相同方式分别灌胃给予每条比格犬以对比例1的奥沙碘铵脂质体颗粒。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h由每条比格犬腿静脉采血3ml，血样经处理后，以建立的HPLC-MS法测定血药浓度。制作本发明实施例1的奥沙碘铵脂质体颗粒剂和对比例1的奥沙碘铵脂质体颗粒的平均血药浓度与时间的关系曲线，如图1中所示。
由图1可知，与对比例1的奥沙碘铵脂质体颗粒相比，服用本发明实施例1的奥沙碘铵脂质体颗粒剂具有以下特点：药物吸收迅速、达峰时间快、峰浓度高。表明本发明的制剂具有起效迅速、生物利用度高等特点。
试验例4 脂质体的稳定性研究
通过加速试验，考察本发明实施例1-3和对比例1-3中的奥沙碘铵脂质体颗粒剂的稳定性。在高温40℃、高湿75％条件下进行加速试验，共计180天，结果如下表3所示。
表3 加速试验结果
由表3可知，本发明实施例1-3的奥沙碘铵脂质体颗粒剂的稳定性高于对比例1-3的奥沙碘铵脂质体颗粒剂。