技术领域
本发明属于医疗器械领域，具体地涉及一种稳定的医用冲洗液及其制备方法。
背景技术
由于机械化工业时代，各种意外而导致的伤害日益增多，如何更好地促进患者伤口愈合，减轻患者痛苦是很多人努力的方向。
在外科手术及创伤处理过程中，医护工作者往往采用多方面的措施进行处理，例如止血剂、消炎剂、伤口冲洗剂等，目前常用的医用冲洗液一般为氯化钠注射液，其流动性好，洁净无污染，对于手术过程中清创具有很重要的意义。
但是，氯化钠注射液作为医用冲洗液尚有不足之处。例如无保湿性能，无润滑度性能以及无抑菌效果等。
羧甲基壳聚糖是一种新型外科辅料，人们在对其不断的研究中已经发现其具有水溶性好、生物易降解、组织相容性好等优点，目前，以羧甲基壳聚糖作为原料制备溶液剂，主要用于术后止血及防粘连，其作用是防止手术中及手术后粘连，其缺点是，为提高防粘连效果，一般多采用高分子量的羧甲基壳聚糖，但伴随着防粘连效果的提高，溶液的流动性大大下降，冲洗能力下降，因此，临床上此类产品仍需与生理盐水冲洗液配合使用，各自起到防粘连和冲洗清创作用，此外，羧甲基壳聚糖溶液剂的稳定性问题，也一直都是困扰本领域技术人员的难题。
中国专利申请CN101011606公开了一种防粘连冲洗液，其组成为：羧甲基壳聚糖0.01~5%，氯化钠0.01~1%，磷酸二氢钠0~1%，磷酸氢二钠0~1%，其余为水；防粘连冲洗液成品的运动粘度在0.1~20mm2/s之间，其pH值在6~8之间。
中国专利申请CN100387238公开了一种外科围手术使用的医用止血防粘连冲洗液，其组成为：壳聚糖0.1~0.8%，氯化钠0.6~0.9%或甘露醇3.0~5.0%或甘氨酸1.0~2.0%，余量为水。
以上两个专利都只考虑了羧甲基壳聚糖或壳聚糖的防粘连性质，并没有考察其他方面，例如冲洗能力，保湿润滑能力，以及稳定性等方面。
中国专利申请CN101259137公开了一种即配型医用止血防粘连冲洗液，其组成为：水溶性壳聚糖0.1~1.5%，调节渗透压的物质：氯化钠0.1~0.9%，或甘露醇3.0~5.0%，或甘氨酸1.0~2.0%，余量为注射用水。该冲洗液中的水溶性壳聚糖和调节渗透压的物质需分别放置，临用时配制，使用不便。
1962年，英国Winter博士在动物实验中证实：在湿性环境中，伤口愈合速度是干性环境下的2倍。1963年Hinman在人体上得到同样的结果。2000年8月，美国食品与药品管理局（FDA）在新颁布的行业指南中特别强调：保持创面湿润环境是标准的伤口处理方法。
但是，众所周知，湿性环境往往同时伴随着细菌感染的加剧，细菌更容易在潮湿的环境中生存繁殖，细菌在干燥环境下生存和繁殖能力均大大下降。
因此，冲洗液的保湿、润滑以及抑菌效果，也是临床医护人员十分关注的方面，但现有技术对冲洗液的研究尚未涉及这些方面，尤其是在手术创面冲洗中同时能表现出优良的保湿、润滑、抑菌及促进愈合方面效果的防护冲洗液尚未见报道。
因此，临床上亟需出现一种稳定的医用防护冲洗液，能够在外科手术中，尤其是操作时间较长的外科手术过程中有效洁净伤口，清除污秽，防止粘连，且能够保持伤口潮湿、润滑，具有良好抑菌性和稳定性。
发明内容
本发明的目的是提供一种以低重均分子量羧甲基壳聚糖制备而成的医用防护冲洗液，以弥补现有冲洗液只具有单一冲洗功能或单一防粘连功能的不足，同时使创面保湿润滑，所提供的冲洗液还具有良好的放置稳定性，不易降解和变性。
本发明提供的技术方案为：
一种稳定的医用防护冲洗液，其包含重量百分含量为0.5~10%的羧甲基壳聚糖、重量百分含量为0.7~0.9%的氯化钠、重量百分含量为0~0.1%的醋酸/醋酸钠缓冲对和余量的水，其中，所述羧甲基壳聚糖重均分子量为2~8万，优选2~5万，进一步优选2~4.5万，所述醋酸/醋酸钠缓冲对为醋酸和醋酸钠摩尔比为1:（30~40）的混合物。
优选地，本发明所述的稳定的医用防护冲洗液，其中，所述述醋酸/醋酸钠缓冲对为醋酸和醋酸钠摩尔比为1:35的混合物。
进一步优选地，本发明所述的稳定的医用防护冲洗液，其进一步加入重量百分含量为0~1%的聚乙二醇400，聚乙二醇400的重量百分含量优选为0.5%。
进一步地，本发明所述的稳定的医用防护冲洗液，其中，所述羧甲基壳聚糖重量百分含量为1~5%。
进一步地，本发明所述的稳定的医用防护冲洗液，其中所述医用防护冲洗液动力粘度为3.6~9 mPa·s。
本发明所述的稳定的医用防护冲洗液，其中所述医用防护冲洗液pH值为6.5~7.5。
本发明还提供上述医用防护冲洗液的制备方法：
本发明所述的医用防护冲洗液的制备方法，其操作如下：按比例称量羧甲基壳聚糖、氯化钠、醋酸/醋酸钠缓冲对及可选的聚乙二醇400，在搅拌下将各成分溶解于水中混匀，除菌过滤即得。
本发明提供的医用防护冲洗液用于对外伤创面冲洗清洁，保持创面湿润光滑，防止创面粘连和瘢痕产生，并抑制创面细菌生长。
作为本领域的常规操作，本发明所使用的羧甲基壳聚糖应该在进行辐照灭菌处理后加入。
本发明所使用的羧甲基壳聚糖的羧甲基取代度为0.7~1.1，其分子量分布系数为1~2，等电点为3~5，优选3~4，均能达到羧甲基壳聚糖产品的一般使用标准。
现有技术中羧甲基壳聚糖的制备方法为现有技术，现有方法有多种，本发明的羧甲基壳聚糖的制备方法可采用中国专利申请CN201210205739.7中所公开的方法或其他方法。
作为本领域的常规操作，本发明所使用的水为注射用水。
本发明所述的羧甲基壳聚糖重均分子量，是指分子量在该值的±5%内的羧甲基壳聚糖占全部羧甲基壳聚糖的比例超过90%。
本发明技术方案所能达到的技术效果为：
（1）本发明医用防护冲洗液，可以在创面形成保护膜，改善创面微循环，增强创面抵抗力，吸收渗液，防止痂皮形成，有利于坏死组织溶解，可适用于腹盆腔手术，用于对裸露的器官表面及手术创面的冲洗清洁，保持创面及裸露器官表面的湿润及低氧环境，抑制细菌生长，促进伤口愈合，同时减少手术操作时由于脏器表面干燥引起的二次损伤，使用方便安全，生物降解良好，避免瘢痕形成，缓解了患者的痛苦。
（2）本发明的医用防护冲洗液对羧甲基壳聚糖分子量范围的考察中意外的发现，羧甲基壳聚糖分子量2~8万范围内时，制得冲洗液在成膜性和流动性之间达到理想的平衡，良好的成膜性使冲洗液具有理想的防粘连性能，良好的流动性使本发明冲洗液具有较强的冲洗能力，其冲洗清洁效果与普通生理盐水基本相当。
（3）与现有产品的另外不同之处在于，本发明的医用防护冲洗液，还能够使创面长时间保湿，保湿时间达1小时以上，长时间保湿对于创面修复具有重要意义，另外，经试验对比发现，本发明产品与现有技术中常见的高分子量羧甲基壳聚糖制成冲洗液相比，具有更好的抑菌效果和促进愈合能力。
（4）本发明的医用防护冲洗液对羧甲基壳聚糖的加入比例作出了优化，在本发明的比例范围内，冲洗液能同时保持良好的防粘连能力、流动能力和抑菌能力，解决了现有产品不能同时满足临床各种需求的难题。
（5）本发明还对于配方进行了优化，并意外的发现，冲洗液中加入一定比例的醋酸/醋酸钠缓冲对，溶液的稳定性明显优于其他配方，说明加入醋酸/醋酸钠缓冲对可以提高产品稳定性，减缓羧甲基壳聚糖的降解，维持冲洗液理想的性能；此外，在此基础上加入一定比例的聚乙二醇400，可明显延长对伤口保湿润滑的时间，且产品稳定性进一步提高。
具体实施方式
实施例1~5及对比例1~3不同重均分子量的羧甲基壳聚糖为原料冲洗液的制备过程
称取不同重均分子量的羧甲基壳聚糖1.0g，重均分子量如表1所示，在搅拌下，将羧甲基壳聚糖溶解于100ml生理盐水溶液（0.9%NaCl）中，再加入醋酸0.002g，醋酸钠0.098g，除菌过滤，得医用防护冲洗液，测pH值，结果见表1。
表1 实施例1~5及对比例1~3羧甲基壳聚糖参数测定
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实施例6~10及对比例4~5不同重量百分含量的羧甲基壳聚糖制备冲洗液
称取重均分子量为3万的羧甲基壳聚糖，所称取羧甲基壳聚糖重量见表2，在搅拌下，将羧甲基壳聚糖溶解于100ml生理盐水溶液中，再加入醋酸0.002g，醋酸钠0.098g，除菌过滤，得医用防护冲洗液，测pH值，结果见表2。
表2 实施例8~12及对比例4~5的羧甲基壳聚糖称重值
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实施例11 ~15 调整醋酸/醋酸钠缓冲对、聚乙二醇400和氯化钠加入量的制备例
称取重均分子量3万的羧甲基壳聚糖1.0g，在搅拌下，将羧甲基壳聚糖溶解于100ml水中，加入氯化钠、聚乙二醇400、醋酸/醋酸钠缓冲对使溶解，除菌过滤，得医用防护冲洗液，溶液中氯化钠、醋酸/醋酸钠缓冲对、聚乙二醇400的加入量及pH测定值见表3。
表3 实施例11~15加入氯化钠、醋酸/醋酸钠缓冲对、聚乙二醇400的加入量及pH值
。
对比例6
称取重均分子量为3万的羧甲基壳聚糖1.0g，在搅拌下，将羧甲基壳聚糖溶解于100ml生理盐水溶液中，除菌过滤，得医用防护冲洗液，测pH值为7.1。
效果例1 冲洗效果试验
1、受试产品：实施例1~15、对比例1~5冲洗液、生理盐水
2、试验方法：制备含50~100cfu/mL金黄色葡萄球菌的菌悬液，准备66个琼脂培养基平皿，平均分成22组，每个平皿用2mL制备好的菌悬液均匀涂抹，将平皿向下倾斜45°角放置，分别采用实施例1~15、对比例1~5冲洗液和生理盐水100mL均匀冲洗平皿表面，每种冲洗液冲洗3个平皿，剩余3个平皿不冲洗作为对照，冲洗后自每个平皿上取相同面积残留物至另一营养琼脂培养基平皿中培养18~24小时后观察菌落数，同一冲洗液冲洗的3个平皿计算平均数，结果见表4。
表4 实施例1~15、对比例1~5冲洗液、生理盐水冲洗试验结果
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从试验结果可知，本发明实施例1~15均能实现良好的冲洗效果，冲洗与生理盐水相当，说明羧甲基壳聚糖重均分子量在2~8万时能实现良好的冲洗效果，其中，重均分子量在2~5万时，冲洗效果明显优于重均分子量10万以上的羧甲基壳聚糖制备的冲洗液，差异显著。
效果例2 抑菌试验
1、受试产品：实施例1~14、对比例1~5冲洗液及生理盐水；采用冲洗液作为供试液。
2、试验材料：菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌；琼脂培养基。
3、操作方法：按照中国药典2010版附录XIA中的管碟法进行测定。
4、评价方法：
抑菌圈直径大于 7.8mm 者，判为有抑菌作用；抑菌圈直径小于或等于 7.8mm 者，判为无抑菌作用。 3 次重复试验均有抑菌作用者，取平均值作为最终结果，有一次以上无抑菌作用者，无抑菌性。
5、试验结果见表5：
表5 实施例1~14、对比例1~5冲洗液抑菌试验结果
。
6、试验结论：本发明的冲洗液有较好的抑菌效果，并且，羧甲基壳聚糖浓度增加有利于抑菌作用增强，当羧甲基壳聚糖重量百分浓度低于0.5%时，抑菌效果不明显；当羧甲基壳聚糖重均分子量大于10万时，冲洗液无抑菌作用。
效果例3 成膜保湿试验
以健康志愿者10人为受试者， 将实施例1~15及对比例1~5的冲洗液按照表6的分配，均匀涂抹冲洗液于受试者前臂相同位置，涂抹量统一为2ml，涂抹面积2cm×15cm，涂抹完毕后于0、10、30min观察涂抹处，记录结果见表7。
表6 涂抹试验安排表
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表7 成膜保湿试验结果
。
从成膜保湿试验结果可以看出，对比例3和对比例4冲洗液成膜性差，并且保湿效果差，说明羧甲基壳聚糖重均分子量小于2万，或羧甲基壳聚糖重量百分含量低于0.5%时，产品无防粘连功能，另外对比例3和对比例4还表现出保湿性能差的问题，说明羧甲基壳聚糖分子量低于2万或浓度小于0.5%保湿润滑效果差，在手术过程中裸露脏器易干燥，易造成损伤；相比，实施例1~15的成膜性和保湿能力均强于对比例1和对比例4。
效果例4 保湿、润滑、促进伤口愈合效果试验：
对实施例1、2、4、5、6、9、10、11、14、15，对比例2~5及生理盐水对照进行了保湿、润滑、促进伤口愈合的效果对比试验，具体方法及结果如下：
选用体重为200g左右的Wistar大鼠280只，雌雄各半，随机分为14组，每组20只。14个组分别为：实施例1冲洗液组、实施例2冲洗液组、实施例4冲洗液组、实施例5冲洗液组、实施例6冲洗液组、实施例9冲洗液组、实施例10冲洗液组、实施例11冲洗液组、实施例14冲洗液组、实施例15冲洗液组、对比例2冲洗液组、对比例3冲洗液组、对比例4冲洗液组、对比例5冲洗液组和生理盐水对照组。全部动物均采用巴比妥钠腹腔注射麻醉。打开大鼠腹腔，在盲肠表面连续磨擦至出现多处渗血。取10ml各组冲洗液反复冲洗受损部位，然后将多余冲洗液吸出，缝合腹腔伤口。手术过程中观察脏器表面保持湿润、光滑情况，并分别于3、5、7、10、12天开腹观察大鼠伤口愈合情况。
标准如下：（1）愈合优良，创面愈合率≥80%，创面完全上皮化时间≤7天，组织切片观察表皮及真皮结构正常；（2）愈合欠佳，创面愈合率50%~80%，创面完全上皮化时间7~10天，组织切片观察表皮及真皮部分坏死；（3）伤口化脓，创面愈合率＜50%，创面完全上皮化时间＞10天，组织切片观察表皮及真皮完全坏死。
试验结果表明，实施例1冲洗液组、实施例2冲洗液组、实施例4冲洗液组、实施例5冲洗液组、实施例6冲洗液组、实施例9冲洗液组、实施例10冲洗液组、实施例11冲洗液组、实施例14冲洗液组、实施例15冲洗液组促进伤口愈合的效果优于对比例2~5组及生理盐水对照组，试验结果见表8：
表8 保湿、润滑、促进伤口愈合效果对比试验
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从以上试验结果可以看出，本发明实施例1~15及对比例2~5与生理盐水相比，在保湿润滑及促进伤口愈合方面均有一定效果，其中，对比例3润滑保湿效果较差，同时防粘连效果差，说明当羧甲基壳聚糖分子量过低时保湿润滑防粘连效果不理想；对比例2促进愈合效果差；对比例4促进愈合及防粘连效果均差，说明羧甲基壳聚糖需要维持一定浓度，当浓度过小则抑菌促愈合及防粘连效果欠佳；所有受试产品生物降解良好；另外，还观察到对比例2部分大鼠出现结膜充血现象。
效果例5 稳定性试验
将实施例2、5、12、14、15及对比例2、5和6冲洗液无菌灌装放置于温度20±5℃下，0、6、12月测定羧甲基壳聚糖重均分子量，结果见表9：
表9 稳定性试验结果
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结果显示，本发明实施例制备的冲洗液均放置稳定，对比例2放置过程中羧甲基壳聚糖降解明显，羧甲基壳聚糖放置过程中降解会使产品理化性质改变，杂质增加，安全性下降，因此，应选择对产品稳定有利的配方；经对比，本发明加入醋酸盐和醋酸钠缓冲对能提高产品稳定性，另外，加入的聚乙二醇400可进一步抑制降解，提高稳定性。
以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，并非本发明可行实施的穷举，对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。