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1、(10)授权公告号 CN 101384266 B (45)授权公告日 2013.03.20 CN 101384266 B *CN101384266B* (21)申请号 200780005915.X (22)申请日 2007.02.14 P-200600377 2006.02.17 ES A61K 31/6615(2006.01) A61K 33/30(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 43/00(2006.01) (73)专利权人 巴利阿里群岛大学 地址 西班牙帕尔马德马略卡岛 (72)发明人 F格拉斯弗雷谢达什 J佩雷。
2、罗贝斯塔德 B爱森阿门瓜尔 P桑切斯科尔特斯 RM普利特阿尔米拉利 A科斯塔保扎 (74)专利代理机构 北京北翔知识产权代理有限 公司 11285 代理人 张广育 姜建成 WO 2005044278 A,2005.05.19,1-19. CN 1593376 A,2005.03.16,1-8. US 4259316 A,1981.03.31,1-8. US 5300289 A,1994.04.05,1-14. US 5300289 A,1994.04.05,1-14. Felix Grases， 等 .Phytate (Myo-inositol hexakisphosphate) inhibi。
3、ts cardiovascular calcifications in rats.Frontiers in Bioscience .2006, 第 11 卷 ( 第 1 期 ),136-142. F. Grases， 等.Effects of Phytic Acid on Renal Stone Formation in Rats. Scandinavian Journal of Urology and Nephrology .1998,第 32 卷 ( 第 4 期 ),261-265. (54) 发明名称 肌醇六磷酸和锌的固定剂量结合物 (57) 摘要 本发明涉及协同比例的肌醇六磷酸和锌的固。
4、 定剂量组合物， 用于治疗羟基磷灰石结晶。优选 地， 所述组合物的肌醇六磷酸和锌的摩尔比率超 过 4 1。该发明还涉及所述组合物用于制备治 疗、 预防和 / 或防止人体内羟基磷灰石结晶的药 物的用途。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2008.08.18 (86)PCT申请的申请数据 PCT/EP2007/051413 2007.02.14 (87)PCT申请的公布数据 WO2007/093611 EN 2007.08.23 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 吕青 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (1。
5、2)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 2 页 1/1 页 2 1. 具有协同作用的肌醇六磷酸和锌的固定剂量结合物用于制备治疗羟基磷灰石结晶 的药物中的用途， 其中所述锌吸附在羟基磷灰石的正在生长的晶体上或正在形成的核上。 2. 根据权利要求 1 的肌醇六磷酸和锌的固定剂量结合物的用途， 其中所述结合物的肌 醇六磷酸和锌的摩尔比超过 4:1。 3. 根据权利要求 1 的肌醇六磷酸和锌的固定剂量结合物的用途， 其中所述结合物的肌 醇六磷酸和锌的摩尔比为 5:1。 4. 根据权利要求 1 的肌醇六磷酸和锌的固定剂量结合物的用途， 其中所述结合物的肌 醇六磷酸和锌的摩尔比超过 5:1。
6、。 5. 根据前述权利要求任一项的结合物用于制备治疗、 预防和 / 或防止牙结石的药物的 用途。 6. 根据权利要求 1-4 任一项的结合物用于制备治疗、 预防和 / 或防止心血管的羟基磷 灰石钙化的药物的用途。 7.根据权利要求6的用途， 其中所述心血管的羟基磷灰石钙化发生在动脉、 静脉和/或 心脏中。 8. 根据权利要求 1-4 任一项的结合物用于制备治疗、 预防和 / 或防止脑中羟基磷灰石 钙化的药物的用途。 9. 根据权利要求 1-4 任一项的结合物用于制备治疗、 预防和 / 或防止肺中羟基磷灰石 钙化的药物的用途。 10.根据权利要求1-4任一项的结合物用于制备治疗、 预防和/或防止。
7、皮肤中羟基磷灰 石钙化的药物的用途。 11. 根据权利要求 1-4 任一项的结合物的用途， 其中所述药物为漱口剂形式。 12. 根据任何权利要求 1-4 任一项的结合物的用途， 其中药物为维生素补充剂形式或 其他给药形式。 权 利 要 求 书 CN 101384266 B 2 1/7 页 3 肌醇六磷酸和锌的固定剂量结合物 技术领域 0001 该发明涉及一种协同比例的肌醇六磷酸和锌的固定剂量结合物 (association)， 用于治疗羟基磷灰石结晶。 0002 该发明还涉及将所述结合物用于制备治疗、 预防和 / 或防止人体内羟基磷灰石结 晶的药物的用途。 背景技术 0003 通常， 任何病理。
8、性结晶的过程都是下述三组因子之间不平衡的结果 ： 过饱和、 结晶 促进剂 ( 基本上为异相成核剂 ) 和结晶阻抑物 ( 结晶抑制剂和细胞防御机制 )。 0004 如果一个系统所包含的溶质的量超过由该溶质的溶度积所确定的量， 那么该系统 即对该溶质过饱和。在这种条件下就已经具备了结晶的热力学因素， 那么最后形成相应的 固体就只是一个动力学问题 ( 即只是时间问题 )。 0005 促进剂或异相成核剂是促进晶体形成的物质， 通过避免均相成核过程而减少了诱 导时间。因此这些是结晶的动力学因素。 0006 结晶抑制剂是阻碍或防止晶体生长的物质。它们可以作用于成核水平 ( 通过吸附 在正在形成的均相或异相。
9、核上)、 作用于晶体生长(通过吸附在正在形成的晶体表面上)或 同时作用于这两个过程。因此它也包括动力学因素。 0007 肌醇六磷酸 (phytate) 是已知的钙盐生长的最强抑制剂， 作用于草酸钙的不均匀 成核、 草酸钙的晶体生长以及磷酸钙的均相和异相成核。肌醇六磷酸和焦磷酸盐对磷酸氢 钙的结晶和羟基磷灰石的结晶都表现出抑制作用。 两种化合物形成磷酸钙能在其中结晶的 两种结构， 后者是病理性血管矿化的主要成分。 0008 最近已经证明肌醇六磷酸存在于哺乳动物 ( 包括人类 ) 的所有器官、 组织和生物 体液中。还已经证明存在于哺乳动物的器管、 组织和体液中的大多数胞外肌醇六磷酸都来 源于饮食而。
10、不是内源合成的结果， 而胞内肌醇六磷酸 ( 以低得多的浓度存在 ) 很可能是在 细胞内部产生的。因此它在生物体内的水平与其外源供给 ( 通过饮食吸收或局部施用 ) 直 接相关。 0009 由于磷酸盐、 钙的浓度值以及血浆的 pH 值， 血浆对于磷酸钙总是过饱和的。事实 上， 经常在心血管系统中发现钙化， 它会减少血管弹性并且引起血栓形成和动脉破裂。 当这 类钙化在心脏瓣膜中发生时会伴生多种机能紊乱， 这些机能紊乱如果不纠正的话就会导致 心力衰竭和死亡。 0010 现在已经知道多种会引起冠状动脉中的钙化发生的危险因素， 例如肾脏疾病、 高 龄、 高血浆胆固醇水平 ( 高密度脂蛋白胆固醇的降低和低。
11、密度脂蛋白胆固醇的升高 )、 肥胖 和高甘油三酯水平、 细胞毒性物质 ( 吸烟习惯 ) 和细菌感染。 0011 必须牢记的是， 心血管钙化的发生最早可以开始于十几岁， 并且年龄在40到49岁 的人中有 50、 年龄在 60 到 69 岁的人中有 80患有冠状动脉钙化。 0012 形成血管钙化的精确机理包括多个步骤， 然而这通常需要预先存在的伤害来作为 说 明 书 CN 101384266 B 3 2/7 页 4 钙化 ( 磷酸钙， 通常以羟基磷灰石的形式 ) 的诱导物 ( 异相成核剂 )。钙化的后续发展将取 决于其他因素间的平衡 ( 过饱和、 结晶抑制剂、 钙化的细胞调质 )。 0013 因此。
12、， 防止心血管钙化发展的一个重要因素是结晶抑制剂的存在。一份最近的文 献表明， 当局部施用肌醇六磷酸时肌醇六磷酸对心血管钙化的发展有防止作用 ( 参见 PCT/ IB2004/003588)。 0014 在一个不同的领域， 羟基磷灰石也会通过牙齿菌斑的矿化而在口腔中积聚。牙齿 菌斑是不能用有压力的水或者简单漱口除去的牙齿上的沉积。 虽然刷牙确实有助于防止这 种沉积的快速积聚， 但是即使经常刷牙也不能完全除去所有附着在牙齿上的沉积。附着在 牙齿表面上的菌斑可以钙化 ( 钙化的牙斑 ) 形成牙垢或牙石。因此菌斑就是牙石的前体。 但是与牙石不同的是， 菌斑可以在牙齿表面的任意位置形成， 尤其是在龈缘。
13、上。 因此牙齿上 存在菌斑除了不美观以外还可以是牙龈炎和牙周疾病发生的原因。 菌斑数量与牙龈炎严重 程度之间有直接的关系。 0015 牙垢或牙石是牙齿上因为菌斑矿化而形成的钙化沉积， 这个过程开始于 24-72 小 时之内， 平均需要 12 天来完成。它由有机和无机物质组成， 成分非常类似于可在生物体中 观察到的其他病理性钙化 ( 肾结石、 皮肤钙质沉着等 ) 的成分 ： 0016 -有机物质 ： 主要来自于互相连接形成菌落的微生物(细菌、 真菌等)， 但是也可以 来自于残留在口腔中的食物残渣。 0017 - 无机物质 ： 主要由存在于唾液中的钙和正磷酸盐组成， 所述钙和正磷酸盐以一 种被称为。
14、羟基磷灰石 (HAP) 的晶格形式排列。 0018 牙石的形成分为两步。 第一步， 由活的和死的细菌组成的菌斑沉积在牙齿上， 其四 周围绕着来源于细菌和唾液的胶化 (gellified) 基质。第二步， 所述菌斑经历矿化过程直 到形成牙石。 最初， 无定形磷酸钙开始沉积在牙斑的胞外基质表面和内部， 基质变得足够紧 密从而使得所述聚集物不易变形， 最后转变成晶体 HAP 物质。无定形磷酸钙虽然与 HAP 相 关， 但它们的晶体结构、 颗粒形态和化学定量关系不同。 0019 已经通过应用钙、 镁离子的抑制剂、 多价螯合剂、 有效抑制剂和 / 或螯合试剂的方 法测试了对 HAP 形成的抑制。为这一目。
15、的已经使用了脱水多聚磷酸盐， 例如水溶性六偏磷 酸盐、 三聚磷酸盐、 焦磷酸盐等， 。 0020 这样我们列出了利用或涉及到目前为止所提出的上述多聚磷酸盐在口腔组合物 中的用途和功能的专利 (US 3.488.419 ； US 4.215.105 ； US 4.515.772)。但是， 按照专利 US 4.627.977 的公开内容所述， 直链脱水多聚磷酸盐被唾液中的酶 ( 磷酸酶 ) 在口腔和 / 或唾液中显著地水解为正磷酸盐， 而正磷酸盐对 HAP 的形成未显示出任何抑制作用 ； 尽 管通过组合使用这些多聚磷酸盐与氟化物 ( 如专利 US 4.808.4109 所公开 )， 以及如文献 U。
16、S-A-4.627.977 所述的与氟离子形成部分聚羧酸酯聚合体的方法， 可以减少所述水解， 但 是仍然还没找到一种用于抑制羟基磷灰石的有效治疗方法。 0021 另一方面， 美国专利 US5300289 描述了用于口腔护理的含肌醇六磷酸的抗菌口腔 组合物。 所述口腔组合物包含肌醇六磷酸或其可药用的盐、 阳离子抗菌化合物和增容试剂， 用于控制牙石、 牙菌斑、 牙龈炎、 牙周病和 / 或口臭。具体而言， 它描述了一种组合物， 包括 ： (1) 按重量比从 0.001 到 10的一种或多种含 C-O-P 键的化合物， 其中所述含 C-O-P 键的 化合物为肌醇六 ( 二氢磷酸 )、 肌醇五 ( 二氢。
17、磷酸 )、 肌醇四 ( 二氢磷酸 ) 或者其可生理用 说 明 书 CN 101384266 B 4 3/7 页 5 盐 ； (2) 按重量比从 0.001 到 10的一种或多种阳离子抗菌化合物 ； 和 (3) 按重量比从 0.1 到 20的一种或多种增容试剂。公开了 10 种可能作为阳离子抗菌化合物的化合物或其衍 生物。 所述增容试剂选自酸和它们的碱金属盐或碱土金属盐， 或者它们的混合物。 还公开了 在上述组合物中存在选自锶、 镁、 锡、 锌、 钙的金属离子或者它们的混合物不会导致组合物 中的肌醇六磷酸在溶液中沉淀， 因此在上述组合物中添加这些离子会有助于抑制口臭。所 述金属离子和肌醇六磷酸在。
18、口腔组合物中的摩尔比可以为从 4 1 到 1 4， 优选为 3 1 到 1 3， 并且更优选为 1 1。 0022 此外， 肌醇六磷酸酯已经在口腔组合物中被实际应用。例如， 在 US-4.259.316 和 US-4.335.102 专利中， 共同使用了肌醇六磷酸和一种锡 (II) 化合物。但是， 肌醇六磷酸和 锡之间形成的复合物不能有效的抑制结石的形成。 0023 另 外，在 美 国 专 利 3.934.002 中，联 合 使 用 了 肌 醇 六 磷 酸 和 二 双 胍 (bisbiguanide) 作为一种抗菌斑和抗龋药物。但是， 这两种化合物之间会发生反应因此不 能在整个口腔组合物中均匀。
19、分布， 甚至达到形成明显可见的两相的程度。 0024 已经研发了很多组合物， 它们包含抗菌斑和抗龈炎药物的不同组合， 同时含有或 任选地同时含有其他化合物， 例如抗结石药物， 它的目的是消除细菌病原和危险因子。 0025 但是， 还没有一种合适的方法能够较好地抑制羟基磷灰石结晶。 发明内容 0026 本发明要解决的问题可以表述为一种用于抑制人体内羟基磷灰石结晶的替代方 法， 这种方法特别是对牙石的发生以及对动脉、 静脉、 心脏、 大脑、 肺和皮肤中的羟基磷灰石 钙化具有令人惊讶的效果。 0027 该解决方法基于一种对抑制羟基磷灰石结晶有协同作用的肌醇六磷酸和锌的固 定剂量结合物。 尚未有记载说。
20、明肌醇六磷酸和锌的组合可以作为用于抗羟基磷灰石结晶的 协同混合物， 也没有解释说明为何肌醇六磷酸和锌之间的协同作用能够加强肌醇六磷酸结 晶对羟基磷灰石的抑制效果。定义 0028 本发明中，“肌醇六磷酸” 是指对应如下结构式的分子 ： 0029 0030 及其相应的盐， 包括但不限于钠盐、 钾盐、 钙盐、 镁盐或钙镁盐。 0031 本发明中 “结晶抑制剂” 是指能够减少或阻止矿化形成的物质。 0032 心血管和齿颊腔(buccodental)的矿化或者在生物体其他部分的矿化(主要是钙 化 ) 是了解得最清楚的矿化， 这是因为它们具有延长结晶诱导的时间的作用。 0033 本发明中，“心血管矿化” 。
21、是指任何积聚在血管壁或心脏任何部分上的固体凝结 物。 说 明 书 CN 101384266 B 5 4/7 页 6 具体实施方式 0034 本发明的总体目标是抑制羟基磷灰石的形成。所述盐在生物体内形成矿化， 通常 生物体内存在的肌醇六磷酸酯可以防止或减少这种矿化。 但是， 除这种情况之外， 还没有一 种组合物、 混合物或者治疗方法能够有效地从外部抑制羟基磷灰石结晶。 0035 本发明提供了一种肌醇六磷酸和锌离子的结合物， 用于治疗、 预防和 / 或防止在 心血管系统和齿颊 (buccodental) 腔中羟基磷灰石的形成。同样， 本发明提供了一种肌醇 六磷酸和锌离子的结合物， 用于制备治疗、 。
22、预防和 / 或防止关节、 乳腺、 肾、 脑、 肺和皮肤中 羟基磷灰石的形成， 因为软组织中盐结晶的抑制取决于能够到达所述组织的抑制剂的浓 度。磷酸六肌醇在软组织中的浓度与在心血管组织中类似 ( 并且在脑中要高 10 倍 )， 因此 预期在这些软组织中与在心血管组织中有同样的抑制效果。 0036 特别地， 本发明的作者发现在肌醇六磷酸和锌结合物中锌的存在导致了对肌醇六 磷酸本身的结晶抑制效果的加强 ( 而单独的锌对羟基磷灰石结晶没有抑制效果 )。锌被吸 附到羟基磷灰石正在生长的晶体上或者正在形成的核上。 因为肌醇六磷酸对锌的亲和力超 过对钙的亲和力， 因此锌吸附在羟基磷灰石上增加了肌醇六磷酸对正。
23、在生长的晶体或者对 正在形成的核的亲和力， 从而加强了它对结晶的抑制作用。 0037 令人惊讶的是， 已经发现肌醇六磷酸和锌的摩尔比超过 4 1 的结合物能够加强 肌醇六磷酸的结晶抑制效果达 40， 尽管这总是取决于诱导期和肌醇六磷酸 / 锌的摩尔 比。 0038 优选地， 经过10分钟的结晶诱导期后， 51的摩尔比能够增强肌醇六磷酸的结晶 抑制效果达 60 ( 参见图 2)。 0039 在本发明中， 肌醇六磷酸和锌离子结合物对羟基磷灰石结晶的协同作用将会在下 文展示。具体而言， 参见下面的实施例 1 和实施例 2。 0040 随后还会令人惊讶地证明， 肌醇六磷酸和锌离子的结合物能抑制植入 W。
24、istar 大 鼠体内的人主动脉瓣膜片段上羟基磷灰石钙化的发生。 本发明的作者已经发现肌醇六磷酸 和锌离子的结合物 ( 特别是口服的 ) 的协同作用对抑制心血管钙化的发生有极好的效果 ( 参见实施例 3)。 0041 本发明的作者还研究了本发明的肌醇六磷酸和锌离子的结合物对被施以不同治 疗方法的个体的齿颊腔中羟基磷灰石形成的作用(参见实施例4和实施例5)。 这一研究的 目的是加强唾液对钙盐结晶的抑制能力和通过使用包含肌醇六磷酸和锌离子的结合物的 口腔组合物来预防钙生物矿化形成的并发症。 使用含有肌醇六磷酸和锌离子的漱口剂的依 据是可降低羟基磷灰石生物矿化形成的危险， 并基于如下事实 ： 004。
25、2 (1) 肌醇六磷酸是一种很强的能抑制羟基磷灰石和其他磷酸钙的均相和异相成核 以及晶体生长的抑制剂。该作用的结果是抑制羟基磷灰石的结晶， 同时防止附着在牙齿上 的磷酸钙微粒的生成。 0043 (2) 人唾液中含有肌醇六磷酸， 其浓度变化取决于个体的饮食。 0044 (3) 某些唾液中缺少肌醇六磷酸的个体可能会表现为舌下羟基磷灰石结晶。 0045 (4) 肌醇六磷酸作为人类唾液中存在的自然物质， 有比其他直链多聚磷酸盐更能 抵抗唾液磷酸酶作用的优点。 0046 (5) 在体外实验中， 肌醇六磷酸和锌离子的协同结合物对羟基磷灰石结晶的抑制 说 明 书 CN 101384266 B 6 5/7 页。
26、 7 作用比单独使用肌醇六磷酸时更显著。 0047 因此， 任何包含本发明的肌醇六磷酸和锌离子的协同结合物的药物形式不管 是漱口剂、 维生素补充剂还是给药的其他形式都包括在本发明的范围内。 附图说明 0048 图 1 显示了肌醇六磷酸和锌离子的结合物在体外对羟基磷灰石的作用。 0049 所述图 1 中显示， 第一条曲线对应无肌醇六磷酸或锌离子存在时的直接沉淀。第 二条曲线 (Zn2+) 组成中添加了 0.038M 锌离子。如图所示， 没有显示出抑制效果。第三 条曲线 ( 肌醇六磷酸 ) 对应有 0.38M 肌醇六磷酸存在时羟基磷灰石的沉淀。显示出了对 结晶的显著抑制效果。最后一条曲线 ( 肌醇。
27、六磷酸 +Zn2+) 对应有 0.38M 肌醇六磷酸和 0.038M 锌离子存在时的沉淀 ( 肌醇六磷酸和锌离子的摩尔比为 10 1)。可以看出羟基 磷灰石沉淀完全被抑制。而且， 这不是累加作用， 而是协同作用， 因为单独的锌并没有表现 出任何抑制效果。 0050 图 2 显示了肌醇六磷酸和锌离子的结合物在体外对羟基磷灰石的作用。 0051 所述图 2 中显示， 第一个系列对应无肌醇六磷酸或锌离子存在的直接沉淀。第二 个系列的组成中添加了 0.3M 锌离子。如图所示， 没有显示出抑制效果。第三个系列对应 有 1.5M 肌醇六磷酸存在时羟基磷灰石的沉淀。显示出了对结晶的显著抑制效果。 0052 。
28、最后两个系列分别显示了使用 1.5M 肌醇六磷酸和两种不同浓度的锌 ： Zn2+： 0.3M( 肌醇六磷酸和锌离子摩尔比 5 1) 和 0.15M( 肌醇六磷酸和锌离子摩尔比 10 1)。可以看出肌醇六磷酸和锌离子之间存在协同作用， 因为单独的锌并没有表现出任 何抑制效果。 0053 图 3 显示了肌醇六磷酸和锌离子的结合物对在植入 Wistar 大鼠体内的人主动脉 瓣膜片段上形成的羟基磷灰石的作用。在所述图中可以看出， 与饮食中不含肌醇六磷酸的 对照组相比， 饮食中含肌醇六磷酸和锌离子的组的瓣膜钙化程度在统计学上显著降低。 实施例 0054 通过下面的实施例来进一步阐述本发明， 下述实施例并。
29、不构成对本发明范围的限 制。 0055 实施例 1 0056 设计了一个体外系统来研究羟基磷灰石的沉淀动力学。该系统使用以下实验 条件 ： 磷酸 1.5mM、 Ca2+ 60mg/l、 pH 7.5。羟基磷灰石的沉淀动力学使用 Shimadzu(UV-120-02) 分光光度计记录， 使用 3ml 塑料管， 每 5 分钟在 550nm 处记录一次吸 光度。结果在图 1 中示出。从图中可以观察到使用摩尔比为 10 1 的肌醇六磷酸与锌的 协同混合物可完全抑制羟基磷灰石沉淀。 0057 实施例 2 0058 使用和实施例1相同的系统， 系统实验条件如下 ： 磷酸2.5mM、 Ca2+60mg/ l。
30、、 pH7.5。 羟基磷灰石沉淀动力学使用Shimadzu(UV-120-02)分光光度计记录， 使用3ml 塑料瓶， 每 5 分钟在 550nm 处记录一次吸光度。结果在图 2 中示出。从图中可以观察到在 肌醇六磷酸和锌之间存在协同作用， 因为单独的锌不能表现出任何抑制效果。 说 明 书 CN 101384266 B 7 6/7 页 8 0059 实施例 3 0060 12只重约250g的雄性Wistar大鼠(来自西班牙巴塞罗纳Harlan Iberica s.l.) 在动物房适应7天， 动物房的温度和湿度分别为211和605， 1212小时光/暗周 期。大鼠饲养在树脂玻璃笼内， 每个笼子两。
31、只大鼠， 不限量地提供食物和饮水。 0061 在适应期后， 将动物随机分成两组， 每组 6 只， 一个为对照组， 只加锌离子， 饲喂 AIN-76A 日粮 ( 无肌醇六磷酸纯化日粮， 锌离子含量为 0.003 ) ； 另一组在对照组日粮基 础上添加 1的钙镁盐的形式的肌醇六磷酸 ( 肌醇六磷酸 -Zn2+的摩尔比为 30 1)。16 天后， 在每个动物腹部移植 2 个未钙化的人主动脉瓣膜片段。在移植后使用所述日粮继续 喂养 30 天。在这个阶段之后， 每隔 24 小时收集尿样以测定肌醇六磷酸， 接着使用戊巴比妥 (50mg kg-1， 腹膜内注射 ) 麻醉所述动物， 取出瓣膜并干燥。 0062。
32、 使用扫描电镜检查一些移植瓣膜的表面和内部， 并与未移植瓣膜片段比较。结果 如下 ： a. 未移植瓣膜片段表面， 没有出现钙化。b. 移植到对照组大鼠体内 30 天的瓣膜片段 表面， 出现一层具有三叉状 (aspidinic) 羟基磷灰石结构的磷酸钙。c. 移植到对照组大鼠 体内 30 天的瓣膜片段内部， 发生磷酸钙钙化。 0063 然后使用 HNO3 HClO4为 1 1 的混合物对瓣膜进行酸消化， 通过使用电感耦合 等离子体的原子发射光谱 (ICP-AES) 测定总钙量。结果在图 3 中示出， 使用钙占所述片段 的重量百分比表示。本实验使用的程序符合 86/609/EEC 指令， 该指令涉。
33、及实验和科研用动 物的保护， 巴利阿里群岛大学伦理委员会给出了进行所述实验的官方许可需。 0064 研究结束时对照组的尿中肌醇六磷酸水平 (0.080.03mg/l) 在统计学上低于处 理组 (1.220.24mg/l)。这些瓣膜片段的植入导致在所述瓣膜的表面和内部发生磷酸钙 (羟基磷灰石)钙化。 相比于对照组， 在肌醇六磷酸加锌离子处理组中植入的主动脉瓣膜的 钙化度在统计学上明显降低(参见图3)， 因此证明血浆肌醇六磷酸能够抑制在植入Wistar 大鼠体内的人主动脉瓣膜形成的羟基磷灰石钙化。 0065 实施例 4 0066 首先， 决定评估一下肌醇六磷酸对齿颊 (buccodental) 腔。
34、中羟基磷灰石形成的作 用。一个患者接受了各持续一周的两种不同的处理， 在处理过程中以每天两次各 10ml 的用 量给予两种不同的漱口剂中的一种 ( 表 1)。对齿颊 (buccodenta) 腔中的矿化沉积进行定 性评估， 由目测发现牙垢或者牙石明显减少。 0067 表 1. 使用的漱口剂 0068 说 明 书 CN 101384266 B 8 7/7 页 9 0069 实施例 5 0070 随后， 使用含较少肌醇六磷酸但含有锌离子的漱口剂， 以定量方式测定 15 天后羟 基磷灰石在齿颊 (buccodental) 腔中的沉积。一个病人接受了各持续两周的两种不同的处 理， 在处理过程中以每天两。
35、次各 10ml 的用量给予两种不同的漱口剂中的一种 ( 表 2)。通 过用机械收集病人牙菌斑沉积和牙垢并且将其吸入牙科诊所的过滤器中， 然后用 1M 的盐 酸溶液溶解沉淀中的羟基磷灰石并且通过使用电感耦合等离子的原子发射光谱法 (Optima 5300DV)测定钙和磷， 定量测定齿颊(buccodental)腔中的矿化沉积。 结果发现矿化沉积中 磷减少 95.1， 钙减少 88.3。 0071 表 2. 使用的漱口剂 0072 说 明 书 CN 101384266 B 9 1/2 页 10 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 101384266 B 10 2/2 页 11 图 3 说 明 书 附 图 CN 101384266 B 11 。