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1、(10)授权公告号 CN 101623325 B (45)授权公告日 2012.01.11 CN 101623325 B *CN101623325B* (21)申请号 200910113416.3 (22)申请日 2009.08.06 A61K 36/53(2006.01) A61P 9/00(2006.01) (73)专利权人 新疆维吾尔自治区药物研究所 地址 830004 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 新华南路 140 号新疆药物研究所 (72)发明人 杨伟俊 满尔哈巴 石峰 何江 阿不都沙拉木 (74)专利代理机构 乌鲁木齐合纵专利商标事务 所 65105 代理人 汤建武 CN 16608。
2、64 A,2005.08.31, 权利要求 1. (54) 发明名称 芳香新塔花总黄酮提取物及其生产方法和心 血管药物的应用 (57) 摘要 本发明提供了一种芳香新塔花总黄酮提取物 及其生产方法和心血管药物的应用， 该芳香新塔 花总黄酮提取物按下述方法得到 ： 将芳香新塔花 干药材经过水或乙醇提取、 大孔吸附树脂柱吸附、 减压浓缩并干燥得到干燥黄色至棕黄色粉末状的 芳香新塔花黄酮类提取物。本发明所得芳香新塔 花的各提取物都能在制备心血管药物方面得到应 用， 并使收率降低 ( 服用剂量降低， 即达到同样的 药效所使用的药材量降低 )， 在提高疗效的同时， 大大节约了芳香新塔花资源、 降低了成本。。
3、 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 赵明强 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 1 页 CN 101623325 B1/1 页 2 1. 一种制备心血管药物的芳香新塔花总黄酮提取物， 其特征在于按下述方法得到 ： 将 芳香新塔花干药材， 粉碎并过10目筛至50目筛， 加入6倍重量份至12 倍重量份的水或30% 至 90% 乙醇水溶液， 浸泡至透心， 加热至微沸回流提取 1 次至 4 次， 每次 0.5 小时至 2.5 小 时， 合并提取液， 放置室温， 过滤， 滤液减压浓缩至干药材的 1 倍重量份至 3 倍重量份， 。
4、浓缩 液通过大孔吸附树脂柱， 随后， 在常温下依次以 6 倍重量份至 12 倍重量份的水、 6 倍重量份 至 12 倍重量份的 30% 乙醇水溶液、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 50% 乙醇水溶液、 6 倍重量 份至 12 倍重量份的 70% 乙醇水溶液洗脱， 洗脱流速为 300 ml/h 至 1000 ml/h ； 收集上述乙 醇水溶液洗脱液， 减压浓缩并干燥得到干燥黄色至棕黄色粉末状的芳香新塔花总黄酮提取 物。 2. 根据权利要求 1 所述的芳香新塔花总黄酮提取物， 其特征在于减压回收乙醇并浓缩 是在 40至 80、 -0.07 Mpa 至 -0.1Mpa 下进行的。 3. 根据权利。
5、要求 1 和 2 所述的芳香新塔花总黄酮提取物， 其特征在于干燥是在 50至 80下的鼓风干燥箱内进行的或者干燥是在风温度 130至 190、 出风温度 30至 90 的喷雾干燥下进行的或者干燥是在冷冻干燥 12 小时至 72 小时进行的。 4. 根据权利要求 3 所述的芳香新塔花总黄酮提取物， 其特征在于大孔吸附树脂 柱采用下述型号 ： AB-8 或 SA-1, SA-3, FL-1, FL-3, DM-130,DM-B1,ADS-7,ADS-17, HPD-300,HPD-600, HP-20。 5. 一种芳香新塔花总黄酮提取物的生产方法， 其特征在于按下述步骤得到 ： 将芳香新 塔花干药。
6、材， 粉碎并过10目筛至50目筛， 加入6倍重量份至12 倍重量份的水或30%至90% 乙醇水溶液， 浸泡至透心， 加热至微沸回流提取 1 次至 4 次， 每次 0.5 小时至 2.5 小时， 合并 提取液， 放置室温， 过滤， 滤液减压浓缩至干药材的1倍重量份至3倍重量份， 浓缩液通过大 孔吸附树脂柱， 随后， 在常温下依次以6倍重量份至12倍重量份的水、 6倍重量份至12倍重 量份的 30% 乙醇水溶液、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 50% 乙醇水溶液、 6 倍重量份至 12 倍 重量份的 70% 乙醇水溶液洗脱， 洗脱流速为 300 ml/h 至 1000 ml/h ； 收集上述乙。
7、醇水溶液 洗脱液， 减压浓缩并干燥得到干燥黄色至棕黄色粉末状的芳香新塔花总黄酮提取物。 6. 根据权利要求 5 所述的芳香新塔花总黄酮提取物的生产方法， 其特征在于减压回收 乙醇并浓缩是在 40至 80、 -0.07 Mpa 至 -0.1Mpa 下进行的。 7. 根据权利要求 5 和 6 所述的芳香新塔花总黄酮提取物的生产方法， 其特征在于干燥 是在 50至 80下的鼓风干燥箱内进行的或者干燥是在风温度 130至 190、 出风温度 30至 90的喷雾干燥下进行的或者干燥是在冷冻干燥 12 小时至 72 小时进行的。 8. 根据权利要求 7 所述的芳香新塔花总黄酮提取物的生产方法， 其特征在于。
8、大孔吸附 树脂柱采用下述型号 ： AB-8 或 SA-1, SA-3, FL-1, FL-3, DM-130,DM-B1,ADS-7,ADS-17, HPD-300,HPD-600, HP-20。 9.一种根据权利要求1或2所述的芳香新塔花总黄酮提取物在制备心血管药物方面的 应用。 10. 一种根据权利要求 3 所述的芳香新塔花总黄酮提取物在制备心血管药物方面的应 用。 权 利 要 求 书 CN 101623325 B1/7 页 3 芳香新塔花总黄酮提取物及其生产方法和心血管药物的应 用 一、 技术领域 0001 本发明涉及医药技术领域， 是一种芳香新塔花总黄酮提取物及其生产方法和心血 管药物。
9、的应用。 二、 背景技术 0002 芳香新塔花 (Ziziphora clinopodioides Lam.)， 又名唇香草、 小叶薄荷， 为唇形 科新塔花属植物。生于砾石坡地及半荒漠草滩上。我国分布于新疆， 国外前苏联、 蒙古亦有 分布。 史料记载， 芳香新塔花全草入药， 味辛性寒， 具有疏散风热， 清利头目， 宁心安神， 利水 清热， 壮骨强身， 清胃消食等功效。我们前期系统研究了芳香新塔花的化学成分， 表明芳香 新塔花含大量黄酮类化合物， 而黄酮类化合物具有广泛的药理活性， 目前， 黄酮类化合物在 心血管疾病方面的作用已为人们所广泛接受。 0003 黄酮类化合物是一类天然有机化合物， 广。
10、泛存在于植物界， 生物学和医药学界的 研究结果显示， 某些黄酮类化合物有着显著的活性 ： 可维护血管正常的渗透压， 防止血管硬 化， 降低血脂， 降低胆固醇， 抑制血栓形成， 抗菌消炎， 抑制肿瘤细胞增殖等。银杏、 山楂、 大 豆等多种植物中的黄酮类化合物在医药和食品方面得到广泛研究和应用。 0004 近年来研究发现， 心血管等多种疾病的产生和发展与体内多余自由基对组织细胞 的损伤有密切关系。 现代药理学研究表明， 酚酸、 黄酮类化合物因其结构特点而具有很强的 清除体内自由基作用， 表现出多方面的生物活性 ： 舒张血管、 抗癌、 抗病毒、 抗菌消炎、 抗过 敏等活性。 因此对该类成分的研究已成。
11、为天然药物领域的热点之一， 尤其是在抗氧化作用、 抗肿瘤及治疗心血管疾病等方面， 引起了医药界的极大关注。 0005 目前中国还没有与芳香新塔花总黄酮提取物有关的专利文献公开。与芳香新塔 花有关的文献报道也较少， 主要涉及其植物全草挥发油化学成分分析、 植化成分等， 例如， 杨小菊等 芳香新塔花化学成分的分离与鉴定 ( 沈阳药科大学学报 J2008， 25(6)456 458) ； 杨伟俊等 芳香新塔花挥发油的化学成分分析 ( 新疆中医药 J， 2009， 27(1) ： 23-24) 等文献。 0006 上述已经公开的各种研究对其药理及药理活性基础方面的研究不够深入。 没有涉 及黄酮类成分的。
12、制备方法及其药理作用， 已有文献仅针对水提取物的抗心肌缺血作用， 给 药量大， 成分复杂， 不仅造成资源浪费， 还存在临床安全隐患。 所以， 芳香新塔花这一丰富的 自然资源仍有待于深入研究和开发利用。 三、 发明内容 0007 本发明提供了一种芳香新塔花总黄酮提取物及其生产方法和心血管药物的应用， 其克服了上述现有技术之不足， 解决了芳香新塔花被充分利用的问题， 提高了芳香新塔花 资源的利用率， 特别是本发明芳香新塔花总黄酮提取物在用于制备心血管药物方面的应 用。 说 明 书 CN 101623325 B2/7 页 4 0008 本发明的技术方案之一是通过以下方式得到的 ： 一种芳香新塔花总黄。
13、酮提取物， 其按下述方法得到 ： 将芳香新塔花干药材， 粉碎并过 10 目筛至 50 目筛， 加入 6 倍重量份 至 12 倍重量份的水或 30至 90乙醇水溶液， 浸泡至透心， 加热至微沸回流提取 1 次至 4 次， 每次 0.5 小时至 2.5 小时， 合并提取液， 放置室温， 过滤， 滤液减压浓缩至干药材的 1 倍 重量份至 3 倍重量份， 浓缩液通过大孔吸附树脂柱， 随后， 在常温下依次以 6 倍重量份至 12 倍重量份的水、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 30乙醇水溶液、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 50乙醇水溶液、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 70乙醇水溶液洗脱， 。
14、洗脱流速为 300ml/h 至 1000ml/h ； 收集上述乙醇水溶液洗脱液， 减压浓缩并干燥得到干燥黄色至棕黄色粉末状 的芳香新塔花黄酮类提取物。 0009 本发明的技术方案之二是通过以下方式得到的 ： 将芳香新塔花干药材， 粉碎并过 10 目筛至 50 目筛， 加入 6 倍重量份至 12 倍重量份的水或 30至 90乙醇水溶液， 浸泡至 透心， 加热至微沸回流提取 1 次至 4 次， 每次 0.5 小时至 2.5 小时， 合并提取液， 放置室温， 过滤， 滤液减压浓缩至干药材的 1 倍重量份至 3 倍重量份， 浓缩液通过大孔吸附树脂柱， 随 后， 在常温下依次以 6 倍重量份至 12 倍。
15、重量份的水、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 30乙醇 水溶液、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 50乙醇水溶液、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 70乙 醇水溶液洗脱， 洗脱流速为 300ml/h 至 1000ml/h ； 收集上述乙醇水溶液洗脱液， 减压浓缩并 干燥得到干燥黄色至棕黄色粉末状的芳香新塔花黄酮类提取物。 0010 下面是对上述技术方案的进一步优化和 / 或选择 ： 0011 上述减压回收乙醇并浓缩是在 40至 80、 -0.07Mpa 至 -0.1Mpa 下进行的。 0012 上述干燥是在 50至 80下的鼓风干燥箱内进行的或者干燥是在风温度 130 至 190、 出风。
16、温度 30至 90的喷雾干燥下进行的或者干燥是在冷冻干燥 12 小时至 72 小时进行的。 0013 上述大孔吸附树脂柱采用下述型号 ： AB-8 或 SA-1， SA-3， FL-1， FL-3， DM-130， DM-B1， ADS-7， ADS-17， HPD-300， HPD-600， HP-20。 0014 本发明的技术方案之三是通过以下方式得到的 ： 上述的芳香新塔花总黄酮提取物 在制备心血管药物方面的应用。 0015 除另有说明外， 本说明书的部分术语定义如下 ： 0016 黄酮类化合物 ： 指化学结构上属于黄酮类、 黄酮醇类、 二氢黄酮类、 二氢黄酮醇类、 花色素类、 黄烷醇类。
17、、 双苯吡酮类、 异黄酮类、 查尔酮类、 二氢查尔酮类、 橙酮类、 高异黄酮类 等的化合物， 以及它与单糖或寡糖形成的糖甙或其它形式的衍生物。 0017 本发明所得芳香新塔花的各提取物都能在制备心血管药物方面得到应用， 并使收 率降低 ( 服用剂量降低， 即达到同样的药效所使用的药材量降低 )， 在提高疗效的同时， 大 大节约了芳香新塔花资源、 降低了成本。 四、 附图说明 0018 附图 1 为芳香新塔花总黄酮部位对离体血管环张力的影响， 其中 ： 横坐标刻度分 别代表阳性对照药普奈洛尔的 5 个浓度级别 ( 即 1-5 分别代表为 0.001-0.10g/l 5 个浓度 级别 )， 及受试。
18、药 5 个浓度级别 ( 即 1-5 分别代表为 0.03-3.0g/l 5 个浓度级别 )。 0019 附图 2 为芳香新塔花总黄酮提取物不同浓度对 DPPH清除率。 说 明 书 CN 101623325 B3/7 页 5 五、 具体实施方式 0020 本发明不受下述实施例的限制， 可根据上述本发明的技术方案和实际情况来确定 具体的实施方式。 0021 1、 芳香新塔花总黄酮提取物的提取 0022 1.1 提取 0023 将芳香新塔花干药材， 粉碎并过10目筛至50目筛， 加入6倍重量份至12倍重量份 的水或 30至 90乙醇水溶液， 浸泡至透心， 加热至微沸回流提取 1 次至 4 次， 每次。
19、 0.5 小 时至 2.5 小时， 合并提取液， 放置室温， 过滤， 滤液减压浓缩至干药材的 1 倍重量份至 3 倍重 量份， 浓缩液通过大孔吸附树脂柱， 随后， 在常温下依次以6倍重量份至12倍重量份的水、 6 倍重量份至12倍重量份的30乙醇水溶液、 6倍重量份至12倍重量份的50乙醇水溶液、 6 倍重量份至 12 倍重量份的 70乙醇水溶液洗脱， 洗脱流速为 300ml/h 至 1000ml/h ； 收集 上述乙醇水溶液洗脱液， 并减压浓缩并干燥得到干燥黄色至棕黄色粉末状的芳香新塔花总 黄酮提取物。 0024 上述减压回收乙醇并浓缩是在 40至 80、 -0.07Mpa 至 -0.1Mp。
20、a 下进行的。 0025 上述干燥是在 50至 80下的鼓风干燥箱内进行的或者干燥是在风温度 130 至 190、 出风温度 30至 90的喷雾干燥下进行的或者干燥是在冷冻干燥 12 小时至 72 小时进行的。 0026 上述大孔吸附树脂柱采用下述型号 ： AB-8 或 SA-1， SA-3， FL-1， FL-3， DM-130， DM-B1， ADS-7， ADS-17， HPD-300， HPD-600， HP-20。 0027 本发明首次发现上述提取物具有抗氧化活性和抗心肌缺血作用。因此， 本发明提 供的所述提取物能够用于制备治疗和 / 或预防心血管药物方面的应用， 如 ： 心绞痛、 。
21、冠脉粥 样硬化、 心肌缺血等病症 ； 以及其它相关病症。 本发明所述提取物与药学上可接受的载体组 成治疗和 / 或预防某些心血管疾病的心血管药物， 并以适合药用的制剂形式存在， 这些制 剂形式可以是片剂、 糖衣片剂、 薄膜衣片剂、 肠溶衣片剂、 缓释片剂、 胶囊剂、 硬胶囊剂、 软胶 囊剂、 缓释胶囊剂、 口服液、 合剂、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 溶 液剂、 注射剂、 粉针剂、 冻干粉针剂、 栓剂、 软膏剂、 硬膏剂、 霜剂、 喷雾剂、 滴剂、 贴剂等。 0028 1.2 总黄酮含量测定 0029 紫外分光光度法测定条件如下 ： 0030 对照品溶。
22、液 ： 取芦丁为对照品， 用 95乙醇水溶液制成每 1ml 含 0.2mg 的溶液 ； 0031 供试品溶液 ： 取新塔花总黄酮提取物， 加 95乙醇水溶液， 制成每 1ml 含 0.4mg 的 溶液。 0032 测定法 ： 取对照品溶液及供试品溶液， 按分光光度法 ( 中国药典 2005 版一部附录 IV A)， 在 510nm 处测定吸收度， 总黄酮物质含量为 20 80。 0033 2、 芳香新塔花总黄酮提取物清除 DPPH 自由基活性实验 0034 心血管等多种疾病的产生和发展与体内多余自由基对组织细胞的损伤密切关系， 同时大量的研究已经证实， 自由基连锁反应是心肌缺血的核心病理环节，。
23、 在心肌缺血时产 生的自由基可引起心律失常、 心肌顿抑及不可逆的心肌细胞凋亡， 因此抗自由基活性对于 防治心肌缺血损伤有重要的意义。 故本实验考察所得芳香新塔花总黄酮的自由基捕获清除 说 明 书 CN 101623325 B4/7 页 6 能力。 0035 实验方法 ： 抗氧化活性以清除 DPPH 自由基能力大小表示。根据预实验确定的实 验条件， 测定芳香新塔花总黄酮清除 DPPH 自由基的活性。精确吸取芳香新塔花总黄酮贮备 液， 用乙醇稀释为 0.01mg/ml、 0.0125mg/ml、 0.0167mg/ml、 0.025mg/ml、 0.05mg/ml， 取各浓 度样品 2ml， 加入。
24、 2ml 210-4mol/L DPPH， 摇匀， 反应 30min 后， 立即测 517nm 吸收值， 测 得的吸光度为 A 样品。用 2ml 无水乙醇加入 2ml 210-4mol/L DPPH溶液为空白对照， 摇 匀， 反应 30min 测得的吸光度为 A 空白对照， 0036 同上法， 测定维生素 C(VC) 不同浓度溶液的 A 样品 vc， A 空白对照 vc。 0037 计算公式为 ： 0038 DPPH清除率 ( ) 1-A样品/A空白对照100 0039 实验结果 ： 通过公式计算， 以 DPPH 清除率对样品浓度作图 ( 图 2)， 通过线性回归 方程， 求得总黄酮提取物半数。
25、清除率浓度 (IC50) 为 0.017mg/ml， VC 半数清除率浓度 (IC50) 为 0.01mg/ml。 0040 图2直观地表示了DPPH自由基清除率随着芳香新塔花总黄酮浓度的增大而增大， 提示芳香新塔花总黄酮具有良好的抗 DPPH 自由基的活性， 其浓度与 DPPH 自由基清除率有 较好的量效关系， 大量研究证明心肌组织细胞的损伤与体内自由基有着密切的关系， 因此 此实验初步推测其可能具有较好的保护心肌活性。 0041 3、 芳香新塔花总黄酮提取物对大鼠离体胸主动脉舒张作用实验 0042 冠心病又称缺血性心脏病， 是由于冠状动脉功能性或器质性病变导致冠脉供血和 心肌需求之间不平衡。
26、所致的心肌损害， 其实质是心肌缺血。而通过药物舒张血管， 从而增 加血流量是改善心肌供血的主要途径之一， 本试验采用离体血管张力记录法观察芳香新塔 花提取物对大鼠胸主动脉血管反应性的影响， 提示芳香新塔花提取物对血管有明显舒张作 用。 0043 本试验的原理在于 ： 血管平滑肌细胞内钙离子 (Ca2+) 浓度增高是血管收缩的必要 条件， 平滑肌细胞兴奋有两条钙通道参与钙离子内流 ： 电压依赖性钙通道 (VDC) 和受体操 纵性钙通道 (ROC)。KCl 可使细胞膜去极化， 开放 VDC， 导致细胞外 Ca2+内流， 平滑肌收缩。 血管环在预加入高浓度 K+的无钙 K-H 液中孵育后， 细胞膜处。
27、于去极化状态， 电压依赖性钙 通道处于活化状态， 此时所引起的血管环收缩主要是细胞外 Ca2+通过钙通道流入细胞内所 引起。此实验考察芳香新塔花不同提取部位对 KCl 所刺激的血管收缩的舒张作用。 0044 实验材料 ： (1) 药品与试剂芳 香新塔花总黄酮提取物， 由实验室制备 ； 普萘洛 尔， 山西云鹏制药有限公司， 国药准字H14020768 ； NaCl、 KCl、 CaCl2、 KH2PO4、 MgSO4、 NaHCO3、 葡 萄糖、 乙二胺四乙酸， 均由上海冠戈实业有限公司生产。K-H 生理液配方 ： NaCl 6.92g， KCl 0.35g， CaCl20.28g， KH2PO。
28、4 0.16g、 MgSO4 0.29g、 NaHCO3 2.1g、 葡萄糖 2.0g， 溶于 1L 双蒸水 中， pH 7.4。 0045 (2) 器材 BL-410 生物机能实验系统、 FT-100 生物张力传感器， 均由成都泰盟 科技有限公司生产 ； DL-501 型超级恒温器， 上海试验设备厂制造 ； 混合气体 (95 O2+5 CO2)， 乌鲁木齐西明特种气体有限公司提供。 0046 (3) 动物 Wistar 大鼠， 雄性 25026.3g， 由新疆医科大学动物实验中心提供， 动 物合格证号 ： 新医动字 SYXK( 新 )2003-0001。 说 明 书 CN 101623325。
29、 B5/7 页 7 0047 实验方法 ： Wistar 大鼠， 雄性 25026.3g。断头处死， 开胸迅速取出胸主动脉， 置 于预先混合气体饱和 4的 K-H 液， 小心去除外周的结缔组织， 并剪成 2 3mm 长的血管 环， 将血管环置于盛有 15mlK-H 液 (37恒温， 并持续通入 95 O2和 5 CO2的混和气体， pH 7.4) 的恒温套瓶中， 每一个血管环用两个 L 型挂钩贯穿血管环管腔， 一端固定， 另一 端连接于张力传感器， 张力变化由 BL-410 生物机能实验系统采集并记录。血管环加静息张 力 2g， 稳定 90min， 期间每 15min 用预温至 37的 K-H。
30、 液更换液体。待血管环完全稳定后， 用 60mmol/L 的 KCl 重复刺激 3 次， 诱发血管的最大收缩幅度， 连续 3 次同样的刺激所引起 的收缩幅度差别 10时， 正式实验， 并以此做为 100收缩张力。按浓度梯度加入芳香新 塔花总黄酮提取物 ( 终浓度为 0.03， 0.10， 0.30， 1.00， 3.00g/L)、 普萘洛尔阳性对照药 ( 终 浓度为 0.001， 0.003， 0.01， 0.03， 0.10g/L)， 生理盐水组给予同体积的生理盐水， 记录加入 药物 10 分钟张力变化。本试验用舒张率表示。舒张率越大， 表明作用越显著。 0048 舒张率 ( 加受试药前张力。
31、 - 加受试药后张力 )/( 药物刺激后张力 - 药物刺激 前张力 )100 0049 结果见表 1 和图 1。 0050 从表 1 可见， 与生理盐水组相比较， 阳性对照药普萘洛尔在终浓度 0.1g/L 的最大 舒张率为 122.00； 芳香新塔花总黄酮提取物在终浓度 3g/L 时， 对 KCl 刺激血管收缩均有 一定的舒张作用， 其最大舒张率可达到 90.34。 0051 从表1可见， 用KCl刺激血管造成血管收缩模型后， 给予生理盐水组对舒张血管的 作用极其微弱， 最大不超过 1.5， 说明生理盐水不能有效舒张血管 ； 阳性对照药普萘洛尔 在终浓度 0.1g/L 的最大舒张率为 122.。
32、00， 说明其舒张血管作用非常显著， 作为临床广泛 认可的治疗心血管疾病的化学药物， 本试验以它做对照， 具有说服力， 其最大舒张率可达到 90.34。表明 ： 芳香新塔花总黄酮提取物对 KCl 刺激的血管收缩具有显著的舒张作用。 0052 图 1( 图 1 为对表 1 的直观表示 ) 表示了实验组浓度 ( 横坐标， g/L) 与血管舒张 率的关系示意图。从图可见， 随着给药浓度的增加， 除生理盐水组未变化外， 总黄酮组的血 管舒张率呈上升趋势， 提示芳香新塔花总黄酮提取物改善血管供血能力与剂量呈正相关。 0053 4、 芳香新塔花总黄酮提取物对脑垂体后叶素致大鼠心肌缺血模型的影响 0054 。
33、用垂体后叶素致大鼠心肌缺血动物模型， 给予 0.8U/Kg 垂体后叶素后心电图主要 表现为心率减慢、 T 波的高耸或倒置、 各心肌酶谱异常， 临床上主要以 ST 段异常来判定心肌 缺血。由于大鼠 ST 段表现不明显， 其变化用 J 点表示。本实验采用注射垂体后叶素复制大 鼠心肌缺血模型， 观察芳香新塔花总黄酮提取物对心肌缺血模型的影响。 研究表明， 注射大 剂量垂体后叶素可诱发动物冠状动脉发生痉挛而引起急性心肌缺血， 与临床上人的冠状动 脉供血不足所致心绞痛相似， 多年来被广泛用于抗心肌缺血药物的筛选研究。 0055 本试验的原理是 ： 动物反复给予试验药物后， 再静脉注射脑垂体后叶素， 导致。
34、心率 减慢、 T 波的高耸或倒置、 各心肌酶谱异常。计算试验组给予脑垂体后叶素后各时间段 J 点 与正常J点差值， 得到J点变化值， 加和各时段变化值， 得到总变化值， 各时段变化值及总变 化值与模型组相应各点比较。 J的变化值越小， 说明心肌损害的保护作用越强。 因此本实验 主要观察 J 点变化值， 从而得到给药组各时段与模型组比较的统计学差异。 0056 实验材料 ： (1) 药品与试剂 芳香新塔花总黄酮提取物， 由本实验室制备 ； 普萘洛 尔， 山西云鹏制药有限公司， 国药准字 H14020768 ； 脑垂体后叶素， 上海第一生化药业有限 说 明 书 CN 101623325 B6/7 。
35、页 8 公司， 国药准字 H31022259。 0057 (2) 器材 BL-410 生物机能实验系统， 由成都泰盟科技有限公司生产 ； 超氧化歧 化酶(SOD)、 乳酸脱氢酶(LDH)、 丙二醛(MDA)测试盒， 均为100T， 南京建成生物工程研究所。 0058 (3) 动物 ： Wistar 大鼠， 雄性 19823.2g， 由新疆医科大学动物实验中心提供， 动 物合格证号 ： 新医动字 SYXK( 新 )2003-0001。所有大鼠均做心电图， 将心电图异常大鼠剔 除， 选取正常心电图大鼠进入实验。 0059 实验方法 ： 将正常大鼠按体重、 性别分为 3 组， 分别为模型组， 阳性对。
36、照药单硝酸 异山梨酯组， 总黄酮提取物组， 每组 10 只， 每日一次， 连续 7 天 ； 模型组给予同体积生理盐 水， 阳性对照药给予单硝酸异山梨酯 10.1mg/kg， 受试药组均给予 0.3g/kg。造模前均记录 II 导联心电图， 并于末次给药 30min 后， 股静脉注射脑垂体后叶素 0.8U/kg， 做 II 导联心电 图， 记录 5s、 10s、 30s、 60s、 180s、 300s、 600s 心电图， 观察各时间段的心率、 J 点变化。注射 脑垂体后叶素45min后断颈取血， 3500r/min离心取血清， 按照试剂盒说明书测定SOD、 LDH、 MDA 指标。 0060。
37、 上述实验得到如下结果 ： 0061 (1)从表2可见， 与模型组比较， 给药组在各时段J点变化值均有所降低， 总变化值 与模型组相比较有显著性差异， 说明芳香新塔花总黄酮提取物对脑垂体后叶素所引起的心 肌缺血 J 点变化有很好的保护作用， 提示各提取物对心肌缺血具有改善作用， 效果较阳性 对照组 ( 单硝酸异山梨酯组 ) 相当。而单硝酸异山梨酯组作为临床公认的治疗心肌缺血的 药物， 本试验为芳香新塔花总黄酮提取物用于治疗心肌缺血提供了可靠证据。 0062 (2) 计算试验组给予脑垂体后叶素后各时间段心率与正常心率差值， 得到心率变 化值， 各时段变化值与模型组相应各点比较。结果表明， 给药组心率差值变化较小， 提示给 药组对脑垂体后叶素所引起的心肌缺血心率变化无影响 ( 表 3)。 0063 (3) 大鼠血清测定 LDH、 SOD、 MDA， 所得数值与模型组比较， 无统计学差异， 提示给 药组对脑垂体后叶素所引起的心肌酶的变化无影响 ( 表 4)。 0064 说 明 书 CN 101623325 B7/7 页 9 说 明 书 CN 101623325 B1/1 页 10 图 1 图 2 说 明 书 附 图 。