技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种抗肿瘤的西米特酸注射液及其 制备方法。
背景技术
西米特酸是一种从海绵中分离提取得到的海洋天然活性物质，结构上属 于异臭椿酸三萜，具有抗肿瘤的活性。西米特酸的化学名称为(13E，15E， 17E，22E，24E)-3，12-二氧-13，15，17，22，24-五烯-26-异臭椿酸，英文名称 为Rhabdastrellic Acid-A，化学结构式如下：
目前还尚未有将西米特酸用于注射液的任何报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种抗肿瘤的西米 特酸注射液。
本发明的另一目的在于提供一种上述抗肿瘤的西米特酸注射液的制备 方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明抗肿瘤的西米特酸注射液，包含活性成分西米特酸和可药用辅 料。
所述可药用辅料，包含抗氧化剂、增溶剂、助溶剂和水。
所述抗氧化剂为2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)；所述增溶剂为聚氧乙烯 蓖麻油；所述助溶剂为药用级无水乙醇；所述水为注射用水。在注射液中加 入2，6-二叔丁基对甲酚作为抗氧化剂，能有效避免在高温灭菌过程中活性成 分的化学变化。
本发明抗肿瘤的西米特酸注射液，优选按重量百分比包含下述组分： 0.25～0.35％的西米特酸、0.005～0.015％的2，6-二叔丁基对甲酚、5～20％的 聚氧乙烯蓖麻油、15～40％的药用级无水乙醇、50～70％的注射用水。
所述西米特酸的用量优选0.30％(重量百分比)。所述2，6-二叔丁基对 甲酚的用量优选0.01％。所述聚氧乙烯蓖麻油的用量优选7～15％，更优选 10％。所述药用级无水乙醇的用量优选20～30％，更优选25％。所述注射 用水的用量优选60～70％，更优选65％。
本发明抗肿瘤的西米特酸注射液的制备方法，是由活性成分西米特酸粉 末与可药用辅料混合、并过滤除菌配制而成，具体包括下述步骤：在药用级 无水乙醇中，加入聚氧乙烯蓖麻油并搅拌均匀；然后加入西米特酸和2，6- 二叔丁基对甲酚，搅拌15～30分钟；再加入注射用水，搅拌15～30分钟； 最后过滤、高温灭菌，得到抗肿瘤的西米特酸注射液。本发明制备的西米特 酸注射液的规格可为5ml∶15mg。
本发明抗肿瘤的西米特酸注射液，其活性成分西米特酸是一类具有重要 生理活性、高效低毒的海洋天然产物。初步筛选发现，西米特酸对B淋巴 细胞和T淋巴细胞的增殖显示出100％的抑制作用(0.1μM浓度下)。体外 活性试验表明，西米特酸对小白鼠淋巴白血病L1210、小白鼠黑色素瘤B16、 人鼻咽癌KB和人早幼粒白血病HL-60等四种细胞系具有显著的抑制增殖作 用，IC50在7.5～10.2μg/ml之间。生物活性测试表明，西米特酸在浓度 10-8mol/L时对P-388小鼠白血病瘤株的抑制率达91.1％，对A-549人肺腺 癌的抑制率超过60％。动物体内抑瘤试验表明，西米特酸对艾氏腹水癌实 体瘤、S180肉瘤、人肺巨细胞(PG)癌和人LOVO结肠癌等多种肿瘤模 型有较高的抑制增殖活性，且毒性不高，安全系数较大。抗癌作用机理研究 表明，西米特酸能通过激活Caspase-3酶诱导HL-60肿瘤细胞的凋亡；基 因芯片检测试验显示，西米特酸能增高或降低一些凋亡基因的表达；抑制 PI3K/AKT信号转导途径可能是其抗肿瘤的作用机制。
本发明与现有技术相比具有如下优点和效果：
(1)本发明抗肿瘤的西米特酸注射液，属于一种天然药物，抗肿瘤性 能好，安全性高，稳定性好，临床副作用低。
(2)原料价格便宜，成本低。
(3)制备工艺简单。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不 限于此。
实施例1
西米特酸注射液的配方组成：0.3克的西米特酸、0.01克的2，6-二叔丁 基对甲酚、10克的聚氧乙烯蓖麻油、30克的药用级无水乙醇、59.69克的 注射用水。
配制程序：在烧杯中准确称取30克药用级无水乙醇，加入10克聚氧 乙烯蓖麻油，搅匀后，加入0.3克西米特酸粉末和0.01克2，6-二叔丁基对 甲酚粉末，搅拌15分钟；再加入59.69克注射用水，搅拌30分钟，再经 注射液专用过滤装置过滤，高温灭菌，得到抗肿瘤的西米特酸注射液。
实施例2：
西米特酸注射液的配方组成：0.25克的西米特酸、0.005克的2，6-二叔 丁基对甲酚、20克的聚氧乙烯蓖麻油、15克的药用级无水乙醇、64.745 克的注射用水。
配制程序：在烧杯中准确称取15克药用级无水乙醇，加入20克聚氧 乙烯蓖麻油，搅匀后，加入0.25克西米特酸粉末和0.005克2，6-二叔丁基 对甲酚粉末，搅拌20分钟；再加入64.745克注射用水，搅拌20分钟，再 经注射液专用过滤装置过滤，高温灭菌，得到抗肿瘤的西米特酸注射液。
实施例3：
西米特酸注射液的配方组成：0.35克的西米特酸、0.015克的2，6-二叔 丁基对甲酚、5克的聚氧乙烯蓖麻油、40克的药用级无水乙醇、54.635克 的注射用水。
配制程序：在烧杯中准确称取40克药用级无水乙醇，加入5克聚氧乙 烯蓖麻油，搅匀后，加入0.35克西米特酸粉末和0.015克2，6-二叔丁基对 甲酚粉末，搅拌30分钟；再加入54.635克注射用水，搅拌15分钟，再经 注射液专用过滤装置过滤，高温灭菌，得到抗肿瘤的西米特酸注射液。
试验1：本发明西米特酸注射液的质量分析
1、颜色检查：根据中国药典，用标准比色法测得西米特酸注射液的色 调为黄绿色8号。
2、PH值测定：PHS3B精密PH计，按照药典规定校准仪器，室温18℃， 湿度65％，测得西米特酸注射液的PH范围：3.99～4.33。(PH计事先用 PH＝6.86、PH＝4.00的标准缓冲液两点法校正)
3、原料药的特征反应：西米特酸具有特征的Carr-Priew显色现象。原 理：根据中国药典对维甲酸VA的鉴别方法，利用西米特酸的共轭多烯侧链 与SbCl3-氯仿饱和溶液具有由橙→深红的特征颜色反应来鉴别。
4、注射液的特征吸收：用UV-2550 SHIMADZU紫外吸收仪测得西米 特酸注射液最大吸收波长：λ＝389nm，Abs＝28630。
5、澄明度：按药典澄清度检查法测得西米特酸注射液小于0.5号浊度 标准液。
6、含量测定：用紫外分光光度法，测得浓度范围0.25％～0.35％。
试验2：本发明西米特酸注射液的稳定性研究
将西米特酸注射液分别置于100℃环境1小时、80℃环境7天及10℃ 环境7天后经HPLC(测定波长为389nm)测定活性成分西米特酸的峰面 积，通过计算得到西米特酸的残留百分比，见表1。
表1 西米特酸注射液稳定性研究 试验条件 100℃，1h 80℃，7d 10℃，7d 西米特酸残留百分比(％) 95.01％ 93.38％ 99.50％ 色泽 均无明显变化 pH值 均无明显变化保持在4.0～4.3 外观 均保持澄清
由表1可知，西米特酸注射液在常温(20℃以下)环境中比较稳定， 活性成分的浓度基本保持不变。但在高温加热时，活性成分浓度略有下降。 因此存放环境的温度不宜过高，最好不超过30℃。
试验3：本发明西米特酸注射液的抗肿瘤药效学试验
(1)西米特酸注射液对艾氏腹水癌实体瘤的影响
取S-180腹水瘤接种小鼠皮下，随机分组，每组10只，共6组。第一 组为生理盐水对照组；第二组为溶剂(含体积25％乙醇和10％聚氧乙烯蓖 麻油的水溶液)对照组；第三组为阳性药物环磷酰胺(CTX)组；第四～六 组为西米特酸注射液组，分为5、10、20mg/kg/d三个剂量组。尾静脉注射， 连续给药10天，处死小鼠，称瘤重并按下列公式计算肿瘤抑制率。
公式中对照组是指生理盐水对照组。
实验结果表明，5、10、20mg/kg/d三个剂量组的西米特酸注射液组的 抑制率分别为38.5％、46.4％、66.06％，这说明剂量为20mg/kg/d时西米 特酸注射液有明显抑制艾氏腹水癌实体瘤的作用。CTX组的抑瘤率为56％。 实验重复一次，结果相似。
(2)西米特酸注射液在裸鼠体内对肝癌细胞Hep3B移植瘤的抑制实验
取Hep3B细胞接种于裸鼠皮下，1周后肿瘤增殖到可清楚摸到时，将 动物随机分成6个组，每组8只裸鼠。第一组为生理盐水对照组；第二组为 溶剂(含体积25％乙醇和10％聚氧乙烯蓖麻油的水溶液)对照组；第三组 为阳性药物CTX组；第四～六组为西米特酸注射液组，分为5、10、20mg/kg/d 三个剂量组。腹腔注射，注射体积为0.2ml/只，隔天给药，共给药12次， 处死裸鼠，称瘤重并按上述公式计算肿瘤抑制率。
实验结果表明，5、10、20mg/kg/d三个剂量组的西米特酸注射液组的 抑制率分别为18.1％、36.2％、57.8％，这说明剂量为20mg/kg/d时西米特 酸注射液有明显抑制肝癌细胞Hep3B移植瘤的作用。CTX组的抑瘤率为 54％。实验重复一次，结果相似。