技术领域
本发明涉及用于通过葡糖异生作用加速酒精代谢或减轻疲劳的 组合物，其包含咖啡因和丝氨酸、色氨酸或富含丝氨酸和/或色氨酸 的肽作为活性成分。本发明的组合物特别适用于加速酒精代谢和/或 减轻疲劳。
背景领域
含酒精的饮料例如酒精饮料在放松人的心情，从而增进交流上是 有效的。因此，其长期以来用于各种场合，例如宗教招待、典礼和聚 会等。此外，酒精饮料不仅自身具有良好的味道，而且在改善膳食的 味道、释放压力和保持健康上也具有有效的作用，因此许多人在其日 常生活中喜好酒精饮料。
酒精饮料中包含的乙醇主要在肝脏中通过醇脱氢酶(ALD)的作 用代谢成乙醛，乙醛进一步被醛脱氢酶(ALDH)代谢为乙酸。这两 种酶(ADH和ALDH)在各自的酶反应过程中需要氧化形式的烟酰 胺腺嘌呤二核苷酸(在下文中称为“NAD+”)。反应中所用的NAD+被还原成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的还原形式(在下文中称为 “NADH”)(图1)。因此，当过量摄入乙醇时，NADH/NAD+的比 率随着乙醇的代谢而增加。结果，细胞内环境倾向于还原状态，从而 抑制了乙醇代谢的继续进行。为了从过度还原状态恢复过来，在细胞 内进行了从丙酮酸至乳酸的反应，该反应伴随着NADH至NAD+的氧 化。从而体内乳酸对丙酮酸的比率增加，且对身体产生了负担。特别 是当摄入极其过量的乙醇时，血液乳酸水平大大增加，从而诱导了高 乳酸血症，已知该病症很可能会导致酸中毒(学术界(academia))和高 尿酸血症。此外，当丙酮酸减少时，葡糖异生作用被阻止，其结果是 不仅发生了酒精中毒性低血糖症(alcoholic hypoglycermia)而且还降 低了产生能量的三羧酸循环的循环。
已知和西方人相比，在黄种人包括日本人中，酒量小的人(light drinker)的比率高。这是因为具有不完全ALDH2功能的人的比率高， 所述ALDH2是两种ALDH类型中的一种，且其对乙醛具有更高的亲 和力。被称为“酒量小的人”的人具有ALDH2*1/2(ND)(ALDH2 等位基因中的一个丧失了其功能)的基因型，且其占了整个人口的大 约30至40％。“不能耐受酒精的”人具有基因型ALDH2*1/1(DD) (ALDH2等位基因的两个都丧失了其功能)，且其占了整个人口的 大约10％。ND和DD基因型的人具有对酒精低耐受性的原因在于， 尽管从酒精饮料中摄取的乙醇可被代谢直至乙醛，但乙醛(其是有毒 性的并且导致不舒服的感觉例如“醉酒不适(drunken sickness)” 和“宿醉”)在体内不容易被代谢。
从上述的背景可以看出，多年来强烈地想要开发出这样的有用的 组合物，该组合物使人能够舒适地喝醉而不具有大的身体负担和使人 在摄入酒精饮料时适当地保持冷静。为了满足该愿望，许多研究者已 开发了乙醇吸收抑制剂和乙醇代谢加速剂。例如，如下面所示，迄今 已公开了氨基酸和肽对酒精代谢有效的发现。加速酒精代谢的氨基酸 和肽的实例包括甘氨酸(日本专利公开(Kokai)号2003-116504)、 D-半胱氨酸和/或其盐(日本专利公开(Kokai)号3-74327)、赖氨 酸(日本专利公开(Kokai)号6-116144)、通过玉米蛋白的酶解获 得的具有200至4000分子量的肽(日本专利公开(Kokai)号7- 285881)和通过用蛋白酶处理猪肉获得的经加工的猪肉产品(日本专 利公开(Kokai)号11-276116)。抑制乙醛毒性的氨基酸和肽的实例 包括L-半胱氨酸(Sprine H等人，Agents Actions(1975)第5卷164- 173)、L-丙氨酸(日本专利公开(Kokai)号61-134313)、含有L- 丙氨酸的二肽(日本专利公开(Kokai)号4-21635)和L-茶氨酸(日 本专利公开(Kokai)号6-40901)。此外，抑制乙醛产生的氨基酸和 肽的实例包括脯氨酸(日本专利公开(Kokai)号6-116144)。此外， 具有抗酒精中毒(anti-alcoholism)作用的氨基酸和肽的实例包括丙 氨酸和谷氨酰胺(日本专利公开(Kokoku)号4-20409)。然而，这 些氨基酸和肽的作用主要是基于大量给动物施用的结果和基于不满 足科学、定量或统计学要求的人研究的结果来确认的。仍只有少数其 作用通过剂量的方式确认的氨基酸或肽，人可在其日常生活中容易地 摄入该剂量。
另一方面，也公开了包含从茶中提取的儿茶素和/或咖啡因作为 主要成分的组分具有加速乙醇代谢的作用(日本专利公开(Kokai) 号6-263648和8-169831)。从给小鼠施用的研究来看，证明必须以 相对大的、达到300mg/kg体重的量施用从茶中提取的活性成分(主 要是咖啡因)来显著降低血液乙醇水平(Kakuda T等人Biosci. Biotech.Biochem.(1996)第60卷1450-1454)。此后进一步进行 的研究显示在以300mg/kg体重的量给小鼠施用咖啡因时胃中乙醇吸 收抑制作用对观察到的血液乙醇水平的降低有极大贡献(日本专利公 开(Kokai)号8-277221)。通过咖啡因降低血液乙醇的水平是个有 趣的发现。然而，咖啡因的药物可接受剂量和在小鼠中提供明显变化 的剂量有很大的不同。为了更明确地解释，由成人吸收的想要的咖啡 因的量是大约100至300mg/剂，且每天的咖啡因总量想要地是500mg 或更低。给具有大约50kg平均体重的成年女性施用的咖啡因的安全 剂量经计算为每天2至6mg/kg体重。此外，还未完全阐明咖啡因如 何降低血液乙醇水平的机制。因此基于小鼠中的实验结果计算人中咖 啡因的有效量并不总是很容易的。关于安全剂量的咖啡因是否真正有 效的问题仍未得到解决。
已知丝氨酸具有皮肤保湿作用和大脑的抗衰老作用。已知色氨酸 在大脑中充当神经递质的前体，从而其具有减轻抑郁症的作用，以及 安定药、安眠药、镇静剂和止痛剂的作用。已知天然存在的氨基酸(除 了亮氨酸和赖氨酸以外)是已知参与葡糖异生作用的氨基酸(即，可 转化为葡萄糖的氨基酸)。然而，丝氨酸和色氨酸与咖啡因协同作用 以在葡糖异生中选择性地充当有效的底物，从而增进乙醇代谢的加速 仍未知道。
发明内容
当将黄种人包括日本人和西方人比较时，酒量小的人的比率较 高。因此，多年来强烈地想要开发出这样的有用的组合物，该组合物 使人在摄入酒精饮料时能够舒适地喝醉而不会具有大的身体负担。依 赖于身体状况和酒精饮料的量，甚至对于酒量大的人(hard drinkers)而言产生身体负担和不舒适的感觉也不是罕见的事例。然 而，迄今公开的几乎所有组合物都有问题。其中一些必需大量施用而 另一些在人中的实施效果上有问题。
本发明考虑到上述情况而实施并且涉及提供了这样的具有安全 剂量的活性成分的组合物，该组合物用于加速酒精代谢、当摄入酒精 (即，乙醇)时减轻身体负担或从疲劳恢复。
我们研究了当以3mg/kg体重的剂量摄入咖啡因时其的加速乙醇 代谢的效果，该剂量在人的可接受摄入范围之内。然而，没有观察到 显著的效果。因此，我们通过使用大鼠，研究了咖啡因的摄入对肝脏 的作用，肝脏是参与乙醇代谢的主要器官。结果，基于在施用咖啡因 的情况下基因表达的变化，我们发现特定的氨基酸例如丝氨酸和色氨 酸的分解代谢加速。我们实际上测量了血液葡萄糖水平。基于该测 量，估计从氨基酸至葡萄糖的葡糖异生作用和所述代谢系统(图1) 被加速。此外，证明了所述系列代谢系统(因为其伴随着NADH至 NAD+的转化)在摄入乙醇时抑制NADH/NAD+的比率增加，从而平 稳地代谢乙醇的可能性。基于这些发现，他们产生这样的想法，即可 通过将咖啡因和氨基酸(丝氨酸或色氨酸)组合来显著地产生乙醇代 谢加速的作用，且通过对人的研究证实了该想法，所述氨基酸在对于 人是安全的剂量内没有表现出明显的乙醇代谢加速的作用。
因此，对人的研究显示，即使分别地摄入安全剂量的咖啡因或氨 基酸(丝氨酸)也没有观察到明显的乙醇代谢加速的作用。然而，在 同时摄入咖啡因和氨基酸的情况下，第一次观察到血液乙醇水平的显 著降低的作用。此外，观察到血液乙醛水平下降的趋势。由此得出如 下结论，因为加速了乙醇至乙酸的代谢，所以降低了血液乙醇的水 平。此外，血液中的葡萄糖水平显著增加，且NADH/NAD+的比率具 有下降的趋势。根据这些事实，推断出葡糖异生作用的加速涉及乙醇 代谢的加速。在相伴进行的主观评估中，在乙醇摄入时具有“舒适感 觉”的人数显著增加。综合考虑所有结果，组合包含安全剂量的咖啡 因和有效量的丝氨酸或色氨酸的组合物是极其有利的，因为其一举实 现了在酒精摄入时“舒适的感觉”和身体负担减轻的感觉的增加。此 外，还认为加速乙醇代谢的作用导致预防“宿醉”和认为乙醛减少作 用导致预防“醉酒不适”。要指出的是，进行彻底的研究以发现和咖 啡因组合产生作用的氨基酸类型。结果，丝氨酸或色氨酸显著有效(图 12)。
基于上述发现，我们现在已经发现酒精摄入时身体负担的减轻和 疲劳时低血糖症的好转可通过将咖啡因和氨基酸(丝氨酸或色氨酸) 组合而获得，所述咖啡因和氨基酸在对于人是安全的剂量(即，可接 受范围)内没有表现出明显的加速乙醇代谢的作用。
因此，本发明包括下列方面。
根据本发明的第一方面，提供了用于协同地加速体内酒精代谢和 葡糖异生作用的组合物，其特征在于包含有效量的咖啡因和有效量的 氨基酸和/或肽作为活性成分，所述氨基酸和/或肽选自丝氨酸、色氨 酸、富含丝氨酸的肽、富含色氨酸的肽、富含丝氨酸/色氨酸的肽及 其混合物。
在一个实施方案中，本发明的组合物用于减轻由于酒精摄入产生 的身体负担和/或加速酒精代谢。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含咖啡因和丝氨酸作为 活性成分。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含咖啡因和色氨酸作为 活性成分。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含咖啡因以及丝氨酸和 色氨酸的混合物作为活性成分。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸的肽以50至100％的构成该肽 的氨基酸的量包含丝氨酸残基。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸的肽是丝氨酰丝氨酸。
在另一个实施方案中，富含色氨酸的肽以50至100％的构成该肽 的氨基酸的量包含色氨酸残基。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸的肽是色氨酰色氨酸。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸/色氨酸的肽的丝氨酸残基和 色氨酸残基的总数对应于50％至100％的构成该肽的氨基酸。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸/色氨酸的肽是丝氨酰色氨酸 或色氨酰丝氨酸。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10mg或更多。
更具体地，咖啡因含量的实例包括，但不限于，每个组合物10mg 或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg或更多、50mg或更多、 60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、90mg或更多、100mg 或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg或更多、140mg或更 多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更多、230mg或更多、 250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、330mg或更多、350mg 或更多、400mg或更多、或450mg或更多。
在另一个实施方案中，每个组合物中咖啡因的含量在人的可接受 摄入范围之内。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是每个组合物500mg或更 少。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是每个组合物50mg至 500mg。
在另一个实施方案中，氨基酸的含量是每个组合物100mg或更 多。
在另一个实施方案中，氨基酸的含量是每个组合物100mg至 20g。
在另一个实施方案中，肽的含量是每个组合物100mg或更多。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸计算，本发明的组合物的 丝氨酸的含量是每个组合物500mg或更多。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸计算，本发明的组合物的 丝氨酸的含量是每个组合物1g或更多。
在另一个实施方案中，本发明的组合物是饮料或食物或药物。
在另一个实施方案中，所述饮料或食物是如上所述含有咖啡因和 丝氨酸的氨基酸饮料。
根据本发明的第二方面，提供了包含500mg或更少的咖啡因和 100mg或更多的由至少2种组分组成的组合的组合物，所述组分选自 丝氨酸或富含丝氨酸的肽、色氨酸或富含色氨酸的肽和富含丝氨酸/ 色氨酸的肽。
在一个实施方案中，按游离的丝氨酸计算，组合中的丝氨酸的含 量是每个组合物100mg或更多。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸计算，组合中的丝氨酸的 含量是每个组合物500mg或更多。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸计算，组合中的丝氨酸的 含量是每个组合物1g或更多。
在另一个实施方案中，本发明的组合物是饮料或食物或药物。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10至500mg。
更具体地，咖啡因含量的实例包括，但不限于，每个组合物10mg 或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg或更多、50mg或更多、 60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、90mg或更多、100mg 或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg或更多、140mg或更 多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更多、230mg或更多、 250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、330mg或更多、350mg 或更多、400mg或更多、或450mg至500mg(包括两者)。
在另一个实施方案中，将根据第一方面的关于活性成分的含量和 类型的所有实施方案都应用于本发明。
根据本发明的第三方面，提供了包含500mg或更少的咖啡因和 100mg或更多的富含丝氨酸/色氨酸的肽的组合物。
在一个方面，本发明的组合物是饮料或食物或药物。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10至500mg。
更具体地，咖啡因含量的实例包括，但不限于，每个组合物10mg 或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg或更多、50mg或更多、 60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、90mg或更多、100mg 或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg或更多、140mg或更 多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更多、230mg或更多、 250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、330mg或更多、350mg 或更多、400mg或更多、或450mg至500mg(包括两者)。
在另一个实施方案中，将根据第一方面的关于活性成分的含量和 类型的所有实施方案都应用于本发明。
根据本发明的第四方面，提供了用于减轻疲劳的组合物，其特征 在于包含有效量的咖啡因和有效量的氨基酸和/或肽作为活性成分， 所述氨基酸和/或肽选自丝氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的肽、富含色 氨酸的肽、富含丝氨酸/色氨酸的肽及其混合物。
在一个实施方案中，本发明的组合物用于减轻由于酒精摄入发生 的身体负担。
在另一个实施方案中，本发明的组合物用于减轻由于低血糖症发 生的疲劳。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含咖啡因和丝氨酸作为 活性成分。
在另一个实施方案中，本发明的组合物是饮料或食物或药物。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10mg或更多。
更具体地，咖啡因含量的实例包括，但不限于，每个组合物10mg 或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg或更多、50mg或更多、 60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、90mg或更多、100mg 或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg或更多、140mg或更 多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更多、230mg或更多、 250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、330mg或更多、350mg 或更多、400mg或更多、或450mg或更多。
在另一个实施方案中，将根据第一方面的关于活性成分的含量和 类型的所有实施方案都应用于本发明。
根据本发明的第5个实施方案，提供了用于加速酒精代谢的组合 物，其特征在于包含有效量的咖啡因和有效量的氨基酸和/或肽作为 活性成分，所述氨基酸和/或肽选自丝氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的 肽、富含色氨酸的肽、富含丝氨酸/色氨酸的肽及其混合物。
在一个实施方案中，本发明的组合物包含咖啡因和丝氨酸、色氨 酸或其混合物作为活性成分。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸计算，本发明的组合物的 丝氨酸的含量是每个组合物500mg或更多。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸计算，本发明的组合物的 丝氨酸的含量是每个组合物1g或更多。
在另一个实施方案中，本发明的组合物是饮料或食物或药物。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10mg或更多。
更具体地，咖啡因含量的实例包括，但不限于，每个组合物10mg 或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg或更多、50mg或更多、 60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、90mg或更多、100mg 或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg或更多、140mg或更 多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更多、230mg或更多、 250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、330mg或更多、350mg 或更多、400mg或更多、或450mg或更多。
在另一个实施方案中，将根据第一方面的关于活性成分的含量和 类型的所有实施方案都应用于本发明。
根据本发明的第6方面，提供了以离散的包装组合包含第一组合 物和第二组合物的组合物组，所述第一组合物包含500mg或更少的 咖啡因，且所述第二组合物包含100mg或更多的丝氨酸、色氨酸或 其混合物。
在一个实施方案中，第二组合物的丝氨酸含量是500mg或更多。
在另一个实施方案中，第二组合物中的丝氨酸的含量是1g或更 多。
在另一个实施方案中，本发明的组合物是饮料或食物或药物。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10至500mg。
更具体地，咖啡因含量的实例包括，但不限于，每个组合物10mg 或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg或更多、50mg或更多、 60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、90mg或更多、100mg 或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg或更多、140mg或更 多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更多、230mg或更多、 250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、330mg或更多、350mg 或更多、400mg或更多、或450mg至500mg(包括两者)。
在另一个实施方案中，将根据第一方面的关于活性成分的含量和 类型的所有实施方案都应用于本发明。
根据本发明的第7方面，提供了包含咖啡因的饮料，其特征在 于，按游离的丝氨酸和/或游离的色氨酸计算，其以每份饮料500mg 或更多的有效量包含选自丝氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的肽、富含色 氨酸的肽、富含丝氨酸/色氨酸的肽及其混合物的氨基酸和/或肽。
在一个实施方案中，所述饮料选自绿茶、红茶、咖啡、可乐和可 饮用的制剂。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10mg或更多。
更具体地，咖啡因含量的实例包括，但不限于，每份饮料10mg 或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg或更多、50mg或更多、 60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、90mg或更多、100mg 或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg或更多、140mg或更 多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更多、230mg或更多、 250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、330mg或更多、350mg 或更多、400mg或更多、或450mg或更多。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是10mg至500mg，包括两 者。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是50mg至500mg，包括两 者。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是100mg至500mg，包括 两者。
在另一个实施方案中，咖啡因的含量是150mg至500mg，包括 两者。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸的肽和富含色氨酸的肽分别以 50％至100％的构成所述肽的氨基酸的量包含丝氨酸残基和色氨酸残 基。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸/色氨酸的肽的丝氨酸残基和 色氨酸残基的总数对应于50％至100％的构成所述肽的氨基酸。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸和/或游离的色氨酸计 算，本发明的组合物中的氨基酸和/或肽的含量是每个组合物1g或更 多。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸和/或游离的色氨酸计 算，本发明的组合物中的氨基酸或肽或其混合物的含量是每个组合物 500mg至20g。
根据本发明的第8方面，还提供了用于加速酒精代谢或减轻疲劳 的和含有咖啡因的饮料混合的组合物，其特征在于，按游离的丝氨酸 和/或游离的色氨酸计算，以每剂100mg或更多、优选地500mg或更 多的量加入选自丝氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的肽、富含色氨酸的肽、 富含丝氨酸/色氨酸的肽及其混合物的氨基酸和/或肽(作为补充物)。
在一个实施方案中，所述组合物是以上述量含有丝氨酸和/或富 含丝氨酸的肽的糖、乳或柠檬汁。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸的肽和富含色氨酸的肽分别以 50％至100％的构成所述肽的氨基酸的量包含丝氨酸残基和色氨酸残 基。
在另一个实施方案中，富含丝氨酸/色氨酸的肽的丝氨酸残基和 色氨酸残基的总数对应于50％至100％的构成该肽的氨基酸。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸和/或游离的色氨酸的计 算，本发明的组合物中的氨基酸和/或肽的含量是每个组合物1g或更 多。
在另一个实施方案中，按游离的丝氨酸和/或游离的色氨酸的计 算，本发明的组合物中的氨基酸或肽或其混合物的含量是每个组合物 500mg至20g。
在另一个实施方案中，含有咖啡因的饮料以大约10mg或更多的 量包含咖啡因。
更具体地，含咖啡因的饮料中咖啡因含量的实例包括，但不限 于，每个组合物10mg或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg 或更多、50mg或更多、60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、 90mg或更多、100mg或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg 或更多、140mg或更多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更 多、230mg或更多、250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、 330mg或更多、350mg或更多、400mg或更多、或450mg或更多。
本发明的有利方面
本发明的组合物组合包含咖啡因(以人的可接受的摄入范围内的 量)和有效量的丝氨酸、色氨酸和富含丝氨酸/色氨酸的肽。基于此， 所述组合物在酒精摄入时不停地产生加速从乙醇至乙酸的反应的有 利作用；同时，加速葡糖异生作用，从而提高酒精代谢，且在酒精摄 入时减轻身体负担(例如，不舒适的感觉、虚脱(collapse)等)，以及 增加“舒适的醉酒(drunkenness)”或“舒适的感觉”。这些有利的效 果归因于在加速乙醇代谢的葡糖异生作用代谢系统中发生的NADH 至NAD+的转化的贡献。
本发明的组合物加速葡糖异生作用，从而其有效地恢复低血糖症 和减轻疲劳。
本说明书整合了日本专利申请号2004-123427的说明书和/或附 图中描述的内容，基于所述内容本申请要求优先权。
附图简述
图1显示酒精代谢和葡糖异生作用相互之间协同作用中的代谢 关系；
图2A显示大鼠中施用咖啡因后血液葡萄糖水平的增加；
图2B显示咖啡因产生的基因表达的改变，其中TDO表示色氨 酸2，3-双加氧酶基因，SDS表示丝氨酸脱水酶基因，且ALT表示丙 氨酸转氨酶基因(数据表示为平均值±SD)；
图3显示大鼠中通过施用咖啡因+丝氨酸产生的血液乙醇水平的 降低(数据表示为平均值±SE)；
图4显示在对人的研究中丝氨酸(A)、咖啡因(B)和咖啡因+ 丝氨酸(C)对血液乙醇水平的作用(数据表示为平均值±SE)；
图5显示在对人的研究中丝氨酸(A)、咖啡因(B)和咖啡因+ 丝氨酸(C)对血液乙醛水平的作用(数据表示为平均值±SE)；
图6显示在对人的研究中丝氨酸(A)、咖啡因(B)和咖啡因+ 丝氨酸(C)对血液乙酸水平的作用(数据表示为平均值±SE)；
图7显示在对人的研究中通过施用咖啡因+丝氨酸产生的血液乳 酸/丙酮酸比率的降低(数据表示为平均值±SE)；
图8显示在对人的研究中丝氨酸(A)、咖啡因(B)和咖啡因+ 丝氨酸(C)对血液葡萄糖水平的作用(数据表示为平均值±SE)；
图9显示在对人的研究中通过施用咖啡因+丝氨酸对饮酒后醉酒 (drunkenness)的主观评估的结果(数据表示为平均值±SE)；
图10显示在对人的研究中通过施用咖啡因+丝氨酸对饮酒后舒 适和不舒适的感觉的主观评估的结果(数据表示为平均值±SE)；
图11显示通过在大鼠中施用咖啡因+色氨酸产生的血液乙醇水 平的降低(数据表示为平均值±SE)；
图12显示通过在大鼠中施用咖啡因和各种类型氨基酸中的每一 个产生的血液乙醇水平的变化(数据表示为平均值±SD)；
图13显示在对人(NN)的研究中咖啡因+丝氨酸的乙醇代谢加 速作用，其中图13A显示血液乙醇水平随时间推移的变化；图13B 显示血液乙醛水平随时间推移的变化；图13C显示血液乙酸水平随 时间推移的变化；和图13D显示乳酸/丙酮酸比率随时间推移的变化 (数据表示为平均值±SE)；
图14显示当经口施用咖啡因+丝氨酸时相对的血液乙醇水平(数 据表示为平均值±SD)；
图15显示在人(ND)中在乙醇摄入后施用的咖啡因+丝氨酸的 乙醇代谢加速使用，其中图15A显示血液乙醇水平随时间推移的变 化；图15B显示血液乙醛水平随时间推移的变化；图15C显示血液 乙酸水平随时间推移的变化；和图15D显示乳酸/丙酮酸的比率随时 间推移的变化(数据表示为平均值±SE)；
图16显示在人(NN)中在乙醇摄入后施用的咖啡因+丝氨酸的 乙醇代谢加速作用，其中图15A显示血液乙醇水平随时间推移的变 化；图15B显示血液乙醛水平随时间推移的变化；图15C显示血液 乙酸水平随时间推移的变化；和图15D显示乳酸/丙酮酸的比率随时 间推移的变化(数据表示为平均值±SE)；
图17显示在人中在饮酒前服用咖啡因+丝氨酸时，宿醉的减轻作 用，其中图17A显示总的评分；图17B显示觉醒(awakening)的调 查结果；图17C头痛，图17D丧失食欲，图17E胃部不适(upset stomach)，和图17F口渴；
图18显示在人中在饮酒后服用咖啡因+丝氨酸时，宿醉的减轻作 用，其中图18A显示总的评分；图18B显示觉醒的调查结果；图18C 头痛，图18D丧失食欲，图18E胃部不适，和图18F口渴；和
图19显示在小鼠中通过施用咖啡因+丝氨酸从在疲劳时的低血 糖症恢复的效果。
实施本发明的最佳模式
根据本发明的一个方面，提供了通过体内葡糖异生作用加速酒精 代谢或减轻疲劳的组合物，其特征在于包含有效量的咖啡因和有效量 的氨基酸或肽作为活性成分，所述氨基酸或肽选自丝氨酸、色氨酸、 富含丝氨酸的肽、富含色氨酸的肽、富含丝氨酸/色氨酸的肽及其混 合物。
用于本发明的咖啡因包括3，7-二氢-1，3，7-三甲基-1H-嘌呤-2，6-二 酮、其酸式盐和其水合物。在本说明书中，其统称为咖啡因。所述酸 式盐是指药物可接受的酸(包括无机酸例如盐酸、硫酸和柠檬酸，和 有机酸)的盐。所述水合物通常称为咖啡因水合物。此处可使用可商 购获得的咖啡因。本发明的组合物、组合物组和饮料中包含的咖啡因 的量的实例包括10mg或更多、20mg或更多、30mg或更多、40mg 或更多、50mg或更多、60mg或更多、70mg或更多、80mg或更多、 90mg或更多、100mg或更多、110mg或更多、120mg或更多、130mg 或更多、140mg或更多、150mg或更多、170mg或更多、200mg或更 多、230mg或更多、250mg或更多、270mg或更多、300mg或更多、 330mg或更多、350mg或更多、400mg或更多、450mg或更多和500mg 或更多。优选的咖啡因的量在人的可接受摄入范围之内，更具体地， 按无水咖啡因的重量计算大约500mg或更少，例如，大约10至 500mg、大约20至500mg、大约30至500mg、大约40至500mg， 优选地大约50至500mg、大约100至500mg、大约150至500mg或 大约200至500mg，更优选地，大约50至300mg，且最优选地大约 100至300mg(日本药典(the Japanese Pharmacopoeia)，第13修定 版(1996)，由Hirokawa Shoten出版；Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版(1995)，Mack Publishing Company， 美国)。咖啡因用作药物，例如中枢神经系统刺激剂、利尿剂、止痛 剂(偏头痛)、用于治疗高血压性头痛(hypertensive headaches)的 药物，且被列为危险毒品。成人中咖啡因的半致死剂量是5至10g， 且儿童中为3g。然而，据认为一次摄入1g或更多的咖啡因导致神经 系统和心血管系统的急性中毒症状，例如虚脱、头晕和心律不齐。因 此，优选地以不超过日本药典等批准的上限的剂量使用咖啡因。
此处所用的短语“人的可接受的摄入范围内的量”是指不超过由 各个国家的国立卫生研究院(National Institute of Health)批准的最 大咖啡因剂量的量。更具体地，最大咖啡因剂量是，例如，500mg (Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版 (1995)，Mack Publishing Company，美国)。
此处所用的术语“有效量”是指通过体内葡糖异生作用加速酒精 代谢或减轻疲劳的量。术语“酒精代谢”可和术语“乙醇代谢”互换 使用。
当以可接受的摄入范围内的量单独服用咖啡因时，没有观察到酒 精代谢的加速(参见图4B)。然而，当除了以可接受的摄入范围内 的量服用咖啡因外还服用有效量的丝氨酸或色氨酸时，在酒量大的人 (基因型ALDH2*2/2(NN))中或在酒量小的人(基因型ALDH2*1/2 (ND))中，酒精代谢加速且血液乙醇水平降低(参见，图4C、13A、 15A和16A)。同时，血液葡萄糖水平增加，且乳酸/丙酮酸比率降低。 因此，由饮酒造成的低血糖症得到好转，并且可产生对疲劳的减轻作 用(参见图7、8、13D、15D和16D)。结果，摄入酒精时，舒适的 感觉显著增加。换句话说，由饮酒导致的身体负担为零或得到减轻(参 见图17和18)。如图1中所示，假定酒精代谢和葡糖异生作用相互 之间协同加速并且NADH和NAD+的转化有效地进行，结果是酒精代 谢加速。此处所用的术语“相互之间协同”是指这样的状态，即在该 状态下，酒精代谢途径和葡糖异生作用途径由于偶联而协同加速酒精 代谢系统。
因此，本发明的组合物可用于在酒精摄入(或饮酒)时加速酒精 代谢或减轻身体负担，或减轻疲劳。即使在摄入酒精之前、期间和之 后的任一时间点上服用本发明的组合物，其也可产生上述作用。此 外，可将本发明的组合物配制成饮料或食品或药物。
本发明中所用的“加速酒精代谢的”是指不停地加速乙醇至乙酸 的代谢。由于酒精代谢的加速，可明显地减轻身体负担，例如在饮酒 期间和之后引起的不舒适的感觉和虚脱，从而显著地增加舒适感觉的 程度。“减轻由饮酒引起的疲劳”是指血液乳糖水平的降低或减轻低 血糖症，从而减轻身体负担，如显示血液中乳糖/丙酮酸的比率降低 (参见图7、13D、15D和16D)和显示血液葡萄糖水平的增加(参 见图8和19)的图中所示的。
本发明的组合物包含有效量的咖啡因和有效量的的氨基酸或 肽，所述氨基酸或肽选自丝氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的肽、富含色 氨酸的肽、富含丝氨酸/色氨酸的肽及其混合物。
丝氨酸和色氨酸各自是这样类型的氨基酸，且可能用作导向产生 葡萄糖的代谢系统(即，葡糖异生)的底物。在该代谢系统中，因为 所述系统伴随着NADH至NAD+的转化，所以其不停地加速了酒精代 谢。在本发明的实施方案中，本发明的组合物可包含选自咖啡因和丝 氨酸、咖啡因和色氨酸以及咖啡因和丝氨酸和色氨酸的混合物的组合 中的任一组合。色氨酸可以是游离的色氨酸或色氨酸的盐和药物可接 受的酸(例如，色氨酸·HCl)。氨基酸或其混合物的含量并不受到具 体的限定，只要其适合用于显著地和协同地加速酒精代谢和葡糖异生 作用；然而，其是，例如，大约100mg或更多、大约200mg或更多、 大约300mg或更多、大约400mg或更多、大约500mg或更多、大约 600mg或更多、大约700mg或更多、大约800mg或更多、大约900mg 或更多、大约1g或更多、大约100mg至20g、大约300mg至20g、 大约500mg至20g、大约1g至20g、大约1.5g至20g、大约2g至20g、 大约3g至20g、大约4g至20g、大约5g至20g、大约6g至20g、大 约7g至20g、大约8g至20g、大约9g至20g、大约10g至20g、大 约12g至20g、大约14g至20g、大约16g至20g和大约18g至20g。 然而，丝氨酸和色氨酸，其是构成饮料或食品中包含的蛋白的氨基酸 并且是极其安全的，因此可以每次以超过20g的量服用。丝氨酸和色 氨酸的混合比率不受到特定的限定，且任何比率都可接受。丝氨酸和 色氨酸可商购获得，并且可以以其在本发明的组合物中存在的形式使 用。
在本发明中，可使用以高比率(例如，大约10％至100％、大约 20％至100％、大约25％至100％、大约30％至100％、大约40％至 100％、大约50％至100％、大约70％至100％、大约80％至100％或 大约90％至100％)包含丝氨酸残基和/或色氨酸残基的肽，例如富 含丝氨酸的肽、富含色氨酸的肽和富含丝氨酸/色氨酸的肽。这样的 肽的实例包括以高比率包含丝氨酸和/或色氨酸残基的寡肽、多肽、 蛋白和蛋白的水解产物或蛋白酶消化产物。这样的肽和蛋白的水解产 物或蛋白酶消化产物可在消化道内或在吸收入身体中(具体是在血液 中)后通过酶促作用分解直至氨基酸。用于本发明的肽的实例包括， 但不限于，二肽、寡肽例如三肽和四肽、多肽、蛋白和蛋白水解的产 物，优选地寡肽，和更优选地二肽。二肽的实例包括丝氨酰丝氨酸 (Ser-Ser)、色氨酰色氨酸(Trp-Trp)、丝氨酰色氨酸(Ser-Trp) 和色氨酰丝氨酸(Trp-Ser)。富含丝氨酸的蛋白的实例包括丝胶蛋 白(来源于蚕)。作为用于本发明的肽，可使用商购获得的肽。可选 择地，可通过单独地使用常规肽合成方法、从天然存在的产物中提取 /纯化的方法、基因工程的方法和酶促蛋白水解的方法(例如，新生 物化学实验课程1，第I、V和VI卷，和新生物化学实验课程2，第 III卷，由日本生物化学协会(Japanese biochemical society)编著)或 通过其合适的组合来制备用于本发明的肽。本发明的组合物中的肽的 含量不受具体的限制，然而，其是，例如，大约100mg或更多、大 约200mg或更多、大约300mg或更多、大约400mg或更多、大约500mg 或更多、大约600mg或更多、大约700mg或更多、大约800mg或更 多、大约900mg或更多、大约1g或更多、大约100mg至20g、大约 300mg至20g、大约500mg至20g、大约1g至20g、大约1.5g至20g、 大约2g至20g、大约3g至20g、大约4g至20g、大约5g至20g、大 约6g至20g、大约7g至20g、大约8g至20g、大约9g至20g、大约 10g至20g、大约12g至20g、大约14g至20g、大约16g至20g、大 约18g至20g或大约20g或更多。按游离的丝氨酸和/或游离的色氨 酸的总重量计算，肽的含量是大约100mg或更多、大约200mg或更 多、大约300mg或更多、大约400mg或更多、大约500mg或更多、 大约600mg或更多、大约700mg或更多、大约800mg或更多、大约 900mg或更多或大约1g或更多。
根据本发明的优选的实施方案，按游离的丝氨酸计算，本发明的 组合物中的丝氨酸的含量是每个组合物500mg或更多。
根据本发明的另一个优选的实施方案，按游离的丝氨酸计算，本 发明的组合物中的丝氨酸的含量是每个组合物1g或更多。
根据本发明的另一个方面，提供了减轻疲劳的组合物，其特征在 于包含有效量的咖啡因和有效量的氨基酸或肽作为活性成分，所述氨 基酸或肽选自丝氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的肽、富含色氨酸的肽、 富含丝氨酸/色氨酸的肽及其混合物。
根据本发明的一个实施方案，提供了减轻疲劳的组合物，该组合 物包含有效量的咖啡因和有效量的丝氨酸作为活性成分。用作活性成 分的氨基酸和咖啡因的含量和类型和上面描述的相同。因为本发明的 组合物包含氨基酸或肽和咖啡因作为活性成分，所以其可用于改善如 上所述的低血糖症。本发明的组合物优选地是饮料或食物或药物。疲 劳是由身体活动、体育运动、压力、缺乏睡眠和疾病(例如，变应性 病症、传染病、癌症等)导致的在身体中发生的生物学反应。本发明 的组合物可用于使身体从疲劳恢复和减轻日常生活中发生的疲劳或 减轻由于酒精摄入引起的身体负担(虚脱)。
本发明还提供了这样的组合物，该组合物包含大约500mg或更 少的有效量的咖啡因和大约100mg或更多的有效量的由至少2种这 样的成分组成的组合，所述成分选自丝氨酸或富含丝氨酸的肽、色氨 酸或富含色氨酸的肽以及富含丝氨酸/色氨酸的肽。组合物的用途不 受具体的限制，然而，组合物可用作饮料或食物或药物。用作活性成 分的氨基酸和咖啡因的含量和类型和上面描述的相同。组合物的实例 包括含有咖啡因以及丝氨酸和色氨酸的混合物的组合物、包含咖啡因 以及丝氨酸和富含色氨酸的肽(例如，Trp-Trp二肽)的混合物的组 合物、包含咖啡因以及色氨酸和富含丝氨酸的肽(例如，Ser-Ser二 肽)的混合物的组合物、包含咖啡因以及丝氨酸和富含丝氨酸/色氨 酸的肽(例如，Ser-Trp或Trp-Ser二肽)的混合物或色氨酸和富含 丝氨酸/色氨酸的肽(例如，Ser-Trp或Trp-Ser二肽)的混合物的组 合物。按游离的丝氨酸和/或游离的色氨酸的总重量计算，每个组合 物中上述氨基酸和肽的总量是大约100mg或更多、大约200mg或更 多、大约300mg或更多、大约400mg或更多、大约500mg或更多、 大约600mg或更多、大约700mg或更多、大约800mg或更多、大约 900mg或更多和大约1g或更多，更具体地为大约100mg至20g、大 约300mg至20g、大约500mg至20g、大约1g至20g、大约1.5g至 20g、大约2g至20g、大约3g至20g、大约4g至20g、大约5g至20g、 大约6g至20g、大约7g至20g、大约8g至20g、大约9g至20g、大 约10g至20g、大约12g至20g、大约14g至20g、大约16g至20g、 大约18g至20g或大约20g或更多。此外，每个组合物的咖啡因的量 优选地在人的可接受摄入范围之内，更具体地，大约500mg或更少， 例如，大约10至500mg、大约20至500mg、大约30至500mg、大 约40至500mg，优选地，大约50至500mg，更优选地，大约50至 300mg，且最优选地，大约100至300mg。
根据本发明的优选的实施方案，按游离的丝氨酸计算，上述组合 中包含的丝氨酸的含量是每个组合物100mg或更多。
根据本发明的另一个优选的实施方案，按游离的丝氨酸计算，上 述组合中包含的丝氨酸的含量是每个组合物500mg或更多。
根据本发明的另一个优选的实施方案，按游离的丝氨酸计算，上 述组合中包含的丝氨酸的含量是每个组合物1g或更多。
本发明还提供了包含咖啡因(500mg或更少)和富含丝氨酸/色 氨酸的肽(大约100mg或更多)的组合物。所述咖啡因和富含丝氨 酸/色氨酸的肽和上面定义的一样。其类型和含量和上面提到的类型 和含量相同。具体地，富含丝氨酸/色氨酸的肽以大约10％或更多至 大约100％的肽的氨基酸组成的比率包含丝氨酸和色氨酸残基，且包 括寡肽、多肽、蛋白和蛋白的水解产物或蛋白酶消化产物。按游离的 丝氨酸和/或游离色氨酸的总重量计算，每个组合物中富含丝氨酸/色 氨酸的肽的总量是大约100mg或更多、大约200mg或更多、大约 300mg或更多、大约400mg或更多、大约500mg或更多、大约600mg 或更多、大约700mg或更多、大约800mg或更多、大约900mg或更 多、大约1g或更多，更具体地，大约100mg至20g、大约300mg至 20g、大约500mg至20g、大约1g至20g、大约1.5g至20g、大约2g 至20g、大约3g至20g、大约4g至20g、大约5g至20g、大约6g至 20g、大约7g至20g、大约8g至20g、大约9g至20g、大约10g至 20g、大约12g至20g、大约14g至20g、大约16g至20g、大约18g 至20g或大约20g或更多。此外，优选地每个组合物中咖啡因的量在 人的可接受的摄入范围之内，更优选地，大约500mg或更少，例如， 大约10至500mg、大约20至500mg、大约30至500mg、大约40 至500mg，优选地，大约50至500mg，更优选地，大约50至300mg， 且最优选地，大约100至300mg。也可将组合物配制成饮料或食物或 药物。
本发明提供了加速酒精代谢的组合物，其特征在于包含有效量的 咖啡因和有效量的氨基酸或肽作为活性成分，所述氨基酸或肽选自丝 氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的肽、富含色氨酸的肽、富含丝氨酸/色 氨酸的肽及其混合物。在其实施方案中，本发明的组合物可包含咖啡 因、丝氨酸和色氨酸或其混合物作为活性成分。此外，所述组合物是 饮料或食物或药物。
根据本发明的优选的实施方案，按游离的丝氨酸计算，本发明的 组合物中包含的丝氨酸的含量是每个组合物500mg或更多。
根据本发明的另一个优选的实施方案，按游离的丝氨酸计算，本 发明的组合物中包含的丝氨酸的含量是每个组合物1g或更多。
本发明还提供了以离散的包装组合包含第一组合物和第二组合 物的组合物组，所述第一组合物以大约500mg或更少的有效量包含 咖啡因，且所述第二组合物以大约100mg或更多的有效量包含丝氨 酸、色氨酸或其混合物。本发明的组合物组的实例包括组合具有包含 咖啡因的咖啡或茶(包括其饮料)和包含丝氨酸或色氨酸的糖的饮料 或食物组，以及组合具有包含咖啡因的制剂和包含丝氨酸或色氨酸的 制剂的药物组。
根据本发明的优选的实施方案，上述第二组合物中包含的丝氨酸 的含量是500mg或更多。
根据本发明的另一个优选的实施方案，上述第二组合物中包含的 丝氨酸的含量是1g或更多。
本发明还提供了包含咖啡因的饮料，其特征在于每份饮料包含 500mg或更多的丝氨酸。
本发明的饮料不受具体的限制，只要其包含咖啡因；然而，其可 选自绿茶、红茶、咖啡、可乐和可饮用的制剂。
根据本发明的优选的实施方案，咖啡因的含量是50mg至 500mg(包括两者)、100mg至500mg(包括两者)或150mg至500mg(包 括两者)。
本发明的组合物可采用，但不限于，饮料或食物和药物的形式。
饮料或食物的实例包括常规的或新的饮料或食物，例如经加工的 谷类产品(例如，面包和年糕)、糖食(例如，巧克力、口香糖、糖 果、西式糖食、日本糖食、小吃、大米糖食(rice confectionery))、 饮料(例如，可饮用的制剂、酒精饮料包括蒸馏烈性高杯酒(distilled spirit highball)和鸡尾酒等)、非酒精饮料例如咖啡、红茶、绿茶、 乌龙茶、可乐、瓜拉纳饮料(guarana beverage)、运动饮料、汁、氨 基酸饮料、苏打饮料、姜黄茶(turmeric tea))、乳制品(例如，干酪、 黄油、乳和冰淇淋等)、肉产品(例如，火腿、香肠)、鱼产品(例 如，蒸鱼酱(steamed fish paste)、鱼香肠(fish sausage))、补充物和健 康食品，但不限于这些。优选的饮料或食物的实例包括饮用制剂 (drinking preparations)、非酒精饮料和补充物。
当在补充物和健康食品中使用时，本发明的组合物可进一步包含 至少一种选自除了丝氨酸和色氨酸以外的氨基酸(例如丙氨酸、甘氨 酸、赖氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、脯氨酸和L-茶氨酸)、 姜黄、芝麻素、牛奶蓟(milk-thistle)、Densiti carrot(高丽参(Chinese gingseng))和牡蛎提取物等的成分。
在各饮料或食物的生产步骤中，在其中活性成分不发生变化的条 件下，将上述剂量范围内的咖啡因和丝氨酸、色氨酸、富含丝氨酸的 肽、富含色氨酸的肽、富含丝氨酸/色氨酸的肽或其混合物和已知的 用于人体的物质组合和饮料或食物混合或加入其中。
本发明的组合物和饮料还可包含载体、稀释、赋形剂、增充剂、 胶凝化剂、分散剂、悬浮剂和助溶剂，所述物质一般包含在饮料或食 物中，且此外还包含，维生素、有机酸、增甜剂、pH调节剂、调味 剂(flavor agent)、着色剂、稳定剂、矿质、调味品、防腐剂、湿润剂、 果汁、乳和增甜剂。
本发明的组合物和饮料中包含的活性成分的含量和上述的含量 一样。例如，具有体积例如每瓶30ml、50ml和100ml的可饮用的制 剂在稀释剂和添加剂的混合物中包含大约500mg或更少的有效量的 咖啡因和大约100mg或更多的有剂量的氨基酸或肽。
此外，可通过将本发明的组合物装入容器并将其密封来将饮料制 备为所谓的“容器中的产品”。可通过包括制备本发明的组合物的步 骤、对获得的组合物进行灭菌的步骤和将灭菌的组合物装入容器，然 后进行密封的步骤的方法来生产这样的饮料。容器的材料可包括，但 不限于，金属例如钢和铝、聚合物例如PET，和玻璃。容器的形状可 以是瓶子或罐等。密封材料的实例包括螺纹盖(screwed cap)和罩盖 (cover cap)等。可通过一般用于饮料工业的灭菌方法例如加热灭菌、 过滤灭菌和UV灭菌中的任一种方法进行灭菌。
要指出的是，饮料的类型、形式和生产方法描述于由Kohrin， October 2003(Tokyo，日本)出版，现代软饮料编辑委员会(update soft drinks editor committee)编著的“Soft drinks update”。对于本发明， 其是可获得的。用作补充物的片剂和颗粒的类型、形式和生产方法描 述于例如由Hirokawa Shoten(July，1990)(Tokyo，日本)出版，Shunich Naito编著的“Tablets”；和由Ohmsha(March 1991)(Tokyo，日本) 出版，粉末加工工业和工程学会(Association of Powder Process Industry and Engineering)编著的“Granulation Landbook”。其对 于本发明是可以获得的。
药物的实例包括酒精代谢加速剂或身体负担减轻剂或用于减轻 疲劳的药物(或疲劳饮料(refresher))。制剂的实例包括片剂、丸剂、 胶囊、粉末、颗粒、乳剂、溶液、悬浮液和糖浆。此外，这些制剂可 包含药物可接受的添加剂，例如载体、赋形剂、稀释剂、防腐剂、湿 润剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、崩解剂、着色剂、凋味剂和调味品。 用作疲劳饮料的本发明的药物可包含已知的试剂，例如维生素(例 如，维生素B1)、中药(例如，高丽参(Korean ginseng))、矿质(例 如，Ca、Mg、Zn、Fe)、蜂王浆(royal jelly)、肉碱、辅酶Q10和牛 磺酸等。具体地，为了在饮酒后减轻身体负担，药物可包含至少一种 选自除了丝氨酸和色氨酸外的氨基酸(例如丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、 亮氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、脯氨酸和L-茶氨酸)、姜黄、芝麻 素、牛奶蓟、Densiti carrot(高丽参)和牡蛎提取物等的成分。优选的 药物形式的实例包括装入小体积的瓶容器中的液体，即所谓的可饮用 的制剂。作为施用方法，可提及经口施用法或肠胃外施用；然而，优 选地使用经口施用法。每份制剂的活性成分的有效量如上所述。具体 地，根据日本药典(第13修定版，1996，Hirokawa Shoten)，咖啡 因的有效量为每个成人每次大约100至300mg，且每天的总剂量需要 为500mg或更少。
通过实施例在下面更详细地描述本发明，所述实施例不应当解释 为限定本发明。
实施例
实施例1
通过施用咖啡因产生的大鼠的代谢变化
给6周龄的雄性Wistar大鼠(Charles River Laboratories Japan， Inc.，Yokohama，日本)经口施用100mg/kg体重的咖啡因(无水咖啡 因，Wako Pure Chemical Industries，Ltd.Osaka，日本)或水(作为 对照)。两小时后，用乙醚麻醉大鼠。从腹主动脉采集血液并切取肝 脏。立即从血液制备血浆并使用glucose CII Test Wako(Wako Pure Chemical Industries Ltd.)测量葡萄糖水平。另一方面，在切取后，立 即用液氮冷冻肝脏。用TRIzol(Invitrogen)从大约50mg肝脏组织中 制备总RNA并用RNeasy Mini(Quiagen)和RNase-Free DNase Set (Quiagen)纯化总RNA。使用Thermo Script RT-PCR系统 (Invitrogen)从所纯化的总RNA(5μg)合成cDNA，并使用FastStart DNA Master SYBR Green I(Roche)和lightCycler(Roche)确定各种基 因的mRNA表达水平。基于管家基因P0的表达水平改正各基因的表 达水平以计算相对表达水平。用于基因表达分析的DNA引物是： 5’-acgctgccgtcaaggaaggaaagc-3’“SEQ ID NO：1”和5’- gcgggctccaccaggatcttctcat-3’“SEQ ID NO：2”，作为丝氨酸脱水酶 (SDS)的有义和反义引物；5’-gctgctgaaatcggagcaggagca-3’“SEQ ID NO： 3”和5’-ctgcttccggaactctgccatctg-3’“SEQ ID NO：4”，作为色氨酸2，3-双加 氧酶(TDO)的有义和反义引物；5’-tcgaggccgtaatccgctttgc-3’“SEQ ID NO： 5”和5’-gaaacccgcactcgcccatgta-3’“SEQ ID NO：6”，作为丙氨酸转氨酶 (ALT1)的有义和反义引物；和5’-ggggaacgtgggctttgtgttca-3’“SEQ ID NO：7”和5’-tggtgatgcccaaagcttggaaga-3’“SEQ ID NO：8”，作为管家基因 酸性核糖体磷蛋白P0的有义和反义引物。这些引物都由Invitrogen合成。
如图2A中所示，发现咖啡因具有增加血液葡萄糖水平的作用， 换句话说，具有加速葡糖异生的作用。据认为哺乳动物葡糖异生在肝 脏中发生，在肝脏中通过复杂的代谢途径从氨基酸生物合成葡萄糖 (Biochemistry，Zubay，由Hirokawa Shoten出版)。然后，分析SDS 和TDO的基因表达的变化。结果表明丝氨酸和色氨酸的代谢被加强 (图2B)。另一方面，丙氨酸代谢途径(ALT1)(一般认为其在肝 脏中发生的葡糖异生作用中发挥主要作用)没有增强。该事实表明通 过咖啡因加速的葡糖异生作用主要涉及和一般葡糖异生作用不同的 丝氨酸和色氨酸的代谢。
实施例2
通过给大鼠施用咖啡因+丝氨酸产生的血液乙醇水平的降低
在非麻醉的情况下通过手术将插管插入体重为250g至300g的雄 性Wistar大鼠(Japan SLC，Hamamatsu，日本)的颈静脉(cervical vein) 中以随时间推移采集血液。如下总共制备4组。通过经口施用水制备 大鼠的对照组(n＝6)。通过施用20mg/kg体重的咖啡因制备大鼠组 (n＝7)。通过施用0.1g/kg体重的丝氨酸制备大鼠组(n＝5)。通过 施用20mg/kg体重的咖啡因和0.1g/kg体重的丝氨酸制备大鼠组 (n＝5)。因为已认为当一次摄入1g或更多的咖啡因时，会引起神经 系统和心血管系统的急性中毒症状，例如虚脱、头晕和心律不齐。因 此，将咖啡因的剂量设定在其上限是20mg/kg体重的范围之内，在所 述剂量上可能会在体重为50kg的一般成年雌性中出现急性中毒症 状。另一方面，将丝氨酸设定在0.1g/kg体重，在大鼠中，该剂量充 分低于急性半致死剂量(14g/kg体重)。在用单一样品施用后一小时， 经口施用乙醇(2g/kg体重)。在施用后1、2、3和5小时从颈静脉 采集血液。采集后，立即将血液和含有0.6N高氯酸盐和0.9％NaCl的溶液充分混合，并在3000rpm下离心分离20分钟以除去蛋白。用 由Shimazu Corporation生产的气相色谱仪测量上清液的乙醇浓度 (Eriksson CJP等人，Anal.Biochem.第125卷，259-263(1982))。
图3显示血液乙醇的变化。发现，和对照组相比，丝氨酸施用组 的血液乙醇水平稍稍降低；然而，在所有测量时间点上观察到的该变 化不显著。在咖啡因施用组中，观察到血液乙醇水平稍微降低，而在 乙醇施用后2小时显著降低；然而，在其他时间点上没有观察到显著 的作用。相反地，在同时施用咖啡因和丝氨酸的组中，观察到血液乙 醇水平的显著降低。更具体地，在施用乙醇后2小时时和2小时后的 所有测量时间点上都观察到显著的作用。基于这些结果，推断即使在 服用0.1g/kg体重的丝氨酸和即使以高浓度(在该浓度上可发生急性中 毒)服用咖啡因的情况下，也不会充分地加速乙醇代谢，可预期不会 发生充分的乙醇代谢的加速。另一方面，当同时摄入咖啡因和丝氨酸 两者时，血液乙醇水平显著降低，从而证明乙醇代谢明显地加速。
实施例3
在人中通过摄入咖啡因+丝氨酸产生的乙醇代谢的加速
选择八个健康成年人作为该试验的受试者，考虑到伦理因素，该 八个成年人在所述试验开始前已同意参加该试验，且其具有乙醛脱氢 酶(ALDH2)：ALDH2*1/2(ND)的基因型。要求受试者从醒来时 至参加试验时不进食物和水。由8个人(作为志愿者)进行对照试验。 在参加对照试验的8个人中，选择5个进行样品施用试验。作为样品， 单独地经口施用3mg/kg体重的咖啡因(由SHIRATORI Pharmaceutical Co.，Ltd.，Chiba日本生产的)，单独地经口施用 30mg/kg体重的丝氨酸(由KYOWA HAKKO KOGYO Co.，Ltd. Tokyo，日本生产的)，或经口施用3mg/kg体重的咖啡因和30mg/kg 体重的丝氨酸。根据体重为50kg的人从一杯咖啡摄入的量(约 150mg)设定咖啡的量，该量可能不导致急性中毒。根据体重为50kg 的一般人每天摄入平均人摄入量(3.71g)的40％的假设来设定丝氨 酸的量，该量显著低于大鼠中的急性半致死剂量(14g/kg体重)。在 样品摄入后1小时，将5％的乙醇溶液(用水稀释的白烈性酒(white liquor))分成6份并以4分钟的间隔分6次经口摄入，从而使每体重 (kg)摄入0.4g乙醇。在饮酒前、饮酒后30、60、90、120和180 分钟后立即采集血液。在采集血液后立即将血液和含有0.6N高氯酸 盐和0.9％NaCl的溶液混合，并在3000rpm下离心分离20分钟以除 去蛋白。通过Perkin Elmer Corporation或Shimazu Corporation生 产的气相色谱测量上清液中的乙醇、乙醛和乙酸浓度(Eriksson CJP 等人，Anal.Biochem.Vol.125，259-263(1982))。此外，在采集 血液后立即从部分血液中制备血浆，并使用glucose CII TestWako(Wako Pure Chemical Industries Ltd.)测量血液葡萄糖水 平。此外，使用相同的血浆，分别使用determiner LA(Kyowa Medics， Tokyo，日本)和determiner PA(Kyowa Medics)测量血液乳酸和丙酮 酸水平。基于乳酸/丙酮酸的比率，计算NADH/NAD+的比率。另一方 面，在采集血液的同时，就“醉酒的感觉(feeling of drunk))”(根据 评分0至8)和舒适的感觉(不舒适(评分-4)至舒适(评分4)) 对受试者进行9个级别的主观评估。
如图4中所示，当单独地摄入丝氨酸或咖啡因时极少改变血液乙 醇的水平；然而，在摄入咖啡因+丝氨酸后60分钟时和之后显著降低 所述水平。另一方面，在单独地摄入丝氨酸、单独地摄入咖啡因和摄 入咖啡因+丝氨酸的样本中的任一样本中，血液乙醛水平未显著改 变。然而，和其他两种情况不同，在咖啡因+丝氨酸摄入的情况下的 血液乙醛水平总是在比对照低的水平。由此，可想到咖啡因+丝氨酸 具有降低乙醛水平的趋向(图5)。从上述结果可看出，当以考虑到 饮食经验和安全性确定的摄入水平单独地摄入丝氨酸或咖啡因时，充 分降低血液乙醇水平和乙醛水平是很困难的。因此，第一次发现，通 过组合摄入咖啡因和丝氨酸可产生显著的作用。
当组合摄入丝氨酸+咖啡因时，血液乙醇水平的最大值和在摄入 乙醇后30分钟对照中的水平相同，且在60分钟时和之后观察到血液 乙醇水平的降低。由此推断血液乙醇水平的降低不是由于乙醇吸收的 抑制产生的而是由于乙醇代谢的加速产生的。如上所述，乙醇通过 ADH被代谢成乙醛，然后乙醛再被ALDH代谢成乙酸。因为咖啡因 +丝氨酸的摄入减少了血液乙醇水平，所以可想象通过ADH的从乙 醇至乙醛的反应被加速。然而，如果只有ADH反应进行，则乙醛的 产量将等于或大于对照的量。然而，血液乙醛水平又显示下降的趋 势。根据该事实，认为从乙醛至乙酸的代谢可能被提高。因此，测量 乙醛代谢产物即乙酸的血液水平。和对照相比，在咖啡因+丝氨酸摄 入的情况下的血液乙酸水平显示上升的趋势(图6)。表明从乙醇至 乙酸的反应被不停地提高。
ADH和ALDH反应在需要NAD+方面相同。因此，已知当 NADH/NAD+的比率增加时乙醇代谢减慢。可基于血液中乳酸/丙酮酸 的比率计算体内NADH/NAD+的比率。因此，测量在摄入咖啡因+丝 氨酸的情况下的血液中的乳酸/丙酮酸的比率。结果，发现在摄入乙 醇的情况下增加的程度低于对照(图7)。当摄入咖啡因+丝氨酸时， 血液葡萄糖水平达到比对照更高的值(图8)。估计葡糖异生代谢系 统中的NADH至NAD+的转化对乙醇代谢的加速有贡献。
主观评估结果显示于图9和10中。由此清楚地证明当摄入咖啡 因+丝氨酸时，对“感觉醉酒(feeling drunk)”没有产生显著的变化， 但“舒适的感觉”显著增加。由此认为咖啡因+丝氨酸的摄入在减轻 酒量小的人在饮酒时具有的不舒适感觉上可以是有效的。
实施例4
通过施用咖啡因+色氨酸在大鼠中产生的血液乙醇水平的降低
使用体重为250g至300g的雄性Wistar大鼠(Japan SLC)，总 共分为4组：通过经口施用水制备的大鼠对照组(n＝4)；通过施用 20mg/kg体重的咖啡因(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)制备 的大鼠组(n＝9)，通过施用0.1g/kg体重的色氨酸(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)制备的大鼠组(n＝6)和通过摄入20mg/kg 体重的咖啡因和0.1g/kg体重的色氨酸制备的大鼠组(n＝7)。1小时 后，施用乙醇。再过2小时后，在用戊巴比妥(Sigma)麻醉的情况 下，从腹主动脉采集血液。以和实施例2中的方式相同的方式测量血 液乙醇水平。
血液乙醇水平的结果显示于图11中。在单独施用色氨酸的组中 没有观察到变化。在施用咖啡因的组中观察到轻微的下降趋势，但不 是显著的变化。相反地，在施用咖啡因+色氨酸的组中观察到血液乙 醇水平的显著降低。
实施例5
通过施用咖啡因+各种氨基酸中的每一种氨基酸在大鼠中产生的 血液乙醇的变化
使用体重为250g至300g的雄性Wistar大鼠(Japan SLC)，总 共分为22组：通过经口施用水制备的大鼠对照组(n＝4)；通过单独 施用20mg/kg体重的咖啡因(Wako Pure Chemical Industries，Ltd) 制备的大鼠的无氨基酸组(n＝4)，和通过摄入20mg/kg体重的咖啡 因和0.1g/kg体重的20种氨基酸类型中的每一种氨基酸制备的20个 大鼠组(每组n＝2)。施用各样品1小时后，经口施用乙醇(2g/kg 体重)。再过2小时后，在用戊巴比妥(Sigma)麻醉的情况下，从 腹主动脉采集血液。以和实施例2中的方式相同的方式使用Shimazu Corporation生产的气相色谱测量血液乙醇水平。
图12显示和只施用咖啡因的组(即，无氨基酸组)(该组的血 液乙醇水平被当作1)相比，氨基酸施用组的相对血液乙醇水平。和 无氨基酸组相比，在丝氨酸施用组和色氨酸施用组中观察到血液乙醇 减少的作用；然而，在其他氨基酸添加组中未观察到血液乙醇减少的 作用。所述结果证明丝氨酸或色氨酸作为这样的氨基酸是优选的，所 述氨基酸用于通过将其和咖啡因一起摄入来产生作用。
实施例6
在人(NN)中通过摄入咖啡因+丝氨酸产生的乙醇代谢的加速
继续实施例3中进行的针对相对地酒量小的人(具有ND的乙醛 脱氢酶(ALDH2)基因型)的试验，检查对酒量大的人(ALDH2*2/2 (NN))的乙醇代谢加速的作用。在获得知情同意书后，选择5个 具有NN基因型的健康成人作为所述试验的受试者。当在早晨进行试 验时，要求他们从醒来时至参加试验时不进食物和水。当试验在下午 进行时，要求受试者在吃完早餐后不进食物和水。作为样本，经口摄 入3mg/kg体重的咖啡因(由SHIRATORI Pharmaceutical Co.，Ltd. 生产)和30mg/kg体重的丝氨酸(KYOWA HAKKO KOGYO Co.， Ltd.)。摄入后1小时，再经口给予5％的乙醇溶液从而使达到0.4g/kg 体重的乙醇。以和实施例3中的方式相同的方式，在即将摄入酒精 前、摄入酒精后30、60、90、120和180分钟采集血液。通过气相色 谱测量乙醇、乙醛和乙酸水平。此外，将部分血液接受乳酸水平和丙 酮酸水平的测量。从乳酸/丙酮酸的比率计算NADH/NAD+的比率。
如图13A中所示，通过摄入咖啡因+丝氨酸，从摄入乙醇后60 分钟开始，血液乙醇水平显示下降的趋势。在摄入后90、120和180 分钟处观察到显著的降低。在乙醇摄入后30分钟和对照相比，血液 乙醇水平没有降低。根据该事实可想象上面观察到的血液乙醇水平的 降低不是由于乙醇吸收的抑制造成的而是由于乙醇代谢的加速导致 的。此外，通过摄入咖啡因+丝氨酸在60分钟时和之后观察到血液乙 醛水平的下降趋势。由此认为不仅由ADH催化的从乙醇至乙醛的代 谢被加速，而且由ALDH催化的从乙醛至乙酸的代谢被加速(图 13B)。在受试者(NN)中，血液乙酸水平没有增加超过对照中的水 平。由此证明由乙醇摄入引起的血液乙酸水平的暂时增加因乙醇代谢 的加速而更早终止(图13C)。此外，通过摄入咖啡因+丝氨酸，反 映NADH/NAD+的比率的血液中的乳酸/丙酮酸的比率比对照中的 低。从而推断由葡糖异生系统的加速导致的NADH至NAD+的转化对 乙醇代谢的加速有贡献(图13D)。
根据上面获得的结果，可想象在饮酒时，咖啡因+丝氨酸的摄入 不仅在ND的人中而且在NN的人中在减轻身体负担上是有效的。
实施例7
通过在施用乙醇后摄入咖啡因+丝氨酸产生的大鼠中血液乙醇的 变化
通过经口给体重为250g至300g的雄性Wistar大鼠(Japan SLC)施用2g/kg体重的乙醇。1小时后，给对照组(n＝4)经口施用 水；给组(n＝5)经口施用10mg/kg体重的咖啡因(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)；给组(n＝5)经口施用100mg/kg体重的丝氨酸(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)；和给组(n＝5)经口施用10mg/kg 体重的咖啡因(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)+100mg/kg体 重的丝氨酸(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)。乙醇摄入后5 小时，在用乙醚麻醉的情况下从腹主动脉采集血液，并以和实施例2 中的方式相同的方式测量血液乙醇水平。
相对血液乙醇浓度的结果显示于图14。和对照组相比，在单独 施用丝氨酸的组中观察到轻微的下降趋势，但其不是显著的变化。相 反地，在咖啡因施用组中观察到显著的降低，且在咖啡因+丝氨酸施 用组中观察到更明显和显著的降低。
这些结果提示咖啡因+丝氨酸的摄入不仅在乙醇摄入前而且在乙 醇摄入后都是有效的。
实施例8
通过在乙醇摄入后摄入咖啡因+丝氨酸产生的人(ND)中乙醇代 谢的加速
针对相对地酒量小的人(具有ND的ALDH2基因型)检查当在 乙醇摄入后摄入咖啡因+丝氨酸时的乙醇代谢的变化。在获得知情况 同意书后，选择6个健康的ND成人和8个健康的NN成人作为该试 验的受试者。当在早晨进行试验时，要求他们从醒来时至参加试验时 不进食物和水。当在下午进行试验时，以和实施例5中的方式相同的 方式要求受试者在吃完早餐后不进食物和水。首先，经口施用5％的 乙醇溶液从而使达到0.4g/kg体重的乙醇。在即将进行30分钟后进行 的血液取样前，经口施用3mg/kg体重的咖啡因(SHIRATORI Pharmaceutical Co.，Ltd.)和30mg/kg体重的丝氨酸(KYOWA HAKKO KOGYO Co.，Ltd.)。在即将摄入酒精前、在摄入酒精后30、 60、90、120和180分钟时采集血液。以和实施例3中的方式相同的 方式通过气相色谱测量乙醇、乙醛和乙酸水平。此外，将部分血液接 受血液中的乳酸水平和丙酮酸水平的测量。根据乳酸/丙酮酸的比率 计算NADH/NAD+的比率。
通过摄入咖啡因+丝氨酸，血液乙醇水平通常显示下降的趋势(图 15A)，且在120分钟时和之后乙醛水平显示下降趋势(图15B)。 此外，由乙醇的摄入导致的血液乙酸水平的暂时增加在150分钟时和 之后大大降低(图15C)，从而表明乙醇代谢可能更早地终止。此外， 通过摄入咖啡因+丝氨酸，反映NADH/NAD+的比率的血液中的乳酸/ 丙酮酸的比率低于对照的乳酸/丙酮酸的比率。因此，推断由于葡糖 异生系统的加速造成的从NADH至NAD+的转化已对乙醇代谢具有 贡献(图15D)。
根据上面获得的结果，咖啡因+丝氨酸的摄入也在当饮酒后摄入 其时对减轻ND的人中的身体负担有效。
实施例9
通过在饮酒后在摄入咖啡因+丝氨酸产生的人(NN)中乙醇代谢 的加速
以和实施例8中的方式相同的方式，针对相对酒量大的人(具有 NN的ALDH2基因型)检查在乙醇摄入后摄入咖啡因+丝氨酸时乙醇 代谢的变化。
由于摄入咖啡因+丝氨酸的原因，血液乙醇水平一般趋向轻微下 降(图16A)，且乙醛浓度显示出更明显的下降(图16B)。此外， 在90分钟时和之后由于乙醇的原因导致血液乙酸水平大大地降低 (图16C)，从而表明乙醇代谢更早地终止。此外，通过摄入咖啡因 +丝氨酸，反映NADH/NAD+的比率的血液中乳酸/丙酮酸的比率比对 照中的低。因此推断由葡糖异生系统的加速造成的从NADH至NAD+的转化对乙醇代谢有贡献(图16D)。
根据上面获得的结果可看出，当在饮酒后摄入咖啡因+丝氨酸 时，咖啡因+丝氨酸的摄入不仅在ND的人中而且在NN的人中都在 减轻身体负担上是有效的。
实施例10
当在饮酒之前和之后摄入咖啡因+丝氨酸时，其对宿醉的作用
在获得知情同意书后使用20个健康成人作为受试者。在饮酒之 前和之后摄入咖啡因+丝氨酸时，在第二天早晨进行关于宿醉症状的 问卷调查。为进行该试验，制备成袋的颗粒，每袋颗粒包含100mg 咖啡因(由SHIRATORI Pharmaceutical Co.，Ltd.生产)和1500mg 丝氨酸(由KYOWA HAKKO KOGYO Co.，Ltd.生产)。从安全的角 度考虑，将摄入剂量限制在1至2袋。试验周期设定在大约一个半月。 在天天饮酒的场合，要求受试者尝试1)不服用样品，2)在饮酒前 服用样品，和3)在饮酒后服用样品，并然后以问卷的形式要求受试 者在第二天早晨回答身体状况。在问卷调查中，要求受试者对宿醉病 症(包括觉醒、头痛、丧失食欲、恶心、胃部不适、口渴、虚弱、战 栗(shivering)、腹泻和头晕的各项进行9个级别的评估(Wise J等 人，Arch.Intern.Med.第164卷，1334-1340(2004))。
图17显示当在饮酒前摄入样品时的结果。通过对单项评分求和 获得的宿醉评分表明3/4的完整宿醉症状得到改善(图17A)。对于 宿醉症状例如觉醒(图17B)、头痛(图17C)和口渴(图17F)， 大约一半的受试者回答“好转”。对于丧失食欲(图17D)和胃部不 适(图17E)，大约1/4至1/3的受试者回答“好转”。
如图18A中所示，同样当在饮酒后摄入样品时，在大约一半的所 有受试者中确认了宿醉评分的提高。对于宿醉症状例如觉醒(图 18B)和头痛(图17C)，大约一半的受试者回答“好转”。对于丧 失食欲(图18D)，大约2/5的受试者和对于口渴(图17E)大约1/4 的受试者回答“好转”。
根据上面的结果，可想象在饮酒前和饮酒后摄入咖啡因+丝氨酸 在第二天早晨对减轻各种宿醉症状是有效的。
要指出的是，部分受试者被要求摄入50mg咖啡因+1000mg丝氨 酸或50mg咖啡因+500mg丝氨酸。在该情况下，观察到宿醉症状好 转。
实施例11
通过施用咖啡因+丝氨酸产生的小鼠从疲劳时的低血糖症的恢复
通过使用流动水容器(flowing-water vessel)(由Matsumoto in Kyoto University开发的)在流动水的情况下进行雄性Balb/c小鼠 (Japan SLC)的游泳实验。让小鼠(4周龄)在不同的两天内在大 约4.5L/分钟(大约16cm/秒)的流速下游泳一次，进行15至20分 钟，以使小鼠习惯游泳环境。在第二周，将这些小鼠(5周龄)禁食 3小时。之后，从尾部采集血液并用GLUTESTACE(Sanwa Kagaku Kenkyusho Co.，Ltd.)测量血液葡萄糖水平。之后立即让小鼠在大约 5.5L/分钟(大约19cm/秒)的流速下以间歇的方式游泳。通过重复由 10分钟游泳和10分钟休息构成的循环两次，然后重复由5分钟游泳 和10分钟休息构成的循环直至小鼠筋疲力尽以致于不能游泳为止来 进行间歇式游泳。在让筋疲力尽以致于不能游泳的小鼠独自逗留15 分钟后，检查血液葡萄糖水平。在确认降低的血液葡萄糖水平后，给 对照组(n＝9)经口施用水，给n＝6的组经口施用80mg/kg体重的咖 啡因(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)，给n＝4的组经口施用 200mg/kg体重的丝氨酸(Wako Pure Chemical Industries，Ltd)，且 给n＝5的组经口施用80mg/kg体重的咖啡因+200mg/kg体重的丝氨 酸。随时间推移测量血液葡萄糖水平。
如图19中所示，和对照相比，通过施用咖啡因+丝氨酸，血液葡 萄糖水平很快地从疲劳时的低血糖症恢复。和对照相比，在施用后的 15、45、60和90分钟上血液葡萄糖水平的提高具有显著性(p＜0.05)。 当单独地施用咖啡因和丝氨酸时，小鼠从低血糖症恢复；然而，在摄 入咖啡因+丝氨酸的情况下恢复的程度更佳。
实施例12
各种类型的商购可获得的饮料中包含的咖啡因和丝氨酸的量
使用HPLC方法测量可商购获得的饮料的咖啡因和丝氨酸量，所 述饮料即一般已知包含咖啡因的饮料，包括绿茶、乌龙茶、红茶、咖 啡、可乐和饮用制剂。如表中所示，绿茶、乌龙茶和红茶的咖啡因的 浓度在10-21mg/100mg(表1)的范围内，且这些饮料的丝氨酸浓度低 于0.5mg/100ml，极其低(表2)。咖啡和饮用制剂的咖啡因浓度相 对较高，在50-100mg/100ml的范围内；然而，丝氨酸浓度却在检测 极限内或更少，被认为是极其低。可乐的咖啡因浓度是11mg/100ml， 和茶的咖啡因浓度相同，但没有检测到丝氨酸。
所述结果提示包含100mg/100ml或更多的丝氨酸的含有咖啡因 的饮料是新的。
表1 样品(n) 咖啡因(mg/100ml) 绿茶 乌龙茶 红茶 咖啡 可乐 饮用制剂 12 4 3 2 1 1 12-21 15-21 10-21 58-100 11 55
表2 样品(n) 咖啡因(mg/100ml) 绿茶 乌龙茶 红茶 咖啡 可乐 饮用制剂 4 2 3 2 1 1 0.2-0.5 ＜0.3 0.2-0.5 未检测到 未检测到 未检测到
实施例13
补充以丝氨酸的饮料的制备
通过以100、500、1000、1500和2000mg的量向100ml商购获 得的无糖咖啡加入丝氨酸(KYOWA HAKKO KOGYO Co.，Ltd.)来 制备饮料。已知丝氨酸是高溶解性的氨基酸，且其在室温下以30g或 更多的量溶解在100g水中，甚至在0℃也以20g的量溶解在100g水 中。因此，可将上述量的丝氨酸容易地溶解在无糖咖啡中而无任何外 观问题，例如沉淀和混浊。此外，已知丝氨酸是甜的氨基酸。当加入 上述范围内的丝氨酸时，咖啡的甜味增加至和含有少量糖的咖啡的甜 味相同的程度。咖啡的味道变得和加糖的咖啡一样不苦。尽管个体之 间味道的评价不同，但大多数人在500至100mg(丝氨酸的量)的量 上感觉到甜味。
本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请都在此以其全文 引用作为参考。
序列表的自由文字
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SEQ ID NO：2：人工序列的描述：SDS的反义引物；
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SEQ ID NO：8：人工序列的描述：P0的反义引物。
序列表
<110>Kirin Beer Kabushiki Kaisha
<120>用于通过葡糖异生作用加速酒精代谢或从疲劳恢复的组合物
<130>PH-2451-PCT
<140>
<141>
<150>JP 2004-123427
<151>2004-04-19
<160>8
<170>PatentIn Ver.2.1
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