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1、(10)授权公告号 CN 103110575 B (45)授权公告日 2014.11.05 CN 103110575 B (21)申请号 201310072193.7 (22)申请日 2013.03.07 A61K 9/08(2006.01) A61K 31/5415(2006.01) A61K 47/40(2006.01) A61P 27/02(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (73)专利权人 宁夏康亚药业有限公司 地址 750002 宁夏回族自治区银川市高新技 术产业开发区 6 号路 (72)发明人 杨亚军 何仲贵 秦一萌 CN 1493292 A,2004.05。
2、.05,说明书第5页第 3 段 - 第 6 页第 6 段 . EP 1082966 A1,2001.03.14, 说明书 0023-0026、 表 1. WO 2004089418 A1,2004.10.21, 全文 . JP 特许第 4947977 B2,2012.06.06, 全文 . Yi Lu， et.al.Physical characterization of meloxicam-cyclodextrin inclusion complex pellets prepared by a fluid-bed coating method.Particuology .2009,( 第 7。
3、 期 ), 第 1-8 页 . 王茹林， 等 .- 环糊精衍生物对昔康类药物 的增溶作用 .光谱实验室 .2008, 第 25 卷 ( 第 5 期 ), 第 959-962 页 . (54) 发明名称 一种美洛昔康滴眼液及其制备方法和应用 (57) 摘要 本发明公开了一种美洛昔康滴眼液及其制 备方法和应用， 其特征在于 ： 包括活性成分美洛 昔康或其可药用的盐、 增溶剂、 稳定剂、 pH 调节 剂、 抑菌剂及渗透压调节剂 ； 所述增溶剂为羟丙 基 - 环糊精、 磺汀基 - 环糊精、 - 环糊精 中的一种或其混合物 ； 所述稳定剂为高分子聚合 物聚维酮、 透明质酸钠、 羟丙甲纤维素中的一种或 其。
4、混合物。 其制备方法是将增溶剂溶于水中， 在加 热下， 加入美洛昔康或其可药用盐， 使其完全溶解 后， 依次加入其他辅料， 搅拌至完全溶解、 冷却至 室温， 调节 pH 值， 补加注射用水至全量， 微孔滤膜 过滤， 即得。 增溶剂和稳定剂在增加美洛昔康溶解 度使其达到用药要求的同时， 显著提高美洛昔康 滴眼液的稳定性， 延长了滴眼液的储藏寿命和使 用的安全性。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李薇霞 权利要求书 1 页 说明书 23 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书23页 (10)授权公告号 CN 103110575 B CN。
5、 103110575 B 1/1 页 2 1. 一种美洛昔康滴眼液， 其特征在于其由以下组分组成 ： 活性成分美洛昔康或其 可药用盐 0.1、 增溶剂 1.0-5、 稳定剂 0.1-2、 pH 调节剂 0.1-8.0、 渗透压调节剂 0.1-2.0、 抑菌剂 0.01-0.5、 注射用水 85-99， 各组分百分含量之和为百分之百 ； 所述增溶剂为羟丙基-环糊精， 所述稳定剂为羟丙甲纤维素， 其中羟丙基-环糊 精与羟丙甲纤维素的重量比为 5 1-1 2 ； 其中所述渗透压调节剂为氯化钠或者葡萄糖 ； 所述 pH 调节剂为盐酸、 硼酸、 硼砂、 磷酸二氢钠、 磷酸氢二钠、 磷酸二氢钾、 枸橼酸、。
6、 枸 橼酸钠中的一种或其混合物 ； 所述抑菌剂为羟苯甲酯、 羟苯乙酯、 羟苯丙酯、 羟苯丁酯、 苯扎氯铵、 苯扎溴铵、 醋酸氯 己定、 硝酸苯汞、 硫柳汞中的一种或其混合物 ； 所述的美洛昔康滴眼液 pH 为 7.5-8.5。 2. 根据权利要求 1 所述的美洛昔康滴眼液， 其中所述美洛昔康可药用的盐为其二乙胺 盐、 甲基葡胺盐、 钠盐、 钾盐或铵盐。 3. 根据权利要求 2 所述的美洛昔康滴眼液， 其中所述美洛昔康可药用的盐为其二乙胺 盐。 4. 根据权利要求 1-3 任意权利要求所述的美洛昔康滴眼液的制备方法， 其特征为 ： 将 增溶剂溶于一定量的水中， 在加热、 搅拌条件下， 加入美洛昔。
7、康或其可药用盐， 使其完全溶 解后， 依次加入其他辅料， 搅拌至完全溶解 ； 将上述溶液冷却至室温， 调节 pH 值， 补加注射 用水至全量， 微孔滤膜过滤， 即得。 权 利 要 求 书 CN 103110575 B 2 1/23 页 3 一种美洛昔康滴眼液及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明涉及一种药物技术领域， 尤其涉及一种美洛昔康滴眼液及其制备方法和应 用。 背景技术 0002 美洛昔康 (4- 羟基 -2- 甲基 -N-(5- 甲基 -2- 噻唑基 )-2H-1， 2- 苯并噻嗪 -3- 甲 酰胺-1， 1-二氧化物)是新一代非甾体抗炎药， 有很强的抗炎、 镇痛、 解热等药理。
8、作用， 是第 一个上市的 COX-2 抑制剂。但有研究表明美洛昔康在中国受试者体内的药动学行为存在着 代谢的多态性， 可能由于美洛昔康在华人体内的首过代谢程度不同而造成的， 但总体上为 慢代谢型 ； 如果配合口服药物在治疗初期给以一定的注射剂， 使其快速达到达峰浓度， 在提 高治疗效果和减轻患者痛苦方面都将取得显著的效果。另一方面， 非甾体类抗炎药其制成 的滴眼液抗炎效果与局部使用的皮质类固醇滴眼液完全相同， 而且非甾体类抗炎药在眼部 的渗透性强， 又避免了长期使用皮质类固醇的副作用。已有专利 ( 公开号为 CN1301177A) 公开了美洛昔康可用于眼部炎症的治疗并表明美洛昔康滴眼液具有优良。
9、的作用效果， 但该 专利所提供的处方中含有吐温 -80 等表面活性剂， 但表面活性剂由于自身性质的限制， 其 用量和安全性问题令人担忧。 0003 环糊精 (CD) 是一种新的药用辅料， 它可以在分子水平上包合各种药物活性成分 从而赋予其新的理化性质， 其中增加不溶和难溶性药物的溶解度的特性使环糊精在液体 制剂领域备受关注。其中， 羟丙基 - 环糊精 (HP-CD)， 是 -CD 的羟烷基衍生物， 是 美国 FDA 批准的第一个可静脉注射的 -CD 衍生物， 美国强生公司生产的含 HP-CD 的 伊曲康唑注射液已经上市。20 世纪 90 年代由美国 Cydex 公司开发的磺汀基 - 环糊 精 。
10、(SBE-CD) 是 -CD 与 1， 4- 丁烷磺内酯发生取代反应的产物。辉瑞已成功开发了以 SBE-CD 作为包合材料的抗精神病药 Ziprasidone 注射剂并在美国上市。两种环糊精在 液体药物制备中显示了良好的应用前景。 0004 高分子聚合物由于自身优点显著， 在外用液体制剂方面正初步替代表面活性剂， 既避免了表面活性剂潜在的毒性、 刺激性和溶血等副作用， 又对提高药物溶解度和稳定性 起到巨大作用。与此同时， 高分子聚合物特有的粘度， 对滴眼剂具有特殊意义， 不仅可以减 少刺激性还可以增加药物溶液在眼内的滞留时间。 发明内容 0005 本发明所要解决的问题是提供一种美洛昔康滴眼液及。
11、其制备方法和应用， 克服了 现有技术中的局限性， 且提供了稳定性更强、 安全性更高、 耐受性更好的液体制剂。 0006 本发明所要解决的问题是通过以下技术方案来实现的 ： 0007 一种美洛昔康滴眼液， 其特征在于 ： 包括活性成分美洛昔康或其可药用的盐、 增溶 剂、 稳定剂、 抑菌剂及渗透压调节剂 ； 所述增溶剂为羟丙基 - 环糊精、 磺汀基 - 环糊 精、 - 环糊精中的一种或其混合物 ； 所述稳定剂为高分子聚合物聚维酮、 透明质酸钠、 羟 说 明 书 CN 103110575 B 3 2/23 页 4 丙甲纤维素 (HPMC) 中的一种或其混合物。 0008 所述美洛昔康可药用的盐为其二。
12、乙胺盐、 甲基葡胺盐、 钠盐、 钾盐或铵盐 ； 0009 优选二乙胺盐。 0010 所述美洛昔康滴眼液是由以下重量组分组成 ： 美洛昔康或其可药用盐 0.05-2.0、 增溶剂 1.0-10、 稳定剂 0.1-10、 pH 调节剂 0.1-8.0、 渗透压调节剂 0.1-2.0、 抑菌剂 0.01-0.5、 注射用水 85-99 ； 0011 其中美洛昔康或其可药用盐优选为 0.1， 增溶剂优选为羟丙基 - 环糊精 1.0-5， 稳定剂优选为羟丙甲纤维素0.1-2。 优选羟丙基-环糊精与羟丙甲纤维素的 重量比为 5 1-1 2。 0012 所述 pH 调节剂为盐酸、 硼酸、 硼砂、 磷酸二氢钠。
13、、 磷酸氢二钠、 磷酸二氢钾、 枸橼 酸、 枸橼酸钠中的一种或其混合物。 0013 所述渗透压调节剂为氯化钠、 氯化钾、 硼酸、 硼砂、 硫酸钠、 硫酸钾、 硝酸钠、 硝酸 钾、 醋酸钠、 甘露醇、 甘油、 丙二醇、 葡萄糖中的一种或两种及以上的组合物， 其中渗透压调 节剂优选氯化钠及葡萄糖。 0014 所述抑菌剂为羟苯甲酯、 羟苯乙酯、 羟苯丙酯、 羟苯丁酯、 苯扎氯铵、 苯扎溴铵、 醋 酸氯己定、 硝酸苯汞、 硫柳汞中的一种或其混合物。 0015 所述的美洛昔康滴眼液 pH 为 6.5-9.0， 优选 7.5-8.5。 0016 所述的美洛昔康滴眼液的制备方法， 其特征为 ： 将增溶剂溶于。
14、一定量的水中， 在加 热、 搅拌条件下， 加入美洛昔康或其可药用盐， 使其完全溶解后， 依次加入其他辅料， 搅拌至 完全溶解 ； 将上述溶液冷却至室温， 调节 pH 值， 补加注射用水至全量， 微孔滤膜过滤， 即得。 0017 所述的美洛昔康滴眼液在治疗眼科非感染性炎症中的应用。 0018 基于美洛昔康药物本身的理化性质并考虑到新型环糊精的发展现状， 本发明者利 用恒温加速实验作为评价手段， 发现两种环糊精在增溶、 增加药物稳定性的优良性质对于 美洛昔康仍然适用， 而且通过与非水溶剂组作对比发现， 环糊精的加入不仅取代了非水溶 剂和表明活性剂的加入而且少量加入环糊精的情况下就可以实现药物的增溶。
15、使其满足药 用要求同时稳定性提高显著， 结果见表1， 其中处方1选取PEG400为增溶剂和稳定剂的美洛 昔康滴眼液， 处方 2 和 3 为加入环糊精作为增溶剂和稳定剂的美洛昔康滴眼液。 0019 表 1 不同增溶剂对美洛昔康滴眼液稳定性的影响 0020 0021 在研究美洛昔康滴眼液时， 为考察高分子聚合物的加入对环糊精的增溶， 提高稳 定性效果影响时， 意外的发现， 将高分子聚合物分别加入以上处方 2 和 3， 溶液稳定性有大 幅度提升， 结果见表 2。 0022 表 2HPMC 对含美洛昔康和环糊精的滴眼液稳定性的影响 说 明 书 CN 103110575 B 4 3/23 页 5 002。
16、3 0024 更具体的说本发明涉及含有美洛昔康的溶液制剂， 克服了现有技术中的局限性， 通过试验研究将更优良的， 更具发展前景的新型辅料与药物进行了首创性的完美的结合， 提供了稳定性更强、 安全性更高、 耐受性更好的液体制剂 ； 于此同时， 发现了传统辅料与新 型辅料的特殊作用， 在提高该液体制剂的稳定性达到一种突跃。 具体实施方式 0025 实施例 1 ： 制备以 1 HP-CD 和 0.1 HPMC 作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔 康滴眼剂 0026 制备方法 ： 称取处方量HP-CD于90ml注射用水中溶解， 加入硼砂、 硼酸溶解， 水 浴加热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅。
17、拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完 全溶解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装 入封口塑料瓶中， 即得。 0027 实施例 2 ： 制备以 5 HP-CD 和 0.1 HPMC 作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔 康滴眼剂 说 明 书 CN 103110575 B 5 4/23 页 6 0028 0029 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼砂、 硼酸溶解于 水， 水浴加热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅 拌至完全溶解， 。
18、调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂 量分装入封口塑料瓶中， 即得。 0030 实施例3 ： 制备以5HP-CD和0.1透明质酸钠作增溶剂和稳定剂的0.1美 洛昔康滴眼剂 0031 0032 制备方法 ： 称取处方量HP-CD于90ml注射用水中溶解， 加入Na2HPO4、 NaH2PO4溶 解， 水浴加热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅 拌至完全溶解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂 量分装入封口塑料瓶中， 即得。 003。
19、3 实施例 4 ： 制备以 10 HP-CD 溶液和 0.1透明质酸钠作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 说 明 书 CN 103110575 B 6 5/23 页 7 0034 0035 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0036 实施例 5 ： 制备以 10 HP-CD 溶液和 1透明质酸钠作增溶。
20、剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 0037 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0038 实施例 6 ： 制备以 10 HP-CD 溶液和 10透明质酸钠作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 说 明 书 CN 103110575 B 7 6/23 页 8 0039 0040 制备方法 ： 称取处方量 H。
21、P-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0041 实施例 7 ： 制备以 10 HP-CD 溶液和 0.45羟丙甲纤维素作增溶剂和稳定剂 的 0.1美洛昔康滴眼剂 0042 0043 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依。
22、次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0044 实施例 8 ： 制备以 10 HP-CD 溶液和 1羟丙甲纤维素作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 说 明 书 CN 103110575 B 8 7/23 页 9 0045 0046 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加。
23、注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0047 实施例 9 ： 制备以 10 HP-CD 溶液和 2羟丙甲纤维素作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 0048 0049 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0050 实施例 10 ： 制备以 5 HP。
24、-CD 溶液和 2羟丙甲纤维素作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 说 明 书 CN 103110575 B 9 8/23 页 10 0051 0052 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0053 实施例 11 ： 制备以 5 HP-CD 溶液和 1羟丙甲纤维素作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 。
25、0054 0055 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0056 实施例 12 ： 制备以 1 HP-CD 溶液和 2羟丙甲纤维素作增溶剂和稳定剂的 0.1美洛昔康滴眼剂 0057 说 明 书 CN 103110575 B 10 9/23 页 11 0058 0059 制备方法 ： 称取处方量 HP-CD 于。
26、 90ml 注射用水中溶解， 加入硼酸溶解， 水浴加 热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶 解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封 口塑料瓶中， 即得。 0060 对比例 1 ： 0061 0062 制备方法 ： 制备方法 ： 称取处方量硼酸及 HP-CD 于 90ml 注射用水中溶解， 水浴 加热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全 溶解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至 100ml。用 0.。
27、22m 微孔滤膜过滤， 分剂量分装入 封口塑料瓶中， 即得。 0063 对比例 2 ： 0064 0065 制备方法 ： 称取处方量氢氧化钠于 40ml 注射用水中溶解， 水浴加热至 80， 加入 1.0g 美洛昔康， 搅拌， 待完全溶解后依次加入其它辅料， 继续搅拌至完全溶解， 调节 pH 值至 7.5， 补加注射用水至100ml。 用0.22m微孔滤膜过滤， 分剂量分装入封口塑料瓶中， 即得。 0066 各实施例与对比例配制滴眼液稳定性试验方法 ： 说 明 书 CN 103110575 B 11 10/23 页 12 0067 1、 影响因素实验 0068 取按上述各实施例与对比例配制好的。
28、美洛昔康滴眼液， 置于无色、 透明、 密封安瓿 中， 分别于温度 60、 光照 (4500Lx500Lx) 条件下放置， 并分别于第 5、 10 天取样检查， 结 果与 0 天样品比较， 试验结果见表 5、 表 6 ： 0069 表 5 美洛昔康滴眼液影响因素 60试验结果 0070 0071 说 明 书 CN 103110575 B 12 11/23 页 13 0072 表 6 美洛昔康滴眼液影响因素光照试验结果 0073 0074 说 明 书 CN 103110575 B 13 12/23 页 14 0075 说 明 书 CN 103110575 B 14 13/23 页 15 0076 。
29、2、 加速试验 0077 取按上述各实施例与对比例配制好的美洛昔康滴眼液， 置于无色、 透明、 密封安瓿 中， 于温度 40 2、 RH75 5的条件下放置 6 个月， 于第 1、 2、 3、 6 个月分别取样检 查， 结果与 0 天样品比较， 试验结果见表 7 ： 0078 表 7 美洛昔康滴眼液加速试验结果 0079 0080 说 明 书 CN 103110575 B 15 14/23 页 16 0081 说 明 书 CN 103110575 B 16 15/23 页 17 0082 3、 长期试验 0083 取按上述各实施例与对比例配制好的美洛昔康滴眼液， 置于无色、 透明、 密封安瓿 。
30、中， 于温度 25 2， RH60 10条件下贮存， 于第 3、 6、 9、 12 个月分别取样检查， 结果 与 0 天样品比较， 试验结果见表 8 ： 0084 表 8 美洛昔康滴眼液长期试验结果 0085 说 明 书 CN 103110575 B 17 16/23 页 18 0086 说 明 书 CN 103110575 B 18 17/23 页 19 0087 说 明 书 CN 103110575 B 19 18/23 页 20 0088 结论 ： 对比例样品和实施例样品在温度 40 2、 RH75 5和温度 25 2， RH60 10条件下放置 12 个月比较， 滴眼液处方中加入羟丙基。
31、 - 环糊精 与高分子水溶性材料玻璃酸钠、 羟丙甲纤维素较未加如增粘剂及高分子水溶性材料的滴眼 液更稳定。试验结果表明， 在美洛昔康滴眼液处方组成中羟丙基 - 环糊精与水溶性高分 子材料， 使药品的稳定性得到大幅提高， 提高了美洛昔康滴眼液在长期贮存条件下的稳定 性， 减小了药物的用药风险， 增强了药物的安全性。 0089 采用兔眼前房穿刺试验和眼局部用药的刺激性试验对 0.025、 0.05、 0.1美 洛昔康滴眼液局部使用的抗炎效果进行了评价。结果表明， 美洛昔康滴眼液可显著抑制因 前房穿刺引起的兔眼房水蛋白浓度升高 ； 对家兔单次给药或连续给药 7 天均无刺激性 ； 美 洛昔康滴眼剂体外。
32、溶血试验均未见溶血和血球凝聚现象 ； 美洛昔康滴眼剂豚鼠眼过敏试验 未见过敏反应 0090 1、 兔眼前房穿刺试验 0091 取眼部无异常家兔 36 只， 随机分为 6 组， 每组 6 只， 依次为生理盐水组、 基质对照 组、 双氯芬酸钠阳性对照组、 0.025、 0.05和 0.1美洛昔康滴眼液组。各组家兔实验眼 内滴入药液 0.05ml， 被动闭合 10 秒， 45 分钟后在 1丁卡因 0.2ml 滴眼局麻下， 用 41/2 号 注射针头自角膜缘穿刺， 取一次房水 0.2ml， 90 分钟后再次穿刺取二次房水， 所获两次房水 分别稀释2倍和50倍后， 取蒸馏水、 房水稀释液及标准蛋白液各0。
33、.05ml， 分别加入考马斯亮 兰染色液 3ml， 反应 10 分钟后于 595nm 处测它们的吸光度值， 并依下列公式计算蛋白含量 ： 0092 0093 结果表明， 美洛昔康滴眼液和双氯芬酸钠滴眼液均可显著抑制因前房穿刺造成的 房水蛋白浓度升高， 与生理盐水组和基质对照组相比， 有显著性差异， 见表 9。 说 明 书 CN 103110575 B 20 19/23 页 21 0094 表 9. 美洛昔康滴眼液对兔眼前房穿刺所致房水蛋白浓度升高的抑制作用 0095 0096 与生理盐水组比较， *P 0.05 ； *P 0.01 0097 与基质对照组比较， P 0.05 ； P 0.01 。
34、0098 通过实验美洛昔康对兔眼前房穿刺引起的房水蛋白浓度升高有显著抑制作用 ； 对 非细菌性眼部炎症反应有治疗作用， 其作用强度与双氯芬酸钠滴眼液相似， 但作用出现较 快。 0099 2、 眼局部用药的刺激性试验 0100 2.1 单次给药刺激性实验 0101 取眼部无异常家兔 16 只， 随机分为 4 组， 4 只 / 组， 1-3 组为实验组， 4 组为基质对 照组， 各组分别于右眼内滴入 0.025， 0.05， 0.1美洛昔康滴眼液 0.1ml， 空白对照组 滴入空白基质 0.1ml， 左眼滴入同体积的生理盐水对照。被动闭合约 10s。观察 6 小时内的 刺激性， 并于给药后 24，。
35、 48， 72 小时再次观察刺激性并以文献有关眼刺激反应评分标准表 10 评分并记录。 0102 将每个动物与受试物接触后眼角膜、 虹膜、 结膜的刺激反应分值相加， 即为该受试 物刺激性反应的最后总积分 ； 将总积分除以动物数即为该动物眼刺激性的最后分值， 并以 最高分为基准按表 11 的评分标准判定刺激性的程度， 结果见表 12。 0103 2.2 连续用药 7 天的刺激性及停药一周刺激性实验 0104 取家兔 16 只， 检查眼部无异常， 随机分为四组， 每组 4 只。依次为空白对照组， 0.025， 0.05和 0.1美洛昔康滴眼液组。将各浓度的美洛昔康及空白基质分别滴入眼 结膜囊内， 。
36、剂量为 0.1ml， 另一侧滴入生理盐水作对照。滴入后将眼睑被动闭合约 10s。每 天上午给药， 观察 6 小时， 打分， 连续一周。依上述标准评分及判断刺激性强度， 刺激性强度 的实验结果见表 13。 0105 由表 12， 表 13， 给药后对巩模有轻度勉强可见的血管扩张作用， 得分均小于 3 分， 均属无刺激性， 停药后未见新的毒性反应。 0106 表 10. 眼刺激反应评分 0107 说 明 书 CN 103110575 B 21 20/23 页 22 0108 注 ： 本药有轻度勉强可见的一过性血管扩张作用记为 0.5 分 0109 表 11. 眼刺激性评价标准 0110 说 明 书。
37、 CN 103110575 B 22 21/23 页 23 0111 表 12. 单次给药对眼结膜的刺激性 (n 4) 0112 0113 ( 一 ) 表示按刺激强度评分标准判断为无刺激性 0114 表 13. 连续给药 7 天的刺激性及停药一周刺激性反应 0115 0116 ( 一 ) 表不按刺激强度评分标准判断为无刺激性 0117 2.3 体外溶血试验 0118 家兔耳缘静脉采血， 依文献方法， 竹签搅拌去纤维蛋白， 用生理盐水洗涤后离心， 反复数次直至上清液无红色， 然后按体积比用生理盐水配成 2.0红血球混悬液供试验用。 0119 取试管 7 支， 按表 10 所示各管分别加入不同体积。
38、的药液和红血球混悬液， 管 6 不 加药， 加生理盐水作空白对照， 管 7 加蒸馏水作完全溶血对照。轻轻摇匀后， 各管置 37水 浴中放置 4 小时， 每小时记录 1 次， 共 4 次。依文献标准肉眼观察有无溶血现象。末次观察 后， 将各试管充分振摇， 观察有无沉淀和凝集现象， 结果见表 14。 0120 表 14. 美洛昔康滴眼液的溶血试验 0121 说 明 书 CN 103110575 B 23 22/23 页 24 0122 判断 ： ( 一 ) 表示无溶血现象， 无凝集， 无沉淀反应。 0123 (+) 表示部分溶血。(+) 表示为全溶血。 0124 0.1美洛昔康滴眼液体外溶血试验未。
39、见溶血和血球凝聚， 与生理盐水比较， 无明 显差别。蒸馏水组则完全溶血， 产生红色透明溶液。 0125 2.4 局部用药的过敏试验 0126 取豚鼠 30 只， 雌雄各半， 随机分为 3 组， 每组 10 只， 实验组滴入左眼结膜囊内 0.1美洛昔康 0.05ml， 对照组分别滴 NS 和基质液 0.05ml， 连续 3 天， 每日一次， 然后于给 药后7， 14天再滴一次， 28天后于右眼结膜滴0.05ml药攻击， 观察给药后6小时， 24小时， 48 小时， 72 小时有无过敏反应及过敏反应的严重程度， 求致敏率， 参照皮肤过敏反应的评分标 准表 15 进行评分和判断。实验结果见表 16， 眼局部用药未见过敏反应。 0127 表 15 皮肤过敏反应评分标准 . 0128 0129 实验结论 ： 美洛昔康滴眼剂对家兔单次给药或连续给药 7 天均无刺激性 ； 美洛昔 康滴眼剂体外溶血试验均未见溶血和血球凝聚现象 ； 美洛昔康滴眼剂豚鼠眼过敏试验未见 过敏反应。 0130 表 16. 美洛昔康滴眼剂致敏试验 说 明 书 CN 103110575 B 24 23/23 页 25 0131 说 明 书 CN 103110575 B 25 。