《用以活化血小板的添加剂.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《用以活化血小板的添加剂.pdf（7页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 103110947 A (43)申请公布日 2013.05.22 CN 103110947 A *CN103110947A* (21)申请号 201110362788.7 (22)申请日 2011.11.16 A61K 45/00(2006.01) A61K 47/18(2006.01) A61K 47/22(2006.01) A61K 47/10(2006.01) A61K 47/06(2006.01) A61K 47/00(2006.01) A61P 17/02(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61L 27/50(2006.01) A6。
2、1L 27/60(2006.01) G01N 1/28(2006.01) A61K 35/16(2006.01) (71)申请人 玛旺干细胞医学生物科技股份有限 公司 地址 中国台湾新北市汐止区康宁街 169 巷 29-1 号 7 楼 (72)发明人 黄美月 (74)专利代理机构 北京申翔知识产权代理有限 公司 11214 代理人 艾晶 周春发 (54) 发明名称 用以活化血小板的添加剂 (57) 摘要 本发明关于一种用以活化血小板的添加剂。 本发明的添加剂包含钙离子、 抗生素、 抗氧化剂及 缓冲液。将所需成份依特定比例混匀后以即取得 前述血浆样本的添加剂。本发明的添加剂使用上 简便且快速， 。
3、而所制得的添加剂具有活化血小板 的功用， 有助于血小板在医疗上的应用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103110947 A CN 103110947 A *CN103110947A* 1/1 页 2 1. 一种用以活化血小板的添加剂， 其特征在于， 其包含 ： 钙离子 ； 抗氧化剂 ； 抗生素 ； 及 缓冲液。 2. 如权利要求 1 所述的添加剂， 其包含 ： 0.050.5mEq/ml 的钙离子 ； 100400mg/ml 。
4、的抗氧化剂 ； 2070g/ml 的抗生素 ； 及 缓冲液。 3. 如权利要求 1 所述的添加剂， 其中前述缓冲液是医药可接受的缓冲液。 4. 如权利要求 1 所述的添加剂， 其中前述缓冲液的 pH 值范围为 58。 5. 如权利要求 1 所述的添加剂， 其中前述抗氧化剂为谷胱甘肽、 维生素 C、 维生素 E、 维 生素 A、 类胡萝卜素、 辅酶、 硫辛酸、 类黄酮或其组合。 6. 如权利要求 1 所述的添加剂， 其中前述抗生素为硫酸正泰霉素、 链霉素、 林可霉素、 青霉素、 四环霉素、 氯霉素、 红霉素、 磺胺类药或其组合。 7. 一种促使血小板活化的方法， 其包含使样本与如申如权利要求 1。
5、 所述的添加剂混 合。 8. 如权利要求 7 所述的方法， 其中前述混合的时间为 520 分钟。 9. 如权利要求 7 所述的方法， 其中前述样本为血浆。 10. 如权利要求 9 所述的方法， 其中前述血浆为富含有血小板的血浆 (PRP)。 权 利 要 求 书 CN 103110947 A 2 1/4 页 3 用以活化血小板的添加剂 技术领域 0001 本发明关于一种用于血液样本的添加剂， 尤指一种用于活化血小板的添加剂。 背景技术 0002 凝血作用是人体一个重要的急救措施， 凝血机制分为外源性 (extrinsic) 与内源 性 (intrinsic)， 牵涉多层的调控及各种凝血因子， 其。
6、中血小板和钙离子 (Ca2+) 扮演极重要 的角色， 血小板调控内源性凝血机制， 钙离子则为多种凝血因子的辅因子， 因此在创伤时， 血小板会产生多种生长因子， 进而促进凝血及伤口愈合。 0003 富血小板血浆 (Platelet Rich Plasma, PRP) 在特定 pH 值及血小板浓度下可产 生多种生长因子， 因此医学上将其用于治疗糖尿病患者难以痊愈的伤口、 关节炎、 足部溃烂 或是烧烫烧等， 甚至也能配合植皮促使组织细胞再生修复， 效用佳且副作用低。 0004 PRP 于使用上的效果除了依不同治疗有不同导入方式外， 影响其活性最大者便是 PRP 中血小板的浓度与其活性， 较高浓度或活。
7、性较高的血小板产生的生长因子较多， 治疗的 效果越快也越好， 虽应用 PRP 治疗的疾病多非急症， 但若能提高每次施打 PRP 的效力， 便可 减少抽血与治疗的次数， 不仅降低感染的机率、 节省人力物力及减轻病患的痛楚， 因此如何 有效率地使 PRP 产生更多生长因子， 确有其开发的必要性。 发明内容 0005 本发明的一目的为提供一种活化血小板的方法， 其可提升现有治疗方法之的效 力， 有助于提升医疗质量。 0006 本发明又一目的为提供一种用于血液样本的添加剂， 可活化血液样本中的血小 板， 使其产生较多量的生长因子， 以获得较佳的治疗效果。 0007 为达到上述目的， 本发明提供一种用以。
8、活化血小板的添加剂， 其包含钙离子、 抗氧 化剂、 抗生素和缓冲液。 0008 较佳地， 前述钙离子的浓度范围为 0.050.5mEq/ml。 0009 较佳地， 前述抗氧化剂的浓度范围为 100400mg/ml ； 较佳地， 前述抗氧化剂为谷 胱甘肽、 维生素 C、 维生素 E、 维生素 A、 类胡萝卜素、 辅酶、 硫辛酸、 类黄酮或其组合。 0010 较佳地， 前述抗生素的浓度范围为 2070g/ml ； 较佳地， 前述抗生素为硫酸正泰 霉素、 链霉素、 林可霉素、 青霉素、 四环霉素、 氯霉素、 红霉素、 磺胺类药或其组合。 0011 较佳地， 前述缓冲液系医药可接受的缓冲液 ； 较佳地。
9、， 前述缓冲液为磷酸缓冲溶 液、 林格氏溶液或其组合。 0012 本发明又提供一种活化血液样本的方法， 其步骤为将样本与添加剂混合。 0013 较佳地， 前述混合时间为 520 分钟。 0014 较佳地， 前述样本为血浆， 每毫升含有 100300106 的血小板。 0015 较佳地， 前述样本为富含有血小板的血浆 (PRP)， 其含有浓度超过每毫升 109 的血 小板。 说 明 书 CN 103110947 A 3 2/4 页 4 0016 综上所述， 本发明的添加剂除添加活化血小板必需的钙离子外， 更辅以抗氧化剂 及抗生素， 增加 PRP 使用上的持续性及安全性， 因此有助于 PRP 于临。
10、床上的应用。此外， 本 发明的添加剂只需简单与血液样本 ( 如， PRP) 混合， 即可发生效果， 不论在检测性、 治疗性 或美容性的临床运用上， 都具有简便快速的优点。 附图说明 0017 图 1 为本发明实施例一于活化血小板的试验结果。 具体实施方式 0018 本发明关于一种用以活化血小板的添加剂及使用前述添加剂于检测性、 治疗性或 美容性的临床运用上活化血小板的方法。 前述添加剂包含适当浓度的钙离子、 抗氧化剂、 抗 生素及缓冲液。 0019 本发明所称的 活化 系指使增加血小板的生理活性及 / 或促进其于生理机制 上的功能。举例来说， 如促使血小板更有效率地释放生长因子如血小板衍生性生。
11、长因子 (PDGF-BB)、 转化生长因子 (TGF-) 与血管内皮生长因子 (VEGF)。 0020 本发明所称的 血液样本 泛指人类或动物的血液样本 ； 更明确地， 系指富含有血 小板的血浆样本。然而， 所属领域具有通常知识者， 参本发明说明书所揭露的内容， 当可理 解使用本发明的添加剂使任何血液样本中所含的血小板活化， 皆应属于本发明的范畴。 0021 前述钙离子的浓度为 0.050.5mEq/ml。前述钙离子可由含钙离子溶液来提供， 其 包括， 但不限于氯化钙溶液、 磷酸钙溶液、 钙葡糖酸盐或其组合。由于钙离子是血小板活化 路径中重要辅因子 (cofactor)， 因此， 添加钙离子将。
12、有助于促使血液样本中的血小板活化， 或提供其活化的程度。 0022 前述抗氧化剂的浓度为100400mg/ml。 前述抗氧化剂包括， 但不限于谷胱甘肽、 维 生素C、 维生素E、 维生素A、 类胡萝卜素、 辅酶、 硫辛酸、 类黄酮或其组合。 于本发明的添加剂 中添加抗氧化剂可去除自由基等活性物质， 延长生长因子的寿命。 0023 前述抗生素的浓度为2070 g/ml。 前述抗生素包括， 但不限于硫酸正泰霉素、 链 霉素、 林可霉素、 青霉素、 四环霉素、 氯霉素、 红霉素、 磺胺类药或其组合。 于本发明的添加剂 中添加抗生素可避免在使用血浆样本时可能发生的感染。 0024 前述缓冲液于本发明的。
13、添加剂中系为了维持适当 pH 值环境， 使血液样本中的血 小板维持正常的生理活性， 而得以持续释放生长因子。 较佳地， 前述缓冲液系将本发明的添 加剂的 pH 值控制于 58 之间。更明确地， 前述缓冲液为医药可接受的缓冲液， 包括， 但不限 于 ： 林格氏溶液、 磷酸缓冲液或其组合。 0025 本发明的添加剂的配制方法系简述如下 ： 首先， 取得所需的原料， 包括欲使用的含 钙离子溶液、 抗氧化剂、 抗生素及缓冲液。 前述原料可直接选购商业上经无菌处理的医药级 试剂， 或者亦可简易经实验室调配， 再依所属领域中具有通常知识者所习知的方式来灭菌。 举例来说， 灭菌的方式有 ： 经0.22m的圆。
14、形滤膜(俗称小飞碟)过滤以同时达到滤除细小 杂质及灭菌的效果， 或者亦可使配好的试剂于灭菌釜中经高温高压灭菌。 0026 值得注意的是， 部分药剂并不适合以高温高压的方式来灭菌， 例如， 在这样的温度 压力条件下， 很有可能造成抗生素的破坏， 因此所属领域具有通常知识者当可理解需视情 说 明 书 CN 103110947 A 4 3/4 页 5 况选择采用灭菌的方式。 较佳地， 即便所使用的原料是在供货商端便已灭菌过的产品， 或已 经操作者进行灭菌， 于本发明的添加剂配置完成后， 仍可再经过至少一次的 0.22m 圆形 滤膜过滤， 以避免于制备本发明的添加剂的过程中的任何可能污染情况。 002。
15、7 取得所需原料之后， 陆续将前述含钙离子溶液、 前述抗氧化剂及前述抗生素加入 前述缓冲液中， 其混合的顺序并没有限制， 但为了维持前述抗氧化剂与前述抗生素的活性， 较佳地， 系先混合前述含钙离子溶液与前述缓冲液。 除此之外， 亦可将前述含钙离子溶液与 前述缓冲液混合为一混合液之后， 将前述混合液妥善保存， 直至需要使用本发明的添加剂 时， 再将保存的前述混合液取出， 并添加前述抗氧化剂与前述抗生素。 如此一来可以确保氧 化剂与抗生素的活性维持在最佳的状况。 0028 将前述含钙离子溶液、 前述抗氧化剂及前述抗生素加入前述缓冲液中后， 搅拌或 摇晃使所有成分能均匀的混合。 较佳地， 为了维持前。
16、述抗氧化剂与前述抗生素的活性， 于室 温下进行混合程序 ； 更明确地， 于 1626下进行混合程序。完成混合程序之后， 如前所述， 较佳地系再经过至少一次的 0.22m 圆形滤膜过滤， 便制得本发明的添加剂。 0029 于使用本发明的添加剂时， 较佳地， 将前述添加剂与血液样本进行混合。更明确 地， 混合过程需持续摇晃以使前述添加剂与血浆样本充分地混合。 较佳地， 前述混合的时间 为 520 分钟。 0030 据此， 本发明的添加剂提供血小板活化所需的辅因子， 且血浆样本来自病患本身， 因此不会有免疫排斥的问题， 特别适合使用生长因子促进组织新生的医疗。 0031 以下实施例仅以文字并搭配图式。
17、说明实际进行的制程及实验， 以使所属领域中具 有通常知识者更明确地了解本发明的特点与精神。惟需注意的是， 以下实施例仅用于示范 性地说明本发明， 而不应用以限制本发明的权利范围。 0032 实施例一 ： 制备本发明的用于活化血小板的添加剂。 0033 于本实施例中将示范性地制备本发明的添加剂。取得无菌的缓冲液、 含钙离子溶 液、 抗氧化剂及抗生素。于本实施例中， 所使用的缓冲液为林格氏液、 所使用的含钙离子溶 液为氯化钙溶液、 所使用的抗氧化剂为谷胱甘肽及所使用的抗生素为硫酸正泰霉素。 0034 首先， 将 1.7 mL 的林格氏液与 0.5 ml 的氯化钙溶液 (0.272 mEq/ml) 。
18、混合， 再于 20的条件下加入250 mg的谷胱甘肽与4 l的硫酸正泰霉素(50 g/ml)。 待各成份均 匀混合及溶解至无悬浮物为止， 即可获得本实施例的用于活化血小板的添加剂， 其中钙离 子浓度约为 0.062 mEq/ml、 谷胱甘肽的浓度约为 113.636 mg/ml 及硫酸正泰霉素的浓度约 为 45 g/ml。 0035 实施例二 ： 实施例一的添加剂的使用方法及效果分析。 0036 于本实施例中， 将实施例一的添加剂与血浆样本依实际使用情况混合后， 分析添 加剂的效果。 0037 前述血浆样本为富含血小板血浆 (PRP)， 其来源为自人体抽取的全血， 经离心等技 术纯化而得， 其。
19、血小板浓度每毫升超过 109。将富含血小板血浆 (PRP) 与实施例一所制得 的添加剂直接于室温下混合， 其中持续以手或振荡器摇晃， 以使两者充分混匀后， 使其静置 20 分钟， 再测定其中的血小板衍生性生长因子 (PDGF-BB)、 转化生长因子 (TGF-) 与血管 内皮生长因子 (VEGF) 的浓度。 0038 请参考图 1， 其显示加入添加剂后前述三种生长因子的浓度均较全血的生长因子 说 明 书 CN 103110947 A 5 4/4 页 6 浓度有显著的提高。 由图中的数据可知， 与对照组相比， 实施例一的添加剂可提升血小板衍 生性生长因子约3.5倍的释放， 提升转化生长因子约2倍的释放， 并提升血管内皮生长因子 约 3.5 倍的释放。 说 明 书 CN 103110947 A 6 1/1 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 103110947 A 7 。