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1、(10)申请公布号 CN 103385880 A (43)申请公布日 2013.11.13 CN 103385880 A *CN103385880A* (21)申请号 201310286061.4 (22)申请日 2013.07.09 A61K 31/575(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61K 31/525(2006.01) A61K 31/51(2006.01) (71)申请人 荣港生技医药科技 （北京） 有限公司 地址 100025 北京市朝阳区八里庄西里 1 号 远洋天地 61 号楼 904 室 (72)发明人 林荣锦。
2、 杨大龙 谢浩 唐晔盛 魏彦韫 姚雅童 (74)专利代理机构 上海信好专利代理事务所 ( 普通合伙 ) 31249 代理人 贾慧琴 (54) 发明名称 一种熊去氧胆酸维生素组合物、 其制备方法 及用途 (57) 摘要 本发明公开了一种熊去氧胆酸维生素组合 物、 制备方法及用途， 该组合物包含以下按重量百 分数计的原料 ： 1-30% 的熊去氧胆酸、 0.1-5% 的 硝酸硫胺、 0.05-2.5% 的核黄素， 余量为分散载 体。本发明还提供了该组合物的胶囊制剂的制备 方法， 该方法操作简单， 制得的胶囊色泽和均匀度 好。 本发明提供的熊去氧胆酸维生素组合物， 采用 熊去氧胆酸、 硝酸硫胺和核黄。
3、素三者合用有助于 拮抗肝脏疏水性毒性胆汁酸的作用， 保护肝细胞， 提供肝细胞充足的能量， 帮助损伤肝细胞功能恢 复正常具有显著的利胆保肝的作用， 能用于制备 利胆保肝的药物。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 103385880 A CN 103385880 A *CN103385880A* 1/1 页 2 1. 一种熊去氧胆酸维生素组合物， 其特征在于， 该组合物包含以下按重量百分数计的 原料 ： 1-30% 熊去氧胆酸 ； 0.1-5% 硝酸硫胺 ； 。
4、0.05-2.5% 核黄素 ； 余量为分散载体。 2. 如权利要求 1 所述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其特征在于， 所述的分散载体选择 聚乙二醇 400。 3. 如权利要求 2 所述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其特征在于， 所述的组合物还包含 助悬剂聚乙二醇 6000， 该助悬剂的用量为以分散载体的重量百分数计 1-3%。 4. 如权利要求 1 所述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其特征在于， 所述的组合物还包含 常规医药辅料。 5. 如权利要求 1-4 中任意一项所述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其特征在于， 所述的 组合物为软胶囊制剂。 6. 一种如权利要求 5 所述的熊去氧胆酸维生素组合物的。
5、制备方法， 其特征在于， 该方 法包含 ： 步骤 1， 胶液的制备 ： 将对羟基苯甲酸乙酯、 纯化水及二氧化钛中， 搅拌均匀 ； 向上述水 溶液中加入甘油、 明胶， 搅拌， 保温 65-85， 2 小时后停止搅拌， 保温 65备用 ； 步骤 2， 胶囊内容物的制备 ： 将熊去氧胆酸、 硝酸硫胺及核黄素加入到分散载体中， 分 散均匀 ； 步骤 3， 采用常规方法， 将胶液制成胶皮， 并装入胶囊内容物， 制成软胶囊。 7. 如权利要求 6 所述的熊去氧胆酸维生素组合物的制备方法， 其特征在于， 所述的步 骤 1 包含 ： 步骤 1.1， 将对羟基苯甲酸乙酯溶入 95% 的乙醇中至完全溶解， 得到对。
6、羟基苯甲酸乙酯 溶液 ； 将该对羟基苯甲酸乙酯溶液加入到 70-80的纯化水中， 搅拌均匀 ； 步骤1.2， 将二氧化钛以纯化水润湿， 用200目筛过滤， 加入至上述步骤1.1得到的溶液 中， 搅拌均匀。 8. 一种如权利要求 1 所述的熊去氧胆酸维生素组合物的用途， 其特征在于， 该组合物 能用于制备利胆保肝的药物。 权 利 要 求 书 CN 103385880 A 2 1/5 页 3 一种熊去氧胆酸维生素组合物、 其制备方法及用途 技术领域 0001 本发明涉及一种熊去氧胆酸维生素组合物， 具体地， 涉及一种包含熊去氧胆酸 (UDCA， 3a， 7p 二羟基 -5- 胆烷酸 )、 硝酸硫胺。
7、 （维生素 B1） 和核黄素 （维生素 B2） 的熊去氧胆 酸维生素组合物及其制备方法。 背景技术 0002 由于肝脏疾病的防治比较复杂， 确定完全奏效的药物并不太多， 通常需采用多种 药物、 不同的方法进行肝病的综合治疗。 熊去氧胆酸为亲水性胆汁酸， 已广泛用于临床各 种肝病治疗， 尤其是能不同程度地改善各种类型胆汁淤积患者的临床症状、 生化指标和肝 组织的变化。它的治疗机制为 ： 利胆， 降低胆汁酸毒性 ： 在体内， 胆汁酸对肝细胞的毒性 与其疏水性相关， UDCA 进人人体后可增加胆汁酸的亲水性而降低其毒性， 且有促进内源性 胆汁酸排泌的作用。 细胞保护作用 ： UDCA 可以竞争性抑制。
8、内源性胆汁酸与细胞膜及线 粒体膜结合， 使肝细胞膜的胆固醇和磷脂不易溶解， 从而起到稳定肝细胞的作用， 即减轻了 肝细胞的损伤。免疫调节作用 ： UDCA 通过抑制主要组织相容性复合物在肝细胞膜表达， 从而使肝组织中的活化T细胞减少， 抑制细胞毒性T细胞对肝细胞损伤作用， 减少肝内淋巴 细胞分泌免疫球蛋白， 降低胆管上皮的免疫应答， 提高库普弗 （Kupfer） 细胞的免疫应答。 抗氧化作用 ： UDCA 能增加肝细胞内谷胱甘肽和巯基蛋白水平， 保护肝细胞免受氧化剂的损 伤。 抑制细胞凋亡 ： 毒性胆汁酸可诱导肝细胞凋亡， UDCA 可明显抑制肝细胞凋亡。它通 过诱发内源性干扰素IFN- 和白。
9、细胞介素IL-2产生， 降低TNF- （Tumor Necrosis Factor， 肿瘤坏死因子） 水平， 从而抑制肝细胞的凋亡。 作用于细胞内信号传导 ： UDCA 进入人体 后与牛磺酸或甘氨酸结合， 形成的牛磺酸熊去氧胆酸是 Ca2+ 增效剂， 可刺激肝细胞 Ca 及胆 汁的细胞外渗。 0003 目前国内已有多种文献报道用熊去氧胆酸治疗治疗原发性胆汁性肝硬化。治疗 3 月后， 按照疗效评价标准进行治疗效果评价， 显效 l8 例， 约占 64.3 ； 有效 7 例， 约占 25.0 ； 无效 3 例， 约占 10.7。总有效人数 25 人， 约占 89.3。一组平行对照的经熊去 氧胆酸恢复。
10、正常的原发性胆汁性肝硬化患者停用熊去氧胆酸 12 月后观察， 停用熊去氧胆 酸组有 92% 的复发率， 继续服用熊去氧胆酸组 15% 复发率。差异有统计学意义 (P0.05)。 停用熊去氧胆酸组丙氨酸转氨酶 (ATJT)、 天冬氨酸转氨酶 (AST)、 碱性磷酸酶 (ALP)、 一谷 氨酰转肽酶 (GGT) 升高， 差异有统计学意义 (P0.05)， 血清胆红素平均水平差异无统计学 意义。继续服用熊去氧胆酸组上述指标均维持稳定。运用中西医结合方法研究熊去氧胆酸 治疗妊娠期胆汁淤积症。治疗 1 周或 2 周后， ALT（谷丙转氨酶） 、 TBA（Total Bile Acid， 总胆汁酸） 明显。
11、下降 (P0.05)， 并对控制瘙痒效果明显。并且观察组围产儿病死率、 围产儿 病率明显低于同期报道的发生率。且胎儿窘迫、 羊水污染、 早产均较对照组明显降低， 差异 极显著 (P0.05)。 0004 因此， 亟需开发一种中西医结合的复方熊去氧胆酸组合物。 说 明 书 CN 103385880 A 3 2/5 页 4 发明内容 0005 为解决上述技术问题， 本发明的目的提供一种中西医结合的复方制剂， 采用熊去 氧胆酸 (UDCA， 3a， 7p 二羟基 -5- 胆烷酸 )、 硝酸硫胺 （维生素 B1） 和核黄素 （维生素 B2） 联用 得到， 该组合物具有显著的利胆保肝的作用。 0006 。
12、为达到上述目的， 本发明提供了一种熊去氧胆酸维生素组合物， 该组合物包含以 下按重量百分数计的原料 ： 1-30% 熊去氧胆酸 ； 0.1-5% 硝酸硫胺 ； 0.05-2.5% 核黄素 ； 余量为分散载体。 0007 上述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其中， 所述的分散载体选择聚乙二醇 400。 0008 上述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其中， 所述的组合物还包含助悬剂聚乙二醇 6000， 该助悬剂的用量为以分散载体的重量百分数计 1-3%。 0009 上述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其中， 所述的组合物还包含常规医药辅料， 所述 医药辅料包含明胶、 甘油、 二氧化钛、 聚乙二醇、 对羟基苯甲。
13、酸乙酯、 色素等。 其中， 明胶为软 胶囊皮主要成分， 作为成型材料 ； 甘油作为保湿剂 ； 二氧化钛作为遮光剂 ； 聚乙二醇 400 作 为保湿剂 ； 对羟基苯甲酸乙酯作为防腐剂 ； 色素 （如， 果绿、 亮蓝色素） 均作为遮光剂。 0010 上述的熊去氧胆酸维生素组合物， 其中， 所述的组合物为软胶囊制剂。 0011 本发明还提供了一种上述的熊去氧胆酸维生素组合物的制备方法， 该方法包含 ： 步骤 1， 胶液的制备 ： 将对羟基苯甲酸乙酯、 纯化水及二氧化钛中， 搅拌均匀 ； 向上述水 溶液中加入甘油、 明胶， 搅拌， 保温 65-85， 2 小时后停止搅拌， 保温 65备用 ； 步骤 2。
14、， 胶囊内容物的制备 ： 将熊去氧胆酸、 硝酸硫胺及核黄素加入到分散载体中， 分 散均匀 ； 步骤 3， 采用常规方法， 将胶液制成胶皮， 并装入胶囊内容物， 制成软胶囊。 0012 上述的熊去氧胆酸维生素组合物的制备方法， 其中， 所述的步骤 1 包含 ： 步骤 1.1， 将对羟基苯甲酸乙酯溶入 95% 的乙醇中至完全溶解， 得到对羟基苯甲酸乙酯 溶液 ； 将该对羟基苯甲酸乙酯溶液加入到 70-80的纯化水中， 搅拌均匀。对于对羟基苯甲 酸乙酯在水中的完全溶解步骤， 常规做法为 ： 水温需加热至 90且需不停搅拌， 费时费力 ； 而本发明是将对羟基苯甲酸乙酯溶于少量乙醇后再倒入 70-80的。
15、水中， 对羟基苯甲酸乙 酯便很快溶解， 乙醇在热水中也很快挥发。 0013 步骤1.2， 将二氧化钛以纯化水润湿， 用200目筛过滤， 加入至上述步骤1.1得到的 溶液中， 搅拌均匀 ； 该方法制得的胶囊皮色泽和均匀度最好。该步骤的常规做法为 ： 将 200 目过滤后的二氧化钛混悬液加入纯水后再溶胶。 0014 本发明还提供了一种上述的熊去氧胆酸维生素组合物的用途， 用于制备利胆保肝 的药物。 0015 硝酸硫胺和核黄素均为人体必需维生素， 其临床应用已超过半个世纪。硝酸硫胺 主要存在于种子的外皮和胚芽中， 人体可通过食物摄取。 它是体内能量代谢， 特别是糖代谢 所必需， 同时还是维持心脏、 。
16、神经及消化系统正常功能所必需。当硝酸硫胺摄入不足、 需要 量增加、 吸收利用障碍或某些疾病时如肝脏慢性疾病时， 会导致机体硝酸硫胺缺乏， 通常症 说 明 书 CN 103385880 A 4 3/5 页 5 状包括食欲不振、 身体疲乏等。 核黄素在体内主要作为辅酶参与氧化还原反应， 是维持人 体正常生理功能所必需。膳食调查发现， 核黄素缺乏较普遍。 0016 熊去氧胆酸、 硝酸硫胺和核黄素三者合用有助于拮抗肝脏疏水性毒性胆汁酸的作 用， 保护肝细胞， 提供肝细胞充足的能量， 帮助损伤肝细胞功能恢复正常。动物实验也已经 证明， 在治疗胆汁淤积性肝病方面， 本发明提供的复方熊去氧胆酸优于单方熊去氧。
17、胆酸。 0017 本发明采用的分散载体为 PEG400， 助悬剂选用高分子 PEG6000， 并优选了二者比 例， 制成的软胶囊内容物的沉降体积比和流动性都能符合生产对溶液的要求 ； 且可在体外 采用溶出度试验对工艺和批间质量的一致性进行控制。 具体实施方式 0018 本发明提供了一种熊去氧胆酸维生素组合物， 该组合物包含以下按重量百分数计 的原料 ： 1-30% 熊去氧胆酸 ； 0.1-5% 硝酸硫胺 ； 0.05-2.5% 核黄素 ； 余量为分散载体。 0019 进一步地， 该熊去氧胆酸维生素组合物以胶囊制剂形式， 还包含常规医药辅料， 所 述医药辅料包含明胶、 甘油、 二氧化钛、 聚乙二。
18、醇、 对羟基苯甲酸乙酯、 色素等。 其中， 明胶为 软胶囊皮主要成分， 作为成型材料 ； 甘油作为保湿剂 ； 二氧化钛作为遮光剂 ； 聚乙二醇 400 作为保湿剂 ； 对羟基苯甲酸乙酯作为防腐剂 ； 色素 （如， 果绿、 亮蓝色素） 均作为遮光剂。 0020 以下结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明。 0021 实施例 1-3 如下表 1 所示的配方量加入各原料， 搅拌混合均匀， 得到本发明的熊去氧胆酸维生素 组合物 . 表 1 ： 实施例 1-3 的配方量 （重量份数计） 实施例 4 软胶囊的制备 一、 胶皮的制备 ： （1） 取 4.5kg 纯化水， 加热至 70-80 ； 称取处方。
19、量对羟基苯甲酸乙酯至小烧杯中， 加 50ml 的 95% 乙醇搅拌溶解， 加入至上述纯化水中搅拌均匀 ； 称取处方量二氧化钛， 以 200ml 纯化水润湿， 用 200 目筛过滤， 加入至上述纯化水中 ； 称取处方量果绿和亮蓝色素， 加入至 上述纯化水中搅拌溶解并加纯化水至 5kg。 0022 （2） 将泡胶桶保温套温度调至 85， 待温度达到后将 （1） 制得的溶液放至泡胶桶 说 明 书 CN 103385880 A 5 4/5 页 6 中， 加入处方量甘油， 搅拌均匀 ； 加入处方量的明胶， 边加边搅拌， 全部加入完毕后继续搅拌 1-2 分钟 ； 盖上胶桶盖， 接入搅拌桨电源， 接入真空水。
20、泵抽真空至表压至 -0.1mPa， 65-85 保温状态下进行真空脱气搅拌， 2 小时后停止搅拌。 0023 （3） 将真空水泵管从接口处拔开， 关闭水泵。将搅拌桨电源接至胶桶保温套， 将胶 桶保温套温度调至 65， 胶液保温备用。 0024 二、 胶囊内容物制备 ： 称取处方量聚乙二醇 400 215.6g 、 聚乙二醇 6000 4.4g， 加热至 50-60 , 使聚乙二醇 6000 溶化， 冷却至 40以下后， 依次称取处方量熊去氧胆酸、 硝酸硫胺和核黄素加至聚乙二醇液中搅拌均匀， 用匀质机匀浆 3 次使各成分分散均匀， 备 用。 0025 三、 软胶囊的制备 ： 将车间环境温度设为 。
21、22， 打开冷水机进行制冷， 打开冷风 机组使滚轮温度至 8-13， 将输胶管道、 加热条、 保温套连接并锁紧， 打开软胶囊机电源， 打 开胶盒加温， 调节温度为 55-58 ； 打开空气压缩泵， 调节气流 （弱） ， 插入胶桶接口， 使胶液 缓缓流入胶盒 ； 调节主机转速为 2.5， 当胶液在滚轮上成胶皮后， 将胶皮接入软胶囊磨具中 定位， 调节胶皮厚度至 0.8-0.85mm ； 将磨具喷体与胶皮贴合后将喷体温度调节至 41-43， 调节胶囊磨具调节螺丝， 使两只磨具合并， 挤出空胶囊 ； 将胶囊内容物加入物料盒中， 经分 配器充入胶皮， 挤出含药软胶囊， 经装量调节， 至每粒软胶囊装量为。
22、 0.285g 后， 保持胶盒、 喷体温度和主机转速不变， 至全部内容物灌装完毕， 所制得软胶囊接收于干燥机中滚动定 型 3-4 小时后， 取出软胶囊， 以无水乙醇清洗 3-4 次， 放于温度 30以下， 相对湿度低于 30% 的环境中 12-24 小时， 干燥后包装。 0026 本发明的实施例 4 制备的软胶囊在 0.1mol/L 盐酸溶液中的溶出度实验数据如表 2 所示， 当软胶囊胶皮被溶解后， 内容物很容易溶出。 0027 表 2 ： 实施例 41 所制样品在 0.1mol/L 盐酸溶液中的溶出度 实施例 5 复方熊去氧胆酸对淤胆型大鼠肝炎模型的影响 目的 : 观察复方熊去氧胆酸对淤胆型。
23、大鼠肝炎模型的影响。 0028 方法 : 将 SD 大鼠随机分为正常对照组、 模型组、 阳性药地塞米松组、 单方熊去氧 胆酸组、 复方熊去氧胆酸高、 中、 低剂量组， 每组10只。 除正常对照组外其余各组均用-萘 异硫氰酸酯 （ANIT） 给大鼠灌胃制备淤胆型肝炎模型 , 正常对照组灌胃给予等量溶剂 ； 造 模后第二天各给药组按剂量灌胃给药， 正常对照组及模型组同时灌胃给予等量溶剂。末次 给药后 1h 后， 收集胆汁测量胆汁流量、 TBA 含量。取血分离血清测定 ALT、 ALP（碱性磷酸 酶） 、 TBil（总胆红素） 、 DBil（直接胆红素） 、 -GT（谷氨酰转移酶） 、 T-CHO（。
24、总胆固醇） 含 量。剖取肝脏后称重并计算肝指数。制备肝匀浆 , 测定肝组织中 MDA（丙二醛） 、 NO（一氧 化氮） 、 SOD (Superoxide Dismutase, 超氧化物歧化酶 )、 Na+-K+-ATP（三磷酸腺苷） 酶活 性。HE（苏木精伊红染色法， hematoxylin-eosinstaining） 染色观察肝组织病理组织学 变化。结果 : 与正常对照组比较， 模型组肝指数、 血清 TBil、 DBil、 ALT、 ALP、 -GT、 T-CHO 水平及肝组织 MDA、 NO 含量显著升高， SOD、 Na+-K+-ATP 酶活性显著降低 , 胆汁流量及胆汁 说 明 书。
25、 CN 103385880 A 6 5/5 页 7 中总胆汁酸含量显著减少 , 病理组织学检查可见大鼠肝细胞灶状坏死， 坏死灶内及周围见 数量不等的炎细胞浸润 , 部分肝细胞脂肪变性及细胞水肿 , 提示淤胆型大鼠肝炎模型制 备成功。与模型组比较， 复方熊去氧胆酸高、 中、 低剂量组能显著降低血清 TBil、 DBil、 ALT、 ALP、 T-CHO水平及肝组织中NO含量, 增加胆汁流量 ； 高、 中剂量组能显著降低肝指数、 血清 -GT 水平及肝组织中 MDA 含量 , 升高肝组织中 SOD、 Na+-K+-ATP 酶活性 , 增加胆汁中总 胆汁酸含量 ； 与单方熊去氧胆酸组比较， 复方熊去。
26、氧胆酸高剂量组能显著降低 ALP、 -GT、 NO水平， 显著升高SOD活性， 复方熊去氧胆酸高、 中剂量组能显著降低血清ALT水平、 显著升 高肝组织 Na+-K+-ATP 活性 , 提示复方组的作用优于单方组。 0029 结论 : 本发明提供的复方熊去氧胆酸能改善 ANIT 导致的淤胆型大鼠肝炎的肝功 能， 促进胆汁排泄， 减轻机体细胞受自由基的攻击损伤， 提高肝组织中 Na+-K+-ATP 酶活性， 改善淤胆型肝炎大鼠肝组织的病理组织学变化。 说明本发明的复方熊去氧胆酸具有显著的 利胆保肝的作用。 0030 尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍， 但应当认识到上述的 描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后， 对于本发明的 多种修改和替代都将是显而易见的。 因此， 本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。 说 明 书 CN 103385880 A 7 。