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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710949510.7 (22)申请日 2017.10.13 (71)申请人 吉林化工学院 地址 132022 吉林省吉林市龙潭区承德街 45号 (72)发明人 钟方丽 王晓林 宋健刚 薛健飞 陈帅 牟荣琴 (51)Int.Cl. A61K 36/73(2006.01) A61K 131/00(2006.01) (54)发明名称 一种从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷 的方法 (57)摘要 本发明提供了一种从黑果腺肋花楸果实中 提取金丝桃苷的方法, 包括对黑果腺肋花楸果实 进。
2、行脱脂处理; 然后在复合酶、 表面活性剂及离 子液体的辅助下经乙醇水溶液提取。 本发明创造 性地在提取步骤前使用适当脱脂等预处理方法; 本发明创造性地在提取步骤中使用了复合酶、 表 面活性剂及离子液体相互协同的提取方法, 并获 得金丝桃苷含量尽可能高的提取浸液, 金丝桃苷 提取率大于63g/g。 权利要求书1页 说明书5页 CN 107737169 A 2018.02.27 CN 107737169 A 1.本发明提供了一种从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的方法, 包括以下步骤: 1) 对黑果腺肋花楸果实进行脱脂处理; 2) 在复合酶、 表面活性剂及离子液体的辅助下经乙醇水溶液提取; 3) 黑。
3、果腺肋花楸果实的提取浸液置于容量瓶中定容, 采用高效液相色谱法测定提取浸 液中金丝桃苷的含量。 2.根据权利要求1所述的方法, 其特征在于, 所述步骤1) 中黑果腺肋花楸果实的脱脂处 理为将黑果腺肋花楸果实自然晾干, 使含水量低于7%重量, 然后以料液比为1:5 (g:mL) 的石 油醚 (6090) 回流脱脂, 石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:5 (g:mL) 的 乙酸乙酯回流脱脂, 低温干燥, 使含水量低于4%重量, 得到预处理好的黑果腺肋花楸果实。 3.根据权利要求2所述的方法, 其特征在于, 所述石油醚回流脱脂次数为1次, 脱脂时间 为1h; 其特征在于, 所述乙酸乙酯回。
4、流脱脂次数为1次, 脱脂时间为1h; 其特征在于, 所述低 温干燥的温度为低于50。 4.根据权利要求1所述的方法, 其特征在于, 所述步骤2) 中复合酶为纤维素酶与果胶酶 按质量比3: 1混合而成; 其特征在于, 所述步骤2) 中表面活性剂为十二烷基硫酸钠; 其特征 在于, 所述步骤2) 中离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐。 5.根据权利要求4所述的方法, 其特征在于, 所述步骤2) 中复合酶、 表面活性剂及离子 液体辅助乙醇水溶液提取方法为: 体积分数为50%的乙醇水溶液与预处理好的黑果腺肋花 楸果实按料液比为1:10 (g:mL) 进行混合, 加入相当于黑果腺肋花楸果实质量0.05。
5、%的复合 酶, 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为56, 于水浴温度50条件下处理5h, 然后加入离 子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液体浓度为0.050.3mol/L, 再加入表面活 性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度至80 提取4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 得到黑果腺肋花楸果实的提取浸液。 6.根据权利要求1所述的方法, 其特征在于, 所述步骤3) 中高效液相色谱法测定提取浸 液中金丝桃苷的含量, 其流动相为: 乙腈为流动相A, 0.25%醋酸水溶液为流动相B, 梯度洗脱 (0min 15%A; 45min20%A。
6、) 。 7.根据权利要求5所述的方法, 其特征在于, 所述黑果腺肋花楸果实中的金丝桃苷提取 率大于63g/g。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107737169 A 2 一种从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的方法 技术领域 0001 本发明涉及医药技术领域, 具体涉及一种从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的 方法。 背景技术 0002 黑果腺肋花楸, 又名野樱莓, 不老莓, 是集食用、 药用、 园林和生态价值于一身的蔷 薇科落叶灌木。 其果实甜酸略有微涩味, 球形, 果皮紫黑色, 果肉暗红色。 黑果腺肋花楸果实 富含大量营养物质, 如膳食纤维、 糖类、 蛋白质、 多酚类化合物, 多酚。
7、类化合物是已知植物中 含量最高的, 多酚类化合物如酚酸、 原花青素、 花青素、 黄酮醇等含量丰富, 且与黑果腺肋花 楸的生物活性密切相关。 花青素和黄酮类化合物具有特殊的保健作用, 可保护机体免受自 由基损伤, 有防癌、 护肝等多种作用。 发明内容 0003 有鉴于此, 本发明的目的在于提供了一种从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的 方法, 包括以下步骤: 1) 对黑果腺肋花楸果实进行脱脂处理; 2) 在复合酶、 表面活性剂及离子液体的辅助下经乙醇水溶液提取; 3) 黑果腺肋花楸果实的提取浸液置于容量瓶中定容, 采用高效液相色谱法测定提取浸 液中金丝桃苷的含量。 0004 优选地, 本发明所述从。
8、黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的方法中, 所述步骤1) 中黑果腺肋花楸果实的脱脂处理为将黑果腺肋花楸果实自然晾干, 使含水量低于7%重量, 然后以料液比为1:5 (g:mL) 的石油醚 (6090) 回流脱脂, 石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸 果实再以料液比为1:5 (g:mL) 的乙酸乙酯回流脱脂, 低温干燥, 使含水量低于4%重量, 得到 预处理好的黑果腺肋花楸果实; 更优选地, 所述石油醚回流脱脂次数为1次, 脱脂时间为1h; 更优选地, 所述乙酸乙酯回流脱脂次数为1次, 脱脂时间为1h; 更优选地, 所述低温干燥的温 度为低于50。 0005 优选地, 本发明所述从黑果腺肋花楸果实中提取金。
9、丝桃苷的方法中, 所述步骤2) 中复合酶为纤维素酶与果胶酶按质量比3:1混合而成, 所述步骤2) 中表面活性剂为十二烷 基硫酸钠, 所述步骤2) 中离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐; 更优选地, 所述步骤2) 中 复合酶、 表面活性剂及离子液体辅助乙醇水溶液提取方法为: 50%的乙醇水溶液与预处理好 的黑果腺肋花楸果实按料液比为1:10 (g:mL) 进行混合, 加入相当于黑果腺肋花楸果实质量 0.05%的复合酶, 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为56, 于水浴温度50条件下处理5h, 然后加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液体浓度为0.050.3mol/L, 再。
10、 加入表面活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴 温度至80提取4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 得到黑果腺肋花楸果实的提取浸液。 0006 优选地, 本发明所述从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的方法中, 所述步骤3) 说 明 书 1/5 页 3 CN 107737169 A 3 中高效液相色谱法测定提取浸液中金丝桃苷的含量, 其流动相为: 乙腈为流动相A, 0.25%醋 酸水溶液为流动相B, 梯度洗脱 (0min15%A; 45min20%A) 。 0007 本发明提供了上述方法获得的黑果腺肋花楸果实金丝桃苷提取浸液, 其中, 所述 黑果腺肋花。
11、楸果实中的金丝桃苷提取率大于63g/g。 0008 本发明与现有技术相比, 本发明具有以下优点: 本发明创造性地在提取步骤前使 用适当脱脂等预处理方法; 本发明创造性地在提取步骤中使用了复合酶、 表面活性剂及离 子液体相互协同的提取方法, 并获得金丝桃苷含量尽可能高的提取浸液, 金丝桃苷提取率 大于63g/g。 具体实施方式 0009 本发明的实施例中提供了一种从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的方法, 包括 以下步骤: 1) 对黑果腺肋花楸果实进行脱脂处理; 2) 在复合酶、 表面活性剂及离子液体的辅助下经乙醇水溶液提取; 3) 黑果腺肋花楸果实的提取浸液置于容量瓶中定容, 采用高效液相色谱法。
12、测定提取浸 液中金丝桃苷的含量。 0010 优选地, 在本发明的一个实施例中, 所述步骤1) 中黑果腺肋花楸果实的脱脂处理 为将黑果腺肋花楸果实自然晾干, 使含水量低于7%重量, 然后以料液比为1:5 (g:mL) 的石油 醚 (6090) 回流脱脂, 石油醚脱脂后的黑果腺肋花楸果实再以料液比为1:5 (g:mL) 的乙 酸乙酯回流脱脂, 低温干燥, 使含水量低于4%重量, 得到预处理好的黑果腺肋花楸果实。 0011 更优选地, 所述石油醚回流脱脂次数为1次, 脱脂时间为1h。 0012 更优选地, 所述乙酸乙酯回流脱脂次数为1次, 脱脂时间为1h。 更优选地, 所述低温 干燥的温度为低于50。
13、。 0013 优选地, 本发明所述从黑果腺肋花楸果实中提取金丝桃苷的方法中, 所述步骤2) 中复合酶为纤维素酶与果胶酶按质量比3: 1混合而成, 所述步骤2) 中表面活性剂为十二烷 基硫酸钠, 所述步骤2) 中离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐。 0014 更优选地, 所述步骤2) 中复合酶、 表面活性剂及离子液体辅助乙醇水溶液提取方 法为: 50%的乙醇水溶液与预处理好的黑果腺肋花楸果实按料液比为1:10 (g:mL) 进行混合, 加入相当于黑果腺肋花楸果实质量0.05%的复合酶, 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为5 6, 于水浴温度50条件下处理5h, 然后加入离子液体1-丁基-3。
14、-甲基咪唑硝酸盐适量, 使 离子液体浓度为0.050.3mol/L, 再加入表面活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂 质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度至80提取4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 得 到黑果腺肋花楸果实的提取浸液。 0015 优选地, 在本发明的一个实施例中, 所述步骤3) 中高效液相色谱法测定提取浸液 中金丝桃苷的含量, 色谱条件为C18 色谱柱 (250 mm4.6mm, 5 m) ; 流动相为: 乙腈为流动 相A, 0.25%醋酸水溶液为流动相B, 梯度洗脱 (0min 15%A; 45min20%A) ; 体积流量为 1.0mL/min; 柱温 25。
15、; 检测波长 360nm; 进样量 20 L。 在上述色谱条件下, 金丝桃苷色谱 峰与相邻峰的分离度大于1.5, 理论塔板数按金丝桃苷色谱峰计算不低于 3000。 0016 优选地, 在本发明的一个实施例中, 所述步骤3) 中高效液相色谱法测定提取浸液 说 明 书 2/5 页 4 CN 107737169 A 4 中金丝桃苷的含量, 金丝桃苷在0.6813.60g/mL (R=0.9976) 范围内色谱峰的峰面积与质 量浓度呈良好线性关系; 仪器精密度试验中对照品的 RSD为0.93%、 黑果腺肋花楸果实提取 浸液的RSD为0.41%; 稳定性试验结果表明黑果腺肋花楸果实提取浸液在28h内稳定。
16、性良好, 满足测定要求; 重复性试验结果表明黑果腺肋花楸果实提取浸液的RSD为0.41%, 结果表明 重复性良好; 加样回收率试验结果表明平均回收率为98.43%, RSD为2.61%, 回收率良好, 方 法准确性较高, 具有可行性; 方法的最低检测限为0.02944g/mL、 定量限为0.0552g/mL。 0017 优选地, 在本发明的一个实施例中, 所述步骤3) 中高效液相色谱法测定提取浸液 中金丝桃苷的含量, 三批工艺稳定性验证试验结果表明该方法对黑果腺肋花楸果实中的金 丝桃苷的提取率大于63g/g。 0018 下面将结合本发明中的实施例, 对本发明中的技术方案进行清楚、 完整地描述。。
17、 显 然, 所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例, 而不是全部的实施例。 基于本发明中的实 施例, 本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例, 都属 于本发明保护的范围。 0019 实施例1: 黑果腺肋花楸果实中金丝桃苷的提取 1、 黑果腺肋花楸果实的预处理: 将黑果腺肋花楸果实自然晾干, 使含水量低于7%, 然后 以料液比 (g:mL) 1:5的石油醚 (6090) 回流处理1h, 再用乙酸乙酯以料液比 (g:mL) 1:5回 流处理1h, 主要除去黑果腺肋花楸果实中的脂类、 色素等, 将脱脂后的黑果腺肋花楸果实在 干燥箱中低于50进行干燥, 使含水量低于4%, 。
18、得到预处理好的黑果腺肋花楸果实; 2、 提取: 将预处理好的黑果腺肋花楸果实与体积分数为: 50%的乙醇水溶液按料液比 (g:mL) 1:10进行混合, 加入相当于黑果腺肋花楸果实质量0.05%的复合酶 (纤维素酶: 果胶 酶=3:1; 质量比) , 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为56, 于水浴温度50条件下处理 5h, 然后加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液体浓度为0.05mol/L, 加入 表面活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度 至80提取4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 即得黑果腺肋花楸果实的提取浸液; 。
19、3、 含量测定: 吸取提取所得到的黑果腺肋花楸果实提取浸液适量, 经0.45 m 有机滤膜 过滤后, 作为供试品溶液, 然后按色谱条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰的峰面积, 采用 外标法计算提取浸液中金丝桃苷的质量浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 其金丝桃苷的 提取率为64.25g/g。 0020 提取溶剂对提取效果的影响 称取干燥的黑果腺肋花楸果实粉末适量, 放入圆底 烧瓶中, 以料液比为1:10 (g:mL) 加入乙醇体积分数分别为0%、 10%、 30%、 50%、 70%、 90%的乙醇 水溶液, 再加入相当于黑果腺肋花楸果实质量0.05%的复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1。
20、; 质量 比) , 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为56, 于水浴温度50条件下处理5h, 然后加入离 子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液体浓度为0.05mol/L, 加入表面活性剂十 二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度至80提取 4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 然后按色谱条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰的峰面 积, 采用外标法计算提取浸液中金丝桃苷的质量浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 结果提 取溶剂为50%乙醇水溶液时, 金丝桃苷提取率最高为59.63g/g。 0021 酶种类对提取效果的影响 称取干燥的黑果腺肋。
21、花楸果实粉末适量, 放入圆底烧 瓶中, 以料液比为1:10 (g:mL) 加入50%乙醇水溶液, 再分别加入相当于黑果腺肋花楸果实质 说 明 书 3/5 页 5 CN 107737169 A 5 量0.05%的纤维素酶、 果胶酶及二者复合酶 (纤维素酶与果胶酶的质量比分别为1:1、 2:1、 3: 1、 1:2、 1;3) , 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为56, 于水浴温度50条件下处理5h, 然 后加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液体浓度为0.05mol/L, 加入表面 活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度至80 。
22、提取4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 然后按色谱条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰 的峰面积, 采用外标法计算提取浸液中金丝桃苷的质量浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 结果当酶种类为复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1; 质量比) 时, 金丝桃苷提取率最高为60.82 g/g。 0022 酶解时间对提取效果的影响 称取干燥的黑果腺肋花楸果实粉末适量, 放入圆底 烧瓶中, 以料液比为1:10 (g:mL) 加入50%乙醇水溶液, 再加入相当于黑果腺肋花楸果实质量 0.05%的复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1; 质量比) , 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为5 6, 分别于50。
23、条件下处理2、 3、 4、 5、 6h, 然后加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液体浓度为0.05mol/L, 加入表面活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂质量体 积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度至80提取4h, 过滤, 滤液定容至容量瓶中, 然后按色谱 条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰的峰面积, 采用外标法计算提取浸液中金丝桃苷的质 量浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 结果当酶解时间5h, 金丝桃苷提取率较高为61.14g/ g。 0023 离子液体摩尔浓度对提取效果的影响 称取干燥的黑果腺肋花楸果实粉末适量, 放入圆底烧瓶中, 以料液比为1:10 (g。
24、:mL) 加入50%乙醇水溶液, 再加入相当于黑果腺肋花楸 果实质量0.05%的复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1; 质量比) , 用30%的乙酸水溶液调至体系pH 值为56, 于50条件下处理5h, 然后加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离 子液体浓度分别为0.01、 0.03、 0.05、 0.1、 0.2、 0.3mol/L, 加入表面活性剂十二烷基硫酸钠 适量, 使表面活性剂质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度至80提取4h, 过滤, 滤液置 于容量瓶中定容, 然后按色谱条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰的峰面积, 采用外标法计 算提取浸液中金丝桃苷的质量。
25、浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 结果当离子液体摩尔浓 度为0.05mol/L时, 金丝桃苷提取率较高为61.27g/g, 以后随着离子液体摩尔浓度的增加, 金丝桃苷的提取率略有增加, 但幅度较小。 0024 料液比对提取效果的影响 称取干燥的黑果腺肋花楸果实粉末适量, 放入圆底烧 瓶中, 料液比分别为1:4、 1:7、 1:10、 1:13、 1:15 (g:mL) , 加入50%乙醇水溶液, 再加入相当于 黑果腺肋花楸果实质量0.05%的复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1; 质量比) , 用30%的乙酸水溶 液调至体系pH值为56, 于50条件下处理5h, 然后加入离子液体1-丁基-3。
26、-甲基咪唑硝酸 盐适量, 使离子液体浓度为0.05mol/L, 加入表面活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性 剂质量体积浓度为0.01%, 然后升高水浴温度至80提取4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 然后按色谱条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰的峰面积, 采用外标法计算提取浸液中金 丝桃苷的质量浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 结果当料液比为1:10时, 金丝桃苷提取率 较高为60.74g/g, 以后随着料液比的增加, 金丝桃苷的提取率略有增加, 但幅度较小。 0025 水浴提取时间对提取效果的影响 称取干燥的黑果腺肋花楸果实粉末适量, 放入 圆底烧瓶中, 以料液比为1:10 (。
27、g:mL) 加入50%乙醇水溶液, 再加入相当于黑果腺肋花楸果实 质量0.05%的复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3: 1; 质量比) , 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为 说 明 书 4/5 页 6 CN 107737169 A 6 56, 于50条件下处理5h, 然后加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液 体浓度为0.05mol/L, 加入表面活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使表面活性剂质量体积浓度为 0.01%, 然后升高水浴温度至80, 分别提取1、 2、 3、 4、 5、 6h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 然后按色谱条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰的峰面积。
28、, 采用外标法计算提取浸液中金 丝桃苷的质量浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 结果提取时间为4h, 金丝桃苷提取率最高 为61.06g/g。 0026 提取水浴温度对提取效果的影响 称取干燥的黑果腺肋花楸果实粉末适量, 放入 圆底烧瓶中, 以料液比为1:10 (g:mL) 加入50%乙醇水溶液, 再加入相当于黑果腺肋花楸果实 质量0.05%的复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1; 质量比) , 用30%的乙酸水溶液调至体系pH值为 56, 于50条件下处理5h, 然后加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑硝酸盐适量, 使离子液 体浓度为0.05mol/L, 加入表面活性剂十二烷基硫酸钠适量, 使。
29、表面活性剂质量体积浓度为 0.01%, 然后使水浴温度分别为60、 70、 80, 提取4h, 过滤, 滤液置于容量瓶中定容, 然后按 色谱条件进样20 L, 测定金丝桃苷色谱峰的峰面积, 采用外标法计算提取浸液中金丝桃苷 的质量浓度, 从而计算金丝桃苷的提取率, 结果水浴温度为80时, 体系处于微沸状态, 此 时金丝桃苷提取率最高为62.58g/g。 0027 通过多次试验发现提取时将酶种类固定为复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1; 质量 比) , 离子液体摩尔浓度固定为0.05mol/L, 表面活性剂质量体积浓度固定为0.01%, 提取水 浴温度固定为80, 金丝桃苷的提取效果较好。 另。
30、外, 为了进一步优化提取条件, 选择乙醇 体积分数A (45%、 50%、 55%) 、 料液比B (1:10、 1:12、 1:14) 、 酶解时间C (4.5、 5.0、 5.5h) 、 水浴提 取时间D (3.5、 4.0、 4.5h) 进行四因素三水平正交实验。 0028 正交试验结果及工艺验证试验: 正交试验结果表明, 最佳提取条件为A2B1C2D2, 即 提取溶剂为50%乙醇水溶液, 料液比为1:10, 酶种类为复合酶 (纤维素酶: 果胶酶=3:1; 质量 比) , 酶解时间为5h, 离子液体摩尔浓度为0.05mol/L, 表面活性剂质量体积浓度为0.01%, 提 取水浴温度为80, 水浴提取时间为4h。 三次工艺验证试验结果金丝桃苷提取率分别为 63.64g/g、 65.03g/g、 64.27g/g, 表明工艺稳定、 可行。 0029 以上所述仅是本发明的优选实施方式, 应当指出, 对于本技术领域的普通技术人 员来说, 在不脱离本发明原理的前提下, 还可以做出若干改进和润饰, 这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。 说 明 书 5/5 页 7 CN 107737169 A 7 。