技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种黄芪提取物的用途。
背景技术
慢性肾脏病(Chronickidneydisease，CKD)在美国肾脏病基金会(NKF)制定的临床实践指南(K/DOQI)的基础上，国际肾脏病学会提高肾脏病整体预后工作组(KDIGO)明确提出了CKD的定义:(1)肾脏损伤(肾脏结构或功能异常)≥3个月，伴或不伴有肾小球滤过率(GFR)下降，肾脏病理学检查异常或肾脏损伤(血、尿成分或影像学检查异常)；(2)eGFR<60ml·min-1·(1.73m2)-1≥3个月，有或无肾脏损伤证据。
慢性肾脏病是绝大多数的肾脏疾病(诸如肾小球肾炎、隐匿性肾炎、肾盂肾炎、过敏性紫癜肾炎、红斑狼疮肾炎、痛风肾、IgA肾病、肾病综合征、膜性肾病、糖尿病肾病、高血压肾病、多囊肾肾病)的临床统称；除了急性肾炎和急性尿路感染(肾脏急性炎症性疾病)外，都可以归属慢性肾脏病的范围；本病是一个缓慢发展相对良性的疾病(或共同的临床病理过程)；但若未能及时有效诊治，均可导致病情恶化进展或随病程迁延，发展成为慢性肾功能不全、肾衰竭，最终形成尿毒症。
由于慢性肾脏病发病特点有“三高”(发病率高、伴发的心血管病患病率高、病死率高)“三低”(全社会对慢性肾脏病的知晓率低、防治率低、伴发心血管病的知晓率低)，已经成为全球性公共健康问题。
美国从2000年开始启动了肾脏早期评价计划目的在于通过对高危人群的早期筛查来提高CKD患病的知晓率并改善其临床预后。该研究是通过对高血压、糖尿病患者或高血压、糖尿病及原发肾脏病患者的一级亲属应用媒体召集符合条件的人群到指定地点接受筛查，CKD的筛查项目有尿常规、尿微量白蛋白及血肌酐，并应用肾疾病饮食修正公式计算有效的GFR，2003年发表结果显示6071例被调查者中有效的GFR下降、蛋白尿及血尿的检出率分别是15.6％、29.3％、18.1％。
目前，中国卫生系统目前缺乏CKD的流行病学数据，有关医生缺少肾脏病学知识，致使CKD患者在出现明显的临床症状之前，往往已经历了较长的无症状阶段，如果不是体检或及时的筛查，很难做到发现相对早期的CKD患者并及时给予治疗，这无疑给家庭和社会额外增加了巨大的经济负担。我国CKD的流行病学调查概况2004年初我国首个较完备的中老年人群CKD流行病学研究是对北京市石景山地区2353例>40岁常住居民进行问卷凋查、肾脏损伤指标(尿常规、血肌醉，尿沉渣)及相关危险因素(血压、血糖和血脂)的检测，根据国际公认的CKD的诊断标准，分析发现人群CKD患病率为9.4％，知晓率为8.3％。近年来我国各地陆续开展了针对城镇居民和部分农村人群的CKD流行病学研究，部分调查结果显示我国大部分区成年人CKD的患病率在9％～14％，其中白蛋白尿患病率5％～10％，肾功能下降[eGFR<60ml·min-1·(1.73m2)-1]患病率1％～5％，血尿各地报道差异较大，从1.4％～8.94％，CKD知晓率8.2％～12.5％。多项研究提示我国CKD的主要危险因素:年龄增加、高血压、血糖或血脂异常及代谢综合征等。
在美国，虽然CKD患者只占医疗人群的7％，但其医疗费用却占了医疗预算费用总额的24％，而中国CKD患病形势严峻，北京大学肾疾病研究所对北京市石景山地区的流行病学调查示>40岁人群CKD患病率达9.4％。据此推算，中国>40岁人群CKD患者达4400万，如果其中1％发展为终末期肾病而需要血液净化治疗，则每年需要医疗费用达500亿元人民币为2004年中国政府健康预算的25倍，可见CKD已成为影响中国国民健康的主要疾病，有效防治CKD关系到中国社会、经济的发展以及和谐社会的构建。
从慢性肾脏病发展到终末期肾脏病，延缓其发展是一个复杂的治疗过程，早预防、早发现、早诊断、早治疗，延缓肾功能损害的进展，并积极预防并发症的治疗，必要时及时开始行肾脏替代治疗。
病因治疗：我国终末期肾病的首位病因是原发性肾小球疾病及一些继发性肾小球疾，疾病的治疗多以传统的免疫抑制药物如激素、环磷酰胺等治疗为主，并考虑疾病的免疫反应类型及分阶段采取针对性治疗。
延缓肾衰竭进展的治疗：除病因治疗外，积极延缓肾衰进展的措施也是重要的一方面，延缓慢性肾衰竭进展的治疗措施主要有控制血压、阻断RAS系统、降脂治疗、饮食治疗等。(1)积极降高血压：众所周知，高血压是加 速CKD进展的最重要危险因素。阻断RAS可以延缓CKD进展，常用的药物有ACEI或ARB类。(2)积极降脂：慢性肾脏病中，脂质代谢异常也相当常见。他汀类药物尚有改善内皮细胞功能、抗炎、T、B淋巴细胞功能等作用。(3)控制蛋白质摄入：摄入过多蛋白质会加重肾脏负担，导致肾功能损害。尤其当肾功能不全时可加剧残存肾单位的损害，应该以优质低蛋白饮食为主。(4)戒烟、限酒、控制体质量等纠正不良生活方式，纠正贫血、调节钙磷代谢；另外，加强卫生宣传教育和健康普查工作，也是延缓CKD不可缺少的重要内容。
替代治疗：进入终末期后，及时行肾脏替代治疗是唯一有效的方法，主要包括腹膜透析、血液透析、肾脏移植。透析治疗目前透析作为一种常规治疗手段已非常普及和成熟，但是有其局限性，只能清除体内水分和部分毒素，纠正酸碱代谢紊乱，但是肾脏的大分子排泄、重吸收、内分泌功能均不能被替代。
肾脏移植：肾脏移植是目前最理想的替代疗法，手术方式的改进和免疫抑制剂的发展已使肾脏移植的成功率大大提高。
中医文献中无慢性肾脏病的名词，在慢性肾脏病的临床表现属中医水肿、尿血、腰痛、虚劳、癃闭、溺毒、关格的范畴。目前中医医者认为CKD属本虚标实、虚实夹杂之证。本虚以脾、肾气血阴阳的亏虚为主，标实则以湿、热、瘀、浊、毒为甚。治疗上，从扶正、祛邪、攻补兼施等不同角度入手，可谓百家争鸣。
目前中医治疗CKD主要分为以下几类：1、扶正为主，如杨霓芝将CKD3，4期分为本虚证与标实证，本虚证分别应用香砂六君子汤、参芪地黄丸、六味地黄丸合二至丸、济生肾气丸、金匮肾气丸加减，标实证均在本虚证的基础上加减用药。2、祛邪为主，如张琳以解毒六法治疗CKD:①疏风解毒法，治疗风毒致病，常用疏风清热解毒药物。②利湿化毒法，治疗湿(水)毒致病，轻者芳香化湿，用平胃散、藿朴夏苓汤、半夏泻心汤；水凌心肺，以真武汤、己椒苈黄丸、独参汤加减；水停胸胁，以葶苈大枣泻肺汤为主；水停腹中，方选实脾饮加减；水毒泛滥周身，宜疏凿饮子化裁。③清热解毒法，用于热/火毒致病，常用黄连解毒汤、白虎汤、五味消毒饮等。④活血散毒法，治疗瘀毒致病，如桃红四物汤、川牛膝、泽兰、益母草、三棱、莪术、水蛭等。⑤化痰 蠲毒法，适于痰毒致病，尿毒症期痰毒蒙蔽神窍则宜芳香化浊、豁痰醒神，如菖蒲郁金汤、涤痰汤之属。⑥降浊排毒法，利尿排浊常用五苓散、济生肾气丸加减；降逆泄浊用苏叶黄连汤、吴茱萸汤、温脾汤加减；和胃泄浊则以黄连温胆汤加减。3、攻补兼施，如叶传蕙将CKD的治疗总结为5种大法:①消法，包括解表散邪法，用于风水证；清热解毒法，用于外邪客于肺系导致的病情加重；清热祛湿法，用于湿热阻滞证候者。②通法，包括通利水道法，用于水肿病证；化瘀通络法，用于肾络瘀阻的证候，此法为贯穿肾脏病始终的治疗大法；通腑降浊法，用于急、慢性肾衰之溺毒潴溜的证候。③补法，包括健脾益气法、气阴双补法、滋阴益肾法、益肾补精法、温阳补肾法，用于治疗肾脏病阴亏损的证侯。④固法，包括益气固表法、固肾摄精法。⑤和法，用于肾脏病出现虚实夹杂、寒热错杂的证候，运用较广。4、分期施治，如戴希文认为气虚、湿瘀是CKD1～5期共见的证候，治疗以益气活血利湿法为主。对CKD早期的患者，用药体现出对驱除外感风热毒邪的重视；对于CKD后期的患者，用药着重于对内停水湿浊毒的渗利以及气血的调补。
中医药治疗慢性肾脏病主要以复方应用为主，单方应用如雷公藤等有文献报道。而传统中药黄芪在治疗CKD过程中起到重要作用，多个文献报道组方中均含有黄芪药材，谢红萍发表了“黄芪注射液治疗慢性肾脏病的临床观察”，结果显示黄芪注射液有一定的延缓CKD发展的作用，未见黄芪单药材或提取物临床口服治疗CKD的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种黄芪提取物的用途。实验证明该黄芪提取物可以抑制慢性肾炎NF-κB表达，进一步影响IL-6，TNF-α,TGF-β1,MCP-1水平，减少蛋白尿。因此，黄芪提取物可以作为抑制慢性肾脏病NF-κB的活性组分，可制备治疗慢性肾脏病的药物。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用；所述黄芪提取物的制备方法为取黄芪经溶剂提取、浓缩、大孔树脂吸附、洗脱、收集洗脱液，干燥。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用中所述溶剂提取为30％～90％醇回流或超声提取。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用中所述浓缩为常压或减压浓缩至20℃～25℃时的相对密度为0.85～1.25。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用中所述大孔树脂吸附选用的树脂为AB-8、D101或ZTC-1。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用中所述洗脱采用水或10％～90％醇洗脱。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用中所述干燥为常压干燥或减压干燥。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用中所述黄芪提取物包括毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷，所述黄芪提取物中毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷的含量为0.1mg/g-50mg/g。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物在制备NF-κB表达抑制剂中的应用中所述黄芪为蒙古黄芪或膜荚黄芪。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物以毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷计，施药剂量为1～20mg/kg。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物包括毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷及药学上可接受的辅料。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、注射剂、口服液、丸剂、散剂。
本发明还提供了一种黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用；所述黄芪提取物的制备方法为取黄芪经溶剂提取、浓缩、大孔树脂吸附、洗脱、收集洗脱液，干燥。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用中所述溶剂提取为30％～90％醇回流或超声提取。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用中所述浓缩为常压或减压浓缩至20℃～25℃时的相对密度为0.85～1.25。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用中所述大孔树脂吸附选用的树脂为AB-8、D101或ZTC-1。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用中所述洗脱采用水或10％～90％醇洗脱。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用中所述干燥为常压干燥或减压干燥。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用中所述黄芪提取物包括毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷，所述黄芪提取物中毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷的含量为0.1mg/g-50mg/g。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备IL-6、TNF-α、TGF-β1或MCP-1表达抑制剂的应用中所述黄芪为蒙古黄芪或膜荚黄芪。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物以毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷计，施药剂量为1～20mg/kg。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物包括毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷及药学上可接受的辅料。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、注射剂、口服液、丸剂、散剂。
一种黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用；所述黄芪提取物的制备方法为取黄芪经溶剂提取、浓缩、大孔树脂吸附、洗脱、收集洗脱液，干燥。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用中所述溶剂提取为30％～90％醇回流或超声提取。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用中所述浓缩为常压或减压浓缩至20℃～25℃时的相对密度为0.85～1.25。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用中所述大孔树脂吸附选用的树脂为AB-8、D101或ZTC-1。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用中所述洗脱采用水或10％～90％醇洗脱。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用中所述干燥为常压干燥或减压干燥。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用中所述黄芪提取物包括毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷，所述黄芪提取物中毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷的含量为0.1mg/g-50mg/g。
在本发明的一些具体实施方案中，黄芪提取物用于制备预防和/或治疗慢性肾脏病药物中的应用中所述黄芪为蒙古黄芪或膜荚黄芪。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物以毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷计，施药剂量为1～20mg/kg。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物包括毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷及药学上可接受的辅料。
在本发明一些具体实施方案中，所述药物的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、注射剂、口服液、丸剂、散剂。
本发明提供了一种黄芪提取物在制备NF-κB抑制剂中的应用。黄芪提取物为黄芪药材经过提取获得的含有黄酮与皂苷组分的混合物，具有治疗慢性肾脏病的功效。经本发明实验证明黄芪提取物可以抑制慢性肾炎NF-κB表达，进一步影响IL-6，TNF-α,TGF-β1,MCP-1水平，减少蛋白尿。因此，黄芪提取物可以作为抑制慢性肾脏病NF-κB的活性组分，可制备治疗慢性肾脏病的药物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示黄芪提取物与黄芪注射液指纹图谱比较；其中，图1(A)示黄芪提取物；图1(B)示黄芪注射液；
图2示黄芪提取物对慢性肾脏病大鼠NF-κB表达的影响；其中，图2(A)示电泳图，1示正常组；2示模型组；3示阳性药物组；4示黄芪提取物高剂量组；5示黄芪提取物中剂量组；6示黄芪提取物低剂量组；图2(B)示柱形图；
图3示黄芪提取物对慢性肾脏病模型大鼠IL-6的影响；
图4示黄芪提取物对慢性肾脏病模型大鼠TNF-α的影响；
图5示黄芪提取物对慢性肾脏病模型大鼠TGF-β1的影响；
图6示黄芪提取物对慢性肾脏病模型大鼠MCP-1的影响；
图7示黄芪提取物对慢性肾脏病模型大鼠病理组织图；其中，A示空白对照组、B示模型组、C示盐酸贝那普利组、D示黄芪提取物低剂量组、E示黄芪提取物低剂量组、F示黄芪提取物低剂量组。
具体实施方式
本发明公开了一种黄芪提取物的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的一种黄芪提取物的用途中所用原料及试剂均可由市场购得。本专利获得国家自然科学基金面上项目(81273723,81473633)、江苏高校优势学科建设工程资助项目支持。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1黄芪提取物的制备
(1)提取
黄芪饮片50kg，用50％的含水乙醇250L按照常规方法回流得提取液，提取液减压浓缩后过滤，取滤液备用；
(2)纯化
将上述滤液进行D101大孔吸附树脂吸附，用水洗脱除去杂质后，用60％的含水乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液；
(3)浓缩干燥
洗脱液按常规减压浓缩，干燥，即得黄芪提取物8.5kg；
(4)含量测定
黄芪甲苷 色谱条件C18(4.6*250mm 5μm)；乙腈水(32:68)为流动相，流速1ml/min，蒸发光散射检测器检测，流速1.60L/min；蒸发管温度90℃；雾化器温度50℃；柱温35℃。
取本实施例中黄芪提取物约1g，精密称定，加甲醇40m1使溶解，溶液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5m1使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)，以水50m1洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30rnl洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
以黄芪甲苷为对照，精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，本品按干燥品计算，含黄芪甲苷(C22H22010)1.35％。
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 照高效液相色谱法(附录ⅥB)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动性A，以O.1％甲酸溶液为流动相B(30:70)洗脱；检测波长为260nm。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定.置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至jml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注人液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)不得少于0.85％。
实施例2黄芪提取物的制备
(1)提取
黄芪饮片50kg，300L70％乙醇按照常规回流法得提取液，提取液减压回收乙醇，浓缩后过滤，取滤液备用；
(2)纯化
将上述滤液进行AB8大孔吸附树脂吸附，用水洗脱除去杂质后，用50％的含水乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液；
(3)浓缩干燥
洗脱液按常规减压浓缩，干燥，即得黄芪提取物7.2kg；
(4)含量测定
参照实施例1项下含量测定方法，测得黄芪提取物中黄芪甲苷含量0.92％，毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.76％。
实施例3黄芪提取物的制备
(1)提取
黄芪饮片50kg，用30％的含水乙醇250L按照常规方法回流得提取液，提取液减压浓缩至25℃时的相对密度为0.85，过滤，取滤液备用；
(2)纯化
将上述滤液进行D101大孔吸附树脂吸附，用水洗脱除去杂质后，用10％的含水乙醇洗脱，收集10％乙醇洗脱液；
(3)浓缩干燥
洗脱液按常规减压浓缩，干燥，即得黄芪提取物8.5kg；
(4)含量测定
黄芪甲苷 色谱条件C18(4.6*250mm 5μm)；乙腈水(32:68)为流动相，流速1ml/min，蒸发光散射检测器检测，流速1.60L/min；蒸发管温度90℃；雾化器温度50℃；柱温35℃。
取本实施例中黄芪提取物约1g，精密称定，加甲醇40m1使溶解，溶液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇 提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5m1使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)，以水50m1洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30rnl洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
以黄芪甲苷为对照，精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，本品按干燥品计算，含黄芪甲苷(C22H22010)1.35％。
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 照高效液相色谱法(附录ⅥB)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动性A，以0.1％甲酸溶液为流动相B(30:70)洗脱；检测波长为260nm。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定.置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至jml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注人液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)不得少于0.85％。
黄芪提取物中毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷的含量为0.1mg/g。
实施例4黄芪提取物的制备
(1)提取
黄芪饮片50kg，用90％的含水乙醇250L按照常规方法回流得提取液，提取液减压浓缩至20℃时的相对密度为1.25过滤，取滤液备用；
(2)纯化
将上述滤液进行ZTC-1大孔吸附树脂吸附，用水洗脱除去杂质后，用90％的含水乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液；
(3)浓缩干燥
洗脱液按常规减压浓缩，干燥，即得黄芪提取物8.5kg；
(4)含量测定
黄芪甲苷 色谱条件C18(4.6*250mm 5μm)；乙腈水(32:68)为流动相，流速1ml/min，蒸发光散射检测器检测，流速1.60L/min；蒸发管温度90℃；雾化器温度50℃；柱温35℃。
取本实施例中黄芪提取物约1g，精密称定，加甲醇40m1使溶解，溶液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5m1使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)，以水50m1洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30rnl洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
以黄芪甲苷为对照，精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，本品按干燥品计算，含黄芪甲苷(C22H22010)1.35％。
毛蕊异黄酮葡萄糖苷 照高效液相色谱法(附录ⅥB)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动性A，以O.1％甲酸溶液为流动相B(30:70)洗脱；检测波长为260nm。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定.置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至jml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注人液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含毛蕊异黄酮葡萄糖苷(C22H22O10)不得少于0.85％。
黄芪提取物中毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷和/或黄芪甲苷的含量为50mg/g。
实施例5黄芪提取物与黄芪注射液指纹图谱比较
1、试验材料
1.1仪器
Waters SNAPT G2UPLC-Q-Tof-MS液相色谱联用仪，采用电喷雾电离(ESI)；Masslynx 4.1工作站(美国Waters公司)；ACQUITYUPLC BEH C18柱(2.1mm×100mm，1.7μm)；梅特勒-托利多AL204电子分析天平(瑞士)；Milli-Q超纯水装置；KQ 3200B型超声发生器(昆山市超声仪器有限公司)；DFT－200粉碎机(浙江温岭市林大机械有限公司)。
1.2试药
黄芪注射液购于正大青春宝药业有限公司，批号：20121220，水为超纯水；其他试剂为分析纯。
2.1方法与结果
2.1供试品溶液的制备
取黄芪注射液，0.22μm微孔滤膜后作为供试品溶液。
2.2色谱条件
流动相A为乙腈溶液；流动相B为0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱：0～2.0min，2％A→15％A，2.0～8.0min，15％A→30％A，8.0～13.0min 30％A→50％A，13.0～19.0min，50％A→100％A，19.0～19.5min，100％A→2％A，19.5～20.0min，2％A，流速：0.3mL·min-1；柱温：30℃；进样体积:2μL。
2.3质谱条件
使用ESI离子源，在正离子模式模式下采集数据。数据采集范围m/z100～1500。离子源参数ESI：毛细管电压：2500V，样品锥电压40V，脱溶剂室温度450℃，离子源温度120℃，锥孔气体流量50L·h-1，脱溶剂气(N2)体积流量800L·h-1。
3结果
结果见图1，从图中可以看出本实施例所得到的提取物指纹图谱明显区别于黄芪注射液以及类似的黄芪水提取物。
对图1进行分析，结果见表1，由表1可以看出，黄芪提取物中化学成分与常见黄芪水提物化学成分具有显著不同，黄芪提取物中鉴别出16个化学成分，黄芪水提物中鉴别出7个化学成分。
表1黄芪提取物与黄芪水提物成分对比表
实施例6黄芪提取物在降低慢性肾脏病炎症中的作用
阿霉素模型是研究人类早期慢性肾脏病的经典模型(参见文献：魏明刚,孙伟,陈继红，等雷至胶囊对阿霉素肾病模型基质金属蛋白酶及其抑制物的作用，时珍国医国药,2011,22(2):399-401.)病理主要表现为肾小球微小病变为主,随着病情的进展表现为肾小球局灶阶段性硬化为主,最终导致肾脏纤维化和肾功能衰竭。病变发生与足细胞损伤、大量蛋白尿和肾脏实质的纤维化息息相关。因此选择阿霉素慢性肾炎模型研究黄芪提取物对肾脏病的防治作用。
1、试验材料
1.1实验仪器
IL-6、TNF-α、TGF-β1、MCP-1检测试剂盒(森贝伽，南京)，SpectraMax190酶标仪(Molecular devices，美国)NF-κB抗体(碧云天)。
1.2供试样品
取实施例1制备黄芪提取物，将提取物用0.5％CMCNa溶液配制成相应浓度。
2试验动物
成年雄性SD大鼠，体质量(220±20)g(上海斯莱克实验动物中心)。
3试验方法
成年雄性SD大鼠32只，体质量(220±20)g，购入后适应饲养1周，普通饮食，自由饮水，1周后开始实验。随机分为空白对照组、模型组、盐酸贝那普利组、黄芪提取物组。各组一次性尾静脉注射0.2％阿霉素溶液，每只按照6mg/kg剂量，进行造模，对照组注射等量生理盐水。第2周确定造模成功后，灌胃黄芪提取物，按照5g/kg、2.5g/kg、1.25g/kg计算药物浓度和使用量。8周后摘取病变肾脏进行组织提取，Western blot测定其中NF-κB表达水平。取血液进行IL-6、TNF-α、TGF-β1、MCP-1含量测定。
4试验结果
4.1 NF-κB表达水平的影响结果见图2。其中，图2(A)示电泳图；图2(B)示柱形图。
研究结果表明，阿霉素造模后大鼠肾组织中NF-κB表达水平提高至正常组189.66％，接受黄芪提取物高、中、低剂量治疗后，NF-κB表达水平下降为正常组的98.56％，147.00％和178.60％，其中中剂量组具有显著性差异(P＜0.05)，高剂量组具有极显著性差异(P＜0.01)。
4.2 IL-6、TNF-α、TGF-β1、MCP-1含量测定见表2，具体见图3、图4、图5、图6所示。
表2黄芪提取物对炎症因子的影响
研究结果表明，阿霉素造模后大鼠肾组织中炎症因子IL-6表达水平由正常组72(ng·L-1)提升至118(ng·L-1)，接受黄芪提取物高、中、低剂量治疗后，IL-6表达水平下降至85(ng·L-1)、98(ng·L-1)、106(ng·L-1)，其中中剂量组 具有显著性差异(P＜0.05)，高剂量组具有极显著性差异(P＜0.01)。炎症因子TGF-β1表达水平由正常组1107(ng·L-1)提升至1590(ng·L-1)，接受黄芪提取物高、中、低剂量治疗后，TGF-β1表达水平下降至1261(ng·L-1)、1384(ng·L-1)、1493(ng·L-1)，其中中剂量组具有显著性差异(P＜0.05)，高剂量组具有极显著性差异(P＜0.01)。炎症因子TNF-α表达水平由正常组110(ng·L-1)提升至169(ng·L-1)，接受黄芪提取物高、中、低剂量治疗后，IL-6表达水平下降至119(ng·L-1)、130(ng·L-1)、146(ng·L-1)，其中中剂量组具有显著性差异(P＜0.05)，高剂量组具有极显著性差异(P＜0.01)。炎症因子MCP-1表达水平由正常组1327(ng·L-1)提升至1998(ng·L-1)，接受黄芪提取物高、中、低剂量治疗后，MCP-1表达水平下降至1465(ng·L-1)、1682(ng·L-1)、1795(ng·L-1)，其中中剂量组具有显著性差异(P＜0.05)，高剂量组具有极显著性差异(P＜0.01)。
取实施例2至实施例4制备的黄芪提取物进行上述实验，结果与实施例1制备的黄芪提取物的实验结果一致。
实施例7黄芪提取物在降低慢性肾脏蛋白尿中的作用
1、试验材料
1.1实验仪器
奥林巴斯AU-2700全自动生化分析仪
1.2供试样品
按实施例1制备黄芪提取物，将提取物用0.5％CMCNa溶液配制成相应浓度。
2试验动物
成年雄性SD大鼠，体质量(220±20)g(上海斯莱克实验动物中心)。
3试验方法成年雄性SD大鼠32只，体质量(220±20)g，购入后适应饲养1周，普通饮食，自由饮水，1周后开始实验。随机分为空白对照组、模型组、盐酸贝那普利组、黄芪提取物组。各组一次性尾静脉注射0.2％阿霉素溶液，每只按照6mg/kg剂量，进行造模，对照组注射等量生理盐水。第2周确定造模成功后，灌胃黄芪提取物，按照5g/kg、2.5g/kg、1.25g/kg计算药物浓度和使用量。分别在第7天、28天、42天和56天应用金属代谢笼留取大鼠 24h尿液，8周后大鼠眼眶静脉取血后留取血清应用奥林巴斯AU-2700全自动生化分析仪检测血清白蛋白、肌酐。
4试验结果
表3大鼠尿蛋白含量的变化(mg/24h)
与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01
试验结果表明，阿霉素造模8周后，大鼠尿蛋白含量由正常组8.14增加至45.93mg/24h，黄芪中剂量组降低尿蛋白含量至42.95mg/24h，与模型组对比，具有显著差异(P＜0.05)，黄芪高剂量组降低尿蛋白含量至37.91mg/24h，与模型组对比，具有极显著差异(P＜0.01)。
表4大鼠血肌酐和血尿素氮变化
与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01
试验结果表明，阿霉素造模8周后，大鼠血肌酐含量由正常组34.42增加至52.52，黄芪中剂量组降低血肌酐含量至40.60(μmol/L)，与模型组对比，具有极显著差异(P＜0.01)，黄芪高剂量组降低尿蛋白含量至39.91(μmol/L)， 与模型组对比，具有极显著差异(P＜0.01)。大鼠尿素氮含量由正常组4.81增加至8.79，黄芪中剂量组降低血肌酐含量至8.57(μmol/L)，与模型组对比，具有极显著差异(P＜0.01)，黄芪高剂量组降低尿蛋白含量至6.15(μmol/L)，与模型组对比，具有极显著差异(P＜0.01)。
取实施例2至实施例4制备的黄芪提取物进行上述实验，结果与实施例1制备的黄芪提取物的实验结果一致。
实施例8黄芪提取物对慢性肾脏病模型大鼠的作用
1、试验材料
1.1实验仪器
组织切片机、组织包埋机、光学显微镜
1.2供试样品
按实施例1制备黄芪提取物，将提取物用0.5％CMCNa溶液配制成相应浓度。
2试验动物
成年雄性SD大鼠，体质量(220±20)g(上海斯莱克实验动物中心)。
3试验方法成年雄性SD大鼠32只，体质量(220±20)g，购入后适应饲养1周，普通饮食，自由饮水，1周后开始实验。随机分为空白对照组、模型组、盐酸贝那普利组、黄芪提取物组。各组一次性尾静脉注射0.2％阿霉素溶液，每只按照6mg/kg剂量，进行造模，对照组注射等量生理盐水。第2周确定造模成功后，灌胃黄芪提取物，按照5g/kg、2.5g/kg、1.25g/kg计算药物浓度和使用量。56天取血后处死大鼠，取出左侧肾脏，选取肾脏纵切的外侧1/2的肾组织于多聚甲醛溶液固定48h，石蜡包埋后，切成4μm的切片，HE染色，在光镜下观察肾组织的病理学变化。
4试验结果如图7所示：
对照组大鼠肾小球的结构未见破坏，未见系膜细胞及基质增生。模型组大鼠肾脏肾小球的基本结构遭到破坏，肾小球毛细血管内皮细胞和系膜细胞增生明显，系膜基质增厚增多，肾间质炎细胞浸润明显。各给组肾脏组织变化介于模型组和对照组之间，黄芪提取物高剂量组肾小球的结构基本恢复正常，系膜细胞及基质增生明显减轻，肾间质的炎细胞浸润明显减少。
取实施例2至实施例4制备的黄芪提取物进行上述实验，结果与实施例1制备的黄芪提取物的实验结果一致。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。