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1、(10)申请公布号 CN 103272006 A (43)申请公布日 2013.09.04 CN 103272006 A *CN103272006A* (21)申请号 201310217246.X (22)申请日 2013.05.31 A61K 36/71(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (71)申请人 上海师范大学 地址 200234 上海市徐汇区桂林路 100 号 (72)发明人 万平 王韵涵 郭正红 夏志华 (74)专利代理机构 上海伯瑞杰知识产权代理有 限公司 31227 代理人 张美娟 (54) 发明名称 白头翁提取液的制备方法及其应用 (57) 摘要 本发。
2、明公开了一种白头翁提取液的制备方 法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： 取白头翁生药根 粉碎成粗粉， 按粗粉与水的质量比 1:5 加水， 用索 氏提取器提取 ； 提取后的汤剂再用旋转蒸发仪蒸 发， 将汤剂用棕色瓶装罐后存于冰箱备用。本发 明的白头翁提取液制备方法工艺简单， 步骤少， 适 宜工业化生产。本发明通过光照甩尾法， 发现白 头翁提取液可以对小白鼠产生的镇痛作用十分明 显， 白头翁提取液具有镇痛的药理作用， 作用的时 间也十分迅速。本发明的方法与现有技术相比其 制备方法工艺简单， 步骤少， 适宜工业化生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和。
3、国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 103272006 A CN 103272006 A *CN103272006A* 1/1 页 2 1. 一种白头翁提取液的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 取白头翁生药根粉碎成粗粉， 按粗粉与水的质量比 1:4-6 加水， 用索氏提取器提 取 ； （2） 提取后的汤剂再用旋转蒸发仪蒸发， 将汤剂用棕色瓶装罐后存于冰箱备用。 2. 权利要求 1 所述的白头翁提取液的制备方法， 其特征在于， 所述粗粉的粒径在 800m。 3. 权利要求 1 所述的白头翁提取液的制备方法， 其特征在于，。
4、 粗粉与水的质量比 1:5。 4. 权利要求 1 所述的白头翁提取液的制备方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中提取后的汤剂 再用旋转蒸发仪蒸发至原液的 1/3-1/2。 5. 权利要求 1-4 任意一项所述方法制备的白头翁提取液。 6. 一种镇痛药物， 其特征在于， 其活性成分为权利要求 5 所述的白头翁提取液。 7. 权利要求 6 所述的镇痛药物， 其特征在于， 其剂型为口服液。 权 利 要 求 书 CN 103272006 A 2 1/5 页 3 白头翁提取液的制备方法及其应用 技术领域 0001 本发明涉及制药技术领域， 具体涉及一种白头翁提取液的制备方法及其应用。 背景技术 0002。
5、 白头翁为毛莨科多年生白头翁属植物白头翁 (chinese pulsatilla)， 多年生草 本， 别名有奈何草、 粉乳草、 白头草、 老姑草、 菊菊苗、 老翁花、 老冠花、 猫爪子花等等， 分布在 中国的吉林、 辽宁、 河北、 山东、 河南、 山西、 陕西、 黑龙江等省的山岗、 荒坡及田野间， 始载于 神农本草经 ， 列为下品， 是常用中药， 具有清热解毒、 凉血止痢、 燥湿杀虫的功效。白头翁 的特征在 开宝本草 中有记载 ：“今验此草丛生， 状如白薇而柔细稍长， 叶生茎头， 如杏叶， 上有细白毛， 近根者有白茸。 ” 传统主要用于治疗细菌性痢疾、 阿米巴痢疾等。 现代研究认为 白头翁除了。
6、抗菌和抗病原作用外， 还具有提高机体免疫力、 抗癌、 抗炎、 抗毒、 止泻、 镇静、 镇 痛、 杀灭滴虫和球虫、 抑制肠运动、 抗内毒素血症等作用。 0003 白头翁的化学成分主要为皂苷和内酯等成分。其中包括白头翁皂苷、 皂苷、 白桦 酯酸、 白桦脂酸、 阿拉伯吡喃糖苷、 氧代白桦脂酸、 胡萝卜苷、 原白头翁素、 白头翁灵、 白头 翁英等。白头翁药材的多成分决定了其治疗作用的多靶点与多层次。白头翁根含白头翁 皂甙 （pulchinenoside） A、 B、 C、 D， 3-O-L- 吡喃鼠李糖 -（1 2） -L- 吡喃阿拉伯 糖 -3， 23- 二羟基 -20（29） - 羽扇豆烯 -28。
7、- 酸 （3-O-L-rhamnopyranosyl-（1 2） -L-arabinopyranosyl-3， 23-dihydroxylup-20（29） -en-28-oicacid ， 白头翁皂甙 （pulchinenoside） A3、 B4， 皂甙 （saponin） 1、 2， 白桦脂酸 -3-O-L 阿拉伯吡喃糖甙 （bet ulinicacid3-O-L-arabinopyranoside） ， 白桦脂酸 （betulinic acid） ， 3- 氧代白桦脂 酸 （3-oxobetulinic acid） ， 胡萝卜甙 （daucosterol） ， 白头翁素 （anemon。
8、in） ， 原白头翁素 （protoanemonin） 。 0004 白头翁提取液出自张仲景的 伤寒论 ， 组方严谨， 仅白头翁、 黄连、 黄柏、 秦皮四味 药， 功擅清阳明之湿热， 泄厥阴之郁火， 解血分之热毒， 治湿热痢疾。 后世常变通应用于多种 病证。 如孙思邈用以治疗赤带下血症 ； 吴鞠通加味用以治疗湿温病内虚所致湿热下陷、 热利 下重等症 ；临证指南医案 载 ： 温邪经旬不解， 发热自利， 神识有时不清， 此邪伏厥阴， 恐致 变痉， 治宜白头翁提取液加生芍药 ；类聚方广义 谓 ： 白头翁提取液又治眼目郁热， 赤肿阵 痛， 风泪不止者， 又为洗蒸剂， 亦效 ； 张锡纯用变通白头翁提取液。
9、治下腹疼痛或久痢肠中腐 烂。 现代多用于痢疾、 溃疡性结肠炎、 慢性结肠炎、 鼠伤寒肠炎等消化系统疾病， 同时白头翁 提取液加减方在治疗泌尿系统疾病、 心血管系统疾病、 造血系统疾病、 妇科疾病、 男科疾病、 眼科疾病等方面也有较好的疗效。 发明内容 0005 本发明的目的在于针对白头翁在镇痛方面的疗效进行研究， 提供一种白头翁提取 液及其应用。 0006 本发明的技术方案如下 ： 说 明 书 CN 103272006 A 3 2/5 页 4 0007 一种白头翁提取液的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： 0008 （1） 取白头翁生药根粉碎成粗粉， 按粗粉与水的质量比 1:4-6 加。
10、水， 用索氏提取器 提取 ； 0009 （2） 提取后的汤剂再用旋转蒸发仪蒸发， 将汤剂用棕色瓶装罐后存于冰箱备用。 0010 优选地， 步骤 （1） 所述粗粉的粒径在 800m。 0011 优选地， 步骤 （1） 粗粉与水的质量比 1:5。 0012 优选地， 步骤 （2） 中提取后的汤剂再用旋转蒸发仪蒸发至原液的 1/3-1/2。 0013 上述方法制备的白头翁提取液具有镇痛作用， 可以以其为活性成分制备镇痛药 物， 制成口服液。 0014 本发明将在实施例中采用光照甩尾法证明其镇痛效果。 0015 本发明的白头翁提取液制备方法工艺简单， 步骤少， 适宜工业化生产。 本发明通过 光照甩尾法。
11、， 发现白头翁提取液可以对小白鼠产生的镇痛作用十分明显， 白头翁提取液具 有镇痛的药理作用， 作用的时间也十分迅速。 具体实施方式 0016 实施例 1 ： 0017 取白头翁生药根 100g， 粉碎成粗粉， 加 500mL 水， 用索氏提取器提取。提取后的汤 剂再用旋转蒸发仪蒸发， 分别制得浓度为 28.8g/kg 的高剂量浓度组和浓度为 10.8g/kg 的 低剂量浓度组。将汤剂用棕色瓶装罐后存于冰箱备用。 0018 实施例 2 0019 使用实施例 1 所得提取液用于实验， 在 16 只准备好的小白鼠中， 取其中 6 只作 为高剂量组并标记， 再取 6 只作为低剂量组并作不同标记， 其余。
12、 4 只为对照组。每天上午 8:00-11:00 内对小鼠进行灌胃， 持续 5 天。对照组小鼠用相应剂量的蒸馏水灌胃。 0020 光照甩尾法 ： 0021 在连续灌胃 5 天后， 第 6 天对小鼠进行光照甩尾测痛试验。灯泡功率保持在 30W， 以动物出现甩尾行为作为痛反应指标， 记录自光照开始到出现甩尾的潜伏期 （s） ， 连续测 3 次， 取平均值， 称为甩尾阈。潜伏期延长， 即甩尾阈升高， 表示有镇痛作用。 0022 高剂量组、 低剂量组和空白对照组小鼠三次测试的潜伏期和甩尾阈分别如表 1、 2、 3 所示， 高剂量组、 低剂量组和空白对照组的平均甩尾阈如表 4 所示。 0023 表 1 。
13、高剂量组 说 明 书 CN 103272006 A 4 3/5 页 5 0024 0025 表 2 低剂量组 0026 0027 表 3 空白对照组 0028 0029 表 4 平均甩尾阈 说 明 书 CN 103272006 A 5 4/5 页 6 0030 0031 可以看出， 低剂量组小白鼠的平均甩尾阈明显高于空白对照组小鼠的平均甩尾 阈。但是， 高剂量组小白鼠的平均甩尾阈只是略高于空白对照组小鼠的平均甩尾阈。由此 可推测， 高剂量的白头翁提取液的浓度过高， 导致白头翁提取液对小白鼠镇痛的效果反而 不明显。 相比较之下， 低剂量的浓度更接近理想中的最佳浓度， 相对而言， 镇痛效果更明显。。
14、 0032 相对于其他有镇痛作用的中药材， 白头翁的镇痛效果表现的不同之处在于高剂量 组小鼠的痛阈反而低于低剂量组小鼠的痛阈。而低剂量组的表现为起效慢， 但在一段时间 后也能达到比较显著的镇痛效果。在同样的剂量条件下， 高剂量组的白头翁的小鼠镇痛方 面反倒低于低剂量组， 这一结果可能与白头翁提取液的复杂的化学成分有关， 同时， 也可能 与白头翁提取液的药理作用有关。 0033 白头翁提取液的化学成分包括生物碱类、 香豆素类、 皂甙类、 柠檬苦素类、 甾醇类 和木脂素类等。 其中生物碱类、 香豆素类、 皂甙类和柠檬苦素类化合物为白头翁提取液中主 要的化学成分， 亦可能为汤剂发挥药效的主要物质基础。
15、。 0034 其中， 生物碱类的盐酸小檗碱具有广谱的抗菌作用， 可用于治疗菌痢、 肠炎、 急性 扁桃体炎和急性支气管炎等多种疾患。 对原生动物、 真菌和利什曼原虫均有抑制作用， 并有 研究发现用小檗碱可治疗霍乱引起的急性腹泻等研究发现， 小檗碱对霍乱弧菌肠毒素引起 的动物疾病具有防治作用。另有研究表明。小檗碱对大肠杆菌耐热肠毒素和不耐热肠毒素 引起的幼兔腹泻具有显著疗效。 在这种化学成分的作用下， 小鼠体内的诸多不适被消除， 对 小鼠具有镇静， 增加舒适感的作用， 同时， 也从侧面增加了对小鼠镇痛的影响。 0035 白头翁提取液香豆素类物质主要包括七叶亭、 七叶甙等。 七叶亭具有抗氧化活性， 。
16、可清除过氧化自由基和羟基自由基， 抑制兔肝脏脂质过氧化 ； 可抑制胶原和蛋白糖的降解， 治疗风湿性关节炎和骨关节炎。七叶甙可以降低血管通透性和促进利尿， 具有抗炎、 抗渗 出、 抗水肿的作用， 还可增强静脉张力、 有抗氧自由基作用及神经保护作用等， 但其抗氧自 由基作用弱于七叶亭。这种物质的存在直接影响了小鼠的镇痛作用， 其中抗炎、 抗渗出、 抗 水肿的作用的影响尤为突出。 0036 白头翁提取液所含皂甙有 5 种以上。其中含量最多的是白头翁皂甙 A3( 单糖链双 糖甙 ) 和皂甙 B4( 双糖链五糖甙 )。皂甙类化合物能增强巨噬细胞的吞噬率。增强机体免 疫功能， 有抗氧化、 抗炎、 抗滴虫、。
17、 抗肿瘤等药理活性。机体免疫力的功能提升， 以及抗炎的 功效， 都增加了小鼠的镇痛效果。 0037 白头翁提取液中的柠檬苦素类主要为黄柏内酯。此类化合物来源于黄连和黄柏， 黄柏内酯能够延缓移植排斥反应的发生， 还能诱导特异性免疫耐受。 0038 另外， 白头翁提取液还有一些其他成分， 但是这些化学成分相关研究报道较少。 0039 除了对白头翁提取液的化学成分的分析之外， 还需要对白头翁提取液的药理作用 进行考虑。到目前为止， 对白头翁提取液的药理作用的研究表明， 白头翁提取液具有 ： 抗菌 说 明 书 CN 103272006 A 6 5/5 页 7 作用、 消炎和修复溃疡作用、 免疫调节作用。
18、、 抑制肠管运动、 抗腹泻作用、 增强体内免疫活性 作用、 对消化系统疾病的治疗作用、 对肝脏的保护作用、 杀精子作用、 对泌尿系统疾病的治 疗作用、 抑制巨噬细胞分泌 IL-6 作用等等。 0040 综上所述， 白头翁提取液所含药物能促进非特异性免疫功能、 抗炎、 抗病毒、 止泻、 镇静、 镇痛和抑制肠运动， 既能消灭引起湿热下痢之病原微生物。 亦能抑制或缓解肠道感染 时局部炎症病变及不适， 还能促进感染免疫功能， 从多方面影响感染过程， 从而取得良好疗 效。 0041 但是， 高剂量组小鼠的镇痛效果差于低剂量组说明， 高剂量的药物使得小鼠的药 效下降。 可以排除药物过量导致药物中毒的可能，。
19、 因为小鼠并未出现恶心， 呕吐， 昏迷， 精神 萎靡等状况。初步推测是由于药物过量导致了机体的强烈反应， 以大量排尿的方式将有效 成分排除体外， 从而导致了镇痛效果不明显的结果。 0042 白头翁提取液在使用时， 并非剂量越大约好， 相对于一个固定的机体存在一个最 适剂量。在使用时， 为了发挥最佳镇痛效果应该尽量接近最佳剂量。 0043 结论 ： 0044 通过光照甩尾法， 发现白头翁提取液可以对小白鼠产生的镇痛作用十分明显， 白 头翁提取液具有镇痛的药理作用。需要注意的是， 在使用白头翁提取液是应当由低剂量向 高剂量尝试。因为， 白头翁提取液镇痛作用明显， 且根据其他研究显示， 作用的时间也十分 迅速。因此， 低剂量的白头翁提取液已经能够达到镇痛的效果。相反， 过高剂量的药物反而 会导致镇痛效果下降。 初步认为， 是因为过高剂量的药物引起小鼠机体的强烈反应， 并以大 量排尿的方式将有效物质排出体外， 从而导致药效下降。 而低剂量组的小鼠并无强烈反应， 药物持续在体内作用， 所以药效相对明显。 0045 以上所述为本发明的较佳实施例而已， 但本发明不应该局限于该实施例所公开的 内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改， 都落入本发明保护的范 围。 说 明 书 CN 103272006 A 7 。