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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711200432.7 (22)申请日 2017.11.27 (71)申请人 广东省微生物研究所 （广东省微生 物分析检测中心） 地址 510075 广东省广州市越秀区先烈中 路100号大院 申请人 广东粤微食用菌技术有限公司 (72)发明人 陈地灵 杨俭 帅欧 唐晓萃 郑超群 谢意珍 吴清平 杨柏华 (74)专利代理机构 广州弘邦专利商标事务所有 限公司 44236 代理人 张钇斌 (51)Int.Cl. A61K 38/02(2006.01) C07K 1/14(200。
2、6.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 35/745(2015.01) A61K 35/747(2015.01) A61K 35/744(2015.01) A61K 36/07(2006.01) (54)发明名称 一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制 备方法和用途 (57)摘要 本发明涉及一种微生态制剂及其制备方法， 尤其涉及一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及 其制备方法， 将猴头菌蛋白提取物和复合益生菌 按照重量比8:1-15:1混合均匀得到， 所述复合益。
3、 生菌为包含重量比为1-2： 1-2： 1-2： 1-2： 1-2： 1- 2： 1-2双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏 乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的混合 物， 所述的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的活 性为5109-11010的活菌数/g； 所述猴头菌蛋 白提取物的制备方法包括： 本发明的上述微生态 制剂能够显著改善胃肠功能， 与单纯的使用复合 益生菌例如本发明所述的复合益生菌相比， 具有 显著的协同辅助作用。 权利要求书2页 说明书3页 附图2页 CN 107898999 A 2018.04.13 CN 1。
4、07898999 A 1.一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 将猴头菌蛋白提取物 和复合益生菌按照重量比8:1-15:1混合均匀得到， 所述复合益生菌为包含重量比为1-2： 1- 2： 1-2： 1-2： 1-2： 1-2： 1-2双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球 菌、 中介链球菌的混合物， 所述的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球 菌、 乳球菌、 中介链球菌的活性分别为5109-11010的活菌数/g； 所述猴头菌蛋白提取物 的制备方法包括： (1)将猴头菌子实体搅碎后加入10-30质量的水， 混匀后置于-。
5、80冷冻4-8h， 待猴 头菌子实体完全冰冻后， 于37水浴锅内完全解冻， 反复冻融2-4次； (2)向冻融好的猴头菌子实体中加入NaOH溶液， 调整pH到9-10， 保持料液比为40-60ml/ g， 封口， 在35-40条件下磁力搅拌提取4-8h， 反复提取两次， 过滤， 合并滤液； (3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5， 使沉淀完全， 离心， 收集沉淀， 即为猴头菌蛋白提取物。 2.根据权利要求1所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 所述猴头菌蛋白提取物的制备方法包括： (1)将猴头菌子实体用碎冰机搅碎后加入10-30质量的蒸馏水， 混匀后置于-80 冰箱中冷冻4。
6、-8h， 待猴头菌子实体完全冰冻后， 迅速于37水浴锅内完全解冻， 反复冻融2- 4次； (2)将冻融好的猴头菌子实体放入大烧杯中， 加入NaOH溶液， 调整pH到9-10， 保持料液 比为40-60ml/g， 用保鲜膜封口， 在35-40条件下磁力搅拌提取4-8h， 反复提取两次， 过滤， 合并滤液； (3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5， 使沉淀完全， 离心， 收集沉淀， 即为猴头菌蛋白提取物。 3.根据权利要求1或2所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 其特征在 于， 上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(2)为： 向冻融好的猴头菌子实体中加入NaOH 溶液， 调整pH到9.4。
7、7， 保持料液比为50ml/g， 封口， 在37.9条件下磁力搅拌提取6h， 反复提 取两次， 过滤， 合并滤液。 4.根据权利要求1或2所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 其特征在 于， 上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(3)中， 所述离心的条件为： 在4的条件下， 采用8000r/min的转数， 离心时间为20min。 5.根据权利要求1所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆 菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的混合物。 6.根据权利要求1所述的一种含有猴头。
8、菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 所述复合益生菌中的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的活性分别为11010的活菌数/g。 7.根据权利要求1所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 其特征在于， 将猴头菌蛋白提取物和复合益生菌按照重量比10:1混合均匀得到， 所述复合益生菌为包含 重量比为1:1双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球 菌的混合物， 所述的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中 介链球菌的活性分别为11010的活菌数/g。。
9、 8.一种根据权利要求1至7中任一所述的制备方法制备得到的含有猴头菌蛋白的微生 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 107898999 A 2 态制剂。 9.一种权利要求9所述的含有猴头菌蛋白的微生态制剂在制备改善胃肠功能、 促红细 胞凝集、 抗炎、 提高机体免疫、 抗肿瘤药物或保健品方面的用途。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 107898999 A 3 一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制备方法和用途 技术领域 0001 本发明涉及一种微生态制剂及其制备方法， 尤其涉及一种含有猴头菌蛋白的微生 物制剂及其制备方法和用途。 背景技术 0002 猴头菌(Hericium eri。
10、naceus)是一种极具营养保健和药用价值的食用菌， 性平， 味甘。 研究报道， 猴头菌活性物质主要有多糖、 甾醇(麦角甾醇类)、 萜类(二萜类、 杂萜类)、 脂肪酸(饱和脂肪酸、 不饱和脂肪酸等)、 酚类、 蛋白质等化合物， 具有利五脏， 助消化， 滋补， 抗癌， 抗神经衰弱等功效。 0003 目前， 国内外对猴头菌的研究主要集中在猴头菌多糖的提取、 化学成分测定等方 面， 但对猴头菌蛋白的研究较少。 发明内容 0004 针对以上不足， 本发明提供一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制备方法。 0005 本发明通过以下方案达到上述目的： 0006 一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法， 将。
11、猴头菌蛋白提取物和复合益生 菌按照重量比8:1-15:1混合均匀得到， 所述复合益生菌为包含重量比为1-2： 1-2： 1-2： 1-2： 1-2： 1-2： 1-2的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链 球菌的混合物， 所述的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的活性分别为5109-11010的活菌数/g； 所述猴头菌蛋白提取物的制备方法 包括： 0007 (1)将猴头菌子实体搅碎后加入10-30质量的水， 混匀后置于-80冷冻4-8h， 待猴头菌子实体完全冰冻后， 于37水浴锅内完全解冻， 反复。
12、冻融2-4次； 0008 (2)向冻融好的猴头菌子实体中加入NaOH溶液， 调整pH到9-10， 保持料液比为40- 60ml/g， 封口， 在35-40条件下磁力搅拌提取4-8h， 反复提取两次， 过滤， 合并滤液； 0009 (3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5， 使沉淀完全， 离心， 收集沉淀， 即为猴头菌蛋白提 取物。 0010 在一个优选的实施例中， 所述猴头菌蛋白提取物的制备方法包括： 0011 (1)将猴头菌子实体用碎冰机搅碎后加入10-30质量的蒸馏水， 混匀后置于- 80冰箱中冷冻4-8h， 待猴头菌子实体完全冰冻后， 迅速于37水浴锅内完全解冻， 反复冻 融2-4次； 001。
13、2 (2)将冻融好的猴头菌子实体放入大烧杯中， 加入NaOH溶液， 调整pH到9-10， 保持 料液比为40-60ml/g， 用保鲜膜封口， 在35-40条件下磁力搅拌提取4-8h， 反复提取两次， 过滤， 合并滤液； 0013 (3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5， 使沉淀完全， 离心， 收集沉淀， 即为猴头菌蛋白提 取物。 说 明 书 1/3 页 4 CN 107898999 A 4 0014 其中， 所述水为蒸馏水。 0015 优选的， 上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(2)为： 向冻融好的猴头菌子实 体中加入NaOH溶液， 调整pH到9.47， 保持料液比为50ml/g， 封口， 在。
14、37.9条件下磁力搅拌 提取6h， 反复提取两次， 过滤， 合并滤液。 0016 优选的， 上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(3)中， 所述离心的条件为： 在4 的条件下， 采用8000r/min的转数， 离心时间为20min。 0017 优选的， 所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪 乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的混合物。 0018 优选的， 所述复合益生菌中的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪 链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的活性分别为11010的活菌数/g。 0019 优选的， 一种含有猴头菌蛋白的微生。
15、物制剂的制备方法， 将猴头菌蛋白提取物和 复合益生菌按照重量比10:1混合均匀得到， 所述复合益生菌为包含等重量份的双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的混合物， 所述的双 歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的活性分别 为11010的活菌数/g； 所述猴头菌蛋白提取物的制备方法如上所述。 0020 在本发明的第二方面， 提供一种上述制备方法制备得到的含有猴头菌蛋白的微生 态制剂。 0021 益生菌是一类对宿主有益的活性微生物， 是定植于人体肠道、 生殖系统内， 能产生 确切健康功效从而改善宿主微。
16、生态平衡、 发挥有益作用的活性有益微生物的总称， 主要分 为三大类， 乳杆菌类、 双歧杆菌类、 革兰氏阳性球菌。 0022 在本发明的第三方面， 提供一种上述含有猴头菌蛋白的微生物制剂在改善胃肠功 能、 促红细胞凝集、 抗炎、 提高机体免疫、 抗肿瘤方面的用途。 0023 在本发明的第四方面， 提供一种上述含有猴头菌蛋白的微生物制剂在制备改善胃 肠功能、 促红细胞凝集、 抗炎、 提高机体免疫、 抗肿瘤药物或保健品方面的用途。 0024 本发明中含有猴头菌蛋白的提取物具有促红细胞凝集、 抗炎、 提高机体免疫和抗 肿瘤的作用， 并且在复合益生菌的促进肠道菌群的构建及丰富方面具有促进作用。 0025。
17、 本发明的上述微生态制剂能够能够显著改善胃肠功能， 与单纯的使用复合益生菌 例如本发明所述的复合益生菌相比， 具有显著的协同辅助作用。 附图说明 0026 图1为实施例1的猴头菇蛋白鉴定图； 0027 图2为试验例1的血清中LPS含量的变化； 0028 图3为试验例1的结肠病理切片图； 0029 图4为试验例1的各实验组小鼠肠道菌群在门分类水平上的比例图。 具体实施方式 0030 以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。 0031 实施例1： 0032 猴头菌蛋白提取物的制备 说 明 书 2/3 页 5 CN 107898999 A 5 0033 具体步骤如下： 0034 (1)将猴头菌子实。
18、体用碎冰机搅碎后加入20质量的蒸馏水， 混匀后置于-80冰 箱中冷冻6h， 待猴头菌子实体完全冰冻后， 迅速于37水浴锅内完全解冻， 反复冻融3次； 0035 (2)将冻融好的猴头菌子实体放入大烧杯中， 加入NaOH溶液， 调整pH到9.47， 保持 料液比为50ml/g， 用保鲜膜封口， 在37.9条件下磁力搅拌提取6h， 反复提取两次， 过滤， 合 并滤液； 0036 (3)用稀盐酸溶液调整pH至4.5， 使沉淀完全， 在4的条件下， 采用8000r/min的转 数， 离心时间为20min， 收集沉淀， 即为猴头菌蛋白提取物(HEP)。 0037 对该猴头菌蛋白提取物进行鉴别， 鉴别图谱见。
19、图1。 0038 实施例2： 含猴头菌蛋白以及复合益生菌的微生态制剂的制备 0039 取猴头菌蛋白提取物30重量份， 双歧杆菌、 嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌、 詹氏乳杆菌、 粪链球菌、 乳球菌、 中介链球菌的益生菌干粉各3重量份， 活性分别为1.5109的活菌数/g， 混合均匀， 分装即得。 0040 试验例1 0041 取SPF级BALB/C小鼠50只， 随机分为5组， 每组10只。 留取1组为正常对照组外， 其余 4组均直肠注入0.6三硝基苯磺酸(TNBS)(溶于50乙醇)0.1ml制备溃疡性结肠炎模型。 0042 造模成功后， 分成HEP组、 复合益生菌组、 HEP+复合益生菌的实施例2制。
20、备的微生物 制剂组、 模型组。 除正常组外， 其他组给以大量抗生素处理， 按组别给相对应药物， 模型组和 正常组灌胃蒸馏水。 持续十天后， 处死小鼠， 取血、 小肠、 粪便。 相关检测结果见图2、 图3、 图 4。 0043 从图2的对血清中LPS水平测定结果显示， 模型组含量是正常组的210。 给药HEP 和复合益生菌制剂后， 小鼠血清中LPS水平皆有明显下降， HEP与复合益生菌共同使用后， 血 清中LPS含量仅增长20左右， 具有协同增效作用。 0044 从图3的结肠病理切片可以看出， 与空白对照组相比， 模型组呈现肠黏膜出现弥漫 一致性炎症现象， 肠黏膜结构改变并出现裂隙状溃疡病变。 。
21、给药HEP和复合益生菌后， 肠粘 膜结构更为规则， 裂隙状溃疡改变也较少。 0045 从图 4可以 看出 ： 与正常组 相比 ， 小鼠 经TNBS处理 后 ， 肠道内放线菌门 (Actinobacteria) 、 厚壁菌门 (Firmicutes) 和TM7门细菌增多 ， 脱铁杆菌门 (Deferribacteres)和变形菌门(Proteobacteria)减少； 与TNBS组相比， 给药HEP、 复合益生 菌和HEP+复合益生菌的微生物制剂后， 小鼠肠道内拟杆菌门(Bacteroidetes)、 厚壁菌门和 变形菌门菌数明显增多； 经过大量抗生素处理后， 脱铁杆菌门、 变形菌门和TM7门细。
22、菌几乎 被完全杀灭， 而给药HEP、 复合益生菌和HEP+复合益生菌后各细菌门则得以保持结构完整。 0046 综上可以看到， 溃疡性结肠炎小鼠服用HEP、 复合益生菌、 HEP+复合益生菌后， 与正 常组相比所有溃疡性结肠炎的症状指标也得到了明显的改善， 特别是HEP+复合益生菌组改 善更为明显， 具有协同增效作用。 0047 以上所述， 仅为本发明的较佳的具体实施例， 但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内， 根据本发明的技术方案及其 构思加以等同替换或改变， 都应涵盖在本发明的保护范围内。 说 明 书 3/3 页 6 CN 107898999 A 6 图1 图2 说 明 书 附 图 1/2 页 7 CN 107898999 A 7 图3 图4 说 明 书 附 图 2/2 页 8 CN 107898999 A 8 。