技术领域
本发明涉及医药卫生领域，具体涉及一种提高机体免疫力的中药 组合物及其制备方法。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任 何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞 以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力，即人体抵御外 邪、排除异己、保卫自己的能力。空气中充满了各种各样的微生物： 细菌、病毒、支原体、衣原体、真菌等等。在人体免疫力不足的情况 下，它们都可以成为赶早班的病原体从而使机体易于被感染或患癌症。 此外，现代医学科学发现，免疫是一个与衰老有密切关系的因素，免 疫功能减退是衰老的最重要原因之一。四川省中医研究所报道免疫反 应与肾脏密切相关、肾虚时细胞免疫、体液免疫、补体系统及网状内 皮系统吞噬功能都有不同程度的降低。据郎华发等研究报道乳腺增生 病患者机体自体免疫调节网络系统呈免疫抑状态及免疫调节功能紊 乱，从而可能出现机体免疫功能降低，以致免疫系统不能有效地识别、 抑制和清除病变细胞而发病。崔同健等研究胃癌脾虚证患者免疫功能 下降，机体免疫平衡状态失调。牛红梅等研究表明恶性肿瘤的转移与 免疫功能的抑制程度呈正相关。如何抗衰老、增强机体抗病力和免疫 力，已成为许多学者致力研究的方向。
宁神定志丸为广西梧州制药(集团)股份有限公司独家生产，批准 文号国药准字Z45020414。其组方为：党参、茯苓、石菖蒲、远志。 其功能与主治：益气安神，交通心肾，明目。用于神志不宁，惊悸健 忘，失眠，倦怠，视力减退。而目前还没有宁神定志丸能够提高机体 免疫力的相关报道。
张雅君等研究表明党参粗多糖为水溶性杂多糖，含有少量蛋白质， 可促进小鼠脾脏B淋巴细胞的增殖，提高小鼠巨噬细胞的吞噬能力进 而调整机体免疫功能。
ChenXiaoyu等将茯苓糖衍生成羧甲基-硫酸衍生物，在体内在体 内对S180细胞具有较高的抑制率，并且可以增加巨噬细胞数量、脾 和胸腺的质量，提高溶血活性，促使脾脏抗体产生和迟发小鼠体内的 超敏反应(DTH)反应。这表明，茯苓多糖的羧甲基-硫酸衍生物能显 著提高小鼠的免疫功能。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高机体免疫力的中药组合物；
本发明的另一目的是提供一种提高机体免疫力的中药组合物的制备 方法。
本发明的目的是通过下列的技术方案实现的：
本发明所述的提高机体免疫力的中药组合物，是由以下重量份的原料 制备而成的：党参10～35份、茯苓10～25份、石菖蒲5～15份、远 志6～15份
优选地，是由以下重量份的原料制备而成的：
党参30份、茯苓22份、石菖蒲15份、远志8份
以下是本发明的药材来源：
党参：本品为桔梗科植物党参Codonopsispilosula(Franch.)Nannf.、 素花党参CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.) L.T.Shen或川党参CodonopsistangshenOliv.的干燥根。秋季采挖， 洗净，晒干。【性味与归经】甘，平。归脾、肺经。【功能与主治】健 脾益肺，养血生津。用于脾肺气虚，食少倦怠，咳嗽虚喘，气血不足， 面色萎黄，心悸气短，津伤口渴，内热消渴。
茯苓：本品为多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥 菌核。多于7～9月采挖，挖出去后除去泥沙，堆置“发汗”后，摊 开晾至表面干燥，再“发汗”，反复数次至现皱纹、内部水分大部散 失后，阴干，称为“茯苓个”；或将鲜茯苓按不同部位切制，阴干， 分别称为“茯苓块”和“茯苓片”。【性味与归经】甘、淡、平。归心、 肺、脾、肾经。【功能与主治】利水渗湿，健脾，宁心。用于水肿尿 少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸不眠。
石菖蒲：本品为天南星科植物石菖蒲AcorustatarinowiiSchott的 干燥根茎。秋、冬二季采挖，除去须根和泥沙，晒干。【性味与归经】 辛、苦，温。归心、胃经。【功能与主治】开窍豁痰，醒神益智，化 湿开胃。用于神昏癫痫，健忘失眠，耳鸣耳聋，脘痞不饥，噤口下痢。 远志：本品为远志科植物远志PolygalatenuifoliaWilld.或卵叶 远志PolygaladibiricaL.的干燥根。春、秋二季采挖，除去须根 和泥沙，晒干。【性味与归经】苦、辛，温。归心、肾、肺经。【功能 与主治】安神益智，交通心肾，祛痰，消肿。用于心肾不交引起的失 眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚，咳痰不爽，疮疡肿毒，乳房肿痛。
本发明的另一方面是提供了本发明活性成分的制备方法，该方法 是采用体积百分比为30％～90％乙醇浸渍渗漉或回流提取制备而成的。 具体的制备方法如下：
方案一：取全部药材，加药材总重量6～12倍量体积百分比为 30～90％的乙醇浸渍12～72小时后进行渗漉，渗漉速度为3～9ml/min， 收集漉液，回收乙醇，减压浓缩至60℃时相对密度为1.15～1.40的 稠膏，即得。
方案二：取全部药材，加入药材总重量6～12倍量体积百分比为 30～90％的乙醇浸渍12～72小时后进行回流提取，每次的提取时间为 1～3小时，共提取3次，过滤，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩 至60℃时相对密度为1.15～1.40的稠膏，即得。
本发明所述的提高机体免疫力的中药组合物，可以与医药学上可 接受的载体配合，制成各种常用制剂，如片剂、颗粒剂、压片糖果、 口服液、丸剂等。
本发明的药学上可接受的载体包括但不限于以下：
稀释剂：淀粉、糖粉、乳糖、糊精、微晶纤维素、无机盐、糖醇 类等。
润湿剂与粘合剂：纯化水、乙醇、明胶、聚乙二醇、纤维素衍生 物等。
崩解剂：淀粉、羧甲基淀粉钠、纤维素衍生物、交联聚维酮等。
润滑剂：硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、聚乙二醇等。
助溶剂：水、乙醇、甘油、丙二醇、液状石蜡、植物油等。
矫味剂：蔗糖、单糖、芳香剂等。
防腐剂：苯甲酸、山梨酸、甲酯、乙酯、丙酯等。
方法1：颗粒剂
取方案一或方案二所得的活性成分，于真空干燥箱内干燥成干膏 粉，加入颗粒剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明颗粒剂。
上述颗粒剂常用辅料包括稀释剂、润湿剂、粘合剂之一或全部。
方法2：片剂
取方案一或方案二所得的活性成分，于真空干燥机内干燥成干膏 粉，加入片剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明片剂。
上述片剂常用辅料包括稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑 剂之一或全部。
方法3：压片糖果
取方案一或方案二所得的活性成分，于真空干燥机内干燥成干膏 粉，加入糖粉，及常用辅料，按常规生产方法制备得本发明压片糖果。
上述糖果常用辅料包括稀释剂、粘合剂、润滑剂之一或全部。
方法4：口服液
取方案一或方案二所得的活性成分，加入蔗糖等常用辅料，按常 规生产方法制备得本发明口服液。
上述口服液常用辅料包括稀释剂、矫味剂、着色剂、防腐剂之一 或全部。
方法5：丸剂
取方案一或方案二所得的活性成分，于真空干燥机内干燥成干膏 粉，加入丸剂常用辅料，按常规生产方法制备得本发明丸剂。
上述丸剂常用辅料包括稀释剂、润湿剂、粘合剂、润滑剂之一或 全部。
方解：在本发明的中药组方中，党参是促进免疫功能常用的中药， 其中包括多糖类、萜及三萜皂苷类，党参苷及党参炔苷等主要有效成 份。党参多糖是党参的主要活性成分之一，现代药理学证明，党参多 糖具有增强免疫力等作用；而党参炔苷类具有抗炎及免疫调节等多种 生理活性。茯苓中茯苓多糖茯苓多糖对细胞免疫有很强的促进作用， 特别是能调整T细胞亚群的比值，增强机体免疫功能，改善机体状 况，增加抗感染能力。远志中的化学成分主要包括皂苷类、糖酯类等， 其对抗癌、免疫增强等方面均具有一定活性。石菖蒲主要含挥发油、 氨基酸、糖类、脂肪酸、无机元素等化学成分，具有免疫、抑菌、抗 癌、抗突变等药理作用。
本发明专利临床应用的安全性较高，在提高机体免疫力不失为一 种好药。
本发明提供的中药组合物用于提高机体免疫力具有以下优点：
1、方中的药物大部分都属于《即使药品又是食品的物品》或者 是《可用于保健食品的物品》名单中，全方性味温和，毒副作用小， 适用人群广，可长期服用。
2、本发明能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数和吞噬率， 说明本发明能够增强机体的非特异性免疫能力。另外，本发明能使正 常小鼠血清溶血素的含量明显增高，提示其具有增强小鼠体液免疫功 能的作用。
3、本发明组合物配方合理创新，生产成本低、工艺简单。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实 施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对 本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明， 本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数。
实施例1：
取党参10g、茯苓12g、远志10g、石菖蒲11g，加药总重量12 倍量75％乙醇浸渍12小时后进行渗漉，渗漉速度为3ml/min，收集漉 液，回收乙醇，减压浓缩至60℃时测得相对密度为1.15～1.40的稠 膏，真空干燥，粉碎，过100目筛，加入适量的淀粉、微晶纤维素、 明胶、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、蔗糖，混合均匀，制软 材、制粒、压制成片即得。
实施例2：
取党参30g、茯苓22g、远志8g、石菖蒲15g中加入药总重量10 倍量60％乙醇浸渍12小时后进行回流提取，每次的提取时间为1小 时，共提取3次，过滤，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃ 时测得相对密度为1.15～1.40的稠膏，真空干燥，粉碎，过100目 筛，加入适量的淀粉、微晶纤维素、明胶、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、 微粉硅胶、蔗糖，混合均匀，制软材、制粒、压制成片即得。
实施例3：
取党参30g、茯苓22g、远志8g、石菖蒲15g，加药总重量6倍 量30％乙醇浸渍72小时后进行渗漉，渗漉速度为9ml/min，收集漉液， 回收乙醇，减压浓缩至60℃时测得相对密度为1.15～1.40的稠膏， 真空干燥，粉碎，过100目筛，加入适量的淀粉、微晶纤维素、明胶、 羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、蔗糖，混合均匀，制软材、制 粒、压制成片即得。
实施例4：
取党参20g、茯苓15g、远志10g、石菖蒲9g，加药总重量9倍 量90％乙醇浸渍50小时后进行渗漉，渗漉速度为5ml/min，收集漉液， 回收乙醇，减压浓缩至60℃时测得相对密度为1.15～1.40的稠膏， 真空干燥，粉碎，过100目筛，加入适量的淀粉、微晶纤维素、明胶、 羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、蔗糖，混合均匀，制软材、制 粒、压制成片即得。
实施例5：
取党参10g、茯苓10g、远志6g、石菖蒲5g中加入药总重量6 倍量30％乙醇浸渍72小时后进行回流提取，每次的提取时间为3小 时，共提取3次，过滤，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃ 时测得相对密度为1.15～1.40的稠膏，真空干燥，粉碎，过100目 筛，加入适量的淀粉、微晶纤维素、明胶、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、 微粉硅胶、蔗糖，混合均匀，制软材、制粒、压制成片即得。
实施例6：
取党参35g、茯苓25g、远志15g、石菖蒲10g中加入药总重量 12倍量90％乙醇浸渍40小时后进行回流提取，每次的提取时间为2 小时，共提取3次，过滤，合并提取液，回收乙醇，减压浓缩至60℃ 时测得相对密度为1.15～1.40的稠膏，真空干燥，粉碎，过100目 筛，加入适量的淀粉、微晶纤维素、明胶、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁、 微粉硅胶、蔗糖，混合均匀，制软材、制粒、压制成片即得。
药效实验：
1、实验动物：健康KM小鼠210只，体重18-22g，雌雄兼用， 广西医科大学实验动物中心提供(许可证号：SCXK桂2009-0002)。
2、实验药品：
小牛血清，由美国Hyclone公司生产；
RPMIl640，由美国Gibco公司生产；
刀豆蛋白A(ConA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)，由美国Sigma公 司生产。
其他试剂均为国产分析纯。
3、实验方法及分组
3.1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
3.1.1分组及给药方式
取健康昆明种小鼠70只，随机分为7组，每组10只，分别为空 白组，高剂量组，中剂量组，低剂量组：
空白对照组：给予纯水，其余操作与其他组一致。
高剂量组：小鼠分别给予实施例1、2制备的样品，给药量按药 材生药量110g/kg计，每天灌胃1次。
中剂量组：小鼠分别给予实施例1、2制备的样品，给药量按药 材生药量11g/kg计，每天灌胃1次
低剂量组：小鼠分别给予实施例1、2制备的样品，给药量按药 材生药量5.5g/kg计，每天灌胃1次
给药方法：每天灌胃1次，连续30d。
3.1.2腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
取各组小鼠，按3.1.1的给药剂量及方式，连续给药30天后， 颈椎脱臼处死小鼠，沿腹中线注入3ml冰中预冷的无菌PBS-H(含 10U/ml肝素和10％小牛血清的PBS)，轻轻按摩腹部5min剪开腹壁， 吸出渗出液，再用同样容量的预冷PBS-H冲洗腹腔，合并渗出液，用 预冷的RPMI1640培养液洗涤并悬浮细胞106/ml，即得巨噬细胞悬液；
由鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量的Alsever液，用PBS将红细 胞比容配成5％的浓度制成鸡红细胞悬液，用巨噬细胞悬液1ml，加入 0.04ml鸡红细胞悬液，1500r/min离心5min，弃上清。涂片，吉萨 染色计数，计算吞噬率和吞噬指数。
吞噬率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞数×100％
吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/巨噬细胞数
3.2半数溶血值(HC50)的测定
3.2.1实验分组及给药同3.1.1；
3.2.2实验方法：
各组小鼠按3.1.1分组及给药后于灌胃26d后，取羊血，用生 理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压 积RBC0.2ml进行免疫，5d后摘取眼球取血，放置约lh，将凝固 血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血 清。
用巴比妥(SA)缓冲液将血清稀释200倍，取1mL置试管内，依次 加入10％(用SA缓冲液配制)压积SRBC0.5mL，补体1mL(用SA缓 冲液按1：10稀释)。
另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中 保温30min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清1 mL，加都氏试剂3mL。同时取10％(用SA缓冲液配制)压积SRBC0.25 mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混匀，放置10min后， 于540nm处以对照管作空白，分别测定各管吸收度值。溶血素的量 以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算。
半数溶血值(HC50)＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的吸收度值 ×稀释倍数
3.3小鼠淋巴细胞转化
3.3.1实验分组及给药同3.1.1
3.3.2实验方法：
各组小鼠在按3.1.1给药，连续给药7d后，在末次给药的2h后 颈椎脱臼处死各组小鼠。无菌操作取出脾脏，制备脾细胞悬液，分别 置入盛有RPMI1640培养液的平皿中，将细胞稀释为1×107/ml悬液。 在96孔平底培养板中，每组l0孔，各加100μl细胞悬液和100μ lConA(终浓度为5μg/m1)，置37℃，5％CO2培养箱中培养48h。轻轻 吸弃上清100μl。加入MTT溶液(浓度为5mg/ml)10μl(50μg/ 孔)，于振荡器上振荡1min。放置5％CO2培养箱中反应2h。取出反应 物，离心(2000r/min，5min)，弃上清，每孔加入酸化异丙醇120μ l，与振荡器上振荡30s。在酶标光度计570nm处读取OD值。
4、统计学处理采用SPSS16.0软件对实验数据进行单因素方差分析，各项数据均以表示。
5、结果
5.1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响：见表1
表1：对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响(n＝10)
注：与空白组比较，*P<0.01
表1结果显示：与空白组相比，服用本发明的各组小鼠的腹腔巨 噬细胞吞噬率、吞噬指数有不同程度的增高(与空白组比较，P<0.01)。 且实施例2的各组总体上来说，效果实施例1各组。
5.2对小鼠血清溶血素的影响：见表2
表2：对小鼠半数溶血值(HC50)的影响(n＝10)
组别 剂量(g/kg) 半数溶血值 空白组 — 120.8±15.7 实施例1高剂量组 110 157.6±17.5* 实施例1中剂量组 11 153.9±12.8* 实施例1低剂量组 5.5 148.8±17.07* 实施例2高剂量组 110 158.0±16.17* 实施例2中剂量组 11 154.0±16.6* 实施例2低剂量组 5.5 150.6±15.1*
注：与空白组比较,*P<0.01
表2结果显示：与空白组相比，服用本发明的各组能不同程度增 加小鼠的半数溶血值(P<0.01)，结果提示本发明具有提高小鼠血清 溶血素水平的作用。
5.3对小鼠脾淋巴细胞转化试验的影响：见表3
表3：对小鼠小鼠脾淋巴细胞转化试验的影响(n＝10)
注：与空白组比较，*P<0.01,**P<0.05
表3结果显示：与空白组相比，服用本发明的各组可不同程度增 强淋巴细胞增殖能力(P<0.05或P<0.01)；提示本发明提供的组合物 具有提高小鼠小鼠脾淋巴细胞转化的作用。
6、讨论：
选用了数个免疫测定指标观察和探讨本发明对小鼠免疫机能的 调节作用。巨噬细胞的吞噬能力很强，其胞浆内富含溶酶体、酸性磷 酸酶和过氧化物酶等物质，能非特异性地吞噬多种抗原，在机体的非 特异性免疫反应中具有十分重要的作用。吞噬作用常作为反映巨噬细 胞功能状况的指标。实验结果表明：本发明能明显提高小鼠腹腔巨噬 细胞的吞噬指数和吞噬率，说明本发明能够增强机体的非特异性免疫 能力。
血清溶血素是B淋巴细胞在接受各种抗原刺激后分泌的抗体，是 衡量机体体液免疫水平的重要指标。实验结果显示本发明能使正常小 鼠血清溶血素的含量明显增高，提示其具有增强小鼠体液免疫功能的 作用。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发 明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进， 这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神 的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。