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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710666550.0 (22)申请日 2017.08.07 (71)申请人 深圳市维琪医药研发有限公司 地址 518000 广东省深圳市宝安区西乡街 道桃花源科技创新园B孵化楼207室 (72)发明人 丁文锋 吕庆琴 (74)专利代理机构 深圳壹舟知识产权代理事务 所(普通合伙) 44331 代理人 李兵 吴娟 (51)Int.Cl. A61K 8/64(2006.01) A61Q 19/02(2006.01) A61Q 19/08(2006.01) (54)发明名称 一。
2、种抗氧化作用和抑制黑色素合成的多肽 组合物及其应用 (57)摘要 本发明提供一种多肽组合物， 包括一种或几 种具有抗氧化作用的多肽以及一种或几种具有 抑制黑色素生成作用的多肽的组合， 其中各多肽 成分质量浓度为0.0001-5。 该组合物主要用 于改善/预防因氧化所致的皮肤老化以及皮肤暗 黄， 从而达到改善皮肤色素沉着、 祛除暗黄和提 亮肤色的目的， 并预防因氧化损伤引起的各种各 样的皮肤疾病如红斑狼疮、 多形性日光疹等。 权利要求书1页 说明书8页 附图1页 CN 107375005 A 2017.11.24 CN 107375005 A 1.一种多肽组合物， 其特征在于包含： (1)、 具。
3、有抗氧化反应、 清除自由基作用的一种或多种多肽， 选自肌肽、 谷胱甘肽、 乙酰 肌肽、 棕榈酰肌肽和脱羧肌肽； 和(2)、 具有抑制黑色素生成作用的一种或多种多肽， 选自九肽-1、 四肽-27、 十肽-12和 六肽-2； 其中以上各多肽成分的质量百分比浓度为0.0001-5。 2.按权利要求1所述的组合物， 其特征在于， 所述多肽组合物选自以下的组合： 肌肽和 九肽-1两种肽组合或是肌肽和四肽-27两种组合； 肌肽和九肽-1、 四肽-27三种肽组合或肌 肽、 乙酰肌肽和九肽-1三种肽组合； 肌肽、 谷胱甘肽和九肽-1、 四肽-27四种肽组合或者肌肽 和九肽-1、 四肽-27、 十肽-12四种肽。
4、组合。 3.按权利要求1-2所述的组合物， 其特征在于， 所述多肽组合物还添加选自抗坏血酸、 维生素E、 艾纳香油的其他具有抗氧化作用的成分， 各成分质量百分比浓度为0.001-5。 4.按权利要求1-2任一权利要求所述的组合物， 其特征在于， 所述多肽组合物还添加有 多醇类防腐剂； 和/或抗菌类试剂； 这些成分的质量百分比浓度范围为0.001-5。 5.按权利要求1-2任一权利要求所述的组合物， 其特征在于， 所述多醇类防腐剂为辛甘 醇； 抗菌类试剂为1,2-己二醇。 6.按权利要求1-2任一权利要求所述组合物， 其特征在于， 所述多肽组合物还添加有选 自甘油、 芦荟胶和透明质酸的保湿剂， 。
5、其质量百分比浓度范围为0.001-5。 7.按权利要求1-2任一权利要求所述的组合物， 其特征在于， 所述多肽组合物还包括选 自三乙醇胺、 碳酸氢钠和碳酸氢钾的pH调节剂； 优选三乙醇胺； 组合物pH值范围为3.0 8.0， 优选5.07.0。 8.按权利要求1-2任一权利要求所述的组合物， 其特征在于， 所述组合物剂型为精华 液、 粉剂、 胶囊、 冻干粉、 乳剂、 霜剂、 凝胶、 面膜或敷料。 9.按权利要求1-8的任一权利要求所述的组合物的应用， 其作为选自面膜、 补水精华、 乳液、 眼霜、 医用敷料的皮肤外用品。 10.根据权利要求9所述的组合物的应用， 其用来预防皮肤氧化损伤导致的老化。
6、、 皱纹、 黑色素沉着产生的肤色暗沉、 暗斑和任意组合的皮肤问题； 或用来改善皮肤暗黄、 色素沉着 过度、 色斑、 皱纹、 氧化发炎和任意组合的皮肤症状。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107375005 A 2 一种抗氧化作用和抑制黑色素合成的多肽组合物及其应用 技术领域 0001 本发明属于医药化妆用品领域， 利用具有抗氧化作用的多肽和抑制黑色素的多肽 进行配方组合， 并采用复合活性多肽的方法制备各种剂型包括霜剂、 精华液、 乳液、 冻干粉 等， 用于改善因氧化应激致使的皮肤老化暗黄， 修复皮肤的氧化损伤， 提亮肤色， 并预防各 种各样的皮肤疾病如红斑狼疮、 多形性日光疹等。 。
7、背景技术 0002 以下描述包含对理解本发明可能有用的背景信息， 但既不是承认在此提供的任何 信息是目前要求保护的本发明或有关申请的现有技术， 也不是承认任何具体或隐含涉及的 公开的现有技术。 0003 皮肤是最早反映机体衰老的组织， 已引起众多学者对皮肤皱纹、 弹性及皮肤含水 量等研究的兴趣。 皮肤衰老是一个非常复杂的现象， 涉及一系列的生物学改变， 如皮肤组织 细胞、 基因和免疫系统的改变， 是体内外各种因素(营养、 环境污染、 精神因素、 情绪变化、 太 阳辐射等)共同作用的结果。 根据研究学者从不同的角度以及研究方法对衰老进行探索， 总 结了许多关于衰老的学说， 包括衰老基因学说、 端。
8、粒缩短学说、 自由基学说、 免疫机能退化 学说等， 其中氧自由基学说被大众认为与衰老密切相关。 1956年， Haman首先提出衰老的自 由基代谢理论， 认为衰老是细胞成分积累性氧化损伤的结果。 0004 氧化应激(oxidative stress， OS)是指在有害刺激因素下， 活性氧(reactive oxygen species， ROS)产生过多或发生代谢障碍并超过内源性抗氧化防御系统对其清除能 力时， ROS在体内增多并参与氧化生物大分子的形成， 直接或间接氧化或损伤DNA、 蛋白质和 脂质， 最终导致细胞的氧化损伤， 体现在以下几个方面： 0005 皮肤内细胞的氧化损伤。 角质形成。
9、细胞(keratinocyte， KC)是中波紫外线作用 靶点， 受紫外线照射后， 细胞内炎症信号传导机制被激活， 通过表达或分泌一系列炎症细胞 因子如白细胞介素-1(IL-1)， 参与机体的免疫和炎症反应。 此外， 紫外线还可引起KC的凋 亡， 可能为DNA直接损伤、 诱导ROS的形成及活化细胞膜表面死亡受体。 黑素细胞 (melanocyte)位于表皮中， 对于维持皮肤耐受紫外线辐射能力有重要意义， 被紫外线照射 后发生树突数目增多、 细胞肿胀等形态改变。 成纤维细胞(fibroblasts)是合成胶原和弹性 纤维的主要场所， 位于皮肤真皮层， 却极易发生氧化损伤。 它与KC一样， 可被紫。
10、外线诱导发 生凋亡。 0006 细胞内所有成分包括蛋白质都会受到氧化而损伤。 皮肤中氧自由基增多， 会产 生一系列的反应： 氧自由基在体内过量增多， 会攻击细胞膜、 蛋白质、 核酸而造成氧化性损 伤， 加速皮肤表皮老化。 这主要体现在氧自由基与细胞膜上主要成分多不饱和脂肪酸 (PUFA)反应， 生成脂质过氧化自由基和脂质过氧化物(LPO)， 分解生成的丙二醛可使膜流动 性改变， 而脂质过氧化自由基又进一步加速PUFA的过氧化， 导致PUFA间分子重排、 交联， 细 胞膜流动性降低， 膜运转功能障碍； 氧自由基可与碱基反应使DNA链聚集， 脂质过氧化物烯 醛与核酸反应使DNA链烷化断裂， 从而使。
11、基因改变， 基因突变， 丧失正常功能引起老化； 氧自 说 明 书 1/8 页 3 CN 107375005 A 3 由基攻击成纤维细胞后导致胶原代谢异常， 胶原合成降低， 出现异常交联， 进一步影响真皮 结构， 加速皮肤老化。 氧化受损的蛋白质一般由蛋白酶作为主要物质负责降解， 可由于衰老 导致蛋白酶的防御功能日益下降， 氧化受损的蛋白质在体内堆积。 此外， 脂褐素在细胞内的 堆积也妨碍蛋白酶的功能。 细胞成分的积累性损伤又会导致组织器官机能进一步发生紊 乱， 引起机体的进一步衰老。 0007 肤色变黄、 暗沉。 肤色变黄的原因有很多因素， 不仅与黑色素、 血红素、 类胡萝 卜 素以及高级糖基。
12、化终末产物AGEs(Advanced Glycation End-products)有关， 而且真皮层 中胶原蛋白和弹性蛋白的羰基化等也会对肤色黄造成一定的影响。 有报道称， 真皮中蛋白 质分子(如胶原纤维和弹性纤维)中氨基酸易与还原性糖的醛基或酮基发生非酶糖基化反 应， 产生成熟的糖基化终产物(AGEs)。 随着年龄的增长， AGEs进行性增加， AGEs黄棕色沉淀 物堆积在真皮层， 导致皮肤发黄。 胶原蛋白和弹性蛋白的羰基化造成脂褐素逐渐聚积， 也会 导致皮肤发黄， 暗沉。 糖类和蛋白质引起的褐色退变的组织变化， 人们习惯称为老年斑。 此 外， 皮肤中AGEs随着年龄增加， 使胶原纤维形成。
13、分子间交联， 不但降低了结缔组织的通透 性， 使养料及废物的扩散性减弱， 组织延伸性和硬度增加， 并降低了胶原的可溶性而难以被 胶原酶水解， 造成皮肤弹性下降， 皱纹不易平复且不断加深， 促进皮肤的衰老。 紫外线诱导 的皮肤老化可能与真皮内AGEs的蓄积有关， 有研究证实(Wondrak G T， et al， Photosensitized growth inhibition of cultured human skin cells mechanism and suppression of oxidative stress from solar irradiation of glycated。
14、 proteins， 2002,119： 489-498)， 紫外线引起的光老化皮肤过氧化反应中， 非酶糖基化蛋白质是体内皮 肤细胞紫外线过氧化损伤的光感物这一假说。 0008 紫外线已经成为引起皮肤氧化损伤越来越主要的原因。 紫外线B能直接与皮肤细 胞的DNA发生作用， 紫外线A则主要通过产生对人体有害的氧自由基而改变核DNA和线粒体 DNA， 并激活基质金属蛋白酶(MMPs)来损害细胞外基质。 MMPs主要作用是降解胶原蛋白及弹 性蛋白等皮肤细胞质基质成分， 使皮肤的真皮层厚度变薄。 因此， 氧化损伤总是伴随着衰 老， 并引起皮肤各种各样的问题， 如肤色变黄、 暗沉。 若氧化损伤进一步发展。
15、， 还会产生皮肤 疾病， 如多形性日光疹， 为最常见的光敏感性疾病之一， 其发病可能与皮肤中常见的ROS(如 氢过氧化物、 单线态氧及超氧阴离子等自由基)有关； 其他疾病如红斑狼疮、 白癜风、 银屑病 等， 其发病可能也与ROS诱导的细胞组织损伤有关。 0009 肤色暗沉除了氧化损伤因素外， 还有另外一个因素， 即紫外线照射下， 刺激黑色素 细胞产生黑色素， 黑色素的沉积对肤色的影响极大， 不仅导致皮肤颜色加深， 还会产生斑 点。 前文也阐述， 黑素细胞对皮肤耐受紫外线有非常重要的意义， 所产生的黑色素可吸收有 害的紫外线辐射， 以便由紫外线诱导的自由基引起的损害降低到最小化。 但是黑色素细胞。
16、 长期处于氧化应激中， 也会产生损伤， 可其损伤机理还不清楚。 0010 综合上文所述， 研发一些具有抗氧化与抑制黑色素生成功效的产品， 清除皮肤自 由基， 延缓皮肤老化， 同时祛除暗黄， 提升皮肤颜色， 预防各种皮肤病显得非常必要。 发明内容 0011 本发明为解决以上皮肤问题， 提供了一种多肽组合物， 其特征在于， 包含： 0012 (1)、 具有抗氧化反应、 清除自由基作用的一种或多种多肽， 选自肌肽、 谷胱甘肽、 说 明 书 2/8 页 4 CN 107375005 A 4 乙酰肌肽、 棕榈酰肌肽、 脱羧肌肽； 0013 和 0014 (2)、 具有抑制黑色素生成作用的一种或多种多肽，。
17、 选自九肽-1(Nonapeptide-1 (L-蛋氨酰-L-脯氨酰-D-苯丙氨酰-L-精氨酰-D-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-赖氨酰-L-脯氨酰- L-缬氨酰胺)CAS:158563-45-2)、 四肽-27(Lightenin， Tetrapeptide-27(Tego- pep-4Even)、 十肽-12(Decapeptide-12(LumixylTM,Envy Medical,Inc.,Westlake Village,USA)、 六肽-2(Hexapeptide-2(DermostatylTMIS)； 0015 其中以上各多肽成分质量浓度为0.0001-5。 0016 本发明的多肽组。
18、合物可为肌肽和九肽-1两种肽组合或是肌肽和四肽-27两种组 合。 0017 本发明的多肽组合物也可以是肌肽和九肽-1、 四肽-27三种肽组合或肌肽、 乙酰肌 肽和九肽-1三种肽组合。 0018 本发明的多肽组合物也可以是肌肽、 谷胱甘肽和九肽-1、 四肽-27四种肽组合或者 肌肽和九肽-1、 四肽-27、 十肽-12四种肽组合。 0019 本发明多肽组合物可添加一些其他具有抗氧化作用的成分， 如抗坏血酸(维生素 C)、 维生素E、 艾纳香油等。 0020 本发明的组合物用于局部皮肤使用， 可添加一些保湿剂， 如透明质酸、 芦荟胶、 甘 油等。 因为健康皮肤属于弱酸性， 较佳的护肤产品pH值为5。
19、.0-7.0， 因此其组合物需要对其 pH进行调节， pH调节剂优选三乙醇胺。 0021 本发明组合物为防止外部环境污染以及细菌的侵入， 可添加一些防腐剂， 优选辛 甘醇； 或抗菌物质， 优选1,2-已二醇。 0022 本发明的多肽组合物可以制成各种剂型， 如开发产品剂型主要有精华液、 粉剂(胶 囊、 冻干粉)、 乳剂、 霜剂、 凝胶、 面膜、 敷料等； 产品可以为面膜、 补水精华、 乳液、 医用敷料 等。 0023 本发明多肽组合物， 可局部皮肤使用， 预防皮肤氧化损伤导致的老化、 皱纹， 黑色 素沉着产生的肤色暗沉、 暗斑， 和任意组合的皮肤问题。 0024 本发明多肽组合物也可用来改善皮。
20、肤暗黄， 色素沉着过度、 黄褐斑、 皱纹、 氧化发 炎和任意组合的皮肤症状。 0025 本发明的有益之处在于： 0026 本发明人对多肽在皮肤领域的研究探索已经有多年经验， 发现多肽对皮肤护理的 作用机制明确， 并有较好的安全性。 多肽是由氨基酸残基通过肽键链接而成的化合物。 根据 肽链上不同的氨基酸残基数目以及氨基酸残基种类， 可形成各种各样的多肽， 但其作用机 制有所差异。 如多肽对黑色素的抑制途径， 不同的多肽， 其作用途径可能是不太一样的： 九 肽-1(九个氨基酸残基组成)(Pooja Bains， Topical peptides for ageing： potential role。
21、 in dermatology， 2016， 5:118-125)和六肽-2(六个氨基酸残基组成)作为MC1-R拮抗 剂， 抑制黑色素细胞的激活达到抑制黑色素的效果； 而十肽-12(十个氨基酸残基组成)则是 作为黑色素细胞内的酪氨酸酶抑制剂， 通过抑制酪氨酸酶的活性达到抑制黑色素生成的目 的 (Andrea T .kassim ， et al ， Open-label evaluation of the skin- brighteningefficacy of a skin-brightening system usingdecapeptide-12， 2012,14: 说 明 书 3/8 页。
22、 5 CN 107375005 A 5 117-121)。 这几种肽从不同的作用位点达到了抑制黑色素的生成， 特别是九肽-1也称为美 白九肽， 被市场上广泛应用于美白祛斑产品上。 肌肽为两个氨基酸残基组成的多肽， 在一定 条件下对皮肤的氧化损伤有较好的保护作用： 对AGE的形成有很好的抑制作用； 可清除产生 的自由基(ROS)以及由ROS诱导脂质过氧化作用产生的终产物， 特别是HNE， 后者可攻击NDA 的核苷酸碱基使其突变； 可有效的减缓因ROS引起的DNA损伤(Reddy VP， et al， Carnosine: A Versatile Antioxidant and Antiglyca。
23、ting Agent， 2005)。 近年来， 肌肽也被广泛添加 到皮肤护理产品中。 0027 目前， 市场上提亮肤色的多肽产品侧重为抑制皮肤黑色素生成或是抗氧化作用， 作用较为单一。 本发明从皮肤的微观结构以及皮肤生理变化的作用机制出发， 创新提出将 抗氧化作用的多肽(如肌肽)与抑制黑色素生成的多肽(如九肽-1)组合一起， 可以有效防止 皮肤的老化， 并提亮肤色， 比单一使用具有更好的效果， 表现出较好的协同效应。 附图说明 0028 图1为实施例1-4多肽对皮肤色度的影响图。 0029 图2为实施例1和对比实施例1-2多肽对皮肤色度的影响图。 具体实施方式 0030 为了更好的理解本发明，。
24、 下面结合实施例和附图对发明作详细的说明， 但并不只 限于以下的实施例。 0031 实施例1多肽组合物溶液的制备(抗氧化精华液) 0032 按以下多肽溶液处方， 以精华液的形式制备本发明的多肽组合物。 0033 溶液处方(1公斤精华液)： 0034 0035 配置方法： 说 明 书 4/8 页 6 CN 107375005 A 6 0036 将配方量的透明质酸钠加入到水中， 搅拌使混合均匀， 然后加热到8085， 保温 搅拌使其分散均匀。 温度降到40以下， 加入甘油、 芦荟胶、 肌肽、 九肽-1、 维生素C、 透明质 酸钠、 辛甘醇和1， 2-己二醇， 搅拌均匀。 用15三乙醇胺调溶液的pH。
25、值至5.5左右。 0037 实施例2 0038 溶液处方(1公斤精华液)： 0039 0040 配置方法： 0041 将配方量的透明质酸钠加入到水中， 搅拌使混合均匀， 然后加热到8085， 保温 搅拌使其分散均匀。 温度降到40以下， 加入甘油、 芦荟胶、 肌肽、 四肽-27、 维生素C、 透明质 酸钠、 辛甘醇和1， 2-己二醇， 搅拌均匀。 用15三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左右。 0042 实施例3 0043 溶液处方(1公斤精华液)： 0044 说 明 书 5/8 页 7 CN 107375005 A 7 0045 0046 配置方法： 0047 将配方量的透明质酸钠加入到水中， 。
26、搅拌使混合均匀， 然后加热到8085， 保温 搅拌使其分散均匀。 温度降到40以下， 加入甘油、 芦荟胶、 肌肽、 九肽-1、 乙酰肌肽、 维生素 C、 透明质酸钠、 辛甘醇和1， 2-己二醇， 搅拌均匀。 用15三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左右。 0048 实施例4 0049 溶液处方(1公斤精华液)： 0050 0051 0052 配置方法： 0053 将配方量的透明质酸钠加入到水中， 搅拌使混合均匀， 然后加热到8085， 保温 搅拌使其分散均匀。 温度降到40以下， 加入甘油、 芦荟胶、 肌肽、 九肽-1、 谷胱甘肽、 四肽- 27、 维生素C、 透明质酸钠、 辛甘醇和1， 2-己二。
27、醇， 搅拌均匀。 用15三乙醇胺调溶液的pH值 说 明 书 6/8 页 8 CN 107375005 A 8 至5.5左右。 0054 对比实施例1多肽溶液的制备(抗氧化精华液) 0055 除不含九肽-1， 代之以去离子水之外， 按实施例1的溶液配方制备精华液。 0056 溶液处方(1公斤精华液)： 0057 0058 配置方法： 0059 将配方量的透明质酸钠加入到水中， 搅拌使混合均匀， 然后加热到8085， 保温 搅拌使其分散均匀。 温度降到40以下， 加入甘油、 芦荟胶、 肌肽、 维生素C、 透明质酸钠、 辛 甘醇和1， 2-己二醇， 搅拌均匀。 用15三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左。
28、右。 0060 对比实施例2 0061 除不含肌肽， 代之以去离子水之外， 按实施例1的溶液配方制备精华液。 0062 溶液处方(1公斤精华液)： 0063 说 明 书 7/8 页 9 CN 107375005 A 9 0064 配置方法： 0065 将配方量的透明质酸钠加入到水中， 搅拌使混合均匀， 然后加热到8085， 保温 搅拌使其分散均匀。 温度降到40以下， 加入甘油、 芦荟胶、 九肽-1、 维生素C、 透明质酸钠、 辛甘醇和1， 2-己二醇， 搅拌均匀。 用15三乙醇胺调溶液的pH值至5.5左右。 0066 实施例5改善皮肤肤色试验研究 0067 选择健康志愿者年龄18-55之间，。
29、 脸上皮肤暗黄， 有明显的色斑， 随机分为六组组， 每组30人， 其中四组分别使用实施例1、 实施例2、 实施例3、 实施例4的产品， 另外两组作为对 照组， 分别使用对比实施1和对比实施例2的产品， 连续使用8周。 测试期间， 志愿者不可改变 原有的面部清洁方式和习惯， 除此外， 不可使用除测试产品外的其他化妆品。 在使用产品 前， 产品使用4周和8周后， 对两侧面颊分别进行皮肤颜色测试， 从而观察产品对皮肤暗黄和 色斑改善的情况。 0068 测试中使用色差计Chromameter(CR-400,Konica Minolta,日本)测量肤色。 本仪 器采用国际照明委员会(CIE)规定的色度系。
30、统(Lab色度系统)表示肤色的变化。 其中： 0069 L*为亮度， a*为红绿色度， b*为蓝黄色度， 三者的综合评价能够反映皮肤色度的变 化； ITA 值为皮肤个体类型角， 是与L*和b*相关的表征皮肤明亮度的数值。 ITA 值越大皮肤 越明亮， 反之， 皮肤越暗沉。 0070 皮肤颜色测试(Chromameter)的测试区域为左右两侧面颊， 每个测试区测试3次取 平均值。 结果见附图1和2。 0071 从实验结果看出来， 多肽可以改善皮肤的色度， 使用的时间越久， 效果越明显； 肌 肽与九肽-1组合使用效果优于单一肌肽或单一九肽-1的使用效果， 侧面推断不同种类的肽 组合使用， 可以从不。
31、同的靶点共同起作用， 从而达到改善色素沉着， 提亮肤色， 祛斑和祛暗 黄的效果， 具有良好的协同作用。 0072 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细的说明， 但是不 表示本发明的具体实施是局限于这些说明。 对于本发明所属领域的普通技术人员来说， 在 不脱离本发明构思的前提下， 还可以做出若干简单推演或是替换。 以上所述仅为本发明的 具体实施例， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、 等同替 换和改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 8/8 页 10 CN 107375005 A 10 图1 图2 说 明 书 附 图 1/1 页 11 CN 107375005 A 11 。