技术领域
本发明属于畜禽大肠杆菌感染治疗技术领域，尤其涉及一种含有三叉风和β-内酰胺类抗菌药的畜禽用组合物及其制备方法。
背景技术
大肠杆菌是常见的条件致病菌，也是常发的一种疾病，它可原发引起鸡急性败血症、腹膜炎、肝炎、肺炎、肠炎等多部位严重感染，亦可继发或混发于病毒病，给养殖业造成巨大的经济损失。阿莫西林、氨苄西林、头孢噻呋、头孢曲松、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦等β-内酰胺环类抗生素是防治该病的常用的重要药物，随着养殖规模集约化程度愈来愈大，用药愈来愈泛滥，其耐药菌株愈来愈多，关于大肠杆菌耐药性的报道也较多。研究证实，耐药的主要机制之一是产生β-内酰胺酶，尤其是超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase，ESBLs)，该酶能较强和快速地水解β-内酰胺环。ESBLs是β-内酰胺酶的最主要酶型，它不仅对头孢三代和氨曲南耐药，而且对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类呈交叉耐药，仅对碳青霉烯类、头霉烯类药物敏感。许多文献已经报道大肠杆菌的多重耐药性与产生ESBLs有密切关系，国内外对之较为关注。发明人最近开展了食品动物源致病菌ESBLs的检测、提取、酶对抗生素的水解率及舒巴坦、他唑巴坦以及中药的抑酶保护作用等研究，对部分ESBLs大肠杆菌的药敏试验表明，其多重耐药率明显高于非ESBLs菌株。另外，结果还表明产ESBLs菌株不仅对头孢噻呋等第三代头孢菌素严重耐药，而且亦对氟喹诺酮类、氨基糖苷类和磺胺类、磷霉素等多种抗菌药耐药，呈严重的多重耐药。发明人在耐药菌株中分离到产ESBLs耐药基因的大肠杆菌，该基因加强了细菌的耐药性。
大肠杆菌的耐药性造成养殖户用药成本增加，治疗疗程延长，畜禽死亡率增加，给生产带来较大经济损失，并且增加畜禽药物残留风险。因此，实际生产中亟需一种对无论是否耐药的大肠杆菌都能有较好治疗作用的药物，并能缩短治疗疗程，减少死亡率，降低经济损失且降低药物残留，为养殖户创造更高的经济效益，也保障人类的健康安全。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种含有三叉风(学名淫羊霍)和β-内酰胺类抗菌药的畜禽用组合物，以解决大肠杆菌的耐药性造成养殖户用药成本增加，治疗疗程延长，畜禽死亡率增加，给生产带来较大经济损失，并且增加畜禽药物残留风险的技术问题。
本发明提出的含有三叉风和β-内酰胺类抗菌药的畜禽用组合物，为包括以下重量份的原料制备成的制剂：5-200份的三叉风和3-30份的β-内酰胺类抗菌药。本方案提供的组合物，能够较快地克服抗菌药治疗由于耐药性问题造成的疗效差、用量大、残留高和成本高的缺陷，避免了单纯中药杀菌谱窄、杀菌慢的问题。
优选地，所述β-内酰胺类抗菌药为阿莫西林、头孢曲松钠或头孢噻呋钠。
优选地，包括以下重量份的原料：40-200份的三叉风和3-20份的阿莫西林，或者5-190份的三叉风和3-25份的头孢噻呋钠。
优选地，包括以下重量份的原料：40-180份的三叉风和3-20份的阿莫西林，或者30-190份的三叉风和3-25份的头孢噻呋钠。
优选地，包括以下重量份的原料：120份的三叉风和3份的阿莫西林，90份的三叉风和10份的阿莫西林，40份的三叉风和14份的阿莫西林，200份的三叉风和20份的阿莫西林，或者190份的三叉风和13份的头孢噻呋钠，或者85份的三叉风和15份的头孢噻呋钠，或者5份的三叉风和3份的头孢噻呋钠，或者30份的三叉风和25份的头孢噻呋钠。
优选地，其特征在于，将所述组合物制备成散剂、片剂、口服液或颗粒剂。
本发明还提出一种含有三叉风和β-内酰胺类抗菌药的畜禽用组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将三叉风粉碎成粉末状；
S2、将步骤S1所得的粉末状三叉风与粉末状的β-内酰胺类抗菌药按三叉风5-200份、β-内酰胺类抗菌药3-30份的重量份比例混合均匀，得到所述组合物。
优选地，所述β-内酰胺类抗菌药为阿莫西林、头孢曲松钠或头孢噻呋钠。
优选地，步骤S2中，按三叉风40-200份、阿莫西林3-20份的重量份比例，或者三叉风5-190份、头孢噻呋钠3-25份的重量份比例混合均匀，得到所述组合物。
优选地，将所述组合物制备成散剂、片剂、口服液或颗粒剂。
研究证明，抗菌药中加入三叉风后，能够逆转细菌对抗菌药的耐药性，从而提高抗菌药的治疗效果。将该组合物制成散剂、片剂、口服液或颗粒剂，按照0.1-10g主药/1kg饲料的添加量添加到畜禽饲料中进行饲喂，可大幅降低用药成本和药物残留，为养殖户创造更高的经济效益，同时也确保了食品安全。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。应该强调的是，下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本发明的范围及其应用。
一、三叉风对抗菌药的耐药逆转作用研究
抗菌药本身具有治疗大肠杆菌的效果，但由于产耐药基因的大肠杆菌具有较强的耐药性，致使抗菌药在正常的使用剂量情况下并未表现出较好的治疗效果。
1、三叉风与抗菌药混合后对大肠杆菌的耐药抑制试验
在96孔板上采用微量试管二倍稀释法，先测定了抗菌药对产ESBLs耐药基因的大肠杆菌株的最小抑菌浓度和三叉风对产ESBLs耐药基因大肠杆菌株的亚抑菌浓度，然后在培养基中加入亚抑菌浓度的三叉风再次使用微量试管二倍稀释法培养测定抗菌药的最小抑菌浓度；利用连续传代法在加有同样亚抑菌浓度三叉风和同样浓度抗菌药的培养基中对产ESBLs耐药基因大肠杆菌株进行传代培养，直至观测到的抗菌药最小抑菌浓度与传代前相比变小4倍以上，即可判断为三叉风对抗菌药具有耐药逆转作用。试验结果统计如表1所示：
表1 亚抑菌浓度(0.06g/mL)三叉风传代引起产ESBLs大肠杆菌西药MIC的变化(μg/mL)
以上结果表明三叉风对产ESBLs耐药基因大肠杆菌具有耐药逆转作用。
二、本发明组合物的应用实例
按照表2配方和以下方法制备实施例1-实施例14：将三叉风粉碎过60目筛后，作为基础原料，再与粉末状的抗菌药按重量份比例放入混合器中混匀，将组合物制备成制剂产品。
表2 实施例1-14的配方及制备剂型
编号 抗菌药 三叉风 剂型 实施例1 阿莫西林3g 200g 散剂 实施例2 阿莫西林30g 5g 口服液 实施例3 阿莫西林3g 180g 片剂 实施例4 阿莫西林20g 40g 颗粒剂 实施例5 阿莫西林3g 120g 片剂 实施例6 阿莫西林10g 90g 散剂 实施例7 阿莫西林14g 40g 口服液 实施例8 阿莫西林20g 200g 颗粒剂 实施例9 头孢噻呋钠3g 200g 散剂 实施例10 头孢噻呋钠30g 5g 口服液 实施例11 头孢噻呋钠3g 190g 片剂 实施例12 头孢噻呋钠25g 30g 颗粒剂 实施例13 头孢噻呋钠13g 190g 片剂 实施例14 头孢噻呋钠15g 85g 散剂
实施例15 头孢噻呋钠3g 5g 口服液 实施例16 头孢噻呋钠25g 30g 颗粒剂 实施例17 头孢曲松钠3g 200g 散剂 实施例18 头孢曲松钠30g 5g 口服液
发明人将上述实施例获得组合物产品进行了如下实验：
1、实施例1-8所得的组合物产品对鸡大肠杆菌疾病的疗效实验
临床症状：广西贵港某鸡场，27日龄肉鸡，鸡群出现零星死亡，剖检个别鸡出现包心包肝病理变化，典型的大肠杆菌疾病特征。
实验室诊断：取病变肝脏染片，革兰氏染色，显微镜下观察，可见红色的革兰氏阴性杆菌；初步判断为大肠杆菌疾病。通过大肠杆菌培养，生化实验鉴别，判断小鸡感染为大肠杆菌疾病，PCR扩增，证明产有TEM型的ESBLs耐药基因。
试验用药方案：将发病鸡群分成10组给药，第一组用实施例1按照0.1g/kg饲料的添加量给药，第二组用实施例2按照5g/kg饲料的添加量给药，第三组用实施例3按照10g/kg饲料的添加量给药，第四组用实施例4按照1.8g/kg饲料的添加量给药，第五组用实施例5按照7g/kg饲料的添加量给药，第六组用实施例6按照2g/kg饲料的添加量给药，第七组用实施例7按照0.8g/kg饲料的添加量给药，第八组用实施例8按照2g/kg饲料的添加量给药；第九组用阿莫西林粉剂按照0.2g/kg饲料的添加量给药，第十组用三叉风粗散剂按照7g/kg饲料的添加量给药；以上十组用药方案均持续使用5天。
效果反馈：第一组至第八组的鸡群用药后，病鸡采食量上升，不再出现死鸡，继续使用3天，鸡群基本痊愈；第九组的鸡群用药2天后，鸡群多数仍不健康，仍有个别鸡死亡，继续使用3天，鸡死亡现象仍没有得到有效控制；第十组的鸡群用药2天后，鸡群没有太大的明显改观，继续使用3天，鸡死亡现象仍没有得到有效控制。可见，含有三叉风的组合物疗效优于单方。
2、实施例9-16所得的组合物产品对23日龄的肉鸭腹泻的疗效实验
临床症状：广西南宁某鸭场，23日龄肉鸭，鸭群拉水样粪便，粪便中有明显的未消化的饲料。鸭群只吃料但不长，个别腹泻严重的鸭逐渐的出现脚软慢慢死亡。
剖检病变：病死鸭脱水比较严重，个别鸭子还是挺大，鸭肝肿大、充血，部分鸭的肝脏上有白色膜，气囊浑浊，初步诊断为大肠杆菌或鸭浆膜炎。
试验用药方案：发病鸭群分10组给药，第一组用实施例9按照0.1g/kg饲料的添加量给药，第二组用实施例10按照10g/kg饲料的添加量给药，第三组用实施例11按照5g/kg饲料的添加量给药，第四组用实施例12按照2.3g/kg饲料的添加量给药，第五组用实施例13按照3g/kg饲料的添加量给药，第六组用实施例14按照1.3g/kg饲料的添加量给药，第七组用实施例15按照0.5g/kg饲料的添加量给药，第八组用实施例16按照0.45g/kg饲料的添加量给药；第九组用头孢噻呋钠粉剂按照0.2g/kg饲料的添加量给药，第十组用三叉风粗散剂按照5g/kg饲料的添加量给药；以上十组用药方案均持续使用5天。
使用效果反馈：第一组至第八组用药2天后，病鸭不再拉水样粪便，粪便成形，不再出现死鸭，继续使用3天，鸭群基本痊愈；第九组用药2天后，鸭群效果不明显，很多还是拉水样粪便，含有未消化的饲料，继续使用3天，稍微有些好转，但没有好彻底，稀水样粪便还是出现，改用实施例14所得的组合物，继续使用2天，才基本痊愈，再使用1天，粪便全部转为正常；第十组用药2天后，鸭没有太大的明显改观，继续使用3天，鸭死亡现象仍没有得到有效控制。可见，含有三叉风的组合物对鸭腹泻的疗效优于单方。
3、实施例17-18所得的组合物产品对25日龄的肉鹅腹泻的疗效实验
临床症状：广西来宾某鹅场，25日龄肉鹅，表现精神不振，食欲减退，不愿走动，头向下弯，嘴触地，腹部膨大，排黄绿色稀粪。
剖检病变：腹腔中充满淡黄色腥臭的液体和破坏了的卵黄，腹腔器官表面有淡黄色、凝固的纤维素性渗出物，初步诊断为大肠杆菌。
试验用药方案：发病鹅群分4组给药，第一组用实施例17按照0.1g/kg饲料的添加量给药，第二组用实施例18按照10g/kg饲料的添加量给药；第三组用头孢曲松钠粉剂按照0.2g/kg饲料的添加量给药，第四组用三叉风粗散剂按照6g/kg饲料的添加量给药；以上四组用药方案均持续使用5天。
使用效果反馈：第一组和第二组用药2天后，病鹅不再拉水样粪便，粪便成形，不再出现死鹅，继续使用3天，鹅群基本痊愈；第三组用药2天后，鹅群效果不明显，很多还是拉水样粪便，含有未消化的饲料，继续使用3天，稍微有些 好转，但没有好彻底，稀水样粪便还是出现，改用实施例17所得的组合物，继续使用2天，才基本痊愈，再使用1天，粪便全部转为正常；第四组用药2天后，鹅没有太大的明显改观，继续使用3天，鹅死亡现象仍没有得到有效控制。可见，含有三叉风的组合物对鹅腹泻的疗效优于单方。
本领域技术人员将认识到，对以上描述做出众多变通是可能的，所以实施例仅是用来描述一个或多个特定实施方式。
尽管已经描述和叙述了被看作本发明的示范实施例，本领域技术人员将会明白，可以对其作出各种改变和替换，而不会脱离本发明的精神。另外，可以做出许多修改以将特定情况适配到本发明的教义，而不会脱离在此描述的本发明中心概念。所以，本发明不受限于在此披露的特定实施例，但本发明可能还包括属于本发明范围的所有实施例及其等同物。