1、技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种主要由甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗宁、苦参素以及水 飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素中的一种或几种和红景天或红景天提取物制成的药物组合物及其制备方法。
2、背景技术
肝脏疾病大体包括肝炎、肝硬化、肝癌等。由肝炎病毒引起的病毒性肝炎一直是全球严重的传染病之 一，更是我国的常见病和多发病，尤其是七十年代以来病毒性肝炎的发生率居高不下，使其患病人群愈来 愈大，如乙肝、丙肝等常见的病毒性肝炎已成为临床难治病，甚至已成为肝硬化、肝癌发病的主要诱因。 由于本类疾病的病因较多，病毒转阴困难，病程较长，部分患者转归预后较差，给患者造成了巨大的身心 痛苦。迄今为止，临床上用于治疗急慢性肝炎的药品较多，西医主要从抗病毒、调节免疫和保护肝功能等 方面治疗，中医则从辨证施治入手治疗。从临床实际看，在改善肝功能方面中西药皆有一定疗效，但在缩 短疗程，促进病毒转阴，预防肝硬化等方面，迄今的治疗药物尚不尽如人意。为肝病临床提供有效，高效， 长效，安全可靠，标本兼治的新药，仍是迫切需要解决的问题。
甘草酸为豆科植物甘草、光果甘草、胀果甘草的根及根茎的精制提取物。由甘草精制提取的甘草酸有 皮质激素样作用，能提高肝炎病人血清氢化可的松的浓度，降低慢性肝炎患者血清及外周单个核细胞中白 介素-6和肿瘤坏死因子，减轻免疫病理反应，促进肝功能恢复，清除症状，缩小肝脾肿大，降酶快，退 黄疸显著。甘草酸单铵和甘草酸二铵分别为甘草酸的单铵盐和二铵盐。甘草酸单铵对各型急慢性肝炎、肝 纤维化、中毒性肝炎、外伤性肝炎以及癌症有一定的辅助治疗作用。甘草酸二铵为20β-羧基-11氧代正齐 墩果烷-12-烯-3β基-2-β-D-葡萄吡喃糖苷醛酸基-α-D-葡萄吡喃糖苷醛酸二铵盐，分子式C42H68N2O16，具有 较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，可阻碍可的松与醛固酮的灭活，从而发挥类固醇样作用， 但无皮质激素的不良反应。
硫普罗宁化学名为N-(2-巯基丙酰基)-甘氨酸，是一种含游离巯基的甘氨酸衍生物。硫普罗宁已收载入 新药转正标准第43册139页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含C5H9NO3S不得少于98.0％。 硫普罗宁临床用于改善各类急慢性肝炎的肝功能，脂肪肝、酒精肝、药物性肝损伤的治疗及重金属的解毒； 硫普罗宁可降低放化疗的毒副作用，并可预防放化疗所致的外周白细胞减少和二次肿瘤的发生；对老年性 早期白内障和玻璃体浑浊有显著的治疗作用。硫普罗宁结构式如下：
硫普罗宁结构式
苦参素是从豆科植物苦豆子、苦参中提取的生物碱，主要成份是氧化苦参碱和极少量的氧化槐果碱。 苦参素已收载入国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第16册363页(国家药典委员会编)，其 中规定含氧化苦参碱(C15H24N2O2)不得少于98.0％。苦参素具有良好的抗病毒作用，近年来对氧化苦参 碱的基础和临床研究发现，该活性成分有良好的抗乙肝病毒(HBV)和丙肝病毒(HCV)的作用，其作用 机理是诱导细胞内细胞因子如IFN、IL-2等的产生，从而加强HBV和HCV基因产物的降解，其化学结构 与嘌呤类似，在细胞或体内可干扰HBV和HCV核酸的合成。另外，苦参素还有改善肝细胞功能、抗肝纤 维化、调节免疫、抗炎、抗肿瘤、清除自由基及抗辐射等多种药理作用。临床主要用于慢性乙肝的治疗及 肿瘤放疗、化疗引起的白细胞低下及其他原因引起的白细胞减少症。氧化苦参碱的结构式如下：
氧化苦参碱结构式
水飞蓟宾为菊科植物水飞蓟(Silybum marianum L.Gaertn)果实提取分离加工而得到的。水飞蓟宾葡 甲胺为水飞蓟宾与葡甲胺的加成物，属水飞蓟宾的水溶性衍生物，已收载入国家药品监督管理局国家药品 标准化学药品地方标准上升国家标准第10册52页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含水 飞蓟素葡甲胺不得少于96.0％；含水飞蓟宾葡甲胺(C25H22O10·C7H17NO5)不得少于75.0％。水飞蓟素为 水飞蓟的果实经提取精制所得的松散粉末，已收载入国家药品监督管理局国家药品标准化学药品地方标准 上升国家标准第7册30页(国家药典委员会编)，其中规定按干燥品计算，含水飞蓟素以水飞蓟宾计算， 不得少于68％，含水飞蓟宾和异水飞蓟宾不得少于30％。水飞蓟宾葡甲胺具有保护及稳定肝细胞膜的作 用，并能促进肝细胞再生，对药物性肝中毒、各种急慢性肝炎、初期肝硬化、脂肪肝有良好的疗效。
红景天是景天科红景天属植物高山红景天(R..hodiola Sachalinensis.A.Bor.)或狭叶红景天 (R.Kirilowii(Regel)Regel[Sedum Ki rilowii Regel])的干燥全草。最早载于《四部医典》，为常用的藏族用药。 具有扶正固本、调和阴阳、益气补血、通脉养心、健脑益智、滋补强身的功效。现代药理学研究表明，红 景天的主要有效成分红景天多糖，具有抗衰老、抗疲劳、抗病毒、抗缺氧、免疫调节、抗微波辐射、干预 肝纤维化作用以及对血压、血糖的双向调节作用。
目前，利用甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗宁、苦参素以及水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素中 的一种或几种和红景天或红景天多糖的相互作用，配伍组方，用于制备治疗肝脏疾病的药物，尚未见报道。
3、发明内容
为了满足临床需要，扩大用药品种，更好的治疗肝脏疾病，提高患者的生活质量，本发明提供了一种 新的药物组合物及其制备方法，该药物组合物主要由甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗宁、苦参素以 及水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素中的一种或几种和红景天或红景天多糖制成，在用于治疗肝炎、肝损伤、 肝纤维化等方面，产生了意想不到的效果。
上述药物组合物，其原料药的重量份数为：甘草酸或其药学上可接受的盐4～800份、硫普罗宁20～ 500份、苦参素80～2000份、水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素20～500份、红景天200～5000份，优选为： 甘草酸或其药学上可接受的盐10～400份、硫普罗宁50～200份、苦参素200～800份、水飞蓟宾或其衍 生物或水飞蓟素50～200份、红景天500～2000份，最优为：甘草酸或其药学上可接受的盐20～200份、 硫普罗宁100份、苦参素400份、水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素100份、红景天1000份。
甘草酸药学上可接受的盐可以是金属盐或有机氮盐，金属盐可以是钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、锌盐， 有机氮盐可以是甘草酸单铵盐和甘草酸二铵盐，优选甘草酸单铵和甘草酸二铵。其中，甘草酸单铵的最优 份数为：40份，甘草酸二铵的最优份数为：150份。水飞蓟宾的衍生物优选为水飞蓟宾葡甲胺。
本发明药物组合物中的红景天可以用适宜的溶剂和方法经过提取加工得到红景天提取物，红景天提取 物再与甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗宁、苦参素以及水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素中的一种或 几种以及药学上可接受的辅料混合制成任一制剂。提取溶剂优选水和乙醇，提取方法可以为浸渍法、渗漏 法、煎煮法、回流提取法或连续提取法。红景天提取物的主要有效成分为红景天多糖，有效成分的含量不 低于30％，最好不低于80％。
本发明提供了一种优选的红景天提取工艺，具体如下：
取红景天药材，粉碎，过40目筛，加8～14倍量水，浸泡半小时，放入超声提取灌中，超声振荡提取 0.5～1h，振荡频率为20～80kHz，提取3～4次，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩成浸膏。在浸膏中加入 30～40倍量60℃～80℃的水，搅拌，静置，倾出上清液，减压浓缩至1ml药液中含1g药材，加入乙醇至含 醇量为70％～90％，静置24h，滤过，收集沉淀，将沉淀用20～30倍量的水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的 同时加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，再加乙醇至含醇量至80％，静置24h， 滤过，收集沉淀，沉淀用无水乙醇反复洗涤多次，再加水溶解，用截留分子量为10000～20000的超滤膜超 滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得红景天多糖。
通过本工艺制备的红景天提取物的得率为1.8～2.5％，红景天提取物中多糖的含量不低于80％。
方法一：取红景天药材，粉碎，置烧瓶中，将此烧瓶放入MCL-3型连续微波反应器中，调整功率为 560W，加水提取三次，每次加水6～8倍量，反应20分钟～1小时，抽滤，合并滤液，滤液水浴浓缩至原 体积的1/3时，加入石油醚脱脂，水液加入0.1％活性炭脱色，过滤，滤液加入乙醇使含醇量达80％，静置 过夜，滤过，滤渣用丙酮反复洗涤，挥干溶剂后加水加热溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸的同时加温，煮沸 后离心除去沉淀物，继续加鞣酸至溶液不产生混浊，再加入乙醇使含醇量达80％，静置过夜，滤过，滤渣 用无水乙醇洗涤多次，挥干溶剂，真空干燥，得红景天多糖。
通过本工艺制备的红景天提取物的得率为2～3％，红景天提取物中多糖的含量不低于50％。
红景天除采用上述方法提取外，还可以通过以下方法提取制备，但不仅限于下列方法：
方法二：取红景天药材置烧瓶中，将此烧瓶放入MCL-3型连续微波反应器中，依次用250ml石油醚(60～ 90℃)、乙醚和80％乙醇回流提取，调整功率为400W，反应时间为20min，提取液弃去，药渣挥干溶剂后， 再放入MCL-3型连续微波反应器中，加水提取三次，每次加8倍量水，提取20min，调整功率为560W。减 压浓缩至一半体积，加入0.1％活性炭，脱色，过滤，滤液加入乙醇至含醇量为80％，静置过夜，过滤，滤 渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，再加水加热溶解，静置，离心去沉淀，上清液再加乙醇至含醇量为80％， 静置过夜，过滤，滤渣用无水乙醇反复洗涤，挥干乙醇，60℃烘干，得红景天多糖。
通过本工艺制备的红景天提取物的得率为2.5～3.5％，红景天提取物中多糖的含量不低于30％。
本发明药物组合物还可以用甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗宁、苦参素、水飞蓟宾或其衍生物 或水飞蓟素中的一种或几种和红景天多糖直接投料制备，根据提取物相对于药材的得率计算，本发明药物 组合物的原料药重量份数为：甘草酸或其药学上可接受的盐4～800份、硫普罗宁20～500份、苦参素80～ 2000份、水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素20～500份、红景天多糖1～100份，优选为：甘草酸或其药学 上可接受的盐10～400份、硫普罗宁50～200份、苦参素200～800份、水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素 50～200份、红景天多糖10～50份，最优为：甘草酸或其药学上可接受的盐20～200份、硫普罗宁100份、 苦参素400份、水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素100份、红景天多糖18～25份。
上述药物组合物的原料药中红景天多糖中多糖的含量不低于30％，最好不低于80％。
以上组成是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为 单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间的重量配比 不变。以上组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成100～10000 支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减 少不超过100％。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具 有较好疗效。
本发明药物组合物具有抗病毒、改善肝细胞功能、抗肝纤维化、调节免疫、抗炎、清除自由基等多种 药理活性，可以用于治疗各种肝脏疾病：包括病毒性、药物毒性、酒精毒性(包括酒精性脂肪肝、酒精性 肝纤维化、酒精性肝硬化、急性酒精性肝炎)及其它化学物质毒性引起的肝脏损害。
本发明药物组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这 种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗 粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其 它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉 针、无菌粉针、输液等。本发明药物组合物的优选剂型是注射剂和口服制剂。
本发明药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的 载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、 表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明药物组合物在制成口服制剂时，可选择的填充剂有：淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊 精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；可选择的粘合剂有：羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟 丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、预胶化淀粉等；可选择的崩解剂有：干 淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；可选择的润滑剂有： 硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。
本发明药物组合物在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80等助溶剂。输液中可 以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖 醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、 山梨醇、蔗糖、甘氨酸、氯化钠等。
本发明组合物具有以下优点：
(1)首次提供了一种由甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗宁、苦参素、水飞蓟宾或其衍生物或 水飞蓟素中的一种或几种和红景天或其提取物配伍，用于治疗肝脏疾病的药物组合物及其制备方法，满足 了临床急需；
(2)首次对本发明药物组合物的相互作用和配伍组方进行了药理药效学研究，发现本发明组合物对 醋氨酚、四氯化碳、D-氨基半乳糖引起的小鼠肝损伤有保护作用，有抗鸭乙肝病毒作用，以及提高免疫力 作用，且本发明药物组合物与单用甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗宁、苦参素、水飞蓟宾或其衍生 物或水飞蓟素相比，统计学差异均显著，表明红景天或其提取物和甘草酸或其药学上可接受的盐、硫普罗 宁、苦参素、水飞蓟宾或其衍生物或水飞蓟素合用治疗肝脏疾病，协同增效，效果显著，其结果是本技术 领域的普通技术人员所意想不到的；
(3)本发明药物组合物的各制剂制备工艺简单，药品质量均匀稳定；
(4)进行的稳定性实验表明本发明药物组合物注射液各项指标均比较稳定，保证了临床用药的安全；
(5)本发明药物组合物合并用药疗效确切，且减小了相对用药剂量，具有广泛的应用前景。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述的药物组合物的有益效果。下列实验例中：红景天或红景天 多糖与甘草酸单铵或甘草酸二铵的组合物以下简称 HG组合物；红景天或红景天多糖和硫普罗宁的组合物 以下简称 HL组合物；红景天或红景天多糖和苦参素的组合物以下简称 HK组合物；红景天或红景天多糖和 水飞蓟宾的组合物以下简称 HS组合物。实验例中所用的红景天多糖均取自实施例1。
实验例1 HG、HL、HK、HS组合物对醋氨酚所致小鼠肝损伤的保护作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水，自制；
甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液，规格：10ml:150mg，自制；
硫普罗宁组：硫普罗宁注射液，2ml:0.1g，沈阳光大制药有限公司；
苦参素组：苦参素注射液，2ml:0.2g，天津市生物化学制药厂；
水飞蓟宾葡甲胺组：水飞蓟宾葡甲胺注射液，2ml:100mg，自制；
HG注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方1)，分为低、中、高三个剂量组；
HL注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方2)，分为低、中、高三个剂量组；
HK注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方3)，分为低、中、高三个剂量组；
HS注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方4)，分为低、中、高三个剂量组。
实验动物：ICR小鼠，体重18～25g，雌雄各半。
实验方法：取小鼠190只，随机分成空白对照组、模型组、红景天多糖组、甘草酸二铵组、硫普罗宁 组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组、HG、HL、HK、HS组合物各剂量组19组，每组10只。空白对照组 和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续10d；给药组尾静脉注射给药，每日1次，剂 量见下表，连续10d。空白对照组在最后一次尾静脉注射6h后腹腔注射生理盐水。模型组和给药组在最后 一次尾静脉注射6h后腹腔注射醋氨酚300mg/kg，各组在腹腔注射生理盐水及醋氨酚16h后断头，取血液、 肝脏，进行生化指标血清ALT(谷丙转氨酶)和肝组织LPO(过氧化脂质)的测试，结果见表1。
实验结果：见表1。
(1)与空白对照组相比，模型组ALT和LPO的活性显著升高，差异极显著(p＜0.01)，说明造模成功。
(2)与模型组相比，甘草酸二铵组、硫普罗宁组、苦参素组和水飞蓟宾葡甲胺组ALT和LPO的活性明 显降低(p＜0.05)，HG、HL、HK、HS组合物各剂量组ALT和LPO的活性显著降低(p＜0.01)，说明各给药组均 对醋氨酚所致小鼠肝损伤有保护作用。
(3)与红景天多糖组相比，HG、HL、HK、HS组合物各剂量组ALT和LPO的活性均显著降低(p＜0.01)。
(4)与甘草酸二铵组相比，HG组合物各剂量组ALT和LPO的活性均显著降低(p＜0.01)。
(5)与硫普罗宁组相比，HL组合物各剂量组ALT和LPO的活性均显著降低(p＜0.01)。
(6)与苦参素组相比，HK组合物低剂量组ALT和LPO的活性明显降低(p＜0.05)，HK组合物高、中剂 量组ALT和LPO的活性显著降低(p＜0.01)。
(7)与水飞蓟宾葡甲胺组相比，HS组合物高、中、低剂量组ALT和LPO的活性均显著降低(p＜0.01)。
结论：与单用甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺相比，红景天或红景天多糖与甘草酸 二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种配伍应用，均可显著降低ALT和LPO的活性。 且效果与给药剂量有关，高剂量组效果最佳。提示，红景天或红景天多糖与甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参 素或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种配伍应用，增强机体免疫力，排斥异常细胞，标本兼治，协同增效。
表1 HG、HL、HK、HS组合物对醋氨酚损伤小鼠肝组织ALT和LPO的影响 组别 给药剂量(mg/kg) 小鼠数量 ALT含量(U/L) LPO含量(nmol/L) 空白对照组 模型组 红景天多糖组 甘草酸二铵组 硫普罗宁组 苦参素组 水飞蓟宾葡甲胺组 - - 20 30 20 80 20 10 10 10 10 10 10 10 52.57±4.18 282.28±17.63&& 269.36±15.77 214.25±12.64* 222.42±13.47* 245.26±10.56* 237.62±14.25* 4.35±0.36 8.57±0.34&& 8.24±0.41 7.57±0.37* 7.59±0.52* 7.65±0.43* 7.68±0.54* HG注射液低剂量组 HG注射液中剂量组 HG注射液高剂量组 10 20 30 10 10 10 142.46±15.35**□□$$ 136.58±13.37**□□$$ 123.46±16.28**□□$$ 5.53±0.26**□□$$ 5.31±0.44**□□$$ 5.24±0.54**□□$$ HL注射液低剂量组 HL注射液中剂量组 HL注射液高剂量组 10 15 20 10 10 10 152.34±11.39**□□## 143.46±13.62**□□## 136.69±13.55**□□## 6.18±0.46**□□## 5.65±0.39**□□## 5.32±0.54**□□## HK注射液低剂量组 HK注射液中剂量组 HK注射液高剂量组 40 60 80 10 10 10 172.74±14.77**□□％ 153.56±12.36**□□％％ 146.65±15.28**□□％％ 6.54±0.46**□□％ 6.14±0.35**□□％％ 5.88±0.53**□□％％ HS注射液低剂量组 HS注射液中剂量组 HS注射液高剂量组 10 15 20 10 10 10 182.52±11.47**□□△△ 163.76±12.48**□□△△ 145.63±11.36**□□△△ 7.14±0.37**□□△△ 6.57±0.42**□□△△ 6.24±0.36**□□△△
注：与空白对照组比较，&&p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与红景天多糖组比较，□□p＜0.01；与甘草酸 二铵组比较，$p＜0.05，$$p＜0.01；与硫普罗宁组比较，#p＜0.05，##p＜0.01；与苦参素组比较，％p＜0.05，％％p＜0.01；与 水飞蓟宾葡甲胺组比较，△p＜0.05，△△p＜0.01。
实验例2 HG、HL、HK、HS组合物对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用
供试品：化学纯CCl4，成都联合化工试剂研究所；
空白对照组：0.9％生理盐水，自制；
甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液，规格：10ml:150mg，自制；
硫普罗宁组：硫普罗宁注射液，2ml:0.1g，沈阳光大制药有限公司；
苦参素组：苦参素注射液，2ml:0.2g，天津市生物化学制药厂；
水飞蓟宾葡甲胺组：水飞蓟宾葡甲胺注射液，2ml:100mg，自制；
HG注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方1)，分为低、中、高三个剂量组；
HL注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方2)，分为低、中、高三个剂量组；
HK注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方3)，分为低、中、高三个剂量组；
HS注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方4)，分为低、中、高三个剂量组。
实验动物：ICR小鼠，体重22～27g，雌雄各半。
实验方法：取小鼠190只，随机分为19组，分别为空白对照组、模型组、红景天多糖组、甘草酸二 铵组、硫普罗宁组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组、HG、HL、HK、HS组合物各剂量组，每组10只。空 白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续7d；给药组尾静脉注射给药，每日 1次，剂量见下表，连续7d。空白对照组在最后一次尾静脉注射2h后腹腔注射花生油10ml/kg，其余各组 动物均腹腔注射0.12％CCl4花生油溶液10ml/kg。16h后断头处死动物，取血清测试ALT、AST的值。断 头取血后，立即剖腹取出肝脏、脾脏，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精确称重肝脏、脾脏的重量，计算肝 指数和脾指数。结果见表2。
表2 HG、HL、HK、HS组合物对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝、脾指数和血清ALT、AST含量的影响 组别 给药剂量 (mg/kg) 小鼠 数量 肝指数 (g/100g) 脾指数 (g/100g) ALT含量 (U/L) AST含量 (U/L) 空白对照组 模型组 红景天多糖组 甘草酸二铵组 硫普罗宁组 苦参素组 水飞蓟宾葡甲胺组 - - 20 30 20 80 20 10 10 10 10 10 10 10 6.132±1.032 8.369±0.657$ 8.043±0.731 7.632±0.654* 7.718±0.648* 7.745±0.568* 7.785±0.625* 0.601±0.147 0.796±0.076$ 0.774±0.064 0.723±0.085* 0.736±0.069* 0.742±0.056* 0.745±0.067* 69.67±17.64 264.23±27.56$$ 213.46±23.49 164.23±21.34* 178.23±18.52* 183.35±15.25* 194.37±18.74* 129.63±27.52 519.66±45.78$$ 457.58±32.48 345.47±34.56* 358.51±28.47* 366.37±27.62* 374.41±24.85* HG注射液低剂量组 HG注射液中剂量组 HG注射液高剂量组 10 20 30 10 10 10 6.928±0.662**□& 6.815±0.639**□&& 6.563±0.734**□&& 0.667±0.082**□& 0.642±0.073**□&& 0.625±0.056**□&& 146.52±28.72**□□& 135.25±34.13**□□&& 126.48±16.87**□□&& 274.65±22.61**□□& 269.53±25.63**□□&& 256.46±23.59**□□&& HL注射液低剂量组 HL注射液中剂量组 HL注射液高剂量组 10 15 20 10 10 10 7.036±0.726*□# 6.759±0.735**□## 6.746±0.674**□## 0.689±0.067**□# 0.652±0.062**□## 0.633±0.065**□## 147.56±25.65**□□# 121.72±22.67**□□## 114.63±19.53**□□## 286.59±32.54**□□# 264.17±26.57**□□## 247.32±28.74**□□## HK注射液低剂量组 HK注射液中剂量组 HK注射液高剂量组 40 60 80 10 10 10 7.153±0.587*□％ 6.855±0.685**□％％ 6.752±0.556**□％％ 0.685±0.069**□％ 0.652±0.077**□％％ 0.641±0.057**□％％ 152.59±28.65**□□％ 138.77±25.87**□□％％ 131.53±33.32**□□％％ 294.36±40.35**□□％ 274.75±36.56**□□％％ 263.32±27.54**□□％％ HS注射液低剂量组 HS注射液中剂量组 HS注射液高剂量组 10 15 20 10 10 10 7.162±0.635*□△△ 6.898±0.746**□△△ 6.735±0.583**□△△ 0.675±0.087**□△△ 0.651±0.057**□△△ 0.634±0.057**□△△ 159.56±37.42**□□△△ 148.35±26.56**□□△△ 123.73±28.55**□□△△ 295.63±26.58**□□△△ 276.55±37.45**□□△△ 265.35±31.72**□□△△
注：与空白对照组比较，$p＜0.05、$$p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05、**p＜0.01；与红景天多糖组比较，□□p＜0.01； 与甘草酸二铵组比较，&p＜0.05、&&p＜0.01；与硫普罗宁组比较，#p＜0.05、##p＜0.01；与苦参素组比较，％p＜0.05、％％p ＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组比较，△△p＜0.01。
实验结果：见表2。
(1)与空白对照组相比，CCl4模型组小鼠肝指数、脾指数均明显增高(p＜0.05)，CCl4模型组小鼠血清 ALT、AST值均显著增高(p＜0.01)，说明小鼠注射CCl4花生油溶液后肝脏损伤，造模成功。
(2)与模型组相比，甘草酸二铵组、硫普罗宁组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组小鼠肝指数、脾指 数、ALT、AST值均明显降低(p＜0.05)，HG、HL、HK、HS组合物各剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、 AST值显著降低(p＜0.01)，说明各药对CCl4所致急性肝损伤均有保护作用。
(3)与红景天多糖组相比，HG、HL、HK、HS组合物各剂量组小鼠肝指数、脾指数明显降低(p＜0.05)， ALT、AST值显著降低(p＜0.01)。
(4)与甘草酸二铵组相比，HG组合物低剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值明显降低(p＜0.05)， HG组合物高、中剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值显著降低(p＜0.01)。
(5)与硫普罗宁组相比，HL组合物低剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值明显降低(p＜0.05)， HL组合物高、中剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值显著降低(p＜0.01)。
(6)与苦参素组相比，HK组合物低剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值明显降低(p＜0.05)， HK组合物高、中剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值显著降低(p＜0.01)。
(7)与水飞蓟宾葡甲胺组相比，HS组合物各剂量组小鼠肝指数、脾指数、ALT、AST值均显著降低 (p＜0.01)。
结论：与单用甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺相比，红景天或红景天多糖与甘草酸 二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种配伍应用，均可显著降低小鼠肝指数、脾指数、 ALT、AST值。且效果与给药剂量有关，高剂量组效果最佳。提示，红景天或红景天多糖与甘草酸二铵、 硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种配伍应用，标本兼治，协同增效。
实验例3HG、HL、HK、HS组合物对D-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤的保护作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水，自制；
甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液，规格：10ml:150mg，自制；
硫普罗宁组：硫普罗宁注射液，2ml:0.1g，沈阳光大制药有限公司；
苦参素组：苦参素注射液，2ml:0.2g，天津市生物化学制药厂；
水飞蓟宾葡甲胺组：水飞蓟宾葡甲胺注射液，2ml:100mg，自制；
HG注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方1)，分为低、中、高三个剂量组；
HL注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方2)，分为低、中、高三个剂量组；
HK注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方3)，分为低、中、高三个剂量组；
HS注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方4)，分为低、中、高三个剂量组。
实验动物：ICR小鼠，体重20～25g，雌雄各半。
实验方法：取小鼠190只，随机分为19组，分别为空白对照组、模型组、红景天多糖组、甘草酸二 铵组、硫普罗宁组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组、HG、HL、HK、HS组合物各剂量组，每组10只。空 白对照组和模型组每日尾静脉注射生理盐水20ml/kg，每日1次，连续10d；给药组尾静脉注射给药，每日 1次，剂量见下表，连续10d。空白对照组在最后一次尾静脉注射1h后腹腔注射生理盐水，其余各组动物 均腹腔注射100g/L的D-氨基半乳糖500g/kg。24h后处死动物取血，离心，取血清，全自动生化分析仪检 测，检测指标为谷草转氨酶(AST)、血清白蛋白(ALB)。处死前动物断尾取血玻片法测定动物凝血时间(CT)。 结果见表3。
表3 HG、HL、HK、HS组合物对D-氨基半乳糖致急性肝损伤小鼠
血清AST、ALB含量和凝血时间(CT)的影响 组别 给药剂量 (mg/kg) 小鼠 数量 AST含量 (U/L) ALB含量 (g/L) CT (s) 空白对照组 模型组 红景天多糖组 甘草酸二铵组 硫普罗宁组 苦参素组 水飞蓟宾葡甲胺组 - - 20 30 20 80 20 10 10 10 10 10 10 10 256.5±28.7 423.6±37.3◇◇◇ 385.45±46.68 348.64±28.56* 353.33±29.28* 355.68±34.71* 363.16±35.73* 33.56±2.37 15.34±1.68◇◇ 17.53±1.76 21.35±2.66* 20.87±1.68* 19.95±2.34* 19.52±2.28* 11.55±2.36 29.51±5.75◇◇◇ 25.35±4.26 20.56±3.44* 21.82±3.76* 22.57±2.95* 22.88±4.53* HG注射液低剂量组 HG注射液中剂量组 HG注射液高剂量组 10 20 30 10 10 10 294.36±28.85**□□& 275.56±32.35**□□&& 268.55±30.25**□□&& 26.62±2.37**□□& 28.55±2.58**□□&& 29.23±1.87**□□&& 16.37±4.36**□□& 15.58±4.35**□□& 13.45±3.38**□□&& HL注射液低剂量组 HL注射液中剂量组 HL注射液高剂量组 10 15 20 10 10 10 283.66±30.52**□□## 277.56±35.63**□□## 271.25±26.45**□□## 25.32±1.79**□□# 28.15±1.96**□□## 28.32±2.72**□□## 16.66±4.53**□□# 14.32±3.45**□□## 13.89±4.82**□□## HK注射液低剂量组 HK注射液中剂量组 HK注射液高剂量组 40 60 80 10 10 10 293.45±35.43**□□％ 287.72±32.57**□□％％ 280.25±25.43**□□％％ 26.52±1.87**□□％％ 27.02±2.32**□□％％ 27.25±3.12**□□％％ 16.95±3.66**□□％％ 14.93±3.78**□□％％ 14.33±3.62**□□％％ HS注射液低剂量组 HS注射液中剂量组 HS注射液高剂量组 10 15 20 10 10 10 297.53±25.71**□□△△ 283.32±28.36**□□△△ 277.87±31.35**□□△△ 25.36±2.33**□□△△ 26.51±2.35**□□△△ 27.63±1.68**□□△△ 16.68±4.64**□□△△ 15.12±4.81**□□△△ 14.53±5.51**□□△△
注：与空白对照组比较，◇◇p＜0.01、◇◇◇p＜0.001；与模型组比较，*p＜0.05、**p＜0.01；与红景天多糖组比较，□□p＜ 0.01；与甘草酸二铵组比较，&p＜0.05、&&p＜0.01；与硫普罗宁组比较，#p＜0.05、##p＜0.01；与苦参素组比较，％p＜0.05、 ％％p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺组比较，△△p＜0.01。
实验结果：见表3。
(1)与空白对照组相比，模型组谷草转氨酶(AST)的活性极显著升高(p＜0.001)，血清白蛋白(ALB)数 量显著减少(p＜0.01)，凝血时间(CT)极显著延长(p＜0.001)，说明造模可靠。
(2)与模型组相比，甘草酸二铵组、硫普罗宁组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组谷草转氨酶(AST)的 活性明显降低(p＜0.05)，血清白蛋白(ALB)数量明显增加(p＜0.05)，凝血时间(CT)明显缩短(p＜0.05)，各组合 物各剂量组谷草转氨酶(AST)的活性显著降低(p＜0.01)，血清白蛋白(ALB)数量显著增加(p＜0.01)，凝血时间 (CT)显著缩短(p＜0.01)，说明各药均有保肝作用，对D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤有保护作用。
(3)与红景天多糖组相比，HG、HL、HK、HS组合物各剂量组小鼠谷草转氨酶(AST)的活性显著降 低(p＜0.01)，血清白蛋白(ALB)数量显著增加(p＜0.01)，凝血时间(CT)显著缩短(p＜0.01)。
(4)与甘草酸二铵组相比，HG组合物低剂量组小鼠谷草转氨酶(AST)的活性明显降低(p＜0.05)，血清 白蛋白(ALB)数量明显增加(p＜0.05)，HG组合物高、中剂量组小鼠谷草转氨酶(AST)的活性显著降低 (p＜0.01)，血清白蛋白(ALB)数量显著增加(p＜0.01)，HG组合物中、低剂量组小鼠凝血时间(CT)明显缩短 (p＜0.05)，HG组合物高剂量组小鼠凝血时间(CT)显著缩短(p＜0.01)。
(5)与硫普罗宁组相比，HL组合物各剂量组谷草转氨酶(AST)的活性均显著降低(p＜0.01)，HL组合物 高、中剂量组小鼠血清白蛋白(ALB)数量显著增加(p＜0.01)，凝血时间(CT)显著缩短(p＜0.01)，HL组合物低 剂量组小鼠血清白蛋白(ALB)数量明显增加(p＜0.05)，凝血时间(CT)明显缩短(p＜0.05)。
(6)与苦参素组相比，HK组合物低剂量组小鼠谷草转氨酶(AST)的活性明显降低(p＜0.05)，HK组合 物高、中剂量组小鼠谷草转氨酶(AST)的活性显著降低(p＜0.01)，HK组合物各剂量组小鼠的血清白蛋白 (ALB)数量均显著增加(p＜0.01)，凝血时间(CT)均显著缩短(p＜0.01)。
(7)与水飞蓟宾葡甲胺组相比，HS组合物各剂量组小鼠谷草转氨酶(AST)的活性均显著降低(p＜0.01)， 血清白蛋白(ALB)数量均显著增加(p＜0.01)，凝血时间(CT)均显著缩短(p＜0.01)。
结论：与单用甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺相比，红景天或红景天多糖与甘草酸 二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种配伍应用，均可显著降低小鼠谷草转氨酶(AST) 的活性、显著增加血清白蛋白(ALB)的数量、显著缩短凝血时间(CT)。且效果与给药剂量有关，高剂量组 效果最佳。提示，红景天或红景天多糖与甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种 配伍应用，标本兼治，协同增效，具有更好的保肝作用。
实验例4HG、HL、HK、HS组合物抗鸭乙肝病毒作用
供试品：空白对照组：0.9％生理盐水，自制；
注射用阿昔洛韦，0.25g，石药集团中诺药业(石家庄)有限公司；
甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液，规格：10ml:150mg，自制；
硫普罗宁组：硫普罗宁注射液，2ml:0.1g，沈阳光大制药有限公司；
苦参素组：苦参素注射液，2ml:0.2g，天津市生物化学制药厂；
水飞蓟宾葡甲胺组：水飞蓟宾葡甲胺注射液，2ml:100mg，自制；
HG注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方1)，分为低、中、高三个剂量组；
HL注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方2)，分为低、中、高三个剂量组；
HK注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方3)，分为低、中、高三个剂量组；
HS注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方4)，分为低、中、高三个剂量组。
实验动物：市售1日龄北京鸭；
DHBV(鸭乙型肝炎病毒)阳性血清，复旦大学医学院微生物学教研室。
实验方法：
动物模型北京鸭经足静脉注射0.2mlDHBV阳性血清，7d后取血，分离血清，-20℃保存待检。
药物治疗筛选出感染成功的阳性鸭114只，随机分为19组，分别为空白对照组、模型组、红景天多 糖组、甘草酸二铵组、硫普罗宁组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组、HG、HL、HK、HS组合物各剂量组， 每组6只。空白对照组每日腹腔注射生理盐水20ml/kg，每日2次，连续14d；给药组腹腔注射给药，每日 2次，剂量见下表，连续14d。阳性药物作为治疗对照组，以阿昔洛韦(ACV)按100mg/kg腹腔注射，2 次/d，给药2周。分别用于药前(1d)、用药第7天(T7)，用药第14天(T14)和停药后第7天(P7)。自鸭腿胫静 脉取血，分离血清，-20℃保存待检。采用DHBV-DNA Dot Blot法，以杂交斑点吸光度值(A)作为标本 DHBV-DNA水平值。结果见表4。
表4 HG、HL、HK、HS组合物对DHBV-DNA的抑制作用 组别 给药剂量 (mg/kg) 治疗前 DHBV-DNA滴度 治疗后7d DHBV-DNA滴度 治疗后14d DHBV-DNA滴度 停药后7d DHBV-DNA滴度 空白对照组 阿昔洛韦组 红景天多糖组 甘草酸二铵组 硫普罗宁组 苦参素组 水飞蓟宾葡甲胺组 - - 20 30 20 80 20 1.65±0.05 1.68±0.09 1.69±0.13 1.67±0.05 1.68±0.14 1.63±0.12 1.65±0.13 1.66±0.06 0.78±0.06** 1.57±0.08 1.32±0.10* 1.35±0.12* 1.45±0.08* 1.41±0.13* 1.65±0.07 0.65±0.05** 1.51±0.06 1.21±0.11* 1.25±0.13* 1.36±0.09* 1.35±0.10* 1.67±0.05 1.64±0.07 1.53±0.07 1.25±0.06* 1.33±0.08* 1.38±0.08* 1.36±0.12* HG注射液低剂量组 HG注射液中剂量组 HG注射液高剂量组 10 20 30 1.68±0.06 1.67±0.11 1.68±0.08 1.16±0.05**□□& 1.12±0.12**□□& 1.11±0.10**□□& 0.85±0.12**□□& 0.78±0.08**□□& 0.73±0.07**□□& 0.92±0.09**□□& 0.83±0.11**□□& 0.79±0.12**□□& HL注射液低剂量组 HL注射液中剂量组 HL注射液高剂量组 10 15 20 1.64±0.12 1.66±0.11 1.65±0.08 1.20±0.08**□□# 1.18±0.11**□□# 1.15±0.13**□□# 0.83±0.13**□□# 0.78±0.11**□□# 0.76±0.08**□□# 0.86±0.07**□□# 0.85±0.13**□□# 0.81±0.10**□□# HK注射液低剂量组 HK注射液中剂量组 HK注射液高剂量组 40 60 80 1.67±0.13 1.66±0.07 1.69±0.05 1.19±0.09**□□％ 1.16±0.07**□□％ 1.13±0.13**□□％ 0.85±0.11**□□％ 0.80±0.09**□□％ 0.77±0.12**□□％ 0.87±0.12**□□％ 0.83±0.09**□□％ 0.80±0.07**□□％ HS注射液低剂量组 HS注射液中剂量组 HS注射液高剂量组 10 15 20 1.65±0.13 1.67±0.12 1.68±0.10 1.22±0.09**□□△ 1.17±0.12**□□△ 1.15±0.07**□□△ 0.93±0.07**□□△ 0.87±0.12**□□△ 0.82±0.09**□□△ 1.13±0.08**□□△ 0.96±0.09**□□△ 0.93±0.07**□□△
注：与空白对照组比较，*p＜0.05、**p＜0.01：与红景天多糖组比较，□□p＜0.01；与甘草酸二铵组比较，&p＜0.05；与 硫普罗宁组比较，#p＜0.05；与苦参素组比较，％p＜0.05；与水飞蓟宾葡甲胺组比较，△p＜0.05。
实验结果：见表4。
(1)与空白对照组相比，阳性对照(阿昔洛韦)组在给药后第7天和第14天的DHBV-DNA滴度均 显著降低(p＜0.01)，但停药后又显著升高，与给药前比较差异无显著性(p＞0.05)；甘草酸二铵组、硫普罗宁 组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组在给药后第7天和第14天的DHBV-DNA滴度均有明显降低(p＜0.05)， 停药后与给药前仍有明显差异，无反跳现象；HG、HL、HK、HS各组合物各剂量组在给药后第7天和第 14天的DHBV-DNA滴度均显著降低(p＜0.01)，停药后与给药前仍有显著差异，无反跳现象
(2)与红景天多糖组相比，HG、HL、HK、HS组合物各剂量组在给药后第7天和第14天以及停药 后7天的DHBV-DNA滴度均显著降低(p＜0.01)。
(3)与甘草酸二铵组相比，HG组合物各剂量组在给药后第7天和第14天以及停药后7天的DHBV-DNA 滴度均明显降低(p＜0.05)。
(4)与硫普罗宁组相比，HL组合物各剂量组在给药后第7天和第14天以及停药后7天的DHBV-DNA滴 度均明显降低(p＜0.05)。
(5)与苦参素组相比，HK组合物各剂量组在给药后第7天和第14天以及停药后7天的DHBV-DNA滴度 均明显降低(p＜0.05)。
(6)与水飞蓟宾葡甲胺组相比，HS组合物各剂量组在给药后第7天和第14天以及停药后7天的 DHBV-DNA滴度均明显降低(p＜0.05)。
结论：实验结果表明，本发明药物组合物有明显的抗鸭乙肝病毒作用，且无反跳现象。与单用甘草酸 二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺相比，红景天或红景天多糖与甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参素 或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种配伍应用，DHBV-DNA滴度均明显降低，表明组成组合物应用，标本兼 治，协同增效，有更好的治疗效果。
实验例5HG、HL、HK、HS组合物的免疫活性
供试品与材料：
空白对照组：0.9％生理盐水注射液，市购；
甘草酸二铵组：甘草酸二铵注射液，规格：10ml:150mg，自制；
硫普罗宁组：硫普罗宁注射液，2ml:0.1g，沈阳光大制药有限公司；
苦参素组：苦参素注射液，2ml:0.2g，天津市生物化学制药厂；
水飞蓟宾葡甲胺组：水飞蓟宾葡甲胺注射液，2ml:100mg，自制；
HG注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方1)，分为低、中、高三个剂量组；
HL注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方2)，分为低、中、高三个剂量组；
HK注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方3)，分为低、中、高三个剂量组；
HS注射液组：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方4)，分为低、中、高三个剂量组。
实验动物分组：昆明种幼鼠180只，雌雄兼用，体重11g～15g，随机分为18组，分别为空白对照组、 红景天多糖组、甘草酸二铵组、硫普罗宁组、苦参素组、水飞蓟宾葡甲胺组、HG、HL、HK、HS组合物 各剂量组，每组10只。
实验方法：各实验组幼鼠分别腹腔注射相应药物，所有剂量均配置成0.3ml/只，对照组腹腔注射等量 生理盐水，给药7d，每天1次。于末次给药24h后，摘眼球放血处死，称体重及胸腺、脾脏重量，计算胸 腺或脾指数，胸腺或脾指数＝胸腺或脾重(mg)/体重(g)，结果见表5。
实验结果：见表5。
(1)与空白对照组相比，红景天多糖组可明显增加幼鼠的胸腺和脾脏重量(p＜0.05)；HG、HL、HK、 HS各组合物各剂量组均可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重量(p＜0.05、p＜0.01)。
(2)与红景天多糖组相比，HG、HL、HK、HS各组合物各剂量组均可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重 量(p＜0.05、p＜0.01)。
(3)与甘草酸二铵组相比，HG组合物各剂量组均可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重量(p＜0.05、p＜0.01)。
(4)与硫普罗宁组相比，HL组合物各剂量组均可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重量(p＜0.05、p＜0.01)。
(5)与苦参素组相比，HK组合物各剂量组均可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重量(p＜0.05、p＜0.01)。
(6)与水飞蓟宾葡甲胺组相比，HS组合物各剂量组均可显著增加幼鼠的胸腺和脾脏重量(p＜0.05、 p＜0.01)。
表5各组对小鼠免疫器官重量的影响(x±s，n＝10) 组别 给药剂量(mg/kg) 胸腺指数(Kt) 脾指数(Ks) 空白对照组 红景天多糖组 甘草酸二铵组 硫普罗宁组 苦参素组 水飞蓟宾葡甲胺组 - 20 30 20 80 20 3.46±0.35 4.35±0.43* 3.68±0.32 3.71±0.36 3.66±0.42 3.74±0.35 4.59±0.61 5.33±0.52* 4.73±0.46 4.69±0.51 4.71±0.56 4.75±0.53 HG注射液低剂量组 HG注射液中剂量组 HG注射液高剂量组 10 20 30 4.88±0.45*□& 4.96±0.37*□& 5.48±0.32**□□&& 5.83±0.66*□& 6.15±0.62**□□&& 6.43±0.55**□□&& HL注射液低剂量组 HL注射液中剂量组 HL注射液高剂量组 10 15 20 4.69±0.38*□# 5.37±0.45**□□## 5.64±0.34**□□## 6.03±0.61**□□## 6.23±0.51**□□## 6.52±0.34**□□## HK注射液低剂量组 HK注射液中剂量组 HK注射液高剂量组 40 60 80 4.96±0.35*□％ 5.28±0.37**□□％％ 5.34±0.46**□□％％ 6.13±0.46**□□％％ 6.39±0.41**□□％％ 6.63±0.52**□□％％ HS注射液低剂量组 HS注射液中剂量组 HS注射液高剂量组 10 15 20 4.86±0.33*□△ 5.16±0.36**□□△△ 5.37±0.43**□□△△ 5.85±0.36*□△ 6.28±0.45**□□△△ 6.46±0.53**□□△△
注：与空白对照组比较，*p＜0.05、**p＜0.01；与红景天多糖组比较，□p＜0.05、□□p＜0.01；与甘草酸二铵组比较，&p ＜0.05、&&p＜0.01；与硫普罗宁组比较，#p＜0.05、##p＜0.01；与苦参素组比较，％p＜0.05、％％p＜0.01；与水飞蓟宾葡甲胺 组比较，△p＜0.05、△△p＜0.01。
结论：实验结果表明，与单用甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺相比，红景天或红景 天多糖与甘草酸二铵、硫普罗宁、苦参素或水飞蓟宾葡甲胺中的任一一种配伍应用，幼鼠的胸腺和脾脏重 量均显著增加，且与红景天多糖组相比有显著差异性，表明组成组合物应用有协同增效作用。
实验例6HG、HL、HK、HS组合物注射液稳定性实验
供试品：HG注射液：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方1)；
HL注射液：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方2)；
HK注射液：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方3)；
HS注射液：自制(处方和制备方法参见实施例3中水针剂处方4)。
考察项目：性状、pH值、澄明度。
长期稳定性实验方法及结果：将本品各组合物置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置 6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明本品组合物注射液长期放置基本稳定。
4、具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为 本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。 以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。实施例2～8中所用的红景 天多糖均取自实施例1。
实施例1红景天多糖的制备
取红景天药材，粉碎，过40目筛，加10倍量水，浸泡半小时，放入超声提取灌中，超声振荡提取40min， 振荡频率为60kHz，提取3次，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩成浸膏。在浸膏中加入30倍量60℃的水， 搅拌，静置，倾出上清液，减压浓缩至1ml药液中含1g药材，加入乙醇至含醇量为80％，静置24h，滤过， 收集沉淀，将沉淀加30倍量的水溶解，在搅拌下滴加1％鞣酸，加温，煮沸后离心除去沉淀物，继续加鞣 酸至溶液不产生混浊，再加乙醇至含醇量为80％，静置24h，滤过，收集沉淀，沉淀用无水乙醇反复洗涤 多次，再加水溶解，用截留分子量为10000～20000的超滤膜超滤，收集未通过液，减压浓缩，干燥，即得 红景天多糖。
红景天多糖的鉴别：
对照品溶液的制备：精密称取D-葡萄糖、D-果糖对照品适量，加70％的乙醇定容至5ml，使D-葡萄 糖的浓度为10mg/ml，D-果糖的浓度为20mg/ml。
供试品溶液的制备：取红景天多糖5mg，加5ml水溶解，加入D101大孔树脂柱中净化处理，用蒸馏 水洗脱，收集水洗脱液20ml，水浴蒸干，用70％乙醇溶解定容至5ml。
将上述两种溶液分别点于同一块硅胶G-0.3mol/L NaH2PO4的3％CMC-Na板上，用正丁醇-丙酮-水(10∶ 10∶2.5)或正丁醇-甲醇-丙酮-水(10∶4∶8∶2.5)饱和30min，展开，取出，凉干后喷苯胺-邻苯二甲酸- 正丁醇试剂，于105℃烘10min。色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。
红景天多糖的含量测定：
标准曲线的制备：精密称取D-葡萄糖对照品(105℃干燥至恒重)约50mg，置100ml容量瓶中，加蒸 馏水溶解并稀释至刻度。
精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0和5.0ml，分别置于50ml容量瓶中，加水至刻度摇匀。精密吸 取上述各浓度溶液各2.0ml，另精密吸取蒸馏水2ml作为空白对照，置具塞试管中，分别加入5％苯酚溶液 1.0ml混匀，迅速加入浓硫酸5.0ml，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，然后置冷水浴中冷却30min， 在波长510nm处测定吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘标准曲线。
供试品的制备：精密称取105℃干燥至恒重的红景天多糖50mg，共3份，置小烧杯中加热溶解，移入 1000ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
测定：精密吸取上述3种供试品溶液各2ml，按标准曲线自“精密吸取上述各浓度溶液各2.0ml”之后 方法操作，测定吸收度，带入标准曲线中，读数，即得。
按照上述方法制备三批红景天多糖，多糖含量和得率见表6。从结果可以看出，通过本工艺得到的红 景天多糖的得率为1.8～2.5％，红景天多糖的含量不低于80％。
表6红景天提取物的含量测定结果和得率 批次 多糖含量(％) 得率(％) 1 2 3 平均 81.55 83.82 85.67 83.68 1.85 2.00 2.18 2.01
实施例2HG、HL、HK、HS组合物粉针剂的制备
1、处方：
处方1：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
甘草酸单铵 40g
聚山梨酯80 35g
甘露醇 300g
无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
处方2：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
硫普罗宁 100g
聚山梨酯80 35g
甘露醇 300g
无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
处方3：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
苦参素 400g
聚山梨酯80 35g
甘露醇 300g
无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
处方4：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
水飞蓟宾葡甲胺 100g
聚山梨酯80 35g
甘露醇 300g
无菌注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
2、具体步骤：
1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)取配液量60％的无菌注射用水，将红景天多糖和甘露醇加入加热搅拌溶解完全，取配液量20％的 无菌注射用水加入处方量的聚山梨酯80加热搅拌溶解完全，再加入甘草酸单铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾 葡甲胺搅拌溶解完全，两溶液混合均匀，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
6)经0.22μm的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-40℃3小时，低温真空干 燥-40℃～0℃35小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例3HG、HL、HK、HS组合物水针剂的制备
1、处方：
处方1：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
甘草酸二铵 150g
注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
处方2：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
硫普罗宁 100g
注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
处方3：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
苦参素 400g
注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
处方4：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
水飞蓟宾葡甲胺 100g
注射用水 加至5000ml
共制备 1000支
2、具体步骤：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)取配液量60％的注射用水，加入处方量的红景天多糖和甘草酸二铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾葡 甲胺搅拌溶解，补加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
5)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
6)检查溶液的澄明度，半成品检验。
7)将药液灌装、熔封于玻璃安瓿中。
8)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
9)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例4HG、HL、HK、HS组合物氯化钠输液的制备
1、处方：
处方1：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
甘草酸单铵 40g
聚山梨酯80 100g
氯化钠 900g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
处方2：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
硫普罗宁 100g
聚山梨酯80 100g
氯化钠 900g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
处方3：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
苦参素 400g
聚山梨酯80 100g
氯化钠 900g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
处方4：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
水飞蓟宾葡甲胺 100g
聚山梨酯80 100g
氯化钠 900g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
2、具体步骤：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将聚山梨酯80用注射用水配成20％的溶液，将红景天多糖和甘草酸单铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟 宾葡甲胺加入加热搅拌使溶解完全，将氯化钠用配液量30％的注射用水溶解完全。合并上述溶液，补加注 射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
5)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
6)检查溶液的澄明度，半成品化验。
7)灌装于相应容积的输液瓶中。
8)115℃热压灭菌30分钟。
9)灯检，成品全检，包装入库。
实施例5HG、HL、HK、HS组合物葡萄糖输液的制备
1、处方：
处方1：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
甘草酸二铵 150g
聚山梨酯80 100g
葡萄糖 5000g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
处方2：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
硫普罗宁 100g
聚山梨酯80 100g
葡萄糖 5000g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
处方3：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
苦参素 400g
聚山梨酯80 100g
葡萄糖 5000g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
处方4：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
水飞蓟宾葡甲胺 100g
聚山梨酯80 100g
葡萄糖 5000g
注射用水 加至100000ml
共制备 1000瓶
2、具体步骤：
1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将聚山梨酯80用注射用水配成20％的溶液，将红景天多糖和甘草酸二铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟 宾葡甲胺加入加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量30％的注射用水溶解完全。合并上述溶液，补加注射 用水至全量。
3)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
4)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的pH值。
5)经0.45μm的微孔滤膜精滤。
6)检查溶液的澄明度，半成品化验。
7)灌装于相应容积的输液瓶中。
8)115℃热压灭菌30分钟。
9)灯检，成品全检，包装入库。
实施例例6HG、HL、HK、HS组合物片剂的制备
1、处方：
处方1：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
甘草酸二铵 150g
预胶化淀粉 120.0g
低取代羟丙基纤维素 20g
微晶纤维素 100.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 3.0g
羧甲淀粉钠 10.0g
共制备 1000片
处方2
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
硫普罗宁 100g
预胶化淀粉 120.0g
低取代羟丙基纤维素 30g
微晶纤维素 80.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 3.0g
羧甲淀粉钠 10.0g
共制备 1000片
处方3：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
苦参素 400g
预胶化淀粉 130.0g
低取代羟丙基纤维素 30g
微晶纤维素 90.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 4.0g
羧甲淀粉钠 15.0g
共制备 1000片
处方4：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
水飞蓟宾葡甲胺 100g
预胶化淀粉 120.0g
低取代羟丙基纤维素 20g
微晶纤维素 60.0g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 3.0g
羧甲淀粉钠 10.0g
共制备 1000片
2、具体步骤：
1)将红景天多糖和甘草酸二铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾葡甲胺粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将红景天多糖、甘草酸二铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾葡甲胺、预胶化淀粉、低取代羟丙基纤维 素、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例7HG、HL、HK、HS组合物胶囊剂的制备
1、处方：
处方1：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
甘草酸单铵 40g
预胶化淀粉 100.0g
微晶纤维素 40.0g
低取代羟丙基纤维素 10g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 3.0g
共制备 1000粒
处方2：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
硫普罗宁 100g
预胶化淀粉 100.0g
微晶纤维素 40.0g
低取代羟丙基纤维素 10g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 3.0g
共制备 1000粒
处方3：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
苦参素 400g
预胶化淀粉 150.0g
微晶纤维素 40.0g
低取代羟丙基纤维素 10g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 3.0g
共制备 1000粒
处方4：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
水飞蓟宾葡甲胺 100g
预胶化淀粉 100.0g
微晶纤维素 40.0g
低取代羟丙基纤维素 10g
2％HPMC水溶液 适量
硬脂酸镁 3.0g
共制备 1000粒
2、具体步骤：
1)将红景天多糖和甘草酸单铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾葡甲胺粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将红景天多糖、甘草酸单铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾葡甲胺、预胶化淀粉、微晶纤维素、低取 代羟丙基纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例8HG、HL、HK、HS组合物颗粒剂的制备
1、处方：
处方1：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
甘草酸单铵 40g
糖粉 4000.0g
固体桔子香精 20g
50％乙醇 适量
共制备 1000包
处方2：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
硫普罗宁 100g
糖粉 4000.0g
固体桔子香精 20g
50％乙醇 适量
共制备 1000包
处方3：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
苦参素 400g
糖粉 4000.0g
固体桔子香精 20g
50％乙醇 适量
共制备 1000包
处方4：
红景天多糖 20g(相当于红景天1kg)
水飞蓟宾葡甲胺 100g
糖粉 4000.0g
固体桔子香精 20g
50％乙醇 适量
共制备 1000包
2、具体步骤：
1)将蔗糖粉碎过100目筛备用，将红景天多糖和甘草酸单铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾葡甲胺粉碎 过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将红景天多糖、甘草酸单铵/硫普罗宁/苦参素/水飞蓟宾葡甲胺、固体桔子香精与糖粉以等量递加 的方法混合均匀，加入50％乙醇适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)筛除过粗或过细的颗粒。
8)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
9)包装，成品全检，包装入库。