技术领域
本发明涉及天麻素在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。
背景技术
类风湿性关节炎是一种进行性、多关节炎症为主要表现的全身性自身免疫性疾病，主要 表现为滑膜炎性增生、单核细胞浸润和新生血管形成。目前尚无根治本病的方案和预防措施， 临床上主要治疗药物包括非甾体抗炎药、肾上腺皮质激素等。由于药物的副作用严重，引起 的肝肾损害、肺纤维化等使病人难以坚持长期服药。寻求一种有效、安全的治疗药物是我们 的目的。我国几千味传统的天然药物历经数千年临床，为寻找有效预防药物提供了丰富的药 源，因此从天然、传统药物中筛选治疗或辅助治疗的类风湿性关节炎药物不仅是可行的，而 且是经济的。
天麻是一味功效诸多而效果显著的中药，据《本草纲目》记载，天麻味辛、温、无毒， 主治诸风湿痹、四肢拘挛、瘫痪不遂、眩晕头痛等症。其提取物天麻素是天麻的主要成分， 能够保护神经细胞，促进心肌细胞能量代谢，具有降低血压和外周血管阻力，临床上广泛应 用于治疗高血压、眩晕、头痛等疾病，疗效确切，但天麻素在治疗类风湿性关节炎的应用未 见报道。
发明内容
本发明所要解决的问题是提供天麻素的新用途，即天麻素在制备治疗类风湿性关节炎的 药物中的应用，用天麻素制备的药物对治疗类风湿性关节炎具有较好的疗效，且副作用少。
本发明提供的技术方案是：天麻素在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。
本发明可用作抗人或动物的类风湿性关节炎防治使用。用天麻素药物治疗类风湿性关节 炎具有较好的疗效，且副作用少。本发明所述药物(如天麻素注射液、注射用天麻素、天麻 素葡萄糖或氯化钠注射液等)可通过肌肉注射或静脉滴注给予。也可采用口服制剂口服给予。 本领域技术人员可根据实际情况容易地确定给药剂量，一般可按照现有技术中天麻素制剂的 常规剂量给予。如肌肉注射时每日1-2次，0.1-0.2克/次；静脉滴注时每日1次，0.5- 1.0克/次。
具体实施方式
本发明通过以下实施例作进一步说明
中医药学在抗类风湿性关节炎方面发挥着重要作用，具有毒副作用小、疗效确切等特点。 本发明选择天麻素作为抗类风湿性关节炎药物，探讨天麻素对类风湿性关节炎的影响。旨在 选择一种抗类风湿性关节炎作用强、毒性小的药物。
材料与方法
1.实验材料：
1.1动物和饲料
实验动物：昆明种小鼠，18～22g，雌雄均用。由上海复旦大学实验动物中心提供。医动 合格证号：06-24-3。ICR小鼠，雄性，18～22g，由中国科学院上海实验动物中心提供，合 格证号：中科动管第003号。SD大鼠，90～110g，120～140g，雄性。上海西普尔-必凯实验 动物有限公司产品。沪动合格证字152号。
1.2药品及试剂
天麻素注射液：湖南五洲通药业有限责任公司，批号：20051216，规格：200mg/2ml。
使用时分别配成为天麻素注射液大剂量组以及小剂量组，给药量分别为：0.4g生药/kg 以及0.2g生药/kg，也就是100mg/kg以及50mg/kg。
地塞米松片：中国上海信谊药厂生产，批号：00110乙。
阿司匹林片：无锡阿斯利康制药有限公司生产，批号：200507002。
角叉菜胶：SIGMA公司出品，批号：61k1122。
完全福氏佐剂：SIGMA公司出品，批号：11K8928。
二硝基氟苯(DNFB)：分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司出品，批号：F20050315。
二甲苯：分析纯，杭州化学试剂厂产品，批号：050131。
1.3器材
JY601电子天平：上海海康电子仪器厂；
TN-100B型托盘扭力天平：上海上平仪器公司；
YLS-6B智能热板仪：山东省医学科学院设备站；
YLS-7A足趾容积测量仪：山东省医学科学院设备站；
1.4统计方法
采用SPSS9.0统计软件对各组数据进行单因素方差分析，组间比较采用t检验，全部结 果均用 X±SD表示。
2.实验方法：
2.1作用研究
2.1.1.天麻素注射液镇痛作用实验(热板法)
室温在13℃～18℃环境下。调节恒温水浴温度至55±0.5℃，金属盘的底部接触水面。然 后将18～20g雌性小白鼠放在热板上，用秒表记录自小白鼠投入热板至出现舔后足的反应时 间(潜伏期)作为该鼠的痛阈值。给药前先测定并筛选小鼠的痛阈值(共测两次，以平均值 为5s～30s者为合格)。根据痛阈值平均分组，随机分为4组，每组10只动物，分别为生理盐 水组、阿司匹林组、天麻素注射液大剂量组以及小剂量组。分组及给药剂量见表1。腹腔注 射给水或给药0.2ml/10g，1次/天，连续3天，末次给药后1.5h、3h各测定一次小鼠痛阈值。 如痛阈值超过60s，即停止测试而按60s计。实验结束后，按痛阈平均值计算痛阈提高百分 率。痛阈提高百分率＝(用药后平均痛阈值-用药前平均痛阈值)/用药前平均痛阈值×100％。
2.1.2天麻素注射液镇痛作用实验(扭体法)
取昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为4组，每组10只动物，分别为生理盐水组、阿司 匹林组、天麻素注射液大剂量组以及小剂量组。分组及给药剂量见表2。腹腔注射给水或给 药0.2ml/10g，1次/天，连续3天。于末次给药后2.5h，各动物腹腔注射0.8％冰醋酸0.1ml/10g。 观察20min内小鼠的扭体次数。
2.2天麻素注射液对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
取昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只动物，分别为生理盐水组、 地塞米松组、天麻素注射液大剂量组以及小剂量组。分组及给药剂量见表3。腹腔注射给水 给药0.2ml/10g，1次/天，连续3天，末次给水或给药后1h，在每只动物右耳上涂50μl二甲 苯，1h后脱颈椎处死小鼠，打孔器直径9mm，打下左、右耳片，称重。计算肿胀度(肿胀度 ＝右耳片重量-左耳片重量)，取胸腺、脾脏称重，计算脏器指数。
2.3天麻素注射液对迟发型超敏反应的影响：
取体重18～22gICR小鼠，雌雄各半，随机分为4组，每组10只动物，分别为生理盐水 组、地塞米松组、天麻素注射液大剂量组以及小剂量组。分组及给药见表4。腹腔注射给药 容积为0.1ml/10克体重，每天1次，连续9天。给药第3天动物腹部脱毛。第4天，腹部涂 抹1％DNFB50μl致敏。第8天每只小鼠右耳廓涂抹1％DNFB20μl。攻击24小时后脱颈椎 处死小鼠，同实验3测定小鼠耳肿胀度。
2.4天麻素注射液对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
取雄性大鼠90-100g，称重、测右足踝关节容积。根据所得数据平均分组，随机分为4 组，每组10只动物，分别为生理盐水组、阿司匹林组、天麻素注射液大剂量组以及小剂量 组。分组及给药剂量见表5。腹腔注射给药或蒸馏水1ml/100g，1次/天，连续5天。末次给 药后测定各鼠右踝关节容积2次，为致炎前周长。并于给药后1.5h在大鼠右足跖皮下注射 1％角叉菜胶0.1ml/只。注射后1h、2h、4h分别测定足跖容积，计算肿胀百分率。
2.5天麻素注射液对大鼠佐剂性关节炎法
取体重120～140gSD大鼠，随机分为4组，每组10只动物，分别为生理盐水组、地塞 米松组、天麻素注射液大剂量组以及小剂量组。分组及给药见表6。给药容积为1ml/100克 体重，地塞米松组每3天腹腔注射给药一次，其他各组每天腹腔注射给药1次，第3天测量 大鼠两后肢踝关节周长，给药1小时后，于大鼠右后肢足跖皮内注射完全福氏佐剂0.15ml/ 只。于注射后1、2、4、6、12、24小时测大鼠右足跖容积，计算肿胀百分率(％)。肿胀百 分率＝(致炎后右足跖容积-致炎前右足跖容积)/致炎前右足跖容积*100％。然后各组动物继 续分别腹腔注射给予生理盐水或药物，致炎后4、8、12、14、16、18、20日分别测定右足 跖容积，并在12、14、16、18、20日同时测定左足跖容积，并计算肿胀百分率(％)。
实验结果
1.天麻素注射液对(热板法)致小鼠疼痛实验的影响
末次给药后3h，天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg组均可明显延长小鼠痛阈，显 示一定镇痛作用(见表1)。
表1.天麻素镇痛作用实验结果(热板法)(X±SD，n＝10) 痛阈(秒) 给药剂量 (g生药/kg) 给药前痛阈 给药后痛阈值 1.5h 3h 生理盐水组 阿司匹林组 天麻素大剂量组 天麻素小剂量组 -- 100mg/kg 0.4 0.2 17.9±3.0 16.8±2.2 16.3±3.2 17.6±2.6 14.6±2.2 14.5±2.1 16.1±4.3 18.2±6.9 15.0±2.5 20.8±7.0* 19.2±4.5* 22.1±8.4* 与生理盐水组比*p＜0.05；**p＜0.01
2.天麻素注射液对(扭体法)致小鼠疼痛实验的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg可明显减少20min内小鼠的扭体次数，显示一 定镇痛作用(见表2)。
表2.天麻素注射液镇痛作用实验结果(扭体法)(X±SD，n＝10) 扭体(次) 给药剂量 (g生药/kg) 20分钟内扭体数 生理盐水组 阿司匹林组 天麻素大剂量组 天麻素小剂量组 -- 100mg/kg 0.4 0.2 34.7±12.0 12.5±5.6** 17.8±6.6** 27.9±9.2 与生理盐水组比**p＜0.01
3.天麻素注射液对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg均可明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀的肿胀度， 显示一定抗炎作用。
表3天麻素注射液对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(X±SD，n＝10) 扭体(次) 给药剂量 (g生药 /kg) 肿胀度(mg) 脾指数 (mg/10g) 胸腺指数 (mg/10g) 生理盐水组 地塞米松组 天麻素大剂量组 天麻素小剂量组 -- 5mg/kg 0.4 0.2 24.2±3.9 8.7±6.5** 14.4±3.4*** 15.7±5.3** 52.9±20.1 20.8±7.0*** 44.2±5.2 48.6±17.7 47.6±10.7 12.1±2.3*** 45.7±8.6 42.5±7.3 与生理盐水组比**p＜0.01；表示与正常组比***p＜0.001
4.天麻素注射液对DNFB所致小鼠迟发型超敏反应所引起的耳肿胀的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg能明显抑制由DNFB诱导小鼠迟发型超敏反 应所引起的耳肿胀，与生理盐水组相比，有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)，结果见表4。
表4天麻素注射液对DNFB所致小鼠迟发型超敏反应所引起的耳肿胀的影响( x±SD，n＝10) 组别 剂量 (g生药/kg) 肿胀度 (mg) 生理盐水组 地塞米松组 天麻素大剂量组 天麻素小剂量组 10ml 5mg/kg 0.4 0.2 21.9±3.0 19.5±3.7 17.8±2.1** 18.1±3.7* 与生理盐水组相比*P＜0.05，**P＜0.01
5.天麻素注射液对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg组均可明显降低角叉菜胶致炎后大鼠足肿胀 的肿胀度，显示一定抗炎作用。
表5天麻素注射液对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响(肿胀率)(X±SD，n＝10) 扭体(次) 给药剂量 g生药/kg 肿胀率(％) 1h 2h 4h 生理盐水组 阿司匹林组 天麻素大剂量组 天麻素小剂量组 -- 100mg/kg 0.4 0.2 62.2±8.1 26.1±16.9*** 25.1±21.7*** 33.0±10.3*** 85.5±28.7 44.4±18.7**38.7±22.2***59.1±15.5* 91.9±27.2 61.4±24.8*54.7±35*75.7±22.0 与生理盐水组比*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001
6.天麻素注射液对大鼠佐剂性关节炎足跖肿胀的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg三个剂量组对完全福氏佐剂所致的大鼠佐剂 性关节炎急性期有明显抑制作用，能降低肿胀率，与生理盐水组相比有显著性差异(P＜0.01， P＜0.05)，结果见表6。
表6天麻素注射液对佐剂性大鼠足跖肿胀的影响(24小时)(X±SD，n＝10) 组别 剂量 (g生药 /kg) 肿胀率(％) 1h 2h 4h 6h 12h 24h 生理盐水组 地塞米松组 天麻素大剂量 组 天麻素小剂量 组 10mg 0.4 0.2 47.1± 5.8 17.3± 7.1** 28.2± 3.1** 36.4± 3.2** 63.5± 5.3 18.80± 4.4** 40.2± 7.8 46.0± 3.7** 66.8± 6.8 15.9± 3.1** 38.0± 4.4** 46.4± 4.2** 69.1± 4.4 19.4± 4.0** 44.1± 3.5** 56.5± 4.2** 44.2± 9.6 19.7± 12.4** 46.0± 6.4 47.2± 1.3 49.1± 6.2 25.7± 4.9** 33.1± 4.9** 40.1± 4.3** 与生理盐水组比*p＜0.05；**p＜0.01；
表7天麻素注射液对佐剂性大鼠足跖肿胀的影响(右足跖4～20日)(X±SD，n＝10) 组别 剂量 (g 生药 /kg) 肿胀率(，％) 4日 8日 12日 14日 16日 18日 20日 生理盐水 组 地塞米松 组 天麻素大 剂量组 天麻素小 剂量组 10mg 0.4 0.2 58.5± 5.3 39.3± 2.1**45.6± 4.6**55.6± 4.8** 57.9± 4.2 22.9± 3.2**44.3± 4.1**52.9± 2.6** 56.55 ±5.6 29.3± 5.6** 45.4± 2.6** 55.1± 3.6** 62.9± 7.8 15.9± 8.3** 38.7±6** 36.1± 3.5** 62.7± 5.4 11.0± 6.3** 42.8± 5.2** 34.8± 4.2** 48.2± 5.6 11.7± 5.9** 37.3± 6.1** 42.8± 2.4** 35.1± 4.6 11.5± 5.3** 28.9± 6.5* 26.4± 5.6** 与生理盐水组比*p＜0.05；**p＜0.01；
表8天麻素注射液对佐剂性大鼠足跖肿胀的影响(左足跖4～20日)(X±SD，n＝10) 组别 剂量 (g生 药/kg) 肿胀率( x±SD，％) 12日 14日 16日 18日 20日 生理盐水组 地塞米松组 天麻素大剂量组 天麻素小剂量组 10mg 0.4 0.2 47.1± 5.8 17.3± 7.1** 28.2± 3.1** 36.4± 3.2** 63.5± 5.3 18.80± 4.4** 40.2± 7.8 46.0± 3.7** 66.8± 6.8 15.9± 3.1** 38.0± 4.4** 46.4± 4.2** 69.1± 4.4 19.4± 4.0** 44.1± 3.5** 56.5± 4.2** 44.2± 9.6 19.7± 12.4** 46.0± 6.4 47.2± 1.3 与生理盐水组比*p＜0.05；**p＜0.01；
实验结论
1.天麻素注射液对(热板法)致小鼠疼痛实验的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg组均可明显延长小鼠痛阈，显示一定镇痛 作用。
2.天麻素注射液对(扭体法)致小鼠疼痛实验的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg可明显减少20min内小鼠的扭体次数，显示一 定镇痛作用。
3.天麻素注射液对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg均可明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀的肿胀 度，显示一定抗炎作用。
4.天麻素注射液对DNFB所致小鼠迟发型超敏反应所引起的耳肿胀的影响
天麻素注射液0.4g生药/kg、0.2g生药/kg能明显抑制由DNFB诱导小鼠迟发型超敏反 应所引起的耳肿胀，与生理盐水组相比，有显著性差异。
5.天麻素注射液对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
天麻素注射液0.4、0.2g生药/kg组均可明显降低角叉菜胶致炎后大鼠足肿胀的肿胀度， 显示一定抗炎作用。
6.天麻素注射液对大鼠佐剂性关节炎足跖肿胀的影响
天麻素注射液0.4、0.2g生药/kg组对完全福氏佐剂所致的大鼠佐剂性关节炎急性期有 明显抑制作用，能降低肿胀率，与生理盐水组相比有显著性差异，显示一定抗炎作用，结果 见表6。天麻素注射液0.4、0.2g生药/kg组对完全福氏佐剂所致的大鼠佐剂性关节炎引起 的继发性关节改变有一定的抑制作用，结果见表7、8。
上述实验证实天麻素注射液有明显的镇痛作用，能明显地改善大鼠原发性炎症和继发性 炎症，能明显减轻大鼠的急性关节肿胀和继发性关节肿胀，降低多发性关节炎肿胀率，提示 天麻素注射液中具有抗炎、镇痛的作用。
以上动物实验从天麻素注射液的急慢性抗炎作用、急性镇痛作用、急慢性抗免疫作用等 几方面来说明天麻素注射液从抗炎、镇痛、抗免疫几个方面对类风湿性关节炎有治疗效果。