猴耳环提取物在制备抗多重耐药铜绿假单胞菌药物中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610308716.7 (22)申请日 2016.05.10 (71)申请人 中山大学 地址 510275 广东省广州市海珠区新港西 路135号 (72)发明人 王永刚 刘翀 周倩 李沛波 苏薇薇 彭维 (74)专利代理机构 广州番禺容大专利代理事务 所(普通合伙) 44326 代理人 刘新年 黄开艳 (51)Int.Cl. A61K 36/48(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61K 31/546(2006.01) A61K 31/7036(2。

2、006.01) A61K 31/407(2006.01) A61K 31/5383(2006.01) (54)发明名称 猴耳环提取物在制备抗多重耐药铜绿假单 胞菌药物中的应用 (57)摘要 本发明公开了猴耳环提取物在制备抗多重 耐药铜绿假单胞菌及该类抗生素增敏药物中的 应用。 所述的猴耳环提取物由以下方法制备： 猴 耳环粗粉用水或乙醇水溶液提取， 所得的提取液 再用乙酸乙酯萃取， 所得的萃取物即为目标产 品。 本发明首次公开猴耳环提取物在制备抗多重 耐药铜绿假单胞菌及该类抗生素增敏药物中的 应用。 可作为天然的抗菌药物或抗生素增敏剂， 应用于由铜绿假单胞菌引起的疾病治疗。 作为中 药提取物还具。

3、有低成本、 副作用低等优点。 权利要求书1页 说明书31页 CN 105963339 A 2016.09.28 CN 105963339 A 1.猴耳环提取物在制备抗多重耐药铜绿假单胞菌药物中的应用。 2.猴耳环提取物在制备抗生素抗多重耐药铜绿假单胞菌增敏药物中的应用。 3.如权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述的抗生素是左氧氟沙星或亚胺培南或阿 米卡星或头孢他啶或头孢哌酮。 4.如权利要求1或2或3所述的应用， 其特征在于， 所述的猴耳环提取物是猴耳环水提取 物或猴耳环乙醇提取物。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的猴耳环水提取物水或猴耳环乙醇提取 物由以下方法制备： 。

4、猴耳环粗粉用水或乙醇水溶液提取， 所得的提取液再用乙酸乙酯萃取， 所得的萃取物即为目标产品。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述的乙醇水溶液是按体积比计浓度为 10-95的乙醇水溶液。 7.如权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的乙醇水溶液是按体积比计浓度为60 的乙醇水溶液。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105963339 A 2 猴耳环提取物在制备抗多重耐药铜绿假单胞菌药物中的应用 技术领域 0001 本发明涉及猴耳环提取物在制备抗耐药菌药物中的新用途。 背景技术 0002 21世纪是多重耐药菌的时代， 抗生素临床应用60年后， 越来越多的院内感染和多 重。

5、耐药菌感染成为目前临床抗菌治疗的一大难题， 1961年Jerons报告第1例临床耐甲氧西 林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染患者， 目前MRSA感染已逐渐遍及全球； 2011年中国细菌耐药 性监测临床中主要耐药菌的分布， 大肠杆菌、 肺炎克雷伯菌产超广谱 -内酰胺酶(ESBL)株 分别平均为50.7、 38.5， 其耐药性的变迁和现状备受关注。 另外据我国卫生部耐药监测 协作组2010年度报告， 鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌在医院ICU分离的病原菌中居首位， 鲍 曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别高达60.4和61.4。 综上所述， 在MRSA、 产ESBL的各类细菌、 多重耐药的鲍曼不动。

6、杆菌和铜绿假单胞菌的临床占有率逐年攀升， 耐 药率不断攀高的压力下， 抗生素治疗面临着巨大的挑战。 为避免细菌耐药现象的进一步恶 化， 专家学者力图发现新的抑制细菌生长以及治疗细菌引起疾病的新方法。 已有研究报道 证明中国传统中药如黄连、 黄芩和连翘等对不同耐药细菌有一定的抑制效果， 进一步研究 中药抑制耐药菌生长的重点在于发现新的抑菌能力更强、 耐药抑菌谱更广的中药。 0003 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth)， 学名围涎树， 是含羞草科猴耳环属 植物猴耳环的干燥幼枝和叶， 其性味苦涩寒， 功效清热解毒、 收湿敛疮， 是治疗多种热毒症 候独特的南方药材 。

7、0004 目前有文献公开猴耳环以及其提取物具有抗病毒作用。 中国专利CN103385912A公 开了猴耳环的提取物具有抗MRSA作用及抗生素增敏作用， 但该专利未提及该猴耳环提取物 对多重耐药铜绿假单胞菌的抗菌作用及与抗生素联用的增敏作用。 发明内容 0005 本发明公开了猴耳环提取物在制备抗多重耐药铜绿假单胞菌及该类抗生素增敏 药物中的应用。 0006 猴耳环提取物对左氧氟沙星或亚胺培南或阿米卡星或头孢他啶或头孢哌酮五类 抗生素抗多重耐药铜绿假单胞菌具有明显的增敏作用。 0007 所述的猴耳环提取物可以是猴耳环水提取物或猴耳环乙醇提取物。 可由以下方法 制备： 猴耳环粗粉用水或乙醇水溶液提取。

8、， 所得的提取液再用乙酸乙酯萃取， 所得的萃取物 即为目标产品。 0008 本发明优选按体积比计浓度为60的乙醇水溶液作为提取溶剂所制得的猴耳环 提取物。 0009 本发明的有益效果： 本发明首次公开猴耳环提取物在制备抗多重耐药铜绿假单胞 菌及该类抗生素增敏药物中的应用。 尤其可作为天然的抗菌药物或抗生素增敏剂， 应用于 由铜绿假单胞菌引起的疾病治疗， 本发明包括药物包括人用药物和其他动物用药物。 作为 说 明 书 1/31 页 3 CN 105963339 A 3 中药提取物还具有低成本、 副作用低等优点。 具体实施方式 0010 本发明通过下述实施方案对猴耳环水或乙醇提取物的抗多重耐药铜绿。

9、假单胞菌 的药理作用进行筛选。 0011 以微量肉汤稀释法测定猴耳环提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。 0012 菌株： 多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA， 编号P1-P20)20株； 铜绿假单胞菌质控菌株 (PAE， ATCC27853)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供， 经中山 大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。 0013 MH肉汤培养基： MH肉汤干粉(英国OXOID LTD.)2.1g， 定容至100ml， NAOH调节pH至 7.0， 高压灭菌， 置4冰箱备用。 0014 方法： 参照美国国立临床试验。

10、标准化委员会(NCCLS)推荐的微量肉汤稀释法操作。 0015 本发明通过下述方法对猴耳环提取物对左氧氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他 啶、 头孢哌酮抗多重耐药铜绿假单胞菌的增敏作用进行考察。 0016 菌株： 多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA， 编号P1-P20)20株； 铜绿假单胞菌质控菌株 (PAE， ATCC27853)均由中山大学附属第一医院检验医学部临床微生物检验室提供， 经中山 大学附属第一医院临床微生物检验室检测确认其耐药性。 0017 MH肉汤培养基： MH肉汤干粉(英国OXOID LTD.)2.1g， 定容至100ml， NAOH调节pH至 7.0， 高压灭菌， 置。

11、4冰箱备用。 0018 方法： 参照美国国立临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的棋盘稀释法操作。 以下 通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。 0019 实施例1 0020 猴耳环提取物的制备方法 0021 猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth)由广州市花城制药厂提供。 取适量猴 耳环药材打成粗粉， 用水或乙醇回流2次， 每次2小时， 过滤； 合并滤液， 浓缩得浸膏(水或乙 醇提取物)。 取浸膏用水混悬后， 用乙酸乙酯萃取， 萃取三次， 合并乙酸乙酯萃取液， 浓缩得 乙酸乙酯萃取物。 0022 所述的乙醇提取物可由10-95乙醇回流制得。 0023 实。

12、施例2 0024 猴耳环水提取物抗多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌杀菌试验及分别与左氧氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他啶、 头孢哌酮联合的增敏药效考察。 0025 1.实验方法 0026 1)最低抑菌浓度(MIC)的测定： 0027 猴耳环水提取物、 左氧氟沙星(LVX)、 亚胺培南(IMP)、 阿米卡星(AMK)、 头孢他啶 (CAZ)、 头孢哌酮(CFP)分别在MH肉汤培养基中进行一系列倍比稀释， 每孔50 l， 调节接种菌 为1.0106CFU/ml， 每孔50 l菌液。 35培养； 24小时， 无沉淀出现的最低抗菌药物的浓度 为其最低抑菌浓度(MIC)。 0028 2)最低杀菌浓度(。

13、MBC)的测定： 说 明 书 2/31 页 4 CN 105963339 A 4 0029 采用平板涂布计数法， 从1)项无菌生长的孔中吸取50ul菌悬液至血平板上， 均匀 涂布， 35培养24小时， 菌落计数， 使最初的实验活菌数减少99.9或以上所需要的最低抗 菌药物的浓度为其最低杀菌浓度(MBC)。 0030 通过测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)， 并对数据进行统计得 出MIC50、 MIC90、 MBC50、 MBC90， 来评价药物抗多重耐药铜绿假单胞菌的作用。 0031 3)棋盘稀释法： 0032 棋盘稀释法在96孔无菌培养板中进行， 将猴耳环水提取物及左氧。

14、氟沙星(LVX)、 亚 胺培南(IMP)、 阿米卡星(AMK)、 头孢他啶(CAZ)、 头孢哌酮(CFP)分别在MH肉汤培养基中倍比 稀释成系列浓度， 以两药各自1/4MIC到4MIC分别进行联合， 每孔A药B药各加25 L， 调整菌悬 液的浓度为1.0106CFU/ml， 每孔接种50 L菌液， 35孵育24h后观察A药B药联合后对多重 耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)。 0033通过计算部分抑菌 指数(FIC)来评价猴耳环水提取物与抗生素联合抗菌的相互作用， FIC0.5为协同作用， 0.5 FIC1为相加作用， 1 FIC2为无关作用， FIC 2为拮抗作用； 并根据无菌生长孔找。

15、出 猴耳环水提取物和抗生素的最佳浓度配比， 最终评价猴耳环水提取物增强抗生素效力的作 用。 0034 2.实验结果 0035 猴耳环水提取物及五种抗生素(左氧氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他啶、 头孢 哌酮)对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌试验结果见表1。 0036 猴耳环水提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌试验结果见表2。 0037 经过统计分析， 猴耳环水提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑 菌和杀菌的MIC50、 MIC90见表3。 0038 经过统计分析， 猴耳环提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌的MBC50、 MBC90见表 4。 0039 猴耳环水提取物与五。

16、种抗生素的联合药敏试验的FIC值及FIC值的分布统计结果 见表5、 表6。 0040 猴耳环水提取物对五种抗生素的增敏作用及联用后其MIC50、 MIC90见表7-表12。 0041 表1猴耳环水提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌体外抑菌试验结果 0042 说 明 书 3/31 页 5 CN 105963339 A 5 0043 0044 表2猴耳环水提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌试验结果 0045 0046 表3猴耳环水提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌的MIC50、 MIC90统计结果 0047 0048 表4猴耳环水提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌的MBC。

17、50、 MBC90 0049 说 明 书 4/31 页 6 CN 105963339 A 6 0050 表5猴耳环水提取物与五种抗生素的联合药敏试验的FIC值 0051 0052 表6猴耳环水提取物与五种抗生素的联合药敏试验FIC值的分布统计结果 0053 0054 表7猴耳环水提取物对头孢他啶的增敏作用及联用后的MIC 0055 说 明 书 5/31 页 7 CN 105963339 A 7 0056 0057 表8猴耳环水提取物对头孢哌酮的增敏作用及联用后的MIC 0058 0059 表9猴耳环水提取物对阿米卡星的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 6/31 页 8 CN 1059633。

18、39 A 8 0060 0061 0062 表10猴耳环水提取物对亚胺培南的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 7/31 页 9 CN 105963339 A 9 0063 0064 表11猴耳环水提取物对左氧氟沙星的增敏作用及联用后的MIC 0065 说 明 书 8/31 页 10 CN 105963339 A 10 0066 0067 表12联用后五种抗生素的MIC50、 MIC90 0068 0069 猴耳环水提取物单用对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC50为800 g/ml， MIC90为1600 g/ml， MBC50为1600 g/ml， MBC90为1600 g/ml； 0070 。

19、对20株多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环水提取物与头孢他啶联用的FIC均2表明 两药无拮抗作用， 其中有45FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单 胞菌， 猴耳环水提取物在浓度单用MIC时， 使头孢他啶MIC50从单用的32 g/ml降至8 g/ ml， 降低了75； MIC90从256 g/ml降至64 g/ml， 降低75； 0071 猴耳环水提取物与头孢哌酮联用对20株多重耐药铜绿假单胞菌FIC均2表明两 药两药无拮抗作用， 其中35FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单 胞菌， 猴耳环水提取物在浓度单用MIC时， 使头孢哌酮MIC50从单用的6。

20、4 g/ml降至0.5 g/ ml， 降低了99.2； MIC90从512 g/ml降至256 g/ml， 降低50； 0072 猴耳环水提取物与阿米卡星联用FIC均2表明两药没有拮抗作用， 其中35FIC 说 明 书 9/31 页 11 CN 105963339 A 11 0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环水提取物在浓度单用 MIC时， 使阿米卡星MIC50从单用的1 g/ml降至0.0625 g/ml， 降低了93.75； MIC90从32 g/ ml降至2 g/ml， 降低93.75； 0073 猴耳环水提取物与亚胺培南联用后FIC均2表明两药没有拮抗作用。

21、， 其中40 FIC0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环水提取物在浓度 单用MIC时， 使亚胺培南MIC50从单用的32 g/ml降至2 g/ml， 降低了93.75； MIC90从64 g/ ml降至16 g/ml， 降低75； 0074 猴耳环水提取物与左氧氟沙星联用抗20株多重耐药铜绿假单胞菌， FIC均2表明 两药无拮抗作用， 其中15FIC值0.5表明两药有一定程度的协同作用； 对20株多重耐药 多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环水提取物在浓度单用MIC时， 使左氧氟沙星MIC50从单用 的4 g/ml降至1 g/ml， 降低了75； MIC90从32 g/。

22、ml降至8 g/ml， 降低75。 0075 实施例3 0076 猴耳环10乙醇提取物抗多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌杀菌试验及分别与左氧 氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他啶、 头孢哌酮联合的增敏药效考察。 0077 1.实验方法： 按本发明实施例2项下方法测定并评价。 0078 2.实验结果： 0079 猴耳环10乙醇提取物及五种抗生素(左氧氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他 啶、 头孢哌酮)对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌试验结果见表13。 0080 猴耳环10乙醇提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌试验结果见表14。 0081 经过统计分析， 猴耳环10乙醇提取物及五种抗生素。

23、对多重耐药铜绿假单胞菌的 体外抑菌和杀菌的MIC50、 MIC90见表15。 0082 经过统计分析， 猴耳环提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌的MBC50、 MBC90见表 16。 0083 猴耳环10乙醇提取物与五种抗生素的联合药敏试验的FIC值及FIC值的分布统 计结果见表17、 表18。 0084 猴耳环10乙醇提取物对五种抗生素的增敏作用及联用后其MIC50、 MIC90见表19- 表24。 0085 表13猴耳环10乙醇提取物及五抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌体外抑菌试验 结果 说 明 书 10/31 页 12 CN 105963339 A 12 0086 0087 0088 表14。

24、猴耳环10乙醇提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌试验结果 0089 0090 表15猴耳环10乙醇提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌 的MIC50、 MIC90统计结果 说 明 书 11/31 页 13 CN 105963339 A 13 0091 0092 表16猴耳环10乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌 的MBC50、 MBC90 0093 0094 表17猴耳环10乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与五种抗生素的联合药敏试验的 FIC值 0095 0096 表18猴耳环10乙醇提取物的与五种抗生素的联合药敏试验FIC值的分布统计结 果 说 明 书 12/。

25、31 页 14 CN 105963339 A 14 0097 0098 表19猴耳环10乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对头孢他啶的增敏作用及联用后 的MIC 0099 0100 0101 表20猴耳环10乙醇提取物对头孢哌酮的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 13/31 页 15 CN 105963339 A 15 0102 0103 表21猴耳环10乙醇提取物对阿米卡星的增敏作用及联用后的MIC 0104 说 明 书 14/31 页 16 CN 105963339 A 16 0105 0106 表22猴耳环10乙醇提取物对亚胺培南的增敏作用及联用后的MIC 0107 0108 表23猴耳环1。

26、0乙醇提取物对左氧氟沙星的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 15/31 页 17 CN 105963339 A 17 0109 0110 0111 表24联用后五种抗生素的MIC50、 MIC90 0112 0113 猴耳环10乙醇提取物单用对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC50为800 g/ml， MIC90 为1600 g/ml， MBC50为1600 g/ml， MBC90为1600 g/ml； 0114 对20株多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环10乙醇提取物与头孢他啶联用的FIC均 2表明两药无拮抗作用， 其中有35FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜 绿假单胞菌， 猴。

27、耳环10乙醇提取物的在浓度单用MIC时， 使头孢他啶MIC50从单用的32 g/ml降至16 g/ml， 降低了50； MIC90从256 g/ml降至64 g/ml， 降低75； 0115 猴耳环10乙醇提取物与头孢哌酮联用对20株多重耐药铜绿假单胞菌FIC均2 表明两药两药无拮抗作用， 其中35FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜 绿假单胞菌， 猴耳环10乙醇提取物在浓度单用MIC时， 使头孢哌酮MIC50从单用的64 g/ ml降至4 g/ml， 降低了93.75； MIC90从512 g/ml降至256 g/ml， 降低50； 0116 猴耳环10乙醇提取物与阿米卡星。

28、联用FIC均2表明两药没有拮抗作用， 其中 说 明 书 16/31 页 18 CN 105963339 A 18 30FIC0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环10乙醇提取 物在浓度单用MIC时， 使阿米卡星MIC50从单用的1g/ml降至0.0625g/ml， 降低了 93.75； MIC90从32 g/ml降至4 g/ml， 降低87.5； 0117 猴耳环10乙醇提取物与亚胺培南联用后FIC均2表明两药没有拮抗作用， 其中 50FIC0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环10乙醇提取 物的乙酸乙酯萃取物在浓度单用MIC时， 使亚胺。

29、培南MIC50从单用的32 g/ml降至2 g/ml， 降低了93.75； MIC90从64 g/ml降至16 g/ml， 降低75； 0118 猴耳环10乙醇提取物与左氧氟沙星联用抗20株多重耐药铜绿假单胞菌， FIC均 2表明两药无拮抗作用， 其中15FIC值0.5表明两药有一定程度的协同作用； 对20株多 重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环15乙醇提取物在浓度单用MIC时， 使左氧氟沙星 MIC50从单用的4 g/ml降至1 g/ml， 降低了75； MIC90从32 g/ml降至4 g/ml， 降低87.5。 0119 实施例4 0120 猴耳环60乙醇提取物抗多重耐药铜绿假单胞菌的。

30、抑菌杀菌试验及分别与左氧 氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他啶、 头孢哌酮联合的增敏药效考察。 0121 1.实验方法： 按本发明实施例2项下方法测定并评价。 0122 2.实验结果： 0123 猴耳环60乙醇提取物及五种抗生素(左氧氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他 啶、 头孢哌酮)对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌试验结果见表25。 0124 猴耳环60乙醇提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌试验结果见表26。 0125 经过统计分析， 猴耳环60乙醇提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的 体外抑菌和杀菌的MIC50、 MIC90见表27。 0126 经过统计分析， 猴耳环。

31、提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌的MBC50、 MBC90见表 28。 0127 猴耳环60乙醇提取物与五种抗生素的联合药敏试验的FIC值及FIC值的分布统 计结果见表29、 表30。 0128 猴耳环60乙醇提取物对五种抗生素的增敏作用及联用后其MIC50、 MIC90见表31- 表36。 0129 表25猴耳环60乙醇提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌体外抑菌试 验结果 说 明 书 17/31 页 19 CN 105963339 A 19 0130 0131 0132 表26猴耳环60乙醇提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌试验结果 0133 0134 表27猴耳环60乙醇提取物。

32、及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌 的MIC50、 MIC90统计结果 说 明 书 18/31 页 20 CN 105963339 A 20 0135 0136 表28猴耳环60乙醇提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌的MBC50、 MBC90 0137 0138 表29猴耳环60乙醇提取物与五种抗生素的联合药敏试验的FIC值 0139 0140 表30猴耳环60乙醇提取物与五种抗生素的联合药敏试验FIC值的分布统计结果 说 明 书 19/31 页 21 CN 105963339 A 21 0141 0142 表31猴耳环60乙醇提取物对头孢他啶的增敏作用及联用后的MIC 0143 0。

33、144 0145 表32猴耳环60乙醇提取物对头孢哌酮的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 20/31 页 22 CN 105963339 A 22 0146 0147 表33猴耳环60乙醇提取物对阿米卡星的增敏作用及联用后的MIC 0148 说 明 书 21/31 页 23 CN 105963339 A 23 0149 0150 表34猴耳环60乙醇提取物对亚胺培南的增敏作用及联用后的MIC 0151 0152 表35猴耳环60乙醇提取物对左氧氟沙星的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 22/31 页 24 CN 105963339 A 24 0153 0154 0155 表36联用后五。

34、种抗生素的MIC50、 MIC90 0156 0157 猴耳环60乙醇提取物单用对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC50为400 g/ml， MIC90 为800 g/ml， MBC50为1600 g/ml， MBC90为1600 g/ml； 0158 对20株多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环60乙醇提取物与头孢他啶联用的FIC均 2表明两药无拮抗作用， 其中有40FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜 绿假单胞菌， 猴耳环60乙醇提取物在浓度单用MIC时， 使头孢他啶MIC50从单用的32 g/ ml降至8 g/ml， 降低了75； MIC90从256 g/ml降至64 g/ml， 。

35、降低75； 0159 猴耳环60乙醇提取物与头孢哌酮联用对20株多重耐药铜绿假单胞菌FIC均2 表明两药两药无拮抗作用， 其中20FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜 绿假单胞菌， 猴耳环60乙醇提取物在浓度单用MIC时， 使头孢哌酮MIC50从单用的64 g/ ml降至4 g/ml， 降低了93.75； MIC90从512 g/ml降至256 g/ml， 降低50； 0160 猴耳环60乙醇提取物与阿米卡星联用FIC均2表明两药没有拮抗作用， 其中 说 明 书 23/31 页 25 CN 105963339 A 25 20FIC0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜。

36、绿假单胞菌， 猴耳环60乙醇提取 物在浓度单用MIC时， 使阿米卡星MIC50从单用的1g/ml降至0.0625g/ml， 降低了 93.75； MIC90从32 g/ml降至2 g/ml， 降低93.75； 0161 猴耳环60乙醇提取物与亚胺培南联用后FIC均2表明两药没有拮抗作用， 其中 15FIC0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环60乙醇提取 物在浓度单用MIC时， 使亚胺培南MIC50从单用的32 g/ml降至2 g/ml， 降低了93.75； MIC90从64 g/ml降至16 g/ml， 降低75； 0162 猴耳环60乙醇提取物与左氧氟沙星联用抗。

37、20株多重耐药铜绿假单胞菌， 有4株 FIC大于2呈拮抗作用， 其中10FIC值0.5表明两药有一定程度的协同作用； 对20株多重 耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环60乙醇提取物在浓度单用MIC时， 使左氧氟沙星 MIC50从单用的4 g/ml降至1 g/ml， 降低了75； MIC90从32 g/ml降至8 g/ml， 降低75。 0163 实施例5 0164 猴耳环95乙醇提取物抗多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌杀菌试验及分别与左氧 氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他啶、 头孢哌酮联合的增敏药效考察。 0165 1.实验方法： 按本发明实施例2项下测定并评价。 0166 2.实验结果： 。

38、0167 猴耳环95乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及五种抗生素(左氧氟沙星、 亚胺培南、 阿米卡星、 头孢他啶、 头孢哌酮)对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌试验结果见表13。 0168 猴耳环95乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌 试验结果见表14。 0169 经过统计分析， 猴耳环95乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及五种抗生素对多重耐 药铜绿假单胞菌的体外抑菌和杀菌的MIC50、 MIC90见表15。 0170 经过统计分析， 猴耳环提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌的MBC50、 MBC90见表 16。 0171 猴耳环95乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物与五种抗生素的联合药敏试。

39、验的FIC值 及FIC值的分布统计结果见表17、 表18。 0172 猴耳环95乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物对五种抗生素的增敏作用及联用后其 MIC50、 MIC90见表19-表24。 0173 表37猴耳环95乙醇提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌体外抑菌试 验结果 说 明 书 24/31 页 26 CN 105963339 A 26 0174 0175 0176 表38猴耳环95乙醇提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外杀菌试验结果 0177 0178 表39猴耳环95乙醇提取物及五种抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑菌 的MIC50、 MIC90统计结果 说 明 书 25/31 页 2。

40、7 CN 105963339 A 27 0179 0180 表40猴耳环95乙醇提取物对多重耐药铜绿假单胞菌的杀菌的MBC50、 MBC90 0181 0182 表41猴耳环95乙醇提取物与五种抗生素的联合药敏试验的FIC值 0183 0184 表42猴耳环95乙醇提取物与五种抗生素的联合药敏试验FIC值的分布统计结果 说 明 书 26/31 页 28 CN 105963339 A 28 0185 0186 表43猴耳环10乙醇提取物对头孢他啶的增敏作用及联用后的MIC 0187 0188 0189 表44猴耳环95乙醇提取物对头孢哌酮的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 27/31 页 2。

41、9 CN 105963339 A 29 0190 0191 表45猴耳环95乙醇提取物对阿米卡星的增敏作用及联用后的MIC 0192 说 明 书 28/31 页 30 CN 105963339 A 30 0193 0194 表46猴耳环95乙醇提取物对亚胺培南的增敏作用及联用后的MIC 0195 0196 表47猴耳环95乙醇提取物对左氧氟沙星的增敏作用及联用后的MIC 说 明 书 29/31 页 31 CN 105963339 A 31 0197 0198 0199 表48联用后五种抗生素的MIC50、 MIC90 0200 0201 猴耳环95乙醇提取物单用对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC5。

42、0为800 g/ml， MIC90 为800 g/ml， MBC50为1600 g/ml， MBC90为1600 g/ml； 0202 对20株多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环95乙醇提取物与头孢他啶联用的FIC均 2表明两药无拮抗作用， 其中有25FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜 绿假单胞菌， 猴耳环95乙醇提取在浓度单用MIC时， 使头孢他啶MIC50从单用的32 g/ml 降至16 g/ml， 降低了50； MIC90从256 g/ml降至128 g/ml， 降低50； 0203 猴耳环95乙醇提取物与头孢哌酮联用对20株多重耐药铜绿假单胞菌FIC均2 表明两药两药无。

43、拮抗作用， 其中40FIC值0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜 绿假单胞菌， 猴耳环95乙醇提取物在浓度单用MIC时， 使头孢哌酮MIC50从单用的64 g/ ml降至4 g/ml， 降低了93.75； MIC90从512 g/ml降至128 g/ml， 降低75； 0204 猴耳环95乙醇提取物与阿米卡星联用FIC均2表明两药没有拮抗作用， 其中 说 明 书 30/31 页 32 CN 105963339 A 32 40FIC0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环95乙醇提取 物在浓度单用MIC时， 使阿米卡星MIC50从单用的1 g/ml降至0.12。

44、 g/ml， 降低了87.5； MIC90从32 g/ml降至4 g/ml， 降低87.5； 0205 猴耳环95乙醇提取物与亚胺培南联用后FIC均2表明两药没有拮抗作用， 其中 40FIC0.5呈协同作用； 对20株多重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环95乙醇提取 物在浓度单用MIC时， 使亚胺培南MIC50从单用的32 g/ml降至4 g/ml， 降低了75； MIC90 从64 g/ml降至16 g/ml， 降低75； 0206 猴耳环95乙醇提取物与左氧氟沙星联用抗20株多重耐药铜绿假单胞菌， FIC均 2表明两药无拮抗作用， 其中10FIC值0.5表明两药有一定程度的协同作用； 对20株多 重耐药多重耐药铜绿假单胞菌， 猴耳环15乙醇提取物在浓度单用MIC时， 使左氧氟沙星 MIC50从单用的4 g/ml降至1 g/ml， 降低了75； MIC90从32 g/ml降至4 g/ml， 降低87.5。 说 明 书 31/31 页 33 CN 105963339 A 33 。