发明领域
本发明涉及改善对象的记忆、学习、认知、突触传递及神经递质合成 与释放以及提高对象的脑磷脂水平的方法，所述方法包括给所述对象施用 CDP-胆碱或其可药用盐。
发明背景
尿苷是一种嘧啶核苷，并且是在核糖核酸及组织糖原(如UDP葡萄糖和 UTP葡萄糖)的合成中必需的。单独的尿苷的现有医学用途包括治疗与嘧啶 合成缺陷相关的遗传性障碍，如乳清酸尿症。胆碱(多种食物中的一种食物 组分)，是对于正常细胞膜结构及功能至关重要的几种主要磷脂的部分。在 一些情况下，向接受胃肠道外营养的患者供给额外热量和必需脂肪酸的脂 质乳剂类中包含胆碱。
发明概述
本发明改善对象的记忆、学习、认知、突触传递及神经递质合成与释 放以及提高对象的脑磷脂水平的方法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆 碱或其可药用盐。
在一个实施方案中，本发明提供改善对象的记忆的方法，该方法包括 给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善对象的记 忆。
在一个实施方案中，本发明提供改善对象的学习的方法，该方法包括 给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善对象的学 习。
在一个实施方案中，本发明提供改善对象的认知的方法，该方法包括 给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善对象的认 知。
在另一个实施方案中，本发明提供改善对象的突触传递的方法，该方 法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善对 象的突触传递。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象的脑细胞或神经细 胞合成神经递质的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱 或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象的脑细胞或神经细胞合成神 经递质的能力。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象的脑细胞或神经细 胞反复释放有效量的神经递质至突触内的能力的方法，该方法包括给所述 对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象的脑 细胞或神经细胞反复释放有效量的神经递质至突触内的能力。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象的脑细胞或神经细 胞产生磷脂酰胆碱的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其 可药用盐的组合物，从而刺激或增强所述对象的脑细胞或神经细胞产生磷 脂酰胆碱。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象的脑磷脂水平的方法，所 述磷脂选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂 酰肌醇(PI)，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合 物，从而提高对象的选自PC、PE、PS和PI的脑磷脂水平。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象神经细胞的神经突 增生的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组 合物，从而刺激或增强对象神经细胞的神经突增生。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象神经细胞的神经突 支化的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组 合物，从而刺激或增强对象神经细胞的神经突支化。
在另一个实施方案中，本发明提供促进修复对象的受损神经细胞的方 法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从 而促进修复对象的受损神经细胞。
附图简述
图1说明当通过标准HPLC方法测试时胞苷峰和酪氨酸峰的重合(6.59)。
图2说明当通过改良HPLC方法测试时不同的胞苷峰(3.25)和酪氨酸峰 (2.92)，所述的改良HPLC方法使用含少量甲醇的洗脱缓冲液。
图3.口服施用UMP提高人的血液尿苷水平。描述在口服施用250毫克/ 每千克体重(mg/kg)的尿苷后血浆中尿苷(设为100％值)对胞苷的比例。
图4.口服施用尿苷提高沙鼠(gerbils)中的血液尿苷水平。描述在模拟施 用或施用胞苷或尿苷后60分钟的血浆尿苷水平。**：比模拟饲喂对照， p＜0.01；##：比胞苷，p＜0.01。
图5.口服施用尿苷提高脑部尿苷水平。描述在模拟施用或施用胞苷或尿 苷后60分钟的脑部尿苷水平。**：比模拟饲喂对照，p＜0.01；##：比胞苷， p＜0.01。
图6.口服施用UMP提高脑部尿苷水平。描述在施用过程或施用水或 UMP后在多个时间点上的脑部尿苷水平。
图7.尿苷在脑内转化成胞苷。描述在口服施用250毫克/每千克体重 (mg/kg)的尿苷后血浆中(A)和脑内(B)尿苷(100％)对胞苷的比例。
图8.口服施用UMP提高脑部CDP-胆碱水平。描述在施用过程或施用水 或UMP后在多个时间点上的脑部CDP-胆碱水平。
图9.尿苷提高神经细胞系中CDP-胆碱的胞内水平。细胞与所示浓度的 尿苷一起温育6小时。描述了表述为皮摩尔(pmol)CDP-胆碱/mg蛋白质形式 的6个培养皿的平均值+/-S.E.M。该实验重复3次，*：p＜0.05。
图10.UMP食物补充显著地增加纹状体透析液中钾诱发的多巴胺(DA) 释放。(A)饮食补充UMP对K+诱发的纹状体DA释放的影响。在每一个点上 从6-9个测量值计算数据(平均值±测量标准误差[S.E.M.])。100％值代表在钾 刺激作用设置在100％之前四次测量值的平均值。(B)数据是根据UMP处理 组而汇集。“*”表示与相应对照相比的p＜0.05。
图11.以UMP处理提高乙酰胆碱基础浓度。描述了平均值+/-S.E.M.。“*” 表示p值＞0.05。
图12.UMP食物补充对于对侧纹状体中神经丝蛋白水平的影响。(A)： NF-70。(B)：NF-M。与相应对照相比，*：p＜0.05，**：p＜0.01。
图13.尿苷处理增强了神经突增生。A.在尿苷(50μM)存在或不存在下用 NGF(50ng/ml)处理4日的PC12细胞。B.在2或4日处理后每个细胞神经突的 数量。C.在2或4日NGF加不同浓度尿苷(50、100和200μM)处理后每个细胞 神经突的数量。D.对每个细胞的支化点数量的定量。E.通过使用蛋白质印 迹法测定的结构蛋白NF-70和NF-M的水平。N＝NGF，U＝尿苷。值代表平均 值+SEM。对应于NGF处理，**：p＜0.01，***：p＜0.001。
图14.尿苷处理提高用NGF处理的细胞内UTP和CTP的胞内水平。尿苷 处理(50μM)显著提高胞内UTP水平(A)和胞内CTP水平(B)。N＝NGF，U＝尿 苷，C＝胞苷。值表示为平均值+SEM。*：对应于NGF处理的p＜0.05。
图15.UTP处理增加神经突增生。与单独用NGF处理相比，用NGF和UTP 处理PC12细胞持续4日显著地增强每个细胞所产生的神经突数量。值代表平 均值+SEM。**：p＜0.01。
图16.NGF分化的细胞表达嘧啶敏感性P2Y受体。A.在细胞与NGF经不 同时间长度温育后P2Y2、P2Y4和P2Y6受体的表达水平。B.NGF处理4日后， 将细胞固定并且使用免疫荧光法将NF-70受体蛋白(红色)和P2Y受体蛋白(绿 色)可视化。左侧表格：P2Y2。中间表格：P2Y4。中间表格：P2Y4。右侧 表格：P2Y6。值表示为平均值+SEM。***p＜0.001。
图17.P2Y受体拮抗物抑制了尿苷对神经突增生的影响。使用NGF和具 有或不具有尿苷(10μM)和P2Y受体拮抗物PPADS、苏拉明、或RB-2处理了 细胞4日。值表示为平均值+SEM。***对应于NGF处理的p＜0.001；对应于 NGF加尿苷处理，#p＜0.05，###p＜0.001。
图18.磷脂酰肌醇(PI)的转换(turnover)受UTP和尿苷刺激。将细胞用[3H] 肌醇以代谢方式过夜标记，其中所述细胞在指定浓度的锂存在下用UTP、尿 苷或UTP加PPADS进行刺激，并且从PI分解衍生的放射标记肌醇磷脂通过闪 烁计数法测量。值代表平均值+SEM。*p＜0.05，**：对应于对照的p＜0.01； #：对应于100μMUTP处理的p＜0.05。
图19.口服UMP改善大鼠的学习和空间记忆。在受限环境中的18月龄大 鼠摄取对照食物或UMP食物6周，并且随后使用莫瑞斯水迷宫进行测试，每 日4次试验，持续4日。确定平台位置的平均时间以秒计。
图20.口服UMP改善沙鼠的学习和空间记忆。在悬臂迷宫中测试沙鼠的 学习和空间记忆，其中所述的沙鼠饲喂对照食物或含有所示量的UMP的食 物。将结果描述为在3分钟截止期之前剩余的时间量。
图21.口服UMP改善工作记忆和参考记忆。使用图20中所述的改良试验 测试饲喂对照食物或0.1％UMP食物的沙鼠的记忆，其中所述的改良试验测 量工作记忆误差(A)和参考记忆误差(B)。菱形表示来自对照沙鼠的数据点； 三角形表示来自饲喂0.1％UMP食物的沙鼠的数据点。
图22.尿苷和胆碱增加纹状体切片(顶位表格)、海马切片(中间表格)以及 皮质切片(顶位表格)中的神经递质释放。将数据表述为纳摩尔/毫克蛋白质/ 每2小时，并且描述为平均值±SEM，“*”＝相对于在缺乏胆碱时所获得的值 P＜0.001。每个表格中的第一系列在缺乏胆碱下进行；第二系列在胆碱存在 下进行。每个系列中的柱图从左至右代表：不添加额外的化合物；添加胞 苷；和添加尿苷(适宜时，除胆碱之外，还添加每种物质)。
图23.环境和补充UMP的食物对海马依赖性隐匿平台水迷宫任务中记 忆的影响。与用高UMP含量(IC-UMP)食物处理的EC大鼠(EC-对照和 EC-UMP)或IC大鼠相比，未处理的IC大鼠(IC-对照)以较慢速度(见左表格) 习得隐匿平台水迷宫任务，并且在探索试验期间，其在最初含有所述平台 的象限中花费更少时间(见右表格)。误差棒代表SEM。
图24.环境和补充UMP的食物对纹状体依赖性可见平台水迷宫任务中 记忆的影响。全部大鼠等速地习得所述可见平台水迷宫任务。
图25.口服CDP-胆碱和UMP对人血浆尿苷水平的影响。
图26.DHA和UMP在完整动物研究中协同提高脑部磷脂水平。“*”表示： 通过单因素方差分析，显著高于对照组。A.pmol磷脂/每毫克(mg)蛋白质。 UMP+DHA显著高于对照(p＜0.05)(单因素方差分析[F(3，28)＝4.12；p＝0.015])。 两因素方差分析也揭示相对于对照组的DHA的统计显著效应[F(1，28)＝8.78； p＝0.006]。B.pmol磷脂/每μg DNA。UMP+DHA显著高于对照(p＝0.020)(单因 素方差分析[F(3，28)＝3.215；p＝0.038])。
发明详述
本发明涉及改善对象的记忆、学习、认知、突触传递及神经递质合成 与释放以及提高脑磷脂水平的方法，所述方法包括向该对象施用CDP-胆碱 或其可药用盐。
在一个实施方案中，本发明提供改善对象的记忆的方法，该方法包括 给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善对象的记 忆。在另一个实施方案中，所述对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方 案中，所述对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中， 该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善或抑制对象认知性记忆下降的 方法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而改善或抑 制对象的认知性记忆下降。在另一个实施方案中，本发明提供改善或抑制 对象智力下降的方法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐， 从而改善或抑制对象的智力下降。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔 茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有与年龄不相关的记忆障碍。 在另一个实施方案中，该对象患有与年龄不相关的记忆障碍。每种可能性 代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善或增强对象认知性记忆的方法， 该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而改善或增强对象 的认知性记忆。在另一个实施方案中，本发明提供改善或增强对象智力的 方法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而改善或增 强对象的智力。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一 个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方 案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实 施方案。
如本文中(实施例14)提供，提高血浆尿苷水平阻止因贫乏环境条件引 起的空间性和/或认知性记忆和智力缺损，并且改善健康对象的空间性和/ 或认知性记忆和智力。实施例13中的数据进一步显示胆碱增加神经递质释 放。因此，施用提高血浆尿苷水平的组合物、尤其施用CDP-胆碱阻止因贫 乏环境条件引起的空间性和/或认知性记忆和智力缺损，并且改善健康对象 的空间性和/或认知性记忆和智力。
在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或其可药用盐提高所述对象的尿 苷水平。在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或其可药用盐提高所述对象 的尿苷磷酸水平。在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或其可药用盐能够 提高所述对象的尿苷水平。在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或其可药 用盐能够提高所述对象的尿苷磷酸水平。在另一个实施方案中，所述水平 是血浆水平。在另一个实施方案中，所述水平是脑水平。在另一个实施方 案中，所述尿苷磷酸是UMP。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善或抑制对象的海马依赖性记忆 下降的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐，从 而改善或抑制对象的海马依赖性记忆下降。在另一个实施方案中，该对象 患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性 记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象患有与年龄不相关的记忆障碍。 每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善或增强对象的海马依赖性记忆 的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐，从而改 善或增强对象的海马依赖性记忆。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔 茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。 在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发 明的一个独立实施方案。
如本文中(实施例14)提供，提高血浆尿苷水平阻止因贫乏环境条件引起 的海马依赖性记忆缺损并且改善健康对象的海马依赖性记忆。实施例13中 的数据进一步显示胆碱增加神经递质释放。因此，施用提高血浆尿苷水平 的组合物、尤其施用CDP-胆碱将防止由贫乏环境条件引起的海马依赖性记 忆缺损并且改善健康对象的海马依赖性记忆。
在另一个实施方案中，由本发明方法治疗、改善或抑制的在认知性记 忆、海马依赖性记忆或智力上的下降因年龄引起。在另一个实施方案中，“因 年龄引起”指在超过55岁的对象中观察到下降。在另一个实施方案中，所述 对象超过57岁。在另一个实施方案中，所述对象超过59岁。在另一个实施 方案中，所述对象超过60岁。在另一个实施方案中，所述对象超过62岁。 在另一个实施方案中，所述对象超过64岁。在另一个实施方案中，所述对 象超过65岁。在另一个实施方案中，所述对象超过67岁。在另一个实施方 案中，所述对象超过69岁。在另一个实施方案中，所述对象超过70岁。在 另一个实施方案中，所述对象超过72岁。在另一个实施方案中，所述对象 超过74岁。在另一个实施方案中，所述对象超过75岁。在另一个实施方案 中，所述对象超过76岁。在另一个实施方案中，所述对象超过78岁。在另 一个实施方案中，所述对象超过80岁。在另一个实施方案中，所述对象超 过82岁。在另一个实施方案中，所述对象大于84岁。每种可能性代表本发 明的一个实施方案。
在另一个实施方案中，加以治疗的所述下降因年龄相关性疾病或年龄 相关性认知下降引起。在另一个实施方案中，所述年龄相关性疾病是阿尔 茨海默病。在另一个实施方案中，所述年龄相关性疾病是轻微认知缺损。 在另一个实施方案中，所述年龄相关性疾病是皮克病。在另一个实施方案 中，所述年龄相关性疾病是路易体病。在另一个实施方案中，所述年龄相 关性疾病是痴呆。在另一个实施方案中，所述年龄相关性疾病是本领域已 知的任何其它年龄相关性疾病或年龄相关性认知下降。每种可能性代表本 发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，加以治疗的所述下降因迟钝引起。在另一个实 施方案中，所述迟钝是身体迟钝。在另一个实施方案中，所述迟钝是精神 迟钝。在另一个实施方案中，所述迟钝是社交迟钝。在另一个实施方案中， 所述迟钝是任何其它类型的迟钝。每种可能性代表本发明的另一个实施方 案。
用于确定认知性记忆下降、海马依赖性记忆下降和智力下降的原因的 方法是本领域熟知的，并且例如在Robertson RG等(Geriatric failure to thrive. Am Fam Physician.2004Jul 15；70(2)：343-50)和van de Port等(Susceptibility to deterioration of mobility long-term after stroke：a prospective cohort study. Stroke.2006Jan；37(1)：167-71)中描述。每种方法代表本发明的一个独立实 施方案。
在另一个实施方案中，“改善”认知性或海马依赖性记忆指提高所述对象 的记忆能力。在另一个实施方案中，所述术语指所述对象的记忆基线水平 提高或改善。在另一个实施方案中，所述术语指记忆水平提高或改善。
在另一个实施方案中，“改善”认知性记忆、海马依赖性记忆和智力指实 现其10％改善。在另一个实施方案中，该术语指实现其20％改善。在另一个 实施方案中，该术语指实现其30％改善。在另一个实施方案中，该术语指实 现其40％改善。在另一个实施方案中，该术语指实现其50％改善。在另一个 实施方案中，该术语指实现其60％改善。在另一个实施方案中，该术语指实 现其70％改善。在另一个实施方案中，该术语指实现其80％改善。在另一个 实施方案中，该术语指实现其90％改善。在另一个实施方案中，该术语指实 现其100％改善。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，认知性记忆或智力的改善相对于开始治疗前的 认知性记忆或智力进行评估。在另一个实施方案中，认知性记忆或智力的 改善相对于未治疗的对象进行评估。在另一个实施方案中，认知性记忆或 智力的改善根据标准化的指标(如试验等)进行评估。每种类型的认知活动改 善代表本发明的一个独立实施方案。
在一个实施方案中，本发明提供改善对象的海马功能障碍的方法，该 方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而改善对象的海马功 能障碍。在另一个实施方案中，所述对象患有阿尔茨海默病。在另一个实 施方案中，所述对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案 中，所述对象患有与年龄不相关的记忆障碍或认知障碍。每种可能性代表 本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供抑制对象的记忆能力下降的方法， 该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而抑制对象的记忆 能力下降。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实 施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中， 该对象患有与年龄不相关的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立 实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善对象的学习的方法，该方法包 括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善所述对 象的学习。在另一个实施方案中，所述学习是认知性学习。在另一个实施 方案中，所述学习是情感学习。在另一个实施方案中，所述学习是精神运 动学习。在另一个实施方案中，所述学习是本领域已知的任何其它类型的 学习。在另一个实施方案中，该对象患有与年龄不相关的记忆障碍或认知 障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
如本文中所提供，图17-19中的数据显示出提高血浆尿苷水平改善了几 个类型的记忆和学习。所述作用跨越不同物种以及在不同类型的记忆和学 习评估中的一致性验证本发明的研究结果。实施例13中的数据进一步显示 胆碱增加神经递质释放。因此，施用提高血浆尿苷水平的组合物、尤其施 用CDP-胆碱改善记忆及神经功能。
在另一个实施方案中，本发明提供改善对象的认知的方法，该方法包 括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善对象的 认知。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方 案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该 对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供恢复在所述认知功能方面具有缺损 的对象的认知功能的方法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药 用盐的组合物，从而恢复在所述认知功能方面具有缺损的对象的认知功能。 在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中， 该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象患 有与年龄不相关的记忆障碍或认知障碍。每种可能性代表本发明的一个独 立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗或降低对象的年龄相关性认知 障碍或年龄相关性记忆缺损(AAMI)的发病率的方法，该方法包括给所述对 象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而治疗或降低对象的年龄相关性认知障 碍或年龄相关性记忆缺损(AAMI)的发病率。
在另一个实施方案中，所述的记忆或学习下降或海马功能障碍因神经 障碍引起。在另一个实施方案中，所述神经障碍是记忆障碍。在另一个实 施方案中，所述记忆障碍包括记忆下降。在另一个实施方案中，所述记忆 下降与脑老化相关。在另一个实施方案中，所述记忆障碍是皮克病。在另 一个实施方案中，所述记忆障碍是路易体病。在另一个实施方案中，所述 记忆障碍是痴呆。在另一个实施方案中，所述痴呆与亨廷顿病相关。在另 一个实施方案中，所述痴呆与AIDS痴呆相关。每种可能性代表本发明的一 个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述神经障碍与多巴胺能途径相关。在另一个 实施方案中，所述神经障碍与多巴胺能途径不相关。每种可能性代表本发 明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是认知障碍。在另一个实施方案 中，所述认知障碍是诵读困难。在另一个实施方案中，所述认知障碍包括 注意力缺失。在另一个实施方案中，所述认知障碍包括警觉缺失。在另一 个实施方案中，所述认知障碍包括专心缺失。在另一个实施方案中，所述 认知障碍包括专注力缺失。在其它实施方案中，所述认知障碍与中风或多 发梗死性痴呆相关。在另一个实施方案中，所述认知障碍是轻度认知性缺 损。在另一个实施方案中，所述认知障碍包括年龄相关性记忆缺损。每种 可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是情绪障碍。在另一个实施方案 中，所述情绪障碍包括狂躁。在另一个实施方案中，所述情绪障碍包括抑 郁。在另一个实施方案中，所述情绪障碍包括压抑。在另一个实施方案中， 所述情绪障碍包括惊恐。在另一个实施方案中，所述情绪障碍包括焦虑。 在另一个实施方案中，所述情绪障碍包括精神抑郁症。在另一个实施方案 中，所述情绪障碍包括精神病。在另一个实施方案中，所述情绪障碍包括 季节性情感障碍。在另一个实施方案中，所述情绪障碍包括双相性精神障 碍(bipolar disorder)。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是抑郁。在另一个实施方案中， 所述抑郁是内源性抑郁。在另一个实施方案中，所述抑郁是重性抑郁障碍。 在另一个实施方案中，所抑郁是伴有焦虑的抑郁。在另一个实施方案中， 所述抑郁是双相抑郁。每种抑郁类型代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是共济失调。在另一个实施方案 中，所述神经障碍是弗里德赖希共济失调。在另一个实施方案中，本发明 的神经障碍排除癫痫、癫痫发作、瘈疭等。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是运动失调。在另一个实施方案 中，所述运动失调包括迟发性运动障碍。在另一个实施方案中，所述运动 失调包括张力障碍。在另一个实施方案中，所述运动失调包括图雷特综合 征。在另一个实施方案中，所述运动失调是本领域已知的任何其它运动失 调。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是脑血管病。在另一个实施方案 中，脑血管病因缺氧引起。在另一个实施方案中，脑血管病是由能够引起 脑血管病的任何其它原因引起。在另一个实施方案中，所述脑血管病是脑 血栓形成。在另一个实施方案中，所述脑血管病是局部缺血。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是行为综合征。在另一个实施方 案中，所述神经障碍是神经综合征。在另一个实施方案中，所述行为综合 征或神经综合征随脑创伤后出现。在另一个实施方案中，所述行为综合征 或神经综合征在脊髓损伤后出现。在另一个实施方案中，所述行为综合征 或神经综合征在缺养症后出现。
在另一个实施方案中，所述神经障碍是周围神经系统障碍。在另一个 实施方案中，所述周围神经系统障碍是神经肌肉障碍。在另一个方案中， 所述周围神经系统障碍是本领域已知的任何其它周围神经系统障碍。在另 一个实施方案中，神经肌肉障碍是重症肌无力。在另一个实施方案中，神 经肌肉障碍是小儿麻痹症综合征。在另一个实施方案中，神经肌肉障碍是 肌肉萎缩症。
每种神经障碍代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善对象脑内突触传递的方法，该 方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而改善 对象脑内的突触传递。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。 在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个 实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个 独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善对象的中枢神经系统(CNS)中突 触传递的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的 组合物，从而改善对象的中枢神经系统(CNS)中的突触传递。在另一个实施 方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另 一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆 障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象脑细胞反复释放有 效量的神经递质至突触内的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含 CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象脑细胞反复释放有 效量的神经递质至突触内的能力。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔 茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。 在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发 明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象神经细胞反复释放 有效量的神经递质至突触内的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包 含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象神经细胞反复释 放有效量的神经递质至突触内的能力。在另一个实施方案中，该对象患有 阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆 障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象脑细胞反复释放有 效量的多巴胺至突触内的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含 CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象脑细胞反复释放有 效量的多巴胺至突触内的能力。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨 海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。 在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发 明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象神经细胞反复释放 有效量的多巴胺至突触内的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含 CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象的神经细胞反复释 放有效量的多巴胺至突触内的能力。在另一个实施方案中，该对象患有阿 尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障 碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表 本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象脑细胞反复释放有 效量的乙酰胆碱至突触内的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含 CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象脑细胞反复释放有 效量的乙酰胆碱至突触内的能力。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔 茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。 在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发 明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象神经细胞反复释放 有效量的乙酰胆碱至突触内的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包 含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高或增强对象神经细胞反复释 放有效量的乙酰胆碱至突触内的能力。在另一个实施方案中，该对象患有 阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆 障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
用于确定神经递质的有效量的方法是本领域熟知的并且例如在 Neurology 2006Jan 10；66(1)：17-22)；Shinoe T等(Modulation of synaptic plasticity by physiological activation of M1 muscarinic acetylcholine receptors in the mouse hippocampus.J Neurosci 2005Nov 30；25(48)：11194-200)和 Lanari A等(Neurotransmitter deficits in behavioural and psychological symptoms of Alzheimer′s disease.Mech Ageing Dev 2006Feb；127(2)：158-65) 中描述。在另一个实施方案中，直接地测量神经递质的量。在另一个实施 方案中，通过神经递质的已知效应直接测量该神经递质的量。每种可能性 代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象脑细胞合成神经递 质的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐 的组合物，从而提高或增强对象脑细胞合成神经递质的能力。在另一个实 施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有 另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记 忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象神经细胞合成神经 递质的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用 盐的组合物，从而提高或增强对象神经细胞合成神经递质的能力。在另一 个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象 患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知 的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象脑细胞合成乙酰胆 碱的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐 的组合物，从而提高或增强对象脑细胞合成乙酰胆碱的能力。在另一个实 施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有 另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记 忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象神经细胞合成乙酰 胆碱的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用 盐的组合物，从而提高或增强对象神经细胞合成乙酰胆碱的能力。在另一 个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象 患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知 的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象脑细胞合成多巴胺 的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的 组合物，从而提高或增强对象脑细胞合成多巴胺的能力。在另一个实施方 案中，所述对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另 一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆 障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高或增强对象神经细胞合成多巴 胺的能力的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐 的组合物，从而提高或增强对象神经细胞合成多巴胺的能力。在另一个实 施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有 另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记 忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象突触中乙酰胆碱水平的方 法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而提高对象突 触中乙酰胆碱的水平。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。 在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个 实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个 独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象突触中多巴胺水平的方法， 该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而提高对象突触中 的多巴胺水平。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一 个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方 案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实 施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象神经细胞的神经突 增生的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐，从 而刺激或增强所述对象的神经细胞的神经突增生。在另一个实施方案中， 该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄 相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每 种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象神经细胞的神经突 支化的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐，从 而刺激或增强所述对象的神经细胞的神经突支化。在另一个实施方案中， 该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄 相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每 种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象神经细胞形成树突 棘的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐，从而 刺激或增强所述对象神经细胞形成树突棘。在另一个实施方案中，该对象 患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性 记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能 性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，在神经细胞中刺激或增强神经突支化或增生或 形成树突棘则促进新突触的形成。在另一个实施方案中，促进更大突触的 形成。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象脑内神经丝-70(NF-70)蛋白 或神经丝-M(NF-M)蛋白水平的方法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱 或其可药用盐，从而提高对象脑内的NF-70蛋白或NF-M蛋白的水平。在另 一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对 象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已 知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供促进或增强脑修复的方法，该方法 包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而促进或增强脑修复。在 另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该 对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象患有 与年龄不相关的记忆障碍或认知障碍。每种可能性代表本发明的一个独立 实施方案。
在另一个实施方案中，在中风后促进或增强所述脑修复。在另一个实 施方案中，在脑损伤后促进或增强所述脑修复。在另一个实施方案中，在 本领域已知必然需要脑修复的任意其它事件、疾病或障碍后促进或增强所 述脑修复。每种可能性代表本发明的另一个实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象的脑细胞或神经细 胞产生磷脂酰胆碱的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其 可药用盐的组合物，从而刺激或增强所述对象的脑细胞或神经细胞产生磷 脂酰胆碱。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实 施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中， 该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象脑内磷脂水平的方法，该 方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高 所述对象脑内的磷脂水平。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默 病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另 一个实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的 一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象脑内PC水平的方法，该方 法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高所 述对象脑内的PC水平。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。 在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个 实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个 独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象脑内PE水平的方法，该方 法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高所 述对象脑内的PE水平。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。 在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个 实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个 独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象脑内PS水平的方法，该方 法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高所 述对象脑内的PS水平。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。 在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个 实施方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个 独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供提高对象脑内PI水平的方法，该方法 包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从而提高所述 对象脑内的PI水平。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另 一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施 方案中，该对象没有已知的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立 实施方案。
本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，在脑细胞或神经细胞的 树突膜中的目的磷脂水平被提高。在另一个实施方案中，在脑细胞或神经 细胞的轴突膜中的目的磷脂水平被提高。在另一个实施方案中，在脑细胞 或神经细胞中的目的磷脂水平被提高。每种可能性代表本发明的一个独立 实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供刺激或增强对象的脑细胞或神经细 胞产生膜的方法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐 的组合物，从而刺激或增强所述对象的脑细胞或神经细胞产生膜。在另一 个实施方案中，该对象患有阿尔茨海默病。在另一个实施方案中，该对象 患有另一种年龄相关性记忆障碍。在另一个实施方案中，该对象没有已知 的记忆障碍。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物提高PC和/或另一种磷脂 (例如磷脂酰肌醇、鞘磷脂)的水平，这转而提高第一或第二信使水平，从而 调节它们对记忆和/或认知的影响。在另一个实施方案中，所述信使是类花 生酸。在另一个实施方案中，所述信使是二酰基甘油。在另一个实施方案 中，所述信使是肌醇三磷酸。在另一个实施方案中，所述信使是血小板激 活因子(PAF)。在另一个实施方案中，所述信使是源自PC和/或另一种磷脂 的任何其它信使。每种可能性代表本发明的另一个实施方案。
评估脑细胞膜或神经细胞膜产生的方法是本领域所熟知。在另一个实 施方案中，通过测量神经突增生或支化的水平来评估膜产生(实施例8)。在 另一个实施方案中，通过测量膜标记蛋白的水平来评估膜产生(实施例7)。 在另一个实施方案中，通过测量膜前体合成的水平来评估膜产生。在另一 个实施方案中，通过测量CDP-胆碱处理之前和之后的膜水平来评估膜产生 (实施例7)。在另一个实施方案中，通过测量膜转换的生物指示物来评估膜 产生。指示物或细胞膜转换是本领域熟知的，并且在例如Das KP等， Neurotoxicol Teratol 26(3)：397-406，2004中描述。每种评估膜产生的方法代 表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供改善或恢复对象脑部的胆碱能功能 的方法，该方法包括给所述对象施用CDP-胆碱或其可药用盐，从而改善或 恢复对象脑部的胆碱能功能。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔茨海 默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。在 另一个实施方案中，该对象患有与年龄不相关的记忆障碍或认知障碍。每 种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法或组合物用来治疗与脑发育相关 的儿科神经疾病。在另一个实施方案中，本发明的方法或组合物用来在早 产的情况下刺激脑发育。在另一个实施方案中，本发明的方法或组合物用 来治疗阿斯珀格综合征。在另一个实施方案中，所述靶疾病是雷特综合征。 在另一个实施方案中，所述靶疾病是图雷特综合征。在另一个实施方案中， 所述靶疾病是安吉尔曼综合征。在另一个实施方案中，所述靶疾病是家族 性植物神经功能障碍症。在另一个实施方案中，所述靶疾病是诵读困难。 在另一个实施方案中，所述靶疾病是周围神经病。在另一个实施方案中， 所述靶疾病是共济失调。在另一个实施方案中，所述靶疾病是张力障碍变 形性肌张力障碍。
在另一个实施方案中，所述靶疾病是ADHD。在另一个实施方案中，所 述ADHD因多巴胺的缺乏引起。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗脑损害。在另 一个实施方案中，所述损害是辐射诱导的。在另一个实施方案中，所述损 害因围产期脑缺氧引起。在另一个实施方案中，所述损害因围产期脑局部 缺血引起。在另一个实施方案中，所述围产期脑缺氧和/或局部缺血继发于 产伤。在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗因上述病况 之一产生的大脑麻痹。
在另一个实施方案中，本发明的方法或组合物用来治疗唐氏综合征或 21三体综合征(21trisomy)。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗继发于不良母 体营养的脑生长或发育受损。在另一个实施方案中，所述的脑生长或发育 受损继发于不良婴儿营养。在另一个实施方案中，所述的脑生长或发育受 损继发于代谢疾病。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗孤独症。在另 一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗孤独症相关性综合征。 在另一个实施方案中，所述综合征是自闭症。在另一个实施方案中，所述 综合征是本领域已知的任何其它孤独症相关性综合征。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗本领域已知的 任何其它儿科神经疾病。每种疾病代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明的方法的另一个实施方案中，本发明组合物的施用提高该对 象血流中的尿苷水平，从而调节本文中所例举的效应之一(例如改善记忆或 认知功能、刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另一个实施方案 中，在不提高血浆中尿苷水平的情况下调节所述效应。在另一个实施方案 中，如本文所提及，提高的血浆尿苷水平引起脑胞苷水平提高。因此，本 发明表明CDP-胆碱作用的一种新机制；即通过提高血浆尿苷水平。在另一 个实施方案中，本发明方法和组合物对血浆尿苷水平的影响能使治疗剂量 比其它可能的治疗剂量更低。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。 每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明方法的另一个实施方案中，施用本发明组合物提高对象脑内 的胞苷水平，从而调节了本文中例举的效应之一(例如改善记忆或认知功能、 刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另一个实施方案中，通过提 高脑内胞苷三磷酸(CTP)水平调节所述效应。在另一个实施方案中，通过提 高脑内CDP-胆碱水平调节所述效应。在另一个实施方案中，通过提高脑内 胞苷、CTP和CDP-胆碱的衍生物的水平调节所述效应。在另一个实施方案 中，通过提高脑内胞苷、CTP和CDP-胆碱的代谢物的水平调节所述效应。 在另一个实施方案中，在不提高脑内胞苷、CTP和CDP-胆碱或其衍生物或 代谢物的水平的情况下调节所述效应。每种可能性代表本发明的一个独立 实施方案。
如本文中所述，图7-9显示口服施用的尿苷迅速且有效地发挥作用以提 高脑内胞苷的水平。这些研究结果证实提高血浆尿苷水平转而提高胞苷、 CTP和CDP-胆碱的水平。实施例13中的数据进一步显示胆碱增加神经递质 释放。因此，施用提高血浆尿苷水平的组合物、尤其施用CDP-胆碱提高脑 胞苷水平。
在另一个实施方案中，增加胞苷、CTP和CDP-胆碱的衍生物或其代谢 物使细胞能提高磷脂水平，从而调节本文中所例举的效应之一(例如改善记 忆或认知功能、刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另一个实施 方案中，所述磷脂是PC。在另一个实施方案中，所述磷脂是PE。在另一个 实施方案中，所述磷脂是PS。在另一个实施方案中，所述磷脂是PI。在另 一个实施方案中，所述磷脂或是PC、PE、或PS的衍生物或其代谢物。每种 可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明方法的另一个实施方案中，施用本发明组合物提高对象神经 学功能，从而调节本文中所例举的效应之一(例如改善记忆或认知功能、刺 激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。
在另一个实施方案中，由本发明方法改善的神经功能是突触传递。在 另一个实施方案中，所述的突触传递邻近运动神经元。在另一个实施方案 中，所述的突触传递邻近中间神经元。在另一个实施方案中，所述的突触 传递邻近感觉神经元。每种类型的突触传递代表本发明的一个独立实施方 案。
在另一个实施方案中，施用本发明的组合物刺激或增强神经细胞的神 经突增生，从而调节本文中所例举的效应之一(例如改善记忆或认知功能、 刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另一个实施方案中，施用本 发明的组合物刺激或增强神经突支化，从而调节本文中例举的作用之一(例 如改善记忆或认知功能、刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另 一个实施方案中，本文中例举的作用之一在不增加神经细胞的神经突数量 的情况下出现。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，“神经突”指从神经元生长出来的突起。在另一个 实施方案中，所述突起是树突。在另一个实施方案中，所述突起是轴突。 每个类型的神经突代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，施用本发明的组合物增加神经细胞的神经突的 平均数量，从而调节本文中所例举的效应之一(例如改善记忆或认知功能、 刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另一个实施方案中，本文中 例举的效应之一在不增加所述神经细胞的神经突数量的情况下出现。每种 可能性代表本发明的一个独立实施方案。
如本文中所提供，实施例8的研究结果显示：提高血浆尿苷水平导致膜 前体水平的提高，引起神经元产生具有更多分支的更多神经突。在另一个 实施方案中，通过增加其表面积和尺寸，细胞能够与相邻细胞形成更多连 接。实施例13中的数据进一步显示胆碱增加神经递质释放。此外，在另一 个实施方案中，胞浆膜的量增加或组成改变神经递质的合成和释放。在另 一个实施方案中，记忆形成也受到影响。因此，施用提高血浆尿苷水平的 组合物、尤其施用CDP-胆碱增加神经突生长和支化。
在本发明方法的另一个实施方案中，施用本发明的组合物增加神经细 胞膜的量，从而调节本文中所例举的效应之一(例如改善记忆或认知功能、 刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另一个实施方案中，本文中 例举的效应之一通过刺激神经细胞膜的合成而实现。在另一个实施方案中， 刺激或增强神经细胞膜的量或其合成是调节本文中所例举效应之一的部分 原因。在另一个实施方案中，本发明的组合物在不刺激或增强神经细胞膜 的量或其合成的情况下调节本文中所例举的效应之一。每种可能性代表本 发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，通过本发明方法增加的膜是神经突膜。在另一 个实施方案中，所述的膜是树突膜。在另一个实施方案中，所述的膜是轴 突膜。在另一个实施方案中，所述膜是本领域已知的任何其它类型的膜。 每个类型的膜代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，通过本发明方法增强细胞膜或突触的组分合成。 如本文中提供，本发明的研究结果显示：提高血浆尿苷水平增强PC前体的 合成。在另一个实施方案中，通过本发明方法增强其合成的组分是PC。在 另一个实施方案中，所述组分是甘油磷脂。在另一个实施方案中，所述组 分是磷脂酸。在另一个实施方案中，所述组分是磷脂酰乙醇胺。在另一个 实施方案中，所述组分是卵磷脂。在另一个实施方案中，所述组分是磷脂 酰肌醇。在另一个实施方案中，所述组分是磷脂酰丝氨酸。在另一个实施 方案中，所述组分是2-溶血卵磷脂。在另一个实施方案中，所述组分是缩醛 磷脂。在另一个实施方案中，所述组分是胆碱缩醛磷脂。在另一个实施方 案中，所述组分是磷脂酰甘油。在另一个实施方案中，所述组分是胆碱双 磷脂酰甘油。在另一个实施方案中，所述组分是胆碱神经鞘脂。在另一个 实施方案中，所述组分是胆碱鞘磷脂。在另一个实施方案中，所述组分是 本领域已知的任何其它磷脂。每个类型的磷脂代表本发明的一个独立实施 方案。
在另一个实施方案中，增强了磷脂前体的合成。在另一个实施方案中， 所述磷脂前体是CTP。在另一个实施方案中，所述磷脂前体是肌醇。在另一 个实施方案中，所述磷脂前体是甘油。在另一个实施方案中，所述磷脂前 体是乙酸酯。在另一个实施方案中，所述磷脂前体是本领域已知的任何其 它磷脂前体。每种磷脂前体代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明方法的另一个实施方案中，本发明的组合物或方法改善或增 强神经递质的功能，从而调节本文中所例举的效应之一(例如改善记忆或认 知功能、刺激神经功能、膜合成、神经递质释放等)。在另一个实施方案中， 改善或增强神经递质的功能通过提高突触内神经递质水平而发生。在另一 个实施方案中，神经递质的功能改善或增强通过增加所述神经递质释放至 突触内而发生。如本文中所提供，本发明的研究结果显示：提高血浆尿苷 水平增强神经元合成神经递质和反复释放神经递质的能力(实施例6)。实施 例13中的数据进一步显示胆碱增加神经递质释放。因此，施用提高血浆尿 苷水平的组合物、尤其施用CDP-胆碱改善神经递质功能。每种可能性代表 本发明的另一个实施方案。
在另一个实施方案中，受到增强的释放在刺激所述神经元之后发生。 在另一个实施方案中，所述释放在所述神经元去极化之后发生。在另一个 实施方案中，所述释放是基础神经递质释放。在另一个实施方案中，对所 述神经元的刺激包括使所述神经元暴露于钾离子。在另一个实施方案中， 对所述神经元的刺激包括本领域已知的任何其它神经刺激方法。用于评估 神经刺激和神经递质释放的方法是本领域熟知的，并且例如在Bewick GS， J Neurocytol 32：473-87，2003中描述。每种可能性代表本发明的一个独立实 施方案。在另一个实施方案中，改善或增强神经递质的功能在不改变突触 中神经递质的水平或其释放的情况下发生。每种可能性代表本发明的一个 独立实施方案。
如本文中所提供，图10中描述的研究结果显示提高血浆尿苷水平显著 改善神经递质功能，从而改善神经功能。图11-14中描述的数据显示：提高 的血浆尿苷水平对神经突形态的有益作用，这再次改善神经功能。实施例 13中的数据进一步显示胆碱增加神经递质释放。因此，施用提高血浆尿苷 水平的组合物、尤其施用CDP-胆碱改善神经功能。
在另一个实施方案中，由本发明方法影响其水平或活性或释放的神经 递质是乙酰胆碱。在另一个实施方案中，所述神经递质是多巴胺。在另一 个实施方案中，所述神经递质是血清素。在另一个实施方案中，所述神经 递质是5-羟色胺(5-HT)。在另一个实施方案中，所述神经递质是GABA。在 另一个实施方案中，所述神经递质是本领域已知的任何其它神经递质。每 个类型的神经递质代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，刺激所述细胞膜的量或其合成通过刺激或增强 磷脂的合成而实现(实施例5)。在另一个实施方案中，刺激或增强神经细胞 膜的量或其合成通过刺激或增强磷脂前体合成而实现(实施例5)。在另一个 实施方案中，刺激或增强磷脂或其前体的合成是刺激神经细胞膜的量或其 合成的部分原因。在另一个实施方案中，本发明的组合物在不刺激或增强 磷脂或其前体合成的情况下刺激所述细胞膜的量或其合成。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供促进对象的受损神经细胞修复的方 法，该方法包括给所述对象施用包含CDP-胆碱或其可药用盐的组合物，从 而促进修复对象的受损神经细胞。在另一个实施方案中，该对象患有阿尔 茨海默病。在另一个实施方案中，该对象患有另一种年龄相关性记忆障碍。 在另一个实施方案中，该对象患有与年龄不相关的记忆障碍或认知障碍。 每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，通过所述方法刺激或增强受损神经细胞中的膜 产生。在另一个实施方案中，通过所述方法刺激或增强与所述细胞相邻的 产生髓磷脂的少突胶质细胞中的膜产生。每种可能性代表本发明的一个独 立实施方案。
在另一个实施方案中，所述受损神经细胞具有受损的轴突。在另一个 实施方案中，所述受损轴突由本发明的方法治愈。每种可能性代表本发明 的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明方法用来治愈受损的神经元。在另一个 实施方案中，所述神经元因儿童疾病或障碍而受损。在另一个实施方案中， 所述神经元因分娩意外而受损。在另一个实施方案中，所述记神经元受损 是由于分娩前或分娩期间氧不充分。在另一个实施方案中，所述记神经元 受损是由于唐氏综合征。在另一个实施方案中，所述神经元受损损害是由 于大脑麻痹。在另一个实施方案中，导致低突触数量的上述之一的病况是 通过本发明的方法进行治疗。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法或组合物用来在早产的情况下刺 激脑发育。在另一个实施方案中，本发明的方法或组合物用来治疗阿斯珀 格综合征。在另一个实施方案中，所述靶疾病是雷特综合征。在另一个实 施方案中，所述靶疾病是图雷特综合征。在另一个实施方案中，所述靶疾 病是安吉尔曼综合征。在另一个实施方案中，所述靶疾病是家族性植物神 经功能障碍症。在另一个实施方案中，所述靶疾病是诵读困难。在另一个 实施方案中，所述靶疾病是周围神经病。在另一个实施方案中，所述靶疾 病是共济失调。在另一个实施方案中，所述靶疾病是张力障碍变形性肌张 力障碍。
在另一个实施方案中，所述靶疾病是ADHD。在另一个实施方案中，认 为所述ADHD因多巴胺的缺乏引起。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗脑损害。在另 一个实施方案中，所述损害是辐射引起的。在另一个实施方案中，所述损 害因围产期脑缺氧引起。在另一个实施方案中，所述损害因围产期脑局部 缺血引起。在另一个实施方案中，所述围产期脑缺氧和/或局部缺血继发于 产伤。在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗因上述病况 之一引起的大脑麻痹。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗唐氏综合征或 21三体综合征。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗继发于不良母 体营养的脑生长或发育受损。在另一个实施方案中，所述的脑生长或发育 受损继发于不良婴儿营养。在另一个实施方案中，所述的脑生长或发育受 损继发于代谢疾病。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗孤独症。在另 一个实施方案中，本发明的方法或组合物用来治疗孤独症相关性综合征。 在另一个实施方案中，所述综合征是自闭症。在另一个实施方案中，所述 综合征是本领域已知的任何其它孤独症相关性综合征。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用来治疗本领域已知的 任何其它儿科神经疾病。每种疾病代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法通过刺激神经细胞、神经元或脑 细胞的受体P2Y引起上述效应之一。在另一个实施方案中，部分地因刺激神 经细胞或神经元的P2Y受体而引起上述效应之一。在另一个实施方案中，部 分地或完全因刺激另一类型细胞的P2Y受体而引起上述效应之一。在另一个 实施方案中，在不刺激P2Y受体的情况下引起上述效应之一。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，对P2Y受体的刺激作用由本发明组合物提供的 CDP-胆碱或其可药用盐介导。在另一个实施方案中，将所述CDP-胆碱或其 可药用盐转化成刺激所述细胞内P2Y受体的第二化合物。在另一个实施方案 中，所述第二化合物是尿苷-5′-三磷酸(UTP)。在另一个实施方案中，所述 第二化合物是本领域已知的CDP-胆碱的另一代谢产物。每种化合物代表本 发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或其可药用盐以胞内方式转化成 第二化合物。在另一个实施方案中，所述转化是在胞外的。在另一个实施 方案中，所述CDP-胆碱或其可药用盐在细胞内转化成第二化合物，然后所 述第二化合物从该细胞中分泌出来。在另一个实施方案中，从细胞中分泌 出来后，所述第二化合物与不同细胞接触，在其中所述第二化合物刺激P2Y 受体。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，P2Y受体是已知参与血小板活化和其它生物学功 能的受体家族。这些P2Y受体在Mahaut-Smith MP等，Platelets.200415： 131-44，2004中综述。
在另一个实施方案中，本发明的P2Y受体是P2Y2受体。在另一个实施 方案中，所述P2Y受体是P2Y4受体。在另一个实施方案中，所述P2Y受体是 P2Y6受体。在另一个实施方案中，所述P2Y受体是本领域已知的任何其它 P2Y受体。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述P2Y受体刺激第二信使。在另一个实施方案 中，所述第二信使是Gα蛋白。在另一个实施方案中，所述第二信使是Gα(q) 蛋白。在另一个实施方案中，所述信使是cAMP。在另一个实施方案中，所 述第二信使是本领域已知的任何其它第二信使。第二信使以及与它们相关 的信号途径是本领域熟知的，并且在例如Ferguson S，Pharm Rev 53：1-24， 2001；Huang E等，Ann Rev Biochem 72：609-642，2003；和Blitterswijk W 等，Biochem.J.369：199-211，2003中的描述。每种第二信使代表本发明的一 个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述第二信使刺激磷脂酶C。在另一个实施方案 中，所述第二信使调节胞内钙水平。在另一个实施方案中，所述第二信使 增加蛋白激酶活性。在另一个实施方案中，上述途径中的一个或多个刺激 膜产生。在另一个实施方案中，所述第二信使调节或刺激另一种细胞途径， 其中所述的另一种细胞途径刺激膜产生。每种可能性代表本发明的一个独 立实施方案。
在另一个实施方案中，作为本发明方法的靶标或在所述方法中被接触 的细胞是神经细胞。在另一个实施方案中，所述细胞是脑细胞。在另一个 实施方案中，所述细胞是本领域已知的任何其它类型的细胞。每种可能性 代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明方法的靶神经细胞、靶神经突或靶脑细 胞是新分化的。在另一个实施方案中，所述细胞不是新分化的。在另一个 实施方案中，“新分化的”指在开始施用本发明组合物前24小时已经分化的神 经元。在另一个实施方案中，“新分化的”指在开始施用本发明组合物前48 小时已经分化的神经元。在另一个实施方案中，“新分化的”指在开始施用本 发明组合物前72小时已经分化的神经元。在另一个实施方案中，“新分化的” 指在开始施用本发明组合物前1周已经分化的神经元。在另一个实施方案 中，“新分化的”是在开始施用本发明组合物后完成分化的神经元。每种可能 性代表本发明的一个独立实施方案。
评估神经元分化的方法是本领域熟知的，并且在例如Contestabile A等 (Neurochem Int.45：903-14，2004)中描述。每种这样的方法代表本发明的一 个独立实施方案。
在另一个实施方案中，在本发明的方法中施用CDP-胆碱前体。在另一 个实施方案中，所述CDP-胆碱前体是本领域已知的任何药理学可接受的 CDP-胆碱前体。
在另一个实施方案中，在本发明的方法中施用CDP-胆碱衍生物。
在另一个实施方案中，在本发明的方法中施用CDP-胆碱代谢物。
在本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，CDP-胆碱以基于CDP- 胆碱的化合物的形式施用。在另一个实施方案中，CDP-胆碱以CDP-胆碱前 体的形式施用。在另一个实施方案中，所述基于CDP-胆碱的化合物是CDP- 胆碱盐。在另一个实施方案中，所述基于CDP-胆碱的化合物或CDP-胆碱前 体是本领域已知的任何基于CDP-胆碱的化合物或CDP-胆碱前体。每种基于 CDP-胆碱的化合物或CDP-胆碱前体代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，CDP-胆碱以CDP-胆碱 源的形式施用。在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱源是富含CDP-胆碱的 食物。在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱源是富含CDP-胆碱的饮食产品。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物包含CDP-胆碱盐。在另 一个实施方案中，所述CDP-胆碱盐是本领域已知的任意CDP-胆碱盐。在另 一个实施方案中，所述CDP-胆碱盐是CDP-胆碱前体的任何已知盐、其衍生 物或来源。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，施用上述CDP-胆碱相关的化合物中两种或更多 种化合物的混合物。每个类型的CDP-胆碱前体、衍生物、代谢物或来源及 其每种组合代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明方法的另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或相关的化合物以 如此方式施用，从而在所述对象的脑内实现至少9-30微摩尔(mcM)血清尿苷 水平。在另一个实施方案中，实现9-50mcM的血清尿苷水平。另一个实施 方案中，实现9-20mcM的血清尿苷水平。另一个实施方案中，实现9-15mcM 的血清尿苷水平。另一个实施方案中，实现12-30mcM的血清尿苷水平。另 一个实施方案中，实现12-50mcM的血清尿苷水平。另一个实施方案中，实 现12-20mcM的血清尿苷水平。另一个实施方案中，实现12-15mcM的血清 尿苷水平。另一个实施方案中，实现14-30mcM的血清尿苷水平。另一个实 施方案中，实现14-50mcM的血清尿苷水平。另一个实施方案中，实现14-20 mcM的血清尿苷水平。另一个实施方案中，实现14-15mcM的血清尿苷水平。 每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明方法的另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或相关的化合物以 如此方式施用，从而在所述对象的脑内实现至少20-30纳摩尔的胆碱水平。 在另一个实施方案中，实现10-50纳摩尔的胆碱水平。在另一个实施方案中， 实现5-75纳摩尔的胆碱水平。在另一个实施方案中，实现25-40纳摩尔的胆 碱水平。在另一个实施方案中，实现30-35纳摩尔的胆碱水平。每种可能性 代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱、其衍生物、来源或前体以20-500 mg每日剂量施用。在另一个实施方案中，所述日剂量是约30-500mg。在另 一个实施方案中，所述日剂量是约40-500mg。在另一个实施方案中，所述 日剂量是约70-500mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约40-500mg。 在另一个实施方案中，所述日剂量是约100-500mg。在另一个实施方案中， 所述日剂量是约150-500mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约200-500 mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约300-500mg。在另一个实施方 案中，所述日剂量是约20-200mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约 30-200mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约40-200mg。在另一个实 施方案中，所述日剂量是约70-200mg。在另一个实施方案中，所述日剂量 是约100-200mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约20-350mg。在另 一个实施方案中，所述日剂量是约30-350mg。在另一个实施方案中，所述 日剂量是约40-350mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约70-350mg。 在另一个实施方案中，所述日剂量是约100-350mg。在另一个实施方案中， 所述日剂量是约20-700mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约30-700 mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约40-700mg。在另一个实施方案 中，所述日剂量是约70-700mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约 100-700mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约70-700mg。在另一个 实施方案中，所述日剂量是约100-700mg。在另一个实施方案中，所述日剂 量是约150-700mg。在另一个实施方案中，所述日剂量是约200-700mg。在 另一个实施方案中，所述日剂量是约300-700mg。在另一个实施方案中，所 述日剂量是约400-700mg。
在另一个实施方案中，所述日剂量是约300mg-1g。在另一个实施方案 中，所述日剂量是约300mg-1.5g。在另一个实施方案中，所述日剂量是约 300mg-2g。在另一个实施方案中，所述日剂量是约300mg-3g。在另一个实 施方案中，所述日剂量是约300mg-4g。在另一个实施方案中，所述日剂量 是约200mg-1g。在另一个实施方案中，所述日剂量是约200mg-1.5g。在另 一个实施方案中，所述日剂量是约200mg-2g。在另一个实施方案中，所述 日剂量是约200mg-3g。在另一个实施方案中，所述日剂量是约200mg-4g。
在另一个实施方案中，所述剂量是每日约20mg-50g。在另一个实施方 案中，所述剂量是每日约50mg-30g。在另一个实施方案中，所述剂量是每 日约75mg-20g。在另一个实施方案中，所述剂量是每日约100mg-20g。在另 一个实施方案中，所述剂量是每日约100mg-10g。在另一个实施方案中，所 述剂量是每日约200mg-8g。在另一个实施方案中，所述剂量是每日约 400mg-6g。在另一个实施方案中，所述剂量是每日约600mg-4g。在另一个 实施方案中，所述剂量是每日约800mg-3g。在另一个实施方案中，所述剂 量是每日约1-2.5g。在另一个实施方案中，所述剂量是每日约1.5-2g。在另 一个实施方案中，所述剂量是每日约5mg-5g。在另一个实施方案中，所述 剂量是每日约5mg-50g。每种剂量范围代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明的方法和组合物的另一实施方案中，CDP-胆碱或其可药用盐 是按每日约20mg施用。在另一个实施方案中，所述剂量是约10mg/日。在另 一个实施方案中，所述剂量是约30mg/日。在另一个实施方案中，所述剂量 是约40mg/日。在另一个实施方案中，所述剂量是约60mg/日。在另一个实 施方案中，所述剂量是mg/日。在另一个实施方案中，所述剂量是约100mg/ 日。在另一个实施方案中，所述剂量是约150mg/日。在另一个实施方案中， 所述剂量是约200mg/日。在另一个实施方案中，所述剂量是约300mg/日。 在另一个实施方案中，所述剂量是约400mg/日。在另一个实施方案中，所 述剂量是约600mg/日。在另一个实施方案中，所述剂量是约800mg/日。在 另一个实施方案中，所述剂量是约1g/日。在另一个实施方案中，所述剂量 是约1.5g/日。在另一个实施方案中，所述剂量是约2g/日。在另一个实施方 案中，所述剂量是约3g/日。在另一个实施方案中，所述剂量是约5g/日。在 另一个实施方案中，所述剂量是多于5g/日。
在另一个实施方案中，每日施用二次上文所述的量之一。在另一个实 施方案中，每日施用三次上文所述的量之一。在另一个实施方案中，每周 一次施用上文所述的量之一。在另一个实施方案中，每周二次施用上文所 述的量之一。在另一个实施方案中，每周三次施用上文所述的量之一。在 另一个实施方案中，根据本领域已知的任何其它给药方案施用上文所述的 量之一。每种可能性代表本发明的另一实施方案。
在本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，每剂量约施用约20mg 的CDP-胆碱或其可药用盐。在另一个实施方案中，所述剂量是约10mg/剂量。 在另一个实施方案中，所述剂量是约30mg/剂量。在另一个实施方案中，所 述剂量是约40mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约60mg/剂量。 在另一个实施方案中，所述剂量是约mg/剂量。在另一个实施方案中，所述 剂量是约100mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约150mg/剂量。 在另一个实施方案中，所述剂量是约200mg/剂量。在另一个实施方案中， 所述剂量是约300mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约400mg/剂 量。在另一个实施方案中，所述剂量是约600mg/剂量。在另一个实施方案 中，所述剂量是约800mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约1g/剂 量。在另一个实施方案中，所述剂量是约1.5g/剂量。在另一个实施方案中， 所述剂量是约2g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约3g/剂量。在另 一个实施方案中，所述剂量是约5g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量 是约多于5g/剂量。
在另一个实施方案中，所述剂量是约10-20mg/剂量。在另一个实施方案 中，所述剂量是约20-30mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约 20-40mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约30-60mg/剂量。在另一 个实施方案中，所述剂量是约40-80mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂 量是约50-100mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约50-150mg/剂量。 在另一个实施方案中，所述剂量是约100-200mg/剂量。在另一个实施方案中， 所述剂量是约200-300mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约 300-400mg/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约400-600mg/剂量。在 另一个实施方案中，所述剂量是约500-800mg/剂量。在另一个实施方案中， 所述剂量是约400mg-1g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约 800mg-1g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约1-1.5g/剂量。在另一 个实施方案中，所述剂量是约1.5-2g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量 是约1-2g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约1-3g/剂量。在另一个 实施方案中，所述剂量是约1.5-3g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是 约2-3g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约1-4g/剂量。在另一个实 施方案中，所述剂量是约2-4g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约 1-5g/剂量。在另一个实施方案中，所述剂量是约2-5g/剂量。在另一个实施 方案中，所述剂量是约3-5g/剂量。每种可能性代表本发明的另一个实施方 案。
在另一个实施方案中，本发明所施用的组合物还包含多不饱和脂肪酸。
在另一个实施方案中，“多不饱和脂肪酸”或“PUFA”是指ω-3脂肪酸。在 另一个实施方案中，该术语指ω-6脂肪酸。在另一个实施方案中，该术语指 具有2个或多个双键的脂肪酸。在另一个实施方案中，该术语指具有2个双 键的脂肪酸。在另一个实施方案中，该术语指具有3个双键的脂肪酸。在另 一个实施方案中，该术语指具有多于3个双键的脂肪酸。每种可能性代表本 发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中的ω-3脂肪酸是DHA。 DHA是ω-3型多不饱和22-碳脂肪酸，又称作4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯 酸。
在另一个实施方案中，所述的ω-3脂肪酸是α-亚麻酸(9，12，15-十八碳三 烯酸)。在另一个实施方案中，所述的ω-3脂肪酸是十八碳四烯酸(6，9，12，15- 十八碳四烯酸)。在另一个实施方案中，所述的ω-3脂肪酸是二十烷三烯酸 (ETA；11，14，17-二十碳三烯酸)。在另一个实施方案中，所述的ω-3脂肪酸 是二十碳四烯酸(8，11，14，17-二十碳四烯酸)。在另一个实施方案中，所述的 ω-3脂肪酸是二十碳五烯酸(EPA；5，8，11，14，17-二十碳五烯酸)。在另一个实 施方案中，所述的ω-3脂肪酸是二十碳六烯酸(又称作″EPA″；5，7，9，11，14，17- 二十碳六烯酸)。在另一个实施方案中，所述的ω-3脂肪酸是二十二碳五烯酸 (DPA；7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸)。在另一个实施方案中，所述的ω-3 脂肪酸是二十四碳六烯酸(6，9，12，15，18，21-二十四碳六烯酸)。在另一个实施 方案中，所述的ω-3脂肪酸是本领域已知的任何其它ω-3脂肪酸。每种ω-3脂 肪酸代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述的ω-3脂肪酸是抗炎性PUFA。在另一个实 施方案中，所述抗炎性PUFA是二十碳五烯酸(EPA；5，8，11，14，17-二十碳五 烯酸)。在另一个实施方案中，所述抗炎性PUFA是DHA。在另一个实施方 案中，所述抗炎性PUFA是本领域已知的任何其它抗炎性PUFA。每种可能 性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述的ω-3脂肪酸是DHA的代谢前体。在另一个 实施方案中，所述的代谢前体是EPA。在另一个实施方案中，所述的代谢前 体是二十二碳五烯酸(DPA；7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸)。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，“代谢前体”指提高血流或组织中脂肪酸浓度的 化合物。在另一个实施方案中，“代谢前体”指被所述对象的组织或酶代 谢成脂肪酸的化合物。在另一个实施方案中，“代谢前体”指被靶细胞代 谢成脂肪酸的化合物。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，ω-3脂肪酸的代谢前体 是α-亚麻酸，其中所述的α-亚麻酸充当EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳 六烯酸)的前体。在另一个实施方案中，所述的代谢前体是本领域已知的任 何其它ω-3脂肪酸前体。每种ω-3脂肪酸前体代表本发明的一个独立实施方 案。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中的PUFA是ω-6脂肪酸。 在另一个实施方案中，所述的ω-6脂肪酸是花生四烯酸。花生四烯酸是又称 作5，8，11，14-二十碳四烯酸的ω-6，20碳脂肪酸。在另一个实施方案中，所述ω-6 脂肪酸是花生四烯酸的代谢前体。每种可能性代表本发明的一个独立实施 方案。
在另一个实施方案中，所述的ω-6脂肪酸是亚油酸(9，12-十八碳二烯酸)。 在另一个实施方案中，所述ω-6脂肪酸是共轭亚油酸(CLA)。在另一个实施 方案中，所述ω-6脂肪酸是γ-亚麻酸(6，9，12-十八碳三烯酸)。在另一个实施方 案中，所述ω-6脂肪酸是二十碳二烯酸(11，14-二十碳二烯酸)。在另一个实施 方案中，所述ω-6脂肪酸是高-γ-亚麻酸(8，11，14-花生四烯酸)。在另一个实施 方案中，所述ω-6脂肪酸是二十二碳二烯酸(13，16-二十二碳二烯酸)。在另一 个实施方案中，所述ω-6脂肪酸是二十二碳四烯酸(7，10，13，16-二十二碳四烯 酸)。在另一个实施方案中，所述ω-6脂肪酸是4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸。 在另一个实施方案中，所述ω-6脂肪酸是双高γ亚麻酸(DGLA)。在另一个实 施方案中，所述ω-6脂肪酸是本领域已知的任何其它ω-6脂肪酸。每种ω-6脂 肪酸代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，所述ω-6脂肪酸的代谢 前体是亚油酸。在另一个实施方案中，所述的代谢前体是作为亚油酸来源 的反-十八碳烯酸(TVA)。在另一个实施方案中，所述的代谢前体是本领域 已知的任何其它ω-6脂肪酸前体。每种ω-6脂肪酸前体代表本发明的一个独 立实施方案。
如本文中所提供，ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸各自与尿苷(例如CDP-胆碱) 协同地作用以提高磷脂合成和磷脂水平(图26)。在另一个实施方案中，所述 尿苷磷酸是CDP-胆碱。
在另一个实施方案中，在本发明方法中进行的施用是长期施用。在另 一个实施方案中，“长期施用”是无限地定期施用。在另一个实施方案中， 该术语指定期施用至少有1个月。在另一个实施方案中，该术语指定期施用 至少有6周。在另一个实施方案中，该术语指定期施用至少2个月。在另一 个实施方案中，该术语指定期施用至少3个月。在另一个实施方案中，该术 语指定期施用至少4个月。在另一个实施方案中，该术语指定期施用至少5 个月。在另一个实施方案中，该术语指定期实施至少6个月。在另一个实施 方案中，该术语指定期施用至少9个月。在另一个实施方案中，该术语指定 期施用至少1年。在另一个方案中，该术语指定期施用至少1.5年。在另一个 实施方案中，该术语指定期施用至少2年。在另一个实施方案中，该术语指 定期施用多于2年。在另一个方案中，该术语指定期施用直至跟踪随访。在 另一个实施方案中，该术语指定期施用直至重新评估正在治疗的疾病或病 症。在另一个实施方案中，该术语指通过饲管施用本发明的组合物。在另 一个实施方案中，所述施用是肠内方式。在另一个实施方案中，所述饲管 用于昏迷的患者或对象。在另一个实施方案中，所述组合物用来恢复该患 者或对象的认知功能。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，“定期间隔”指每日施用。在另一个方案中， 该术语指每周施用。在另一个方案中，该术语指每日施用。在另一个方案 中，该术语指每周施用1-2次。在另一个方案中，该术语指每周施用1-3次。 在另一个方案中，该术语指每周施用2-3次。在另一个方案中，该术语指每 周施用1-4次。在另一个方案中，该术语指每周施用1-4次。在另一个方案中， 该术语指每周施用1-5次。在另一个方案中，该术语指每周施用2-5次。在另 一个方案中，该术语指每周施用3-5次。在另一个方案中，该术语指施用1-2 次。在另一个方案中，该术语指每日施用1-3次。在另一个方案中，该术语 指每日施用1-4次。在另一个方案中，该术语指每日施用2-3次。在另一个方 案中，该术语指每日施用2-4次。在另一个方案中，该术语指每日施用3-4 次。在另一个方案中，该术语指每日施用2-5次。在另一个方案中，该术语 指每日施用3-5次。在另一个方案中，该术语指每日施用4-5次。
上述施用的每个类型代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明组合物以在至少10％受治疗患者的群体中 产生预期效果的剂量施用。在另一个实施方案中，所述剂量在至少20％的受 治疗患中产生所述效果的剂量。在另一个实施方案中，在至少30％的受治疗 患者中产生所述效果。在另一个实施方案中，在至少40％的受治疗患者中产 生所述效果。在另一个实施方案中，在至少50％的受治疗患者中产生所述效 果。在另一个实施方案中，在至少60％的受治疗患者中产生所述效果。在另 一个实施方案中，在至少70％的受治疗患者中产生所述效果。在另一个实施 方案中，在至少80％的受治疗患者中产生所述效果。在另一个实施方案中， 在至少90％的受治疗患者中产生所述效果。在另一个实施方案中，在大于 90％的受治疗患者中产生所述效果。每种可能性代表本发明的一个独立实施 方案。
在另一个实施方案中，本发明方法的对象是哺乳动物。在另一个实施 方案中，该对象是人。在另一个实施方案中，该对象是啮齿目动物。在另 一个实施方案中，该对象是实验动物。在另一个实施方案中，该对象是雌 性。在另一个实施方案中，该对象是雄性。在另一个实施方案中，该对象 是妊娠雌性。在另一个实施方案中，该对象是授乳雌性。在另一个实施方 案中，该对象是婴儿。在另一个实施方案中，该对象是儿童。在另一个实 施方案中，该对象是幼儿。在另一个实施方案中，该对象是成体。在另一 个实施方案中，该对象是老龄成体。在另一个实施方案中，“老龄”涉及 上述所例举的任意实施方案。在另一个实施方案中，该对象是成体。在另 一个实施方案中，该对象是本领域已知的任何其它类型的对象。每种可能 性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，“婴儿”指小于1岁的对象。在另一个方案中， 该术语指小于18月龄的对象。在另一个方案中，该术语指年龄小于6月龄的 对象。在另一个方案中，该术语指小于7月龄的对象。在另一个方案中，该 术语指小于8月龄的对象。在另一个方案中，该术语指小于9月龄的对象。 在另一个方案中，该术语指小于10月龄的对象。在另一个方案中，该术语 指小于11月龄的对象。在另一个方案中，该术语指小于13月龄的对象。在 另一个方案中，该术语指小于14月龄的对象。在另一个方案中，该术语指 小于16月龄的对象。在另一个方案中，该术语指小于20月龄的对象。在另 一个方案中，该术语指小于2岁的对象。在另一个方案中，该术语指仍未断 奶的对象。在另一个方案中，该术语指虽已断奶，但是属于上述年龄范围 之一的对象。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，“儿童”指小于18岁的对象。在另一个方案中， 该术语指小于17岁的对象。在另一个方案中，该术语指小于16岁的对象。 在另一个方案中，该术语指小于15岁的对象。在另一个方案中，该术语指 小于14岁的对象。在另一个方案中，该术语指小于13岁的对象。在另一个 方案中，该术语指小于12岁的对象。在另一个方案中，该术语指小于11岁 的对象。在另一个方案中，该术语指小于10岁的对象。在另一个方案中， 该术语指小于9岁的对象。在另一个方案中，该术语指小于8岁的对象。在 另一个方案中，该术语指小于7岁的对象。
在另一个实施方案中，“幼儿”指小于7岁的对象。在另一个方案中， 该术语指小于6岁的对象。在另一个方案中，该术语指小于5岁的对象。在 另一个方案中，该术语指小于4岁的对象。在另一个方案中，该术语指小于 三岁半的对象。在另一个方案中，该术语指小于3岁的对象。在另一个方案 中，该术语指小于两岁半的对象。每种可能性代表本发明的一个独立实施 方案。
在另一个实施方案中，“成体”指是指大于上述所列作为儿童上限的 年龄之一的对象。在另一个方案中，该术语指大于上述所列作为幼儿上限 的年龄之一的对象。每种可能性代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述对象是婴幼儿，并且给所述婴幼儿的授乳 母亲施用CDP-胆碱或其可药用盐。在另一个实施方案中，所述对象是胎儿， 并且给所述婴幼儿的妊娠母亲施用CDP-胆碱或其可药用盐。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，给所述对象施用额外的治疗性化合物作为本发 明方法的部分。在另一个实施方案中，所述CDP-胆碱或前体、衍生物或其 来源是由所述对象利用的组合物中的唯一活性成份。每种可能性代表本发 明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述额外的治疗性化合物是作为尿苷磷酸化酶 抑制剂发挥作用的药物，例如苯巴比妥或其衍生物。在另一个实施方案中， 所述额外的治疗性化合物是增加尿苷可用性的药物。在另一个实施方案中， 所述额外的治疗性化合物是抑制尿苷分泌的化合物，例如地拉卓或海索苯 定。在另一个实施方案中，所述额外的治疗性化合物是尿苷的肾脏运输竞 争物，例如：L-尿苷、L-2′，3′-二脱氧尿苷和D-2′，3′-二脱氧尿苷。在另一个实 施方案中，所述额外的治疗性化合物是与CDP-胆碱在磷脂生成中协同发挥 作用的药物。在另一个实施方案中，所述额外的治疗性化合物是与尿苷竞 争肾清除率的化合物，例如美国专利号5723449和5567689中所披露的L-尿 苷、L-2′，3′-二脱氧尿苷和D-2′，3′-二脱氧尿苷及其混合物。在另一个实施方案 中，所述额外的治疗性化合物是有益于对象的任何其它化合物。
在其它实施方案中，所述额外的治疗性化合物是鞘磷脂、酰基甘油磷 酸胆碱、卵磷脂、溶血卵磷脂、甘油磷脂酰胆碱或其混合物。每种额外的 治疗性化合物代表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法包括施用药物组合物，所述药物 组合物包含CDP-胆碱或前体、衍生物或其来源的类似物、衍生物、同分异 构体、代谢物、可药用盐、医用产品、水合物、氮氧化物或其任意组合。
在另一个实施方案中，本发明的药物组合物通过本领域技术人员已知 的任何其它任何方法给对象施用，所述方法例如是胃肠道外、癌近旁、经 粘膜、经皮、肌内、静脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内、颅内、阴道 内或瘤内法。每种可能性代表本发明的另一个实施方案。
在本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，包含CDP-胆碱或前体、 衍生物或其来源的组合物还包含脂质部分。另一个实施方案中，所述脂质 部分包含多于10％(按重量)的ω-3脂肪酸。另一个实施方案中，所述脂质部 分包含多于10％的具有大于18个碳原子长度的ω-3脂肪酸。在另一个实施方 案中，ω-3脂肪酸的百分数或长度超过18个碳原子的ω-3脂肪酸的百分数超 过16％。在另一个实施方案中，所述百分数超过20％。在另一个实施方案中， 所述百分数超过25％。在另一个实施方案中，所述百分数超过30％。在另一 个实施方案中，所述百分数超过35％。在另一个实施方案中，所述百分数超 过40％。在另一个实施方案中，所述百分数超过45％。在另一个实施方案中， 所述百分数是10-40％。在另一个实施方案中，所述百分数超过10-50％。在 另一个实施方案中，所述百分数是16-40％。在另一个实施方案中，所述百 分数超过16-50％。在另一个实施方案中，所述百分数是20-40％。在另一个 实施方案中，所述百分数超过20-50％。在另一个实施方案中，所述百分数 是30-40％。在另一个实施方案中，所述百分数超过30-50％。每种可能性代 表本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，包含CDP-胆碱或前体、衍生物或其来源的所述 组合物的脂质部分包括二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸 及其组合。在另一个实施方案中，这些脂肪酸的总量大于存在的ω-3长链脂 肪酸的重量的50％。在另一个实施方案中，这些脂肪酸的总量大于ω-3长链 脂肪酸的60％。在另一个实施方案中，这些脂肪酸的总量大于ω-3长链脂肪 酸的70％。在另一个实施方案中，这些脂肪酸的总量大于ω-3长链脂肪酸的 75％。在另一个实施方案中，这些脂肪酸的总量大于ω-3长链脂肪酸的80％。 在另一个实施方案中，这些脂肪酸的总量大于ω-3长链脂肪酸的85％。
在另一个实施方案中，这些脂肪酸(DHA、DPA和EPA)的总量与亚油酸 的比值大于0.5。在另一个实施方案中，所述比值大于0.6。在另一个实施方 案中，所述比值大于0.7。在另一个实施方案中，所述比值大于0.8。在另一 个实施方案中，所述比值大于1。在另一个实施方案中，所述比值大于1.5。 在另一个实施方案中，所述比值大于2。在另一个实施方案中，所述比值大 于3。在另一个实施方案中，所述比值大于5。在另一个实施方案中，所述 比值大于7。在另一个实施方案中，所述比值大于10。在另一个实施方案中， 所述比值大于12。在另一个实施方案中，所述比值大于15。在另一个实施 方案中，所述比值是1-25。在另一个实施方案中，所述比值是2-22。在另一 个实施方案中，所述比值是3-22。在另一个实施方案中，所述比值是5-20。 在另一个实施方案中，所述比值是7-15。在另一个实施方案中，所述比值是 10-12。
在另一个实施方案中，包含CDP-胆碱或前体、衍生物或其来源的组合 物的脂质部分贡献该组合物的能量的20-60％。在另一个实施方案中，来源 于所述脂质的能量贡献是是25-55％。在另一个实施方案中，所述能量贡献 是30-50％。在另一个实施方案中，所述能量贡献是32-45％。
在另一实施方案中，在包含CDP-胆碱或前体、衍生物或其来源的组合 物的脂质部分中DHA与EPA的重量比是1-20。在另一个实施方案中，所述范 围是2-18。在另一个实施方案中，所述范围是3-16。在另一个实施方案中， 所述范围是5-14。在另一个实施方案中，所述范围是7-12。
在其它实施方案中，本发明的方法和组合物的一种组合物是营养补充 物(在另一实施方案中，是饮料)，其包含：
-CDP-胆碱 0.5g
-鱼油 3.7g
-糖 9.0g
-乳蛋白 3g
包含CDP-胆碱或前体、衍生物或其来源的组合物的脂质部分的上述类 型中的每一种类型代表本发明的一个独立实施方案。
在本发明的方法和组合物的另一个实施方案中，口服施用所述药物组 合物，并且从而将其配制为适于口服的形式。在另一个实施方案中，所述 形式是营养配方食品。在另一个实施方案中，所述形式是固体制品。在另 一个实施方案中，所述形式是半固体制品。在另一个实施方案中，所述形 式是液体制品。在其它实施方案中，固体口服制剂是片剂、胶囊剂、丸剂、 颗粒剂、团粒丸等。在另一个实施方案中，所述半固体制品是凝胶剂。在 另一个实施方案中，所述半固体制品是体育用凝胶剂。在另一个实施方案 中，液体口服制剂是溶液剂、混悬剂、分散剂、乳剂、油剂等。
在另一个实施方案中，所述活性成分配制于胶囊中。在另一个实施方 案中，本发明所述组合物除所述活性化合物和惰性载体或稀释剂外，还包 含硬质凝胶化胶囊(hard gelating capsule)。
在另一个实施方案中，所述药物组合物通过静脉内、动脉内、或肌内 注射液体制品而施用。适合的液体制剂包括溶液剂、混悬剂、分散剂、乳 剂、油剂等。在另一个实施方案中，所述药物组合物进行静脉施用，并且 因此而配制成适于静脉内施用的形式。在另一个实施方案中，所述药物组 合物是动脉内施用，并且因此而配制成适于动脉内施用的形式。在另一个 实施方案中，所述药物组合物是肌内施用，并且因此而配制成适合肌内施 用的形式。
在另一个实施方案中，所述药物组合物局部地施用于体表，并且因此 配制成适于局部施用的形式。合适的局部用剂型包括凝胶剂、软膏剂、乳 膏剂、洗剂、滴剂等。对于局部施用，将本发明的组合物作为在含有或不 含有药用载体的生理学可接受的稀释剂中的溶液剂、混悬剂或乳剂施加。
在另一个实施方案中，将所述药物组合物作为栓剂(例如直肠栓剂或尿 道栓剂)施用。在另一个实施方案中，将所述药物组合物通过皮下植入团粒 丸而施用。在另一个实施方案中，所述团粒剂提供活性剂的受控释放持续 一段时间。
在另一个实施方案中，所述活性化合物在囊泡(如脂质体)中递送。
在其它实施方案中，本发明方法中使用的载体或稀释剂包括但不限于 树胶、淀粉(如玉米淀粉、预糊化淀粉)、糖(如乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄 糖)、纤维质材料(如微晶纤维素)、丙烯酸酯(如聚甲基丙烯酸酯)、碳酸钙、 氧化镁、滑石或其混合物。
在其它实施方案中，用于液体制剂的可药用载体是水性或非水性的溶 液、混悬液、乳液或油。非水性的溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇以及可 注射的有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或混悬液， 包括盐水和缓冲介质。油的实例是动物源、植物源或合成源的那些油；例 如花生油、大豆油、橄榄油、葵花子油、鱼肝油、另一种海产类油或源自 乳或蛋的脂质。
在另一个实施方案中，胃肠道外用载体(用于皮下、静脉内、动脉内、 或肌内注射)包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖液、葡萄糖和氯化钠、乳酸林 格液和固定的油。静脉内用载体包括流体、营养补充剂和电解质补充剂， 如那些基于林格氏葡萄糖液的载体等。载体实例是添加/或不添加表面活性 剂和其它可药用佐剂的无菌液体，如水和油。通常，水、盐水、葡萄糖和 相关糖的水溶液和二醇(如丙二醇或聚乙二醇)是优选的液体载体，尤其对注 射溶液剂是这样。油的实例是动物源、植物源、或合成源的那些油；例如 花生油、大豆油、橄榄油、葵花子油、鱼肝油、其它海产类油，或源自乳 或蛋的脂质。
在其它实施方案中，所述组合物还包含粘合剂(例如阿拉伯胶、玉米淀 粉、明胶、卡波姆、乙基纤维素、瓜尔胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤 维素、聚维酮)、崩解剂(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸、二氧化硅、 交联羧甲纤维素钠、交聚维酮、瓜尔胶、淀粉羟乙酸钠)、多种pH值和离子 强度的缓冲剂(如Tris-HCI、醋酸盐、磷酸盐)、防止吸附至表面的添加剂如 白蛋白或明胶、去垢剂(例如吐温20、吐温80、Pluronic F68、胆汁酸盐)、蛋 白酶抑制剂、表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠)、渗透促进剂、增溶剂(例 如甘油、聚乙二醇)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠、丁化羟基苯甲 醚)、稳定剂(例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、增粘剂(例如卡波姆、 胶体二氧化硅、乙基纤维素、瓜尔胶)、甜味剂(例如阿斯巴甜、柠檬酸)、 防腐剂(例如硫柳汞、苄醇、对羟苯甲酸酯)、润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁、 聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)、助流剂(例如胶体二氧化硅)、增塑剂(如邻苯 二甲酸二乙酯、枸橼酸三乙酯)、乳化剂(例如卡波姆、羟丙基纤维素、十二 烷基硫酸钠)、聚合物涂层(例如聚羟体或泊洛沙姆)、涂层剂和成膜剂(例如 乙基纤维素、丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯)和/或佐剂。每个上述赋形剂代表 本发明的一个独立实施方案。
在另一个实施方案中，所述药物组合物在控释系统中递送。例如，该 制剂可以使用静脉内输注、可植入型渗透泵、透皮贴剂、脂质体或其它施 用模式施用。在一个实施方案中，可以使用一种泵(见Langer，同上；Sefton， CRC Grit.Ref.Biomed.Eng.14：201(1987)；Buchwald等，Surgery 88：507 (1980)；Saudek等.，N.Engl.J.Med.321：574(1989)。在又一个实施方案中， 使用高分子材料；例如在微球或植入物中使用高分子材料。在再一个实施 方案中，将控释系统放置在治疗靶(即脑)附近，因此仅需要所述全身剂量的 一部分(如见，Goodson，在Medical Applications of Controlled Release，同上， vol.2，第115-138页(1984)；和Langer R，Science 249：1527-1533(1990)。
在另一个实施方案中，所述组合物也包括将活性材料合并到高分子化 合物(如聚乳酸、聚羟基乙酸、水凝胶等)的粒状制品内或至其表面或合并至 脂质体、微乳液、胶束、单层或多层囊泡、血影或原生质球表面。此类组 合物将影响物理状态、溶解度、稳定性、及体内释放速率和体内清除速率。
本发明中也包括以聚合物(例如泊洛沙姆及泊洛沙胺)涂覆的粒状组合 物，和这样的复合物，其与针对组织特异性受体、配体或抗原的抗体偶联 或与组织特异性受体的配体偶联。
本发明也包含通过共价连接水溶性聚合物而改性的化合物，其中所述 水溶性聚合物可以是例如聚乙二醇、聚乙二醇与聚丙二醇的共聚物、羧甲 基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮或聚脯氨酸。已知所述修 饰的化合物在静脉注射后表现在血液中比相应未改性的化合物明显更长的 半衰期(Abuchowski等，1981；Newmark等，1982；和Katre等，1987)。此类改性 也可以增加该化合物在水溶液中的溶解度、消除聚集、增强该化合物的物 理和化学稳定性并大大降低该化合物的免疫原性和反应性。因此，在另一 个实施方案中，通过以低于所述未改性的化合物的频率和剂量而施用此类 聚合物-化合物的加合物，实现想要的体内生物学活性。
在另一个实施方案中，将活性组分作为中性可药用盐形式配制到所述 组合物内。可药用盐包括(与多肽或抗体分子的游离氨基所形成的)酸加成 盐，所述的酸加成盐与无机酸(例如盐酸或磷酸)或与有机酸(例如乙酸、草 酸、酒石酸、扁桃酸等)形成。从游离羧基形成的盐可以从无机碱(如氢氧化 钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁)和有机碱(如异丙胺、三甲 胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因)等产生。
上述添加剂、赋形剂、配方及施用方法的每一种代表本发明的一个独 立实施方案。
实验详述部分
实施例1：在无酪氨酸干扰的情况下通过HPLC测量胞苷
材料与方法
样品制备
肝素化血浆的1毫升(mL)样品掺入1μg 5-氟尿苷用作内标，然后通过添 加甲醇(5mL)去蛋白。将样品离心，冻干，在5mL的0.25N醋酸铵(pH8.8) 内重新恢复，随后立即经过硼酸盐亲和柱纯化。
硼酸盐亲和柱
全部步骤在4℃进行。硼酸盐亲和柱(Affigel-601，Bio-Rad)灌注两份5mL 醋酸铵洗液，施加样品，并将柱再次用醋酸铵洗液洗涤，随后将核苷用0.1N 甲酸(7mL)洗脱。将洗脱物冻干，然后重新恢复在100μL水中用于HPLC分 析。硼酸盐亲和柱结合多种生物分子，包括核苷酸碱基：腺苷、胞苷、鸟 苷、胸苷和尿苷。
HPLC
使用配备Rainin Dynamax Microsorb C18柱(3μm包装；4.6×100mm)的 Bechman System Gold仪(Bechman Instruments)在室温开展HPLC分析法。标 准HPLC法在Lopez-Coviella等(J.Neurochem 65：889-894，1995)中描述。对 于改良HPLC，使用等强度洗脱缓冲液，其中所述等强度洗脱缓冲液含有 0.004N磷酸钾缓冲液(pH 5.8)和替代甲酸的0.1％甲醇，流速1mL/分钟并加 热至35℃。
结果
用于测量核苷的标准HPLC法产生尿苷和胞苷的分离峰；然而，胞苷和 酪氨酸峰的共同出现妨碍准确测量胞苷水平，如对人血浆样品所示(图1)。 酪氨酸存在于多种生物流体(例如血浆或脑脊液(CSF))中。在本实施例中， 使用可区分胞苷峰和酪氨酸峰从而允许精确测量胞苷水平的改良HPLC法 (图2)。
实施例2：口服施用UMP提高人体内的血浆尿苷水平
材料与实验方法
研究设计
要求8位健康对象(5男、3女、27-67岁)禁食过夜，并且在三日中每一日 早晨7-8点分别給予递增剂量(500mg、1000mg和2000mg)的UMP二钠 (Numico，Wageningen，NL)，其中所述的每一日相隔至少一个三日清除期。给 予全部对象午餐。在8小时期间，将血样抽取至肝素化的管内。将血浆用甲 醇处理以沉淀蛋白质，以氯仿萃取，并且将等分试样的含水层冻干，溶解 在水中，并通过HPLC以UV检测法测定。
统计分析
用SPSS12.0软件实施统计分析。数据表示为平均值±SEM。使用非配对 t检验、单因素方差分析(ANOVA)，具有重复测量的ANOVA、两因素ANOVA 来评估统计效应，如本文中详述。当适合时，开展Tukey′s HSD事后分析。 显著性水平设置在p＜0.05。
结果
对象口服施用500、1000或2000mg UMP，并且血液尿苷水平在基线和 给药后1、2、4和8小时(hr)测量。血浆尿苷水平如实施例1中描述加以测定。 血浆尿苷以剂量依赖方式应答于口服UMP而提高，然后在8小时内返回基线 水平(图3)。在沙鼠中观察到相似结果(图4)。
实施例3：口服施用尿苷或UMP提高沙鼠的脑尿苷水平
材料与实验方法
实验设计
将8至9只雄性沙鼠组(60-80g)禁食过夜，施用尿苷(Sigma，St.Louis，MO； 250mg/kg体重)或UMP二钠(1mmol/kg体重，剂量等同于通过强饲法施加 的250mg/kg体重尿苷)，并且1小时后在Telazol麻醉下通过断头法处死。 将自颈部收集的血收集到含有EDTA的管中，并且如上文对实施例2描述 加以处理。
沙鼠脑组织的制备
断头后将沙鼠脑迅速从颅中取出，在干冰上冻结，在80％甲醇中均浆， 离心，冻干，并且如对实施例2中血液所描述进行分析。
结果
为确定口服施用尿苷是否可以提高血浆尿苷水平，通过强饲法向沙鼠 饲喂250mg/kg胞苷或尿苷。60分钟(min)后，将脑部均浆并且测定尿苷水平。 相对于对照动物，口服施用胞苷导致脑尿苷水平提高2倍，并且口服施用尿 苷导致脑尿苷水平提高大于3倍(图5)。组间的所有差异在统计上是显著的。
在评估血浆尿苷水平提高的时间过程的一个独立实验中，给沙鼠施用 水或每千克(kg)体重1毫摩尔(mmol)UMP，在随后60分钟内在不同时间点上 处死所述沙鼠，并且评估脑尿苷水平。脑尿苷水平在施用尿苷的10分钟内 增加，在30分钟内达到峰水平，与对血浆尿苷水平观察到的结果相似(图6)。 因此，口服施用的尿苷被有效地输送至脑。
实施例4：尿苷在脑内容易地转化成胞苷
在独立实验中，以250mg/kg体重口服给沙鼠施用尿苷，并且60分钟 后评估胞苷和尿苷的血浆水平及脑水平。计算相对于对照动物的提高倍数， 并且将其在图7A(血浆)和图7B(脑)中描述。在每种情况下，将胞苷的提高 倍数标准化为尿苷的提高倍数，人为地将后者设置为100％。这些结果显示 (a)血流中的尿苷被输送至脑且(b)尿苷在脑内以不同于血浆中的方式进行代 谢处理；具体而言，它在脑内比在血浆中更有效地转化成胞苷。
因而，例如通过施用CDP-胆碱提高血浆尿苷水平提高了脑胞苷水平。
实施例5：尿苷增加大脑和神经细胞系中的CDP-胆碱水平
材料与实验方法
实验设计
数据汇集自组大小5～16只动物的三个实验。雄性沙鼠(60-80g)通过强 饲法给予UMP(1mmol/kg体重)，并在所示时间被处死。在如对实施例3所 示，将脑匀浆、沉淀蛋白质和冻干后，通过HPLC-UV分析样品。
CDP-胆碱水平的评估
将脑组织或细胞溶解在甲醇/氯仿(1∶2体积/体积)中，离心，并且将水相 在真空下干燥、重悬于100-200μL水中，并且在离子交换柱(Alltech HypersilAPS-2，5μM，250×4.6mm)上通过HPLC分离。用NaH2PO4缓冲 液A(1.75mMNaH2PO4，pH2.9)和B(500mM，pH4.5)的线性梯度洗脱CDP- 胆碱，其中所述的线形梯度允许经40分钟将CDP-胆碱与密切共洗脱的物 质解析分离。CDP-胆碱的停留时间是9.5分钟。各个核苷酸峰通过在380nm 处的UV吸收加以检测，并且通过与可信标准物(authentic standard)位置的 比较，以及通过添加针对所选样品的核苷酸标准物进行鉴定。
PC12细胞
PC12细胞在37℃在补充有10％胎牛血清(FBS)的最低必需培养基 (MEM；Invitrogen，Carlsbad，CA)中维持。实验温育在含有50ng/ml小鼠 2.5S(2.5亚基)NGF和1％FBS的培养基中与或不与测试化合物一起持续2 日或4日。NGF和FBS从Invitrogen公司获得。
结果
为评估口服施用的尿苷对脑内磷脂前体水平的影响，对实施例3的第二 实验的沙鼠脑测定CDP-胆碱(经Kennedy途径的磷脂生物合成中的一种关键 中间体)的水平。CDP-胆碱的水平在施用UMP后以线性方式(回归分析， r＝0.98，p＜0.02)显著升高30分钟(图8)。
为直接证明尿苷在神经细胞内转化成CDP-胆碱，用尿苷处理PC12细 胞，该细胞是能够分化成神经细胞的细胞系，并测量CDP-胆碱的胞内水平。 尿苷处理导致50分钟后CDP-胆碱水平的统计显著提高(图9)。这些结果表明 在输送至脑后，尿苷转化成磷脂前体，或许通过中间体CTP而转化，并且因 此通过增加脑细胞内磷脂前体合成而增强认知功能和智力。
实施例6；口服施用UMP增加老年大鼠脑内的神经递质释放
材料与实验方法
动物和饮食性UMP补充物
从National Institute on Aging(Harlan Sprague-Dawley，Indianapolis，IN) 获得在进行微透析时22-24月龄的雄性中老年年Fischer 344大鼠。大鼠在标 准饲养条件下分别安置并且暴露于12小时光/暗周期下，并提供自由进食食 物和水。每只大鼠消费大约500mg/kg/日的UMP·2Na(尿苷i.p.给药的LD50是 约4.3g/Kg)。
大鼠适应动物设施超过7日，此后饲喂对照实验室食物(Teklad Global 16％蛋白质啮齿动物食物，TD.00217，Harlan Teklad，Madison，WI)或以 UMP·2Na+(2.5％，TD.03398，UMP·2Na+；Numico Research，the Netherlands) 强化的这种食物持续6周。
大鼠在其抵达至少7日后才用研究食物饲喂。大鼠在开始饲喂时(t＝0) 以及稍后1、2、4、6周称重。在0时间上，将大鼠随机分配至两组内。在 组间没有体重的显著差异(F1，11＝3.03，p＞0.05)，平均重量是455±5(N＝13 只大鼠)。随周数重复测量作为对象内部因素，显示饲喂时间(0、1、2、4、 6周)显著地改变体重(F4，44＝2.65，p＜0.05)；然而，UMP-食物(比对照)和UMP ×时间相互作用均不影响体重(分别是F1，11＝0.01，F4，44＝1-25，全部p＞ 0.05)。
本实施例中描述的实验进行两次，每次用7只对照大鼠和9只施用UMP 食物的大鼠。结果在这两次实验间是一致的。
化学品和溶液
多巴胺(DA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、血清素(5-HT)、 5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)和3，4-二羟基苯甲酸(DHBA；内标物)从 Sigma(St.Louis，MO)购买，并且溶解在HClO4(0.1M)中以产生1mM母液，并 且将等分试样保持在-80℃。盐酸氯胺酮(100mg/ml)从Fort Dodge Animal Health(Fort Dorge，IA)购买。赛拉嗪(20mg/ml)来自Phoenix Scientific，Inc.(St. Joseph，MO)。
林格氏液由NaCl 147mM、KCl 2.7mM、CaCl21.2mM和MgCl20.85mM组 成。对于高钾溶液，将KCl增加至80mM，而氯化钠降至69.7mM，以维持渗 透性。全部溶液从重蒸去离子水中产生并且通过(Millipore， Bedford，MA)过滤。
体内微透析
大鼠用氯胺酮和赛拉嗪(分别按80mg/Kg和10mg/Kg体重，腹膜内方式) 的混合物麻醉，并置于Kopf立体定位架中。全部手术器械通过热珠干燥消 毒器或70％乙醇灭菌。由2-mm环骨钻在颅骨内钻出小孔。将CMA/11 14/04 Cupr探针(O.D.0.24mm，4mm膜，6,000Da，CMA微透析，Sweden)植入右 侧纹状体(距离前囟点，AP＝+0.5、ML＝-3.0；距离脑膜，DV＝-7.3mm，如 Paxinos G等，The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates，第二版，Academic Press，San Diego中所述)，而切牙辊(incisor bar)设置在-5.0mm。使用牙科水 泥和三只锚凹螺丝，将探针在颅骨上永久固定就位。手术后，大鼠以腹膜 内方式注射盐水(5ml/kg)并将其保持在加热垫上维持体温在37℃直至苏醒。
自由活动的大鼠是在不需要用液体旋转轴的旋转平台上的圆形钵中进 行灌注(见Wang L等，Neurochem Int 42：465-70，2003)，并使之在手术后第 一日习惯此环境。实验在手术后大约48小时进行，并且在上午10:00至下午 4:00间实施。使用氟化乙丙烯(FEP)树脂管和气密注射器由微量输液泵 (CMA/100)以1.5μl/min恒定速率连续灌注林格氏溶液。以15分钟间隔收集透 析液。在收集之前向取样瓶中添加由0.2M HClO4和0.1mM EDTA组成的 5μL抗氧化混合物，以保护多巴胺及其代谢物。从分析中舍弃头60分钟内的 样品。随后，收集3个连续阶段的样品。除最终阶段样品外(1.5小时，6份样 品)，收集其它样品(4份样品)持续1小时。顺序如下：阶段1(aCSF)，阶段2(高 K+)，阶段3(aCSF)。全部样品均在粉碎冰块上收集、迅速冻结并且保持在 -80℃直至HPLC分析。
用于蛋白质和单胺的脑解剖
微透析实验后，用氯胺酮和赛拉嗪(80和10mg/Kg，i.p.)麻醉大鼠。将黑 色墨水经所述探针推送以使该探针周围的组织染色。大鼠以铡刀断头。将 脑在冷冻的解剖板上迅速剖分。左侧纹状体在置于液氮中的Eppdendorf管内 急速冷冻用于将来的蛋白质测定。进一步解剖右侧纹状体，并且通过肉眼 观察确定探针的位置。如果发现探针不在所述纹状体内，则不包括数据。
额外一个组的大鼠(20月龄，对照和UMP均为n＝6)饲喂6周。在这些大 鼠中没有实施微透析法。如上文那样收集纹状体(包括左侧和右侧纹状体) 以确定多巴胺及其代谢物的组织水平。
提取组织多巴胺样品
将所述纹状体称重并在冰上的Eppdendorf管中以含有0.1M HClO4和 1μM EDTA的1ml H2O均浆。涡旋混合10秒后，一个等份试样用于双喹啉-4- 羧酸(Sigma，St.Louis，MO)蛋白质测定。随后，将所述组织匀浆物以 Ultrafree-MC离心过滤装置(Millipore，14,000rpm/15分钟/4℃)过滤。准备好 1∶10稀释物，此后将水层进行HPLC。将DHBA作为内标物在匀浆前添加至 所述样品中。多巴胺及其代谢物的浓度由HPLC测定，并且将源自三个重复 测量的值进行平均，并标准化成每个样品的蛋白质的量。
对多巴胺及代谢物的分析
使用带ESA微透析小室(型号5014B，ESA，North Chelmsford，MA)的 ESACoulochem 5100A探测器(E1＝-175mV；E2＝+325mV；Eguard＝350mV)确定 透析液和组织样品中的DA和代谢物。流动相(MD-TM，ESA)由75mM的 NaH2PO4、1.7mM 1-辛烷磺酸、100μl/L三乙胺、25μM EDTA和10％乙腈组 成，pH值3.0。流速是0.4mL/分钟。此柱(ESA MD 150，3×150mm，3μm， )保存在40℃柱恒温箱中。样品通过Alltech 580自动进样器(Alltech， Deerfield，IL)注射至HPLC，并且在分析期间以冷却盘保持在4℃。数据可以 由Alltech AllChromTM数据系统获得，并且用AllChrom plusTM软件分析。使 用能够在样品分离和检测期间改变检测增益的时间线程序来通过一次注射 可以获得透析液中的低DA浓度数据和高代谢物浓度数据。
数据分析
根据每个点的6至9个测量值的采样时间表述数据(平均值±测量标准误 差[S.E.M])。基于K+刺激之前的头四个连续样品的平平均值(透析液中的平 均值是10.2±0.4nM，n＝22)确定DA和主要代谢物的基础值，赋予其值为 100％。使用两因素ANOVA(处理×时间)和Turkey′s HSD事后检验进行统计。 单因素ANOVA用来在每个时间点上比较所述三个组之间的差异。使用 ＞0.05的p值来评估统计显著性。多巴胺的基础水平在所述两个重复实验之间 是齐次的，从而汇集到相应的组(F1，20＝3.99，p＞0.05)中。透析液中的DA基 础水平在1小时平衡后在K+刺激之前的四个连续样品中是稳定的(F3，57＝0.15， p＞0.05；具有重复测量值的单因素ANOVA，使用采样时间(0、15、30、45 分钟)作为对象内部因素)。
与DA基础水平相似，透析液中DOPAC和HVA的基础水平是612±14nM 和369±7nM(n＝22只大鼠)，并且是稳定的(分别F3，57＝1.06，F3，57＝0.84；在每 种情况下，p＞0.05)。UMP处理对DOPAC和HVA的基础水平无影响(对照组 比UMP-1周比UMP-6周；分别F2，19＝0.27，F2，19＝0.03；在每种情况下，p＞0.05)。
结果
为评估口服施用的尿苷代谢物对脑内神经递质释放的影响，在限制性 环境中维持的老年大鼠摄取对照食物或者含2.5％UMP的食物1周或6周。 UMP补充物不影响在处理组之间所述透析液中的基础DA水平(对照组比 UMP-1周比UMP-6周；F2，19＝0.98)。所述透析液中DA的浓度是10.2±0.4nM (n＝22只大鼠)。
在图10A中描述饮食性UMP补充物对K+诱发纹状体DA释放(在用高K+溶液灌注后)的影响。在对照组、UMP-1周和UMP-6周处理组之间在DA水平 上存在统计显著差异(F2，266＝3.36)。事后多重比较揭示对照组和UMP-6周组 之间的显著差异。将数据进一步分成3个部分(在K+诱发之前、K+诱发和K+诱发之后)，所述数据还揭示对照组和UMP-6周组之间K+诱发的DA释放显著 增强，从283±9％至341±21％(图10B)。UMP-1周组也显示相对于对照组的DA 释放增加(316±15％)；然而，这种增加是不显著的。
此外，表明饮食性UMP增加纹状体中来自神经元的神经递质乙酰胆碱 的基础释放(图11)。
这些结果表明(a)提高血浆尿苷水平(例如通过施用CDP-胆碱)改善了脑 内神经递质释放；(b)脑功能增强是多物种现象，不仅限于沙鼠；(c)脑功能 增强存在于年龄受损性认知障碍的生物学相关动物模型中。
因此，提高血浆尿苷水平(例如通过施用CDP-胆碱)改善神经递质释放 和脑功能。
实施例7；施用UTP提高老年大鼠的脑内NF-70和NF-M的水平
材料与实验方法
数据分析
根据UMP处理的每组6至16个测量值表述数据(平均值±S.E.M)。使用具 有Turkey′s HSD事后检验的单因素ANOVA来比较处理之间的差异。使用 Newman-Keuls多重范围检验用于图13中的数据。
蛋白质印迹法
纹状体组织置于含有200μl裂解缓冲液(60mMTris-HCl、4％SDS、20％ 甘油、1mM二硫苏糖醇、1mM AEBSF、8μM抑酞酶、500μM抑氨肽酶素 b、15μM E64、200μM亮肽酶素、10μM胃酶抑素A)的Eppdendorf管内。将 所述样品进行超声处理，煮沸(10分钟)，并离心(14,000g，室温条件下，1 分钟)。将上清液转移至清洁的管内，并且使用二喹啉甲酸测定法 (Bicinchoninic Acid assay)(Sigma，St.Louis，MO)确定总蛋白质含量。 加载等量蛋白质(40μg蛋白质/泳道)用于十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝 胶电泳(4-15％的SDSPAGE；Bio-Rad，Hercules，CA)。在凝胶电泳之前，将 溴酚蓝溶液(0.07％)添加到每个样品。将蛋白质分离，转移至聚偏二氟乙烯 (PVDF)膜(Immobilon-P，Millipore)，并且以5％牛血清白蛋白(Tris缓冲盐水 /0.15％吐温20)封闭1小时。在Tris缓冲盐水(TBST)中淋洗310分钟后，将印 迹物在TBST中与针对目的蛋白(包括NF-70、NF-M)的多种抗体(分别1∶2000、 1∶5000，Calbiochem，LaJolla，CA)在4℃于定轨振荡器上温育过夜。按制造 商建议，使用ECL系统(Amersham，Piscataway，NJ)和Kodak X-AR胶片分别 检测蛋白质-抗体复合物并使其显像。使用具有透明度适配器(UMAX Technologies，Freemont，CA)的Supervista S-12扫描仪，将胶片数字化。使用 公众域NIH图像程序(NIH V.1.61)开展分析。
结果
为评估提高尿苷水平是否可以增强脑内新膜的产生，在源自实施例6中 所述实验的大鼠脑内评估神经突增生的生物标记-神经丝-70(NF-70)和神经 丝-M(NF-M)的水平。持续6周的UMP食物补充显著地提高NF-70(图12A)和 NF-M(图12B)的水平分别达到对照值的182±25％(F2，31＝6.01，p＜0.05)和 221±34％(F2，21＝8.86，p＜0.01)。与对照组相比，持续1周进食UMP食物并没 有以统计显著方式提高这两种蛋白质的水平。纹状体中NF-70和NF-M的水 平分别提高至对照值的204±36％和221±34％。
实施例8：施用尿苷或UTP增加神经突的生长和支化并提高神经突细胞的 NF-70和NF-M的水平
材料与实验方法
数据分析
数据表示为平均值+/-S.E.M。使用方差分析(ANOVA)来确定组间差异 (显著性水平，p＜0.05)。当检测到差异时，使用Newman-Keuls多重范围检验 法分离平均值。
神经突增生研究
将PC12细胞稀疏地铺种在涂有胶原蛋白的60mm培养皿中含有1％胎牛 血清的MEM内。实验组如下：尿苷组、尿苷三磷酸组、胞苷组、活性蓝2 组、苏拉明和PPADS组(Sigma，St.Louis，MO)。全部处理在铺种后24小时进 行。在处理时间结束时，使用OpenLab软件，以Zeiss Axioplan2相差显微镜 获得图像。对每个培养皿捕获六幅数字图像，每个处理组总共18至24幅图 像。对每个实验的每一处理组定量大约300个细胞。一式三份开展实验。由 不了解实验组的多位研究人员开展对包括神经突支化和神经突长度在内的 神经突的定量。使用公众域NIH软件“Image J”测量神经突长度。将长度 超过细胞体直径的突起视为神经突。仅分析带突起的细胞。
胞内UTP和CTP的检测
胞内UTP和CTP水平如对实施例5所述通过HPLC分析，除了使用 5mM NaH2PO4，pH2.65作为缓冲液A以外。
结果
随即检测尿苷处理(10-200μM)对NGF诱导神经突增生的影响。在不存 在NGF的情况下，PC12细胞不萌生神经突(少于1％)。在不存在NGF的情况 下的尿苷处理(50μM，2或4日)不导致神经突的产生。在存在NGF的情况下， 在4日处理后，尿苷(50-200μM)显著(p＜0.01或0.001)增强每个细胞的神经突 数(图13A-C)，而2日处理或较低尿苷浓度(10，25μM)没有影响。用胞苷处 理暴露于NGF的细胞也不影响神经突增生。
由于尿苷增加每个细胞的神经突数量，故也评估了尿苷在NGF存在下 对神经突支化及神经突长度的影响。在用尿苷(50μM)和NGF处理4日后，与 只用NGF(图13D)处理的那些细胞相比，每个细胞的神经突支化点数量显著 (p＜0.01)增加。尿苷没有显著影响NGF分化的细胞中的平均神经突长度。 神经丝蛋白在神经突中高度富集；因而，神经突数量的增加应当与神 经丝蛋白表达增加相关。因此测量了用单独NGF或NGF加尿苷(50μM)处理 PC12细胞4日后的NF-70(70kD)和NF-M(145kD)水平(图13E)。在尿苷处理后， 与只用NGF处理的细胞相比，NF-70和NF-M的表达均显著提高(分别是 p＜0.01，p＜0.001)。在不存在NGF的情况下，尿苷处理对两种神经丝蛋白的 水平均没有影响。因此，尿苷增强PC12细胞中的神经突增生。
在不存在NGF的情况下，添加外源性尿苷提高PC12细胞中的胞内UTP 水平和CDP-胆碱水平(实施例5)。为确定在NGF存在下尿苷是否影响UTP或 CTP水平，使用NGF测量PC12细胞中的UTP和CTP水平2日，其中所述的 PC12细胞不用核苷酸处理、(对照)、用尿苷、胞苷或UTP处理。与仅接受 NGF处理的细胞相比，尿苷(50μM)显著地(p＜0.05)提高UTP和CTP的水平(分 别见图14A-B)。UTP(100μM)或胞苷(50μM)没有显著影响所述两种核苷酸中 任一种的胞内水平。
为确定UTP是否可以调节尿苷对神经突增生的影响，PC12细胞用NGF 和多个剂量的UTP处理。在处理4日后，与仅用NGF处理的细胞的神经突增 生相比，UTP(10μM和50μM)显著地(p＜0.01)增强神经突增生(图15)。因此， 尿苷或UTP均增强神经突增生。
结论是，尿苷或UTP食物性补充提高大鼠脑内两种主要神经丝蛋白的水 平，并且直接显示诱导PC12细胞中的神经突增生。因此，提高血浆尿苷水 平(例如通过施用CDP-胆碱)诱导神经突增生。
实施例9：NGF分化的PC12细胞表达嘧啶敏感性P2Y2、P2Y4和P2Y4受体
材料与实验方法
P2Y受体的检测
蛋白质印迹法利用兔抗P2Y2、抗P2Y4(均来自Calbiochem)；或兔抗 P2Y6(Novus Biologicals，Littleton，CO)。
免疫细胞化学
如上所述处理PC12细胞，除了将PC12细胞在涂有胶原蛋白的12mm盖 玻片上(A.Daigger & Co.，Vemon Hills，IL)培养外。使用免疫荧光法使蛋白质 可视化。简而言之，细胞用4％多聚甲醛固定、用0.25％Triton X-100透化处 理、在10％正常山羊血清中封闭、并且在适当抗体(小鼠抗NF-70和兔抗 -P2Y2、兔抗-P2Y4或兔抗-P2Y6)中过夜温育。对于P2Y2和P2Y4的可视化， 将对照培养物与第一抗体加对照抗原一起温育，以确保免疫染色是特异性 的。不可获得P2Y6受体的对照抗原。细胞随后在缀合荧光染料的二抗体温 育1小时(山羊抗兔ALEXA 488和山羊抗小鼠ALEXA 568；Molecular Probes， Eugene，OR)，并且用含或不含DAPI(Vector Laboratories，Burlingame，CA) 的封片剂在载玻片上封片。随初次抗体提供的对照抗原用来确保免疫染色 是特异性的。使用Zeiss Plan-Neofluor 40x浸油物镜，在Zeiss(Oberkochen， Germany)Axioplan显微镜上以OpenLab软件获得数字图像。
结果
UTP是嘧啶激活类型的P2Y受体(即P2Y2、P2Y4和P2Y6受体)的激动剂。 为确定这些受体是否参与胞外UTP影响神经突增生的机制，首先确定所述受 体是否在PC12细胞中表达并且确定暴露于NGF是否改变它们的表达；将 PC12细胞用NGF处理0-7日并且测量所述受体的水平。在NGF处理3日后， P2Y2受体的表达达到最大水平，其显著(p＜0.001)高于用NGF处理少于3日时 所见到的那些水平(图16A)。为使P2Y2、P2Y4和P2Y6受体的表达和定位可 视化，将细胞在存在或不存在NGF的情况下培育4日，并且随后对其就神经 突标记NF-70以及P2Y2、P2Y4或P2Y6进行免疫染色(图16B，分别从左至 右)。全部这三种受体在NGF分化的PC12细胞中高度表达。此外，P2Y2与神 经元标记MAP-2共定位。在不存在NGF的情况下，受体蛋白表达不可由免 疫染色法检测到。此外，与暴露于仅NGF的细胞中存在的量相比，尿苷的 存在不影响所述受体的表达。因此，P2Y2、P2Y4和P2Y6受体存在于神经细 胞中，而不存在于其前身中。
实施例10：P2Y受体的拮抗作用抑制尿苷对NGF诱导的神经突增生的影响
为确定通过P2Y受体进行的信号传导是否调节尿苷诱导神经突增生，将 PC12细胞与NGF、尿苷(100μM)和P2Y受体拮抗物苏拉明(30μM)、磷酸吡哆 醛-6-苯偶氮基-2′，4′二磺酸(PPADS；30μM)和活性蓝2(RB-2；10μM)温育4日。 每种所述拮抗物显著地(p＜0.05或0.001)阻断尿苷对NGF刺激的神经突增生 的增强作用(图17)。P2Y受体拮抗物均不抑制将尿苷摄入PC12细胞。这些结 果表明，在所用条件下，经过P2Y受体的信号传导调节尿苷诱导神经突增生。 因此，提高血浆的尿苷水平(例如施用CDP-胆碱)通过刺激P2Y受体而诱导神 经突增生。
实施例11；UTP和尿苷刺激磷脂酰肌醇(IP)信号传导
材料与实验方法
代谢标记和PI转换分析
如Nitsch RM等，J Neurochem 69：704-12，1997所述开展对PI转换的分 析。简而言之，细胞在无血清MEM中以1.25微居里(μCi)/培养皿的肌-[2-3H] 肌醇(17.0居里/mmol；Amersham Biosciences)进行代谢标记36小时，用Hank′s 平衡盐溶液(HBSS)洗涤两次，并用HBSS中的10mM氯化锂处理15分钟。在 37℃和10mM氯化锂存在下添加药物，持续60分钟。使用冰冷甲醇裂解细 胞，并且通过用氯仿/甲醇/水(体积比2∶2∶1)提取而去除脂质。用AG 1-X8 柱(Bio-Rad)和1M甲酸铵及0.1M甲酸作为洗脱液，通过由离子交换层析法将 标记的水溶性磷脂肌醇与游离的[3H]肌醇分离。放射活性通过液体闪烁光谱 法定量。
结果
P2Y2、P2Y4和P2Y6受体激活磷脂酶C/二酰基甘油TP3/三磷酸肌醇 (PLC/DAG/IP3)信号传导途径。为确定促进神经突增生的尿苷或UTP的浓 度是否激活这些受体，NGF-分化的PC12细胞用[3H]-肌醇(50μM)或UTP(10， 100μM)标记1小时，并且IP信号传导通过测量放射标记的IP的转换(图18) 进行评估。IP的形成因添加100μM UTP(p＜0.05)和50μM尿苷(p＜0.01)而显 著提高。P2Y受体拮抗物PPADS(100μM)显著地(p＜0.05)阻断通过UTP对 IP信号作用的刺激。这些研究结果表明：UTP通过P2Y受体介导对IP信 号传导途径的刺激作用而促进神经突增生。
实施例9-11的研究结果提出通过提高血清尿苷水平刺激神经突增生的 机制，即通过激活P2Y受体刺激神经突增生。P2Y受体作用的至少部分由 IP信号传导介导。总之，来自实施例6-11的研究结果提供进一步的证据： 即提高血清尿苷水平通过以下多种机制增强神经传递而改善认知功能和智 力：(1)增强神经递质释放；(2)通过CTP作为膜磷脂的前体而发挥作用；(3) 通过UTP激活P2Y受体-偶联的胞内信号传递途径。在另一个实施方案中， 机制(2)和(3)共同发挥作用以增加神经突形成。
实施例12：补充UMP的食物增强多物种的学习和记忆
材料与实验方法
莫瑞斯水迷宫
向衰老大鼠(18月，500g)饲喂对照食物或含有2.5％UMP的食物持续6 周。随后向大鼠展示在直径6英尺水池中的隐藏平台，并将它们依次置于所 述池的四个象限中每个象限的某处，并在每个试验中提供90秒以试图通过 游泳而重新确定所述平台的位置，并且记录游泳时间“平均逃逸潜伏期”。在 连续4日的每日中重复含四次试验的组。所述平台在每日处于相同位置。称 作莫瑞斯水迷宫的这种试验是空间记忆的指示物。
食物颗粒学习测定
在悬臂型迷宫中测试不限制采食对照饲料或含有UMP(0，0.1，0.5或 2.5％)的饲料持续3周的雄性青年成体沙鼠，所述的悬臂型迷宫由具有四个 支臂的中央室组成，其中所述支臂在每个支臂末端备有食物小颗粒。在测 试前，动物禁食过夜；随后将每只动物置于中央室内并提供至多到180秒以 找到全部所述颗粒。发现颗粒所需要的较短时间表示改善的学习和空间记 忆。
工作记忆和参考记忆测定
向10只沙鼠组饲喂对照食物或含有0.1％UMP的食物持续4周并且受训 以成功找到如上所述的全部食物颗粒，然后对其进行改良试验，在所述的 改良试验中所述迷宫中仅两条臂(不过总是相同两条臂)含有食物颗粒奖励。 在这个试验中，工作记忆误差是这样的记忆误差，其中沙鼠再次访问其在 当日已经从中取得食物颗粒的一条悬臂。参考记忆误差是这样的记忆误差， 其中沙鼠(在所述改良试验期间)进入从来没有食物颗粒的悬臂。
结果
先前实施例表明，提高血清尿苷水平以几种方式改善并增强神经细胞 发挥作用的能力。本实施例直接证明尿苷增强认知功能和和智力。向衰老 大鼠(18月，500g)饲喂对照食物和含有2.5％UMP·2Na+的食物持续6周，并 且使用莫瑞斯水迷宫(空间记忆的指示物)测试其记忆力。施用UMP·2Na+强 化食物的大鼠表现在达到平台位置所需的时间上的统计显著减少(图19)， 表明空间记忆因提高血清尿苷水平而增强。
也在沙鼠中测试提高血清尿苷水平对学习和空间记忆的影响。在悬臂 型迷宫中测试不限制采食对照饲料或含有UMP(0，0.1，0.5或2.5％)的饲料持 续3周的雄性青年成体沙鼠，所述的悬臂型迷宫由具有四个支臂的中央室组 成，其中所述支臂在每个支臂末端备有食物小颗粒。在测试前，动物禁食 过夜；随后将每只动物置于中央室内并提供至多到180秒以找到全部所述颗 粒。发现颗粒所需要的时间的减少要求空间学习。补充UMP的食物以剂量 依赖性方式降低沙鼠寻找所述食物颗粒需要的时间(图20)。
此外，检验提高血清尿苷水平对工作记忆和参考记忆的影响。沙鼠饲 喂对照或含0.1％UMP的食物持续4周并且受训以成功找到如上所述的全部 食物颗粒，然后对其进行改良试验，在所述的改良试验中测量工作记忆和 参考记忆。饲喂补充UMP的食物的沙鼠显示工作记忆误差(图21A)和参考记 忆误差(B)的数量减少。
这些结果直接显示，(a)提高血清尿苷水平改善学习和各种类型(空间、 工作和参考)的记忆；(b)所述作用不限于特定物种；并且(c)所述作用体现在 年龄受损性认知功能和智力的生物学相关动物模型中。因此，提高血浆尿 苷水平的组合物(例如CDP-胆碱)改善学习和记忆。
总之，本文中的研究结果表明提高血清尿苷水平正向地影响神经信号 床底、神经细胞解剖学、认知记忆和智力。所述研究结果还牵涉尿苷发挥 影响作用的几种机制。
实施例13：胆碱增加神经递质释放
材料与实验方法
脑切片的制备
9-11月龄雄性Sprague-Dawley大鼠以氯胺酮(85mg/kg体重，肌内)麻醉， 并且在4℃于冷室中被断头。将脑迅速取出并置于含有1mM氯胺酮和15 μg/ml毒扁豆碱的冰冷(4℃)的充氧Krebs缓冲液(119.5mM NaCl、3.3mM KCl、1.3mM CaCl2、1.2mM MgSO4、25mM NaHCO3、1.2mM KH2PO4、 11mM葡萄糖和0.03mM EDTA，pH 7.4)。在除去剩余脑膜和脉络丛后， 立即通过McIllwain组织切片机制备纹状体、海马和皮层的30μM切片，洗涤 3次并置于定制的组织表面灌注室(Warner Instrument，Hamden，CT)中。
表面灌流(superfusion)和电刺激
将切片在37℃通过用上文所述的充氧Krebs/氯胺酮/毒扁豆碱缓冲液以 流速0.8ml/分钟表面灌流所述室而平衡60分钟。表面灌注室含有与电子刺激 器(型号S88；Grass Instruments)连接的两个对立网状银电极。使用定做的 极性反转装置来防止灌注室极化并且也用来监测在每个脉冲开始50微秒后 的电流和电压，旨在确保均匀的室电阻。在平衡期后，使切片通过用高K+(52 mM)形式的Krebs/氯胺酮/毒扁豆碱缓冲液在20μM胆碱、25μM胞苷和/或 25μM尿苷存在或不存在的情况下灌流而去极化。将灌流液在2小时期间全 程收集，并针对乙酰胆碱进行检测。将值针对切片的蛋白质含量进行标准 化。
结果
为确定胆碱对乙酰胆碱释放的影响，将纹状体、海马和皮质的切片(n＝8) 在胆碱存在或不存在的情况下温育并随后去极化，并且测量乙酰胆碱释放。 在一些组内，还添加胞苷或尿苷。胆碱增加乙酰胆碱释放(图22)。
这些研究结果表明，当神经元反复受到刺激以释放乙酰胆碱时，胆碱 通过弥补膜磷脂(例如PC)中的胆碱贮备而增加所释放的神经递质的量。上述 实施例已经表明尿苷增进CDP胆碱的合成，其中所述的CDP-胆碱随后用来 合成新PC。因此，神经元合成新磷脂并且因此反复释放神经递质的能力尤 其因CDP-胆碱而提高。
因此，CDP-胆碱的施用通过2个独立机制：(a)通过提高血清尿苷水平； 和(b)通过充当胆碱源，而正向地影响神经信号创到、神经细胞解剖学、认 知记忆和智力。
实施例14：施用UMP改善EC大鼠和IC大鼠中海马依赖性记忆加工
材料与实验方法
动物
将动物维持在标准环境条件下(室温，20至25℃；相对湿度55-60％； 明/暗方案(12/12))。在分娩前1周获得7只妊娠Sprague Dawley大鼠(Charles River Laboratories)。在出生后第23日，将雄性乳鼠取出，分成小组并且使 其适应新环境1周。此时，将32只大鼠根据其体重配对，并且分配至EC 环境或IC环境中。给予一个亚组的IC大鼠(n＝8)和一个亚组的EC大鼠(n＝8) 接近对照实验室食物(Teklad Global 16％蛋白质啮齿动物食物(Teklad食物 00217)，Harlan Teklad，Madison，WI)，而其余亚组(每组n＝8)接受补充有尿苷 -5′-单磷酸二钠的食物(0.1％UMP-2Na+；Teklad食物03273)的食物，所述的 食物对应于UMP-2Na+每日200mg/kg，或者尿苷每日大约132mg/kg。
将大鼠安置在带金属丝筛盖(wire lid)的塑料笼(52×32×20cm高)中的相 同格栅内。定期更换垫料和水，并且每星期对动物称重，此时作出整体健 康评估。动物可以不限制地获得饲料和水。将EC大鼠安置在含2-3只动物 的组中。将塑料玩具(积木、球、PVC管等)置于EC笼内，各组之间每周轮 换；按月引入新玩具。每隔一日将EC大鼠送至“游戏间”(12×6英尺；含 有柜、桌、椅、箱和玩具)45分钟。IC大鼠分别安置，没有玩具，并且对其 每周操作三次以使动物适应实验员操作，并且旨在减轻大鼠在后续行为训 练程序中的恐惧和焦虑。为避免因贫乏环境条件(相对于丰富环境下的大鼠) 引起的常见体重增加，允许IC大鼠在仅有实验员存在的4×6英尺空房间 内每周锻炼三次持续15分钟。
每周对动物称重以确保UMP处理的大鼠和未处理的大鼠采食等量食 物。在UMP-补充组和对照组之间没有发现大鼠平均体重的显著差异，表明 大鼠采食等量食物，无论所述食物是否补充UMP。另外，由于使大鼠锻炼 以避免可能出现的体重增加(相对于EC大鼠而言)，因而在EC和IC测试组之 间不存体重的差异。
水迷宫仪
将直径6英尺(185cm)和高1.5英尺(0.55cm)的镀锌圆形槽充入水 (25℃+/-2℃)至深度20cm并安放在含有几个外部迷宫线索(extra-maze cue) 的光线昏暗的房间中。四个出发位置(北、南、东、西)在该槽的周边安置， 从而把水池划分成四个相等象限。对于可视平台形式的水迷宫，将一只白 色橡胶球(直径8cm)连接至淹没的平台的顶部并且突出高于水面。此平台可 以用作一个台阶以支持橡胶球离开水。在水迷宫的正上方直接安装一部摄 像机；该摄像机与具有视频跟踪软件的计算机连接以自动记录逃逸潜伏期 (到达所述平台的时间)、经过的距离(为找到该平台所经过的游泳路径长度) 和游泳速度(HVS Image Ltd；Buckingham，UK)。
行为过程
行为训练在上午10:00-下午2:00之间以双盲方式(blinded manner)进 行。大鼠接受由每日4个试验(即游泳)组成的一个4日训练阶段以确定隐匿平 台(水面下1.5cm)的位置，其中所述的平台在整个试验中对于各只动物保持 处在相同的位置内(即位于四个象限之一内)。在每个试验中，将动物置于水 槽内，在四个指定出发点之一(北、南、东和西)处面向槽壁，并且允许其逃 逸至隐匿的平台上。在每个试验中使用不同的出发点，从而每个出发点每 日使用一次。如果动物在90秒内没有逃逸，则将其由实验员手工地导引至 逃逸平台。在登上该平台后，大鼠留在平台上20秒。在每次试验后，将动 物从迷宫中取出并且安置在容留笼内持续30秒试验间隔期(ITI)。使用登上 逃逸平台的潜伏期作为对任务获得的量度。
在第5日，给予大鼠探索试验。为此，拆除所述平台，并且在60秒内测 量游泳轨迹及在此前包括该平台的泳池象限中搜索所花费的时间。这提供 对保留空间记忆的量度，并且显示在隐匿平台训练期间是否采用空间策略。
统计分析(针对本实施例及之后的实施例)
结果表述为平均值+/-S.E.M.。数据通过ANOVA进行分析，随后进行 Fisher的PLSD事后比较。认为具有P＜0.05的值的差异是显著的。
结果
为确定口服施用UMP对海马依赖性和/或认知性记忆加工的影响，将大 鼠暴露于丰富条件(EC)或贫乏条件(IC)持续3个月，并且对暴露于每种条件 的大鼠施用对照食物或富含UMP的食物，然后执行隐匿水迷宫平台任务。 全部大鼠的表现在隐匿平台水迷宫任务训练的4日过程中改善(图23A)，如由 阻断试验的显著主要影响(ANOVA分析；P＜0.001)所证明。另外，观察到主 要影响组(P＜0.001)和显著的组×食物相互作用(P＜0.05)。IC-UMP大鼠和用 两种食物之一处理的EC大鼠以显著快于IC-CONT大鼠(施用对照食物的IC 大鼠)学到任务(事后分析；P＜0.05)。而且，以UMP处理的EC大鼠以快于 EC-CONT大鼠的速度学到任务(P＜0.09)。因此，用UMP的长期饮食性治疗 防止空间性和/或认知性记忆与智力因贫乏环境条件引起的缺损，并且改善 健康对象的空间性和/或认知性记忆与智力。
此外，对大鼠实行探索试验。总体而言，大鼠在原先含有所述平台的 象限中花费更多时间，这提示全部动物使用某种程度的空间性技巧以学习 隐匿平台任务(图23)。IC-UMP及处理或未处理的EC大鼠在60秒探索试验期 间在正确的象限中花费比IC-CONT大鼠显著更多的时间(ANOVA；p＜0.01)， 这提供进一步证据，即用UMP的长期饮食性治疗防止空间性和/或认知性记 忆与智力因贫乏环境条件引起的缺损，并且改善健康对象的空间性和/或认 知性记忆与智力。因此，提高血清尿苷水平的组合物(如CDP-胆碱)改善认 知性记忆和智力，并且预防与年龄有关的认知性记忆和智力的下降。
实施例15：施用UMP未改善EC大鼠和IC大鼠中的纹状体依赖性记忆加工
材料与实验方法
可视水迷宫任务
在完成4日/每日4次试验的空间训练任务后1周，来自上述实施例的大鼠 接受由由每日4个试验(即游泳)组成的4阶段训练。在每个试验中，将动物置 于水槽内，在四个指定出发点之一(北、南、东和西)处面向槽壁，并且允许 其逃逸至有可见提示的平台上。在每个试验中使用不同的出发点，从而每 个出发点每日使用一次。此外，所述可见逃逸平台在每个试验中置于不同 的象限中，从而所述四个象限中的每一个每日含有所述逃逸平台一次。如 果动物在90秒内没有逃逸，则将其由实验员手工地导引至逃逸平台。在登 上该平台后，大鼠留在平台上20秒。在每次试验后，将动物从迷宫中取出 并且安置在容留笼内持续30秒ITI。
结果
为确定口服施用UMP对纹状体依赖性记忆加工的影响，大鼠如先前实 施例中那样进行处理并且执行可视平台水迷宫任务。如图24中所示，大鼠 的表现在4日训练期间改善，如由阻断试验的显著主要影响(ANOVA分析； P＜0.001)所证明。未观察到其它显著主要影响，表明环境及补充UMP的食物 对于基于纹状体(刺激-应答)的记忆几乎没有或没有影响。
实施例16：口服施用的CDP-胆碱提高血液尿苷水平
对象接受分别含有3.3mmol(毫摩尔)尿苷或3.2mmol胞苷的口服 UMP(2000mg)或CDP-胆碱(4000mg)。在施用UMP和CDP-胆碱后，血浆尿苷 分别达到最大24mcM和14mcM；曲线下面积的增加分别是345％和201％ (图25)。
实施例17：施用PUFA提高脑磷脂水平并且提高血浆尿苷水平导致进一步 的协同性增加
材料与实验方法
食物
对照标准食物(表4)由Teklad Global的16％蛋白质啮齿动物食物(Harlan Teklad，Madison，WI)组成，所述食物含有0.1％氯化胆碱(CC)，其对应于 50mg/kg/日的日剂量。以0.5％UMP·2Na+重量/重量提供UMP，添加至所述对 照食物中，其中UMP·2Na+也由Harlan Teklad公司制备，对应于240mg/kg/ 日UMP。DHA作为200微升(mcL)/日5％阿拉伯树胶溶液中的300mg/kg/日施 用。然而未接受DHA的组仅施用载体(5％阿拉伯树胶)。DHA由Nu-Chek Prep(Elysian，MN)提供，并且UMP由Numico(Wagenigen，NL)提供。各组 在实验过程中均不表现显著的体重变化。
表4.对照标准食物
脑收集
沙鼠用氯胺酮和赛拉嗪(分别为80mg/kg体重和10mg/kg体重，腹膜内) 麻醉，并且通过将头部浸入液氮2分钟而处死，随后断头。使用咬骨钳将脑 立即且迅速(30秒)取出，并贮存在-80℃。
脑磷脂的测量
将冷冻的脑半球称重并且使用组织降解器(Polytron PT 10-35， Kinematica AG，Switzerland)在100体积的冰冷无离子水中均浆，然后如实施 例1中所述进行分析。
DNA和蛋白质测定
使用二喹啉甲酸试剂(Perkin Elmer，Norwalk，CT，USA)测量全脑匀浆物 样品中的蛋白质。通过在荧光计上在二苯并咪唑(bisbenzimidizole)存在下测 量样品的460nm发射而测量DNA，其中所述的二苯并咪唑是称作Hoechst H 33258(American Hoechst Corporation)的一种荧光染料，此荧光染料在与 DNA结合时在356nm处具有最大激发并在458nm处具有最大发射。
结果
将体重80-100g的雄性沙鼠分成4个组，每组8只沙鼠，并且施用表1中所 述的补充物：
表1.处理组
组别 补充物 量/方法 1 对照食物+载体(5％阿拉伯树胶) 2 UMP钠盐+载体(5％阿拉伯树胶) 含0.5％Na-UMP，饲用。 3 DHA 300mg/kg，每日强饲 4 DHA+UMP钠盐 如上述
4周后，处死动物，并且对减去小脑和脑干的1个脑半球测定总磷脂及 PC、磷脂酰乙醇胺(PE)、鞘磷脂(SM)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰丝氨酸(PS) 的含量。ω-3脂肪酸(DHA)提高总磷脂水平至显著高于所述对照组的水平(图 26、表2和表3)。DHA与UMP的联合导致具有协同性的进一步增加(26％)(即 大于DHA组(12％)和UMP组(5％)中观察到的增加的总和)。每种单独的磷脂 观察到相似结果(表2和表3)。无论磷脂值标准化成蛋白质的量(图26A和表2) 还是标准化成DNA(图26B和表3)，均观察到统计显著性。
表2.标准化成蛋白质水平的DHA、UMP或两者处理对脑磷脂水平的影 响。数据表示为平均值+/-所述平均值的标准差(SEM)。统计分析使用两因 素方差分析(ANOVA)和Tukey检验。相对于对照组，“*”表示P＜0.05；“**” 表示P＜0.01；“***”表示P＜0.001。
处理/脂质 总PL PC PE SM PS PI 对照组 351±8 152±6 64±4 45±2 33±3 21±2 UMP组 367±22 171±8* 84±8* 52±5 35±3 31±2** DHA组 392±20 185±12* 78±5* 56±3* 39±3 32±2** UMP+DHA组 442±24*** 220±22*** 113±6*** 73±4*** 46±6*** 36±6***
表3.标准化成DNA水平的DHA、UMP或两者处理对脑磷脂水平的影 响。统计分析/数据表达方式如表2所示。
处理/脂质 总PL PC PE SM PS PI 对照组 885±45 332±12 176±13 112±5 79±8 54±5 UMP组 878±18 368±10* 195±9 111±4 86±7 78±6** DHA组 909±77 366±13* 196±18 126±8 98±7 84±13** UMP+DHA组 1058±25*** 462±26*** 261±30*** 169±11*** 110±5*** 85±10***
这些研究结果表明，ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸均提高脑磷脂合成和脑磷 脂水平(磷脂总水平以及各种磷脂的水平)。这些研究结果进一步证明提高血 液尿苷水平的PUFA与UMP联合导致进一步的协同增加。
构成脑内主要细胞膜的4种结构性磷脂(这4种磷脂是PC、PE、PS和鞘磷 脂)的成比例增加是大致相等的，而这4种化合物中每一种化合物的水平升高 约20％。因此，维持了这4种结构性磷脂膜在膜中的比例。因此，膜质量提 高，而不破坏正常的膜结构和功能。这些结果表明，本发明的组合物改善 并增强脑功能。