[技术领域] 本发明涉及一种具有增强人体免疫功能，并具有预防和延缓衰老 作用的药物组合物片剂及其制备方法，尤其是一种含有大豆异黄酮、人参茎叶 皂苷及原花青素等天然植物提取物的药物组合物片剂，该片剂亦可作为保健食 品使用，对于增强人体免疫功能，预防和延缓衰老具有明显功效。
[背景技术] 近年来，随着人民生活水平的日益提高，人们对于健康的要求已 经不能仅仅满足于对疾病的预防和治疗上，如何防止和延缓衰老的问题，已经 越来越受到人们的重视。研究人员发现，大豆异黄酮、人参茎叶皂苷及原花青 素等药物，对于延缓人体衰老都具有明显的功效。
异黄酮(Isoflavone)类化合物是一种天然存在的植物雌激素，在植物中它们的 主要作用是抗氧化剂，在人和动物体内这类物质除有雌激素样作用外，还有其 它生物活性。研究发现该类化合物大量存在于豆类作物中，是大豆中的一类非 营养成分，但对人类有明显的保健作用，且无明显毒性，因此受到广泛重视。近 年来对大豆异黄酮生理及保健作用的研究倍受重视，对大豆异黄酮的抗癌、抗 衰老、防治心血管疾病、对骨质疏松的治疗作用等报道很多，是一种很有潜力 的化学防治剂[1]。
人参茎叶皂甙(ginsenosideofstemandleaf，GSL)是人参茎、叶中的主要活性成 分，其作用是多方面的[1]，有抗疲劳、抗衰老和改善学习记忆等作用，现在认为人参 茎叶和人参根部一样也是一种高级营养品。既往研究发现：GSL改善学习记忆的 机制与增强大脑肾上腺素(NE)能神经、5-羟色胺(5-HT)能神经功能有关[2]。
有资料表明，人参有效成分——人参茎叶皂甙可提高机体的免疫功能。经 观察发现，人参茎叶皂甙对创伤小鼠脾脏、胸腺、肠系膜淋巴结病理形态学改 变及淋巴细胞的变性与坏死具有一定的改善作用，且能明显提高创伤小鼠淋巴 细胞膜的流动性，这说明人参茎叶皂甙在一定程度上可从器官——细胞——分 子乃至基因转录水平纠正创伤后的细胞免疫功能低下[3]。
原花青素在欧美等国家享有“皮肤维生素”、“口服化妆品”的美誉。皮肤 属于结缔组织，其中所含的胶原蛋白和弹性蛋白对皮肤的整个结构起着重要作 用，胶原蛋白的适度交联，可以维持皮肤的完整性，而体内自由基氧化可使其 过度交联，在皮肤上表现为皱纹和囊泡，原花青素可促使胶原蛋白的适度交联， 有效清除自由基，从而保持皮肤柔顺、光滑。另外，弹性蛋白可使皮肤具有弹 性，缺乏弹性蛋白的皮肤松弛无力，使人显得老态龙钟，弹性蛋白可被自由基 或弹性蛋白酶所降解，原花青素具有清除自由基，阻断弹性蛋白酶的产生并抑 制其活性，从而改善皮肤健康状况。原花青素防病保健功效的基础就是其清除 自由基的能力。此外，它还具有较好的生物利用度，易于与胶原蛋白结合，稳 定细胞膜及抗酶活性，这些能力与抗氧化能力协同使其有望成为一种颇具开发 前景的保健品[4]。
将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷以及原花青素等三种药物组方，结合并用， 可以达到协同互补之功效，能够更好的发挥其增强人体免疫功能，预防和延缓 衰老的作用。据查临床上至今尚未有使用以上三种药物组方制剂的报道，也没 有类似的保健食品公诸于世。
[发明内容] 本发明的目的在于弥补现有技术的不足，向广大追求美好生活的 人们，提供一种能有效增强人体免疫功能，并具有预防和延缓衰老作用的药物 组合物片剂及其制备方法。
将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素按照一定的比例组方，再配以相 应的辅料，并经过常规的片剂制备工艺，即可得到本发明所述及的药物组合物 片剂。该制剂可制成普通片剂或异形片剂，商品名为“京雷牌岁月无痕片”。以 下是本发明所述“京雷牌岁月无痕片”的制备方法：
一.药物原料
1.大豆异黄酮——汉语拼音Dadou Yihuangtong，英文名soybean isoflavones；
大豆中异黄酮主要有以下3种构成：染料木苷(genistin)、大豆苷(daidzin)和 6-甲氧基大豆苷(glicitin)，其总量约占大豆重的0.25％[5]；
2.人参茎叶皂苷——据国家药品标准记载如下：
人参茎叶总皂苷——汉语拼音Renshen Jingye Zongzaogan
英文名General Ginsenoside in extract of Ginseng stems and leaves
本品为人参茎叶的提取物，按干燥品计算，含人参皂苷Rg1(C42H72O14)不得 少于7.0％，含人参皂苷Re(C48H82O18)不得少于23.0％。
[性状]本品为淡黄色或棕黄色无定形粉末，微臭；味苦；具吸湿性。
本品在甲醇或乙醇中易溶，在水中溶解，在乙醚或石油醚中几乎不溶。
[鉴别]见国家药品标准2002年第七分册P7-4，WS-10001-(HD-0591)-2002
3.原花青素——汉语拼音Yuanhuaqingsu，英文名leucocyanidins，或者 procysnidins。
原花青素属双黄酮衍生物的天然多酚化合物，由不同数目的黄烷醇聚合而 成，本发明所涉及的原花青素是以葡萄籽提取物5，7，3’，4’-四羟基黄烷-3醇 (5，7，3’，4’-tetrahydroxyflavan-3-ol)，即(+)-儿茶素(+)-catechin、(-)-表儿茶素 (-)-epicatechin为单位聚合而成的这类化合物[4]。
二.处方
药物原料：
大豆异黄酮(10～40)％，人参茎叶皂苷(1～60)％，原花青素(10～70)％
辅料：
微晶纤维素(5～40)％，淀粉(5～30)％，硬脂酸镁(0～10)％
三.制备工艺
第一步 按照处方给出的比例，以重量计，正确称取各原、辅料；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合 均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料混合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料混合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均 匀后，加入适量10％乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得含有 药物的混合物II备用；
第四步 将混合物II用整粒机整粒，压片，包衣，分装，灭菌，即得。
(将混合物II整粒后，还可酌情加入适量硬脂酸镁作为润滑剂，并充分混合 均匀，压片，包衣，分装，灭菌，即得。)
[有益效果] 利用现有技术得到的抗衰老药物或保健食品种类繁多，不胜枚 举。本发明所述及的具有增强人体免疫功能，并具有预防和延缓衰老作用的药 物组合物片剂，商品名称为“京雷牌岁月无痕片”，具有以下有益效果：
一.理论分析
1.采用大豆异黄酮、人参茎叶皂苷和原花青素等高纯度的天然植物提取物为 原料，服用剂量小，功效强，服用方便；
2.三种药物配合使用，其功效协同互补，其增强人体免疫功能和预防、延缓 衰老的效果也更为明显；
3.采用大豆、人参茎叶、葡萄籽的高纯度天然植物提取物为药物原料，简化 了制备工艺，有利于保证药品在制备过程中的卫生条件，使得广大使用者服用 更加安全。
4.本发明所述及的“京雷牌岁月无痕片”为常规薄膜衣片，制备工艺简单， 服用量小，服用方便，既可以作为药物使用，也可以用作保健食品，长期服用 成本较低，具有更加广阔的市场前景。
二.实验结果
为了证明以上效果，针对本发明所述及的“京雷牌岁月无痕片”设计了果 蝇寿命的实验，其结果如下：
1.实验材料
上海铁道大学医学院提供的美国野生型黑腹果蝇(Oigen)。
2.剂量选择
设一个空白对照组和四个剂量组，各剂量组饲料含受试物浓度分别为0％、 0.013％、0.040％、0.120％、0.360％。
3.果蝇基础饲料
玉米粉8.5％、红糖6.5％、琼脂0.75％、丙酸0.5％、干酵母粉0.75％、水83％， pH＝7。
4.检测方法
卵、幼虫、蛹及成虫均培养在25±1℃，相对湿度(40～70)％的生化培养箱 中。将常用基础饲料煮成粥后，分装于无菌培养试管中，每支培养管用无菌海 绵塞封口，成虫基础饲料每四天更换一次。将培养管平放在培养箱内饲养，收 集六小时内孵出的成虫进行分组，在次时间内孵出的果蝇均未交配。用乙醚麻 醉后称重分组，选择个体大小相近的果蝇，每管20只，雌雄分养，每组雌雄果 蝇各200只。在成虫期给受试物，受试物掺入到预先溶化的50℃基础饲料中， 并保持各组pH值一致，每天定时统计果蝇存活数和死亡数，直至全部死亡，每 组最后死亡的20只果蝇存活天数的平均数为该组的最高寿命，实验结束，计算 平均寿命和最高寿命以及半数死亡时间。
实验数据用微软公司Excel软件进行方差分析统计。
5.实验结果
(实验结果中的受试物即本发明所述及的“京雷牌岁月无痕片”)
5-1 受试物对老龄小鼠心肌脂褐素的影响
表1受试物对老龄小鼠心肌脂褐素的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只) 心肌脂褐素含量(μg/g组织重) P值 空白对照组 0 12 5.4±1.8 - 低剂量组 0.1 12 4.5±1.4 0.1447 中剂量组 0.2 12 4.5±0.8 0.0890 高剂量组 0.6 12 4.1±0.9* 0.0233
*与空白对照组相比有显著差异(p＜0.05)
表1表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比， 高剂量组心肌脂褐素含量降低24％(p＜0.05)。
5-2 受试物老龄小鼠血清丙二醛含量的影响
表2受试物老龄小鼠血清丙二醛含量的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只) 血清丙二醛(nmol/mL) P值 空白对照组 0 12 4.6±0.7 - 低剂量组 0.1 12 4.2±0.7 0.1408 中剂量组 0.2 12 3.8±0.4** 0.0023 高剂量组 0.6 12 3.6±0.3*** 0.0001
**与空白对照组相比有非常显著差异(p＜0.01)
***与空白对照组相比有极显著差异(p＜0.001)
表2表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比， 中、高剂量组血清丙二醛含量分别降低17％(p＜0.01)、22％(p＜0.001)。
5-3 受试物老龄小鼠血清SOD活力的影响
表3受试物老龄小鼠血清SOD活力的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只) 血清SOD活力(L/mL) P值 空白对照组 0 12 263±26 - 低剂量组 0.1 12 261±21 0.8551 中剂量组 0.2 12 283±15* 0.0292 高剂量组 0.6 12 284±18* 0.0311
*与空白对照组相比有显著差异(p＜0.05)
表3表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比， 中、高剂量组血清SOD活力分别提高8％(p＜0.05)、8％(p＜0.05)。
5-4 受试物老龄小鼠全血谷光甘肽过氧化物酶活力的影响
表4受试物老龄小鼠全血谷光甘肽过氧化物酶活力的影响(X±SD) 分组 受试物剂量(g/Kg.bw) 动物数(只) GSH-PX(L/mL全血) P值 空白对照组 0 12 14.8±2.9 - 低剂量组 0.1 12 14.3±2.8 0.6936 中剂量组 0.2 12 14.4±2.7 0.7172 高剂量组 0.6 12 14.0±2.0 0.4323
表4表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比， 各剂量组全血谷光甘肽过氧化物酶活力均无显著差异(p＞0.05)。
5-5 受试物对老龄小鼠体重的影响
表5受试物对老龄小鼠体重的影响(X±SD) 分组 受试物剂量 (g/Kg.bw) 动物数 (只) 实验前体重 (克) P值 实验后体重 (克) P值 空白对照组 0 12 49.1±4.4 - 49.3±4.0 - 低剂量组 0.1 12 48.9±5.5 0.9452 49.2±5.5 0.9463 中剂量组 0.2 12 48.8±5.9 0.9075 49.4±5.4 0.9932 高剂量组 0.6 12 48.8±5.7 0.9149 49.1±5.6 0.9178
表5表明，经口给予老龄小鼠不同剂量受试物45天后，与空白对照组相比， 低、中、高剂量组体重均无显著差异(p＞0.05)。
5-6 每管果蝇平均体重
表6每管果蝇平均体重(X±SD) 受试物浓度％ 性别 样本数 每管果蝇平均体重(mg) P值 0 ♀ 200 19.9±0.7 - ♂ 200 15.3±0.5 - 0.013 ♀ 200 19.7±0.9 0.5040 ♂ 200 15.3±0.5 0.9317 0.040 ♀ 200 19.7±1.1 0.6763 ♂ 200 15.4±0.5 0.7332 0.120 ♀ 200 19.6±1.0 0.4248 ♂ 200 15.2±0.8 0.8710 0.360 ♀ 200 20.0±1.0 0.7932 ♂ 200 15.2±0.5 0.7312
表6表明，与空白对照组相比，各剂量组每管果蝇平均体重均无显著差异 (p＞0.05)。
5-7 受试物对果蝇半数死亡时间的影响
表7受试物对果蝇半数死亡时间的影响 受试物浓度％ 性别 样本数 半数死亡时间(d) 0 ♀ 200 66 ♂ 200 60 0.013 ♀ 200 66 ♂ 200 60 0.040 ♀ 200 66 ♂ 200 63 0.120 ♀ 200 66 ♂ 200 69 0.360 ♀ 200 69 ♂ 200 59
5-8 受试物对果蝇寿命的影响
表8受试物对果蝇寿命的影响(X±SD) 受试物 浓度％ 性别 样本数 平均寿命(d) P值 最高寿命(d) P值 0 ♀ 200 66.0±11.1 - 79.9±1.4 - ♂ 200 57.8±13.5 - 81.0±2.6 - 0.013 ♀ 200 64.3±12.2 0.1570 82.1±2.3*** 0.0008 ♂ 200 60.1±14.6 0.1078 81.3±0.9 0.5719 0.040 ♀ 200 64.2±11.3 0.1085 81.6±3.6 0.0552 ♂ 200 62.9±13.3*** 0.0002 82.2±2.3 0.1276 0.120 ♀ 200 65.0±12.2 0.4013 80.1±1.3 0.7224 ♂ 200 65.2±14.2*** 1.717×10-7 84.7±2.8*** 0.0001 0.360 ♀ 200 66.8±10.4 0.4627 80.1±1.4 0.6521 ♂ 200 60.3±15.7 0.0882 83.2±2.6* 0.0113
*与空白对照组相比有显著差异(p＜0.05)
***与空白对照组相比有极显著差异(p＜0.001)
表7表8表明，与空白对照组(受试物浓度0％)相比，受试物浓度0.013％的 雌性果蝇最高寿命延长3％(p＜0.001)；受试物浓度0.040％的雄性果蝇平均寿命延 长9％(p＜0.001)；受试物浓度0.120％的雄性果蝇平均寿命延长13％(p＜0.001)， 最高寿命延长5％(p＜0.001)，半数死亡时间延长9天；受试物浓度0.360％的雄性 果蝇最高寿命延长3％(p＜0.05)。
三.本发明所述及的药物组合物片剂“京雷牌岁月无痕片”，已通过北京联 合大学应用文理学院保健食品功能检测中心鉴定，结论如下：
经口给予老龄小鼠不同剂量的京雷牌岁月无痕片45天，与空白对照组相比： 中剂量组(0.2g/Kg.bw)血清丙二醛含量降低17％(p＜0.01)，血清SOD活力提高 8％(p＜0.05)。高剂量组(0.6g/Kg.bw)心肌脂褐素含量降低24％(p＜0.05)，血清丙二 醛含量降低22％(p＜0.01)，血清SOD活力提高8％(p＜0.05)。实验前后各剂量组 体重均无显著差异(p＜0.05)。
与空白对照组(受试物浓度0％)相比，受试物浓度0.013％的雌性果蝇最高寿 命延长3％(p＜0.001)；受试物浓度0.040％的雄性果蝇平均寿命延长9％(p＜0.001)； 受试物浓度0.120％的雄性果蝇平均寿命延长13％(p＜0.001)，最高寿命延长 5％(p＜0.001)，半数死亡时间延长9天；受试物浓度0.360％的雄性果蝇最高寿命 延长3％(p＜0.05)。
根据《保健食品的功能学评价程序和检测方法》判定：京雷牌岁月无痕片 具有延缓衰老功能[6]。
[具体实施方式] 下面结合三个具体实施例对于本发明所述及的岁月无痕片 制备技术方案作进一步说明。
实施例1
第一步 按照处方给出的比例，准确称取大豆异黄酮150g、人参茎叶皂 苷40g、原花青素100g、微晶纤维素200g、淀粉200g、硬脂酸镁10g；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合 均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料组合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料组合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均 匀后，加入适量10％PVP乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得 含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II备用；
第四步 将含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II 用整粒机整粒，并加入羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，充分混合均匀，用常规的压 片机压成异形片1000片，硬度控制在80牛顿左右，用浦力膜包衣粉包薄膜衣， 分装，灭菌，即得。
以上各原辅料总重量为700g，制成1000片，每片为700mg，含有大豆异黄 酮150mg(21.4％)，人参茎叶皂苷40mg(5.7％)，原花青素100mg(14.3％)。
实施例2
第一步 按照处方给出的比例，准确称取大豆异黄酮200g、人参茎叶皂 苷40g、原花青素150g、微晶纤维素200g、淀粉100g、硬脂酸镁10g；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合 均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料组合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料组合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均 匀后，加入适量10％PVP乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得 含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II备用；
第四步 将含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II 用整粒机整粒，并加入羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，充分混合均匀，用常规的压 片机压成异形片1000片，硬度控制在80牛顿左右，用浦力膜包衣粉包薄膜衣， 分装，灭菌，即得。
以上各原辅料总重量为700g，制成1000片，每片为700mg，含有大豆异黄 酮200mg(28.6％)，人参茎叶皂苷40mg(5.7％)，原花青素150mg(21.4％)。
实施例3
第一步 按照处方给出的比例，准确称取大豆异黄酮100g、人参茎叶皂 苷20g、原花青素150g、微晶纤维素200g、淀粉220g、硬脂酸镁10g；
第二步 将大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素等三种药物原料混合 均匀，经超微粉碎得到≤5μm的微粉药物原料组合物I备用；
第三步 将所得微粉药物原料组合物I与微晶纤维素、淀粉充分混合均 匀后，加入适量10％PVP乙醇溶液，制粒，在(40～60)℃温度条件下干燥后，得 含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II备用；
第四步 将含有大豆异黄酮、人参茎叶皂苷、原花青素的药物组合物II 用整粒机整粒，并加入羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，充分混合均匀，用常规的压 片机压成异形片1000片，硬度控制在80牛顿左右，用浦力膜包衣粉包薄膜衣， 分装，灭菌，即得。
以上各原辅料总重量为700g，制成1000片，每片为700mg，含有大豆异黄 酮100mg(14.3％)，人参茎叶皂苷20mg(2.9％)，原花青素150mg(21.4％)。
部分参考资料：
1.周玲，苏黎红，侯金玲.大豆异黄酮研究概况.时珍国医国药2001，12-2P.157-158
2.赵晓民，宗瑞义，谢湘林，鲁澄宇，高允生，朱玉云.人参茎叶皂甙和胆碱合用对学 习记忆的影响.营养学报2000，22-3P.266-270
3.徐祥，梁华平，王正国，朱佩芳，耿波，罗艳.人参茎叶皂甙提高创伤小鼠细胞免疫 功能的实验研究.中医研究1997，12-10(6)P.19-22
4.赵超英，姚小曼.葡萄籽提取物原花青素的营养保健功能(综述).中国食品卫生杂 志2000，12-6P.38-41
5.孙家莉.大豆异黄酮的抗癌作用。天津药学2001，4-13(2)P10-12
6.北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心鉴定报告复印件