技术领域
本发明涉及一种药物，尤其是用于治疗人体严重的急性和慢性损伤的药 物制剂，这种严重的急性和慢性损伤会导致大量失血和血液功能性质的改变。 更特别地，本发明涉及血浆代用品组合物。
背景技术
众所周知，严重的急性损伤和慢性损伤通常与造血系统功能失常和免疫 机能缺陷相关联，其中所说的严重的急性损伤如大面积深度烧伤，由严重损 伤引起的组织坏死导致的败血症，冻伤，渗出性损伤等等，严重的慢性损伤 如各种贫血，白细胞减少症，由与患者的某种癌症相关的化学疗法造成的或 由辐射或生态学事故中辐射作用或毒性作用造成的血小板减少症。
在患有急性和慢性感染疾病如艾滋病，乙肝，II型生殖器疱疹等等的病 人身上也会发现长期的免疫机能缺陷。
除一些损伤附加疗法外，用血浆代用品输血是治疗上述疾病的一种主要 方法。
根据其目的和功能性质，现代的血浆代用品组合物可分为四类：有循环 或抗休克作用的溶液，解毒溶液，非肠道营养用的蛋白质溶液和水-盐/酸-碱 平衡调节剂(参见Mashkovsky M.D.，：“Medicinal Remedies”：part 2， 122-135(1983)；输血和血液替代品手册，Medicine，Moscow，p.155-178， (1982))。
在有循环作用的血浆代用品中，常用于制剂的是聚亚糖精，它是一种部 分水解葡聚糖的无毒/无热源的均聚物片段，被溶解于氯化钠的等张溶液中。
血浆代用品解毒组合物包括如hemodez或polydez，它是一种聚乙烯吡 咯烷酮或聚乙烯醇的低分子量化合物溶于适当盐水溶液中的溶液。
最常用的非肠道营养用蛋白质溶液包括酪蛋白水解物，hydrolysin，蛋 白质水解物，每种都是氨基酸和单肽的混合物，被溶解于氯化钠和葡萄糖的 等张溶液中。
目前公知的水-盐和酸-碱平衡调节剂是Disol，Trisol的溶液，包括含 有平衡的盐和乳酸的Lactasol的水-盐输液。
人们已经知道血浆代用品可用于模拟血液呼吸功能(血液气体运载剂)， 它是以浓缩的基质/促凝血因子释放血红蛋白溶液为基础制备的(see Mashkovsky M.D.，“Medicinal Remedies”：part 2，122-135(1983))。 现有技术中已经研制出改进的用于氧气运输的以血红蛋白为基础的模型制剂 (见US5,449,759，09.12.1995)，其中，Perftoran和Perfucol的乳剂是人 们尤其感兴趣的(vesnik A.N.SSSR：v.6，p.55-64(1989))。目前，人们已 经研制出一种新的以淀粉为基础的具有循环作用的血浆代用品溶液(见 EP059,633，04.27.1994；US5,470,841，11.25.1995)。
由于医学操作通常会大量失血，为了不引起严重的休克，我们必须对病 人同时进行输血，使动脉压力恢复正常并维持在一个稳定的水平上，从机体 清除毒素，正常止血，提供营养物质和氧气，这样就促使人们研制了大量的 溶液状态的多模式代用品，如有循环和造血作用的Polyfer，或有利尿和流变 作用的Rheogluman。
此外，在上述情况中，血浆代用品组合物有很广泛的用途，其中可以同 时加入Polyglucin和Rheopolyglucin，其中Polyglucin可以增加动脉张力 并将该张力维持在一个稳定的水平上的，Rheopolyglucin可以使微循环正常 化，消除凝血(hemostasis)，造成红血球从毛细血管中的重新配置；可以同 时加入帮助代谢物从机体经尿消除的化合物和能消除组织酸中毒并改善总的 治疗效果的Lactasol。
但是，现有技术的血浆代用品组合物，包括多功能血浆代用品，都不能 同时提供刺激造血系统和恢复免疫系统功能的作用。
发明内容
本发明要解决的根本问题是要提供一种新的血浆代用品组合物，这种血 浆代用品组合物不仅有很高的调整性，而且它还具有血液纠正 (hemocorrecting)和免疫调节作用，能够确保造血系统的重建和活化，并能 使免疫系统功能正常化。这种性质使它能够提高存活百分率，减少病人的治 疗时间，迅速恢复血液的数量或功能。
这个问题可以通过提供一种包含等张溶液的血浆代用品组合物来解决， 该等张溶液可进一步含有一种活性成分，该活性成分具有血液纠正 (hemocorrecting)和免疫调节作用以及激活造血功能的能力。此类组分例如 含有生理上可接受的DNA衍生物盐的组合物，其中DNA衍生物是用动物原材 料制备的。
为了获得最大的功效，本发明的组合物含有由鲟鱼或鲑鱼精液制备的 DNA衍生物的钠盐。
这个问题可以通过提供一种含有平均分子量为(1.5-550)×103D，增色效 应(hyperchroic effect)为(28-47)％的生理上可接受的DNA衍生物盐的血 浆代用品组合物来进一步解决，组合物包含盐的数量为每1L等张溶液含有(5 ×103-5)g的盐。根据本发明，本发明的组合物是在生理盐水中含有生理上 可接受的DNA衍生物盐的等张溶液。
这个问题可以通过提供一种制备血浆代用品组合物的方法来进一步解 决，这种方法是制备一种等张溶液，向其中加入活性成分，其特征在于向等 张溶液中进一步加入用动物原材料制备的生理上可接受的DNA衍生物的盐， 其数量和状态应确保溶液的功效，同时维持溶液的等张容积，生理上可接受 的DNA衍生物的盐优选是钠盐。
为了改善所得组合物的质量，DNA衍生物的钠盐先溶解至一定的浓度， 这会使所得溶液在等张溶液中的进一步溶解更为有效，溶液中盐的含量为(5 ×103-5)g/L，溶液中的还含有：
不多于1.5％的蛋白质，不多于2％的多糖，不多于6％的RNA，其中的百 分数均为重量百分数。所用的溶剂包括蒸馏水或生理溶液。
如果向等张溶液中加入平均分子量为(1.5-550)×103D，增色效应为 (28-47)％的DNA衍生物钠盐，则本方法的效能可能会增加。
由于几乎所有现有技术的血浆代用品都可以以等张溶液的形式应用，所 以本发明所要求的组合物是一种广谱血浆代用品。而且，本发明通过血组合 物中加入一种新的具有血液纠正(hemocorrecting)和免疫调节作用的活性成 分，就得到一种新的制剂，这种制剂有一种令人惊奇的新作用，其特征在于 这种制剂不仅能够使血细胞数量急剧增加恢复到正常水平，而且能够在相当 短的时间内激活造血系统的功能，随后产生免疫缺陷修复作用，这些作用在 生命垂危的时候显得十分有用。
发明的实施方案
本发明的组合物是在工厂条件下用常规的容积-重量法制备的。
根据本发明，将适量的生理上可接受的平均分子量为(1.5-550)×103D， 增色效应为(28-47)％的粉末状的DNA衍生物盐，如钠盐，溶解在适量容积 的溶液中，使其浓度大于0.5％，其中所说的粉末含有不多于1.5％的蛋白质， 不多于2％的多糖，不多于6％的RNA，其中的百分数均为重量百分数。其中所 用的溶剂为蒸馏水或生理溶液。然后将所得到的溶液过滤，灭菌，向其中加 入适量的血浆代用品直至达到合适的浓度，能使溶液具有等张容积。
研究结果表明本发明所要求的溶液的功效依赖于加到本发明血浆代用 品中的活性成分的数量及其理化性质，例如DNA衍生物钠盐的量及其理化性 质(表1和2)，当向等张溶液中加入平均分子量为(1.5-550)×103D，增色 效应为(28-47)％的DNA衍生物钠盐时，溶液的功效显著增加。
所得到的溶液为无色透明的液体，不含有机械污染物或其他杂质，性质 稳定。能够长期贮存，贮存期不少于两年。在化学检查和细菌学检查中没有 观察到污染物。
表1
治疗效果与血浆代用品组合物中所要求的活性成分含量的关系 血浆代用品中活性成 分的含量，％ ＞0.5×10-5 0.5×10-5-0.5 ＜0.5 功效 治疗效果急剧下降 最佳治疗效果，没有 并发症 可能有并发症，过敏 性休克
表2
治疗效果与所添加活性成分的理化性质的关系 平均分子量，D ＞0.5×103 1.5×103-550×103 ＜550×103 功效 疗效降低，毒性增加 最佳治疗效果，没有并发症 可能发生血小板凝 聚或凝结
临床实验研究揭示了本发明要求的组合物在治疗由细胞抑制剂或γ-射 线诱发的血细胞减少症(前者为由长期环境毒性导致的免疫缺陷模型，后者 为由放射性污染导致的免疫缺陷模型)中的血液纠正(hemocorrecting)作用。
本研究是用F1(CCBA×C57B1)系雄性小鼠，F1(AMCY×Wistar)雄性大鼠 和比格尔犬进行实验的。
Cyclophosphn(自制)，Pharmorubicin(Pharm，意大利)，顺铂(DDR， 美国)被用作细胞抑制剂。用“Stebel-3a”装置进行放射。细胞抑制剂腹膜 内给药。在用“Stebel-3a”装置进行放射。细胞抑制剂腹膜内给药。在用 “Stebel-3a”装置进行γ-射线辐射的过程中，将3-4只小鼠放在玻璃箱中， 放在装置的辐射区内，射线源以“鼠笼”的方式排列。剂量测定检查表明容 器内的剂量差异小于10％。辐射剂量为6Gy。所要求的组合物以静脉注射的方 式给药，剂量为2mg/kg动物体重。
用本申请的组合物进行治疗会产生血液纠正(hemocorrecting)和免疫 调节作用，明显激活造血系统功能。
例如，在给予细胞抑制剂后的对周边围血液的形态学分析结果表明本申 请的组合物能刺激淋巴细胞和粒细胞释放进入周围血液。在第6天，用本申 请的组合物进行治疗的小鼠的粒细胞数量比对照组高3倍(表3)。
在完全γ-射线治疗后所提供的组合物对血细胞数量正常化的动态作用 见表4。可以看出周围循环系统中白细胞的数量在统计学上显著过剩，比对照 组高出数倍。
表3
在cyclophosphan(CP)的存在下，含有本发明活性成分(K)的血浆代 用品组合物(C)对小鼠周围系统中淋巴细胞和粒细胞数量的动态变化的影响 所用制剂的剂 量和方案 背景第3天 第4天 第6天 第10天 第14天 第21天 粒细胞 (％/abs.c.) CP200mg/kg 23±7.7 3.4±2.75 52.2±4.9 35±8.8 42.4±3.85 27.1±3.4 CP200mg/kg+C& K2mg/kg 2690±990 25±3.4 2875±390 56±45 4.2±2.2 108±57 3500±330 64±8.2 10240±1310 2970±750 31.6±6 2780±530 4280±390 38.6±7.15 39807±40 3200±400 29.8±2.8 370±350 淋巴细胞 (％/abs.c.) CP200mg/kg 69.2±8.25 83.6±4.4 26.4±3.3 42±14.8 39.4±5.5 47.4±2.9 CP200mg/kg C&K 8930±1070 71.3±5.8 1371±72 74±6 1770±220 20.4±3.85 3560±1250 48.6±6.6 3980±560 48.4±8.8 5600±340 66.1±5.2 2mg/kg 8199±667 1910±160 3260±620 4280±580 4980±906 8200±650
表4
在600 Rad完全γ-射线治疗后本申请的血浆代用品组合物(C)对小鼠 周围血流中百细胞数量动态变化的影响 剂量和治疗方案 背景第3天 第2天 第4天 第9天 第14天 第22天 白细胞总数 对照组接受 600Rad 14.7±1.54 4.32±0.77 1.26±0.22 1.80±0.16 1.70±0.38 6.16±2.09 接受600Rad +C&K 17.9±1.7 4.94±1.65 1.88±0.38 2.82±0.16 4.66±0.77 10.1±1.98
对组合物中的活性成分进行加工和纯化，所用的活性成分为生理上可用 的DNA衍生物盐的形式，主要是用氚标记的钠盐，研究了其在小鼠体内的药 物动力学性质。对药物制剂使用了几种不同的给药途径，包括静脉内给药。
研究被标记了的药物制剂的代谢物在全血，血浆，全血的各组成元素， 肾，肝，淋巴结，脾，胸腺，胃，小肠，脑，骨骼，骨髓中的浓度和时间的 相互依赖关系。在所研究的器官和组织中，所有描述以生理上可用的DNA衍 生物盐的形式存在的活性成分的浓度变化过程的药物动力学曲线都表现出一 个为期3-6天的典型的浓度迅速下降相，其中所说的以生理上可用的DNA衍 生物盐的形式存在的活性成分主要是钠盐及其代谢产物。所说活性成分的最 高取向出现在淋巴结，脾，胃，以及肾中。活性成分在这些器官和组织中的 平均滞留时间为60±2.9小时。活性成分主要通过尿来进行排泄。被给药的 活性成分主要在给药后的第一天进行排泄：37％通过尿进行排泄，3.3％通过粪 便进行排泄。到给药后第六天，药物的排泄速率下降，动物体内含有少于 10-15％的给药剂量。给药后活性成分完全从器官和组织中消除至少需要10天。
对本申请所要求的组合物的毒性也进行了广泛的研究，用小鼠，大鼠和 狗进行了急性毒性研究，用大鼠和狗进行亚急性毒性研究，致敏作用和免疫 学作用用豚鼠进行研究，胚胎毒性和致畸形作用用大鼠进行研究，致热性质 用兔子进行研究，组合物的安全性和潜在的诱变性质用致癌活性预测进行研 究。
由得到的实验数据我们可以得出如下的结论，即本申请的含有血液纠正 (hemocorrecting)和免疫调节作用的活性成分的组合物的毒性很低。尸检研 究表明器官和组织的变化与所用的剂量有关，且这种变化是可逆的。本申请 的组合物没有致畸形作用，没有致癌作用或胚胎毒性，不影响周围血液的形 态学和生化组成，没有胃肠道，心，肝和肾毒性，没有局部刺激作用，没有 致热活性。该组合物的毒性仅表现为不能以高剂量和高浓度静脉给药。重复 给药时，该组合物不会发生过敏，也不会诱发致敏。
进行研究和分析得到的主要结论如下：
·在血液纠正(hemocorrecting)作用下，使用本申请的组合物，能诱发 造血系统的活性；
·与已知的血浆代用品制剂不同，本申请的组合物能迅速的加速机体免 疫状况的恢复；
·使用本申请的组合物不会产生副作用或并发症。对本申请的组合物也 进行了临床研究。
本发明的临床研究是用患有慢性贫血的病人或用化学或放射治疗后血 细胞生成受抑制的肿瘤病人进行的。
在临床研究中，选择18岁以上患贫血的慢性贫血患者(男性红细胞数 为4.0×1012/l；女性红细胞数为3.5×1012/l)，他们的治疗坚持治疗至少6 个月，或在治疗结束后一年内有规律的进行循环治疗。在研究开始以前，所 有的病人都要进行全面的医学检查，进行临床血液学和生化学检查以确诊以 下诊断指标：病史；白血球、红血球和网状细胞数量；血红蛋白，血细胞比 容，全血细胞数，ESR，铁及血清的铁结合能力，转铁蛋白，铁蛋白，铜，锌， 和血浆铜蓝蛋白。同时用临床免疫学装置测定免疫系统的状况：CD3、CD4、 CD8、CD16、CD72-淋巴细胞(lumphocytes)，血清免疫球蛋白，吞噬细胞的数 目和指数，补体的溶血能力，类风湿因子的效价。
病人每天静脉给予100-200升的聚亚糖精等张溶液进行治疗，该等张溶 液中含有以DNA衍生物钠盐形式存在的活性成分，活性成分的量为(0.5-1.5) ×10-3，连续治疗3天。
在治疗后，用下面的标准对结果进行评估：病人的健康状况和主观感觉， 血液特性动力学，免疫特性动力学，生化特性动力学，在以后阶段疾病的复 发状况。
对18位病人的实验数据进行总结，统计学结果表明治疗有明显的积极 效果，83％的病人的血液学，生化学和免疫学特性正常化，具有造血系统功能 激活迹象，其余病人在这些性质上也表现出积极效果，在治疗结束后40-60 天疾病没有显著复发。22％的病人出现发热反应，体温上升至38-38.5°；在 停药2-3天内发热症状自动消失。没有发现其它副作用。
在用肿瘤病人作为研究对象进行的研究中，选择14位病人作为一组， 这些病人在大剂量钙调蛋白(CAM)方案中结合化疗来治疗小细胞肺癌。在研 究开始之前，病人接受全面的医学检查：肺部X射线照相，肝、肾上腺、脑 CT、骨扫描CT，血液生化分析，骨髓细胞分类记数。
在治疗的第一天，在形态学上定位的小细胞肺癌的病人使用如下的制 剂：环磷酰胺(Cyclophosphanum)1.5g/m2，静注，阿霉素60mg/m2，静注，氨 甲蝶呤30mg/m2，静注。
在治疗期间，从治疗的第二天开始，每天静脉给予100-200ml含有 (0.5-1.5)×10-3％活性成分的Rheopolyglucin，持续治疗5-10天。从第二天 到第二十天每天进行血细胞记数，在第6和10天记录对照的骨髓细胞分类记 数。在研究过程中，病人不再使用其他的帮助造血的制剂，维他命，皮质类 固醇，同时不再进行输血。
全部实验数据表明，对于患有小细胞肺癌的病人，在接受化疗的同时给 予本申请的制剂会减少白细胞和中性粒细胞减少症的发生以及减少白细胞和 中性粒细胞减少症的持续时间，避免在化疗期间出现脓肿性并发症，并且64％ 的病人的可进行重复化疗的治疗间期缩短了20-30％。据报道，所有的病人对 该制剂都有良好的耐受性，21％的病人体温升高至38°，但不用对这种症状 进行治疗，停止使用该制剂后该症状自动消失。
使用本发明对病人进行治疗的具体实施例见下面的例子。
举例
病人K.A.Y.，1935年出生，患有慢性贫血，在6个月的观察中，使用 普通制剂的疗效很短或无效。每天静注200ml的Polyglucin血浆代用品组合 物，其中含有0.5×10-3％的活性成分，疗程为3天。结果见表5。
表5 背景 第9天 第13天 第20天 第50天 红细胞 3.05 3.34 3.48 3.75 4.06 ESR 19 52 44 24 19 白细胞 3400 4400 4400 4700 5100 Stab％ 4 6 2 4 5 Segm.％ 53 59.5 62 70 46 嗜酸性细胞％ 4 1 1 1 2 嗜碱性细胞％ 0 0.5 0 0 0 单核细胞％ 5 6.5 3 6 11 淋巴细胞％ 34 26.5 33 19 36 Segm.abs 1938 2882 2816 3478 1394 嗜酸性细胞吸收度 136 44 44 47 55 嗜碱性细胞吸收度 0 22 0 0 0 单核细胞吸收度 170 286 132 282 301 淋巴细胞吸收度 1156 1166 1452 893 984 CD3％ 33 40.5 CD4％ 8 21.6 CD8％ 29 41.2 CD72％ 17 33.3 CD16％ 31 24 CD3吸收度 381 362 CD4吸收度 92 193 CD8吸收度 335 338 CD72吸收度 197 297 CD16吸收度 358 214 噬菌体数目 90 96 噬菌体指数 6.1 12
上述例子的特征为给药后接下来的50天红细胞和淋巴细胞数目持续增 加，其余指标正常化。病人的健康状况永久性的改善，同时没有出现头晕和 乏力的症状。没有发现常见的并发症或副作用。这些数据表明，我们可以将 这种制剂广泛的用作血浆代用品，它具有血液纠正(hemocorrecting)和免疫 调节的作用。
对其他病人进行的研究进一步肯定了本申请组合物的激活造血系统和恢 复病人免疫功能的活性，这正是本发明的要达到的目的。
本发明的工业实用性
血浆代用品组合物被广泛用于医学和兽医学，用于治疗严重的急性和慢 性机体损伤，这些损伤会造成血容量减少，以及以免疫缺陷为标志的血液功 能性质发生改变。