技术领域
本发明涉及预防流感病毒感染的药剂，所述药剂包含脂肪球膜成 分作为活性组分。
此外，本发明还涉及预防流感病毒感染的药剂，所述药剂包含含 有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、特别是鞘磷脂作为活性成分。
背景技术
流感病毒通过空气使人感染，从而几乎每年都引起流行。尽管近 年来由于卫生措施的改善和医学的进步其威胁已经降低，但是仍有引 起死亡的情况。
存在A型、B型和C型三种类型的流感病毒，其中A型病毒易于 产生变异并且易于引起世界范围内的流感大流行。主要通过接种疫苗 来预防流感病毒的感染。然而，由于流感病毒易于引起抗原性转变、 抗原性漂移等变异，所以流行性病毒与疫苗的抗原在许多情况下并不 一致，使得目前存在通过疫苗进行预防的效果并不令人满意的情况。
因此，目前对于儿童的预防接种疫苗也并不是义务性的。金刚烷 胺、奥塞米韦(oseltamivir)等被用作流感的治疗剂，但是由于需要考 虑副作用、耐性菌的出现等问题，所以必须注意它们的使用。基于这 种情况，人们已经开始关注可以日常地安全摄取、并且有效地预防流 感病毒感染的试剂或者食物或饮料。
发明内容
本发明的目的是提供预防流感病毒感染的药剂，所述药剂可以被 日常地安全摄取。
通过关注具有各种生理活性的乳类成分，本发明人对它们对于流 感病毒感染的预防效果进行了深入地研究，并且发现了脂肪球膜成分 以及含有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物对于流感病毒感染具有预防效 果，因此导致完成了本发明。
即，本发明涉及下列内容。
(1)一种预防流感病毒感染的药剂，所述药剂包含脂肪球膜成分 作为活性组分。
(2)一种预防流感病毒感染的药剂，所述药剂包含含有鞘氨醇的 磷脂和/或其衍生物作为活性成分。
(3)根据(2)所述的预防流感病毒感染的药剂，其中所述含有 鞘氨醇的磷脂为鞘磷脂。
(4)一种用于预防流感病毒感染的食物或饮料，所述食物或饮料 包含脂肪球膜成分。
(5)一种用于预防流感病毒感染的食物或饮料，所述食物或饮料 包含含有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物。
(6)根据(5)所述的用于预防流感病毒感染的食物或饮料，其 中所述含有鞘氨醇的磷脂为鞘磷脂。
通过本发明的预防流感病毒感染的药剂和用于预防流感病毒感染 的食物或饮料，可以预防流感病毒感染。
由于本发明的预防流感病毒感染的药剂和用于预防流感病毒感染 的食物或饮料包含脂肪球膜成分作为活性成分，所以它们可以相对便 宜地大量供给，并且它们还具有安全性相当高的特性。
另外，由于本发明的预防流感病毒感染的药剂和用于预防流感病 毒感染的食物或饮料包含含有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、特别是鞘 磷脂作为活性成分，所以它们可以相对便宜地大量供给，并且它们还 具有安全性相当高的特性。
具体实施方式
(脂肪球膜成分)
本发明涉及预防流感病毒感染的药剂，所述药剂包含脂肪球膜成 分作为活性成分，并且本发明还涉及这样的食物或饮料，所述食物或 饮料通过与脂肪球膜成分混合而具有预防流感病毒感染的作用。
脂肪球膜成分是覆盖由乳腺分泌的乳脂肪球的膜，其不仅具有使 脂肪分散在乳汁中的作用，而且具有作为新生动物的食物的许多生理 作用。牛奶的乳脂肪球膜包含约45质量％的蛋白质和约55质量％的脂 质，并且含有被称为乳粘蛋白的高分子糖蛋白作为蛋白质。此外，还 含有约70质量％的甘油三酯、约27质量％的磷脂和约3质量％的胆固 醇等作为脂质。
关于牛奶的乳脂肪球膜，已知其具有保护乳脂肪球膜、使乳脂肪 乳液稳定、促进脂质的消化、防御特定细菌的感染等作用。另一方面， 从动物的粘膜组织中分离的含有大量唾液酸的粘蛋白具有抗流感病毒 的活性(Biochem.J.，277，713-718，1991)，但是其组成的成分与根据 本发明的乳脂肪球膜成分完全不同。
作为本发明中使用的脂肪球膜的成分，例如可以直接使用这样的 酪乳，该酪乳是在通过对使用搅乳器等离心分离奶牛等哺乳动物的乳 汁而获得的乳脂进行处理来制备奶油颗粒时获得的。
此外，通过使用搅乳器等来处理这样的乳脂从而制备奶油颗粒， 由此获得的酪乳也可以用作脂肪球膜的成分，其中通过重复数次下述 过程来从该乳脂中除去无脂乳类成分：通过加入相同量的水来与该乳 脂混合并离心分离，从而制得具有初始脂肪率的乳脂。
另外，当通过加热和离心分离上述奶油颗粒来制备乳脂肪时，作 为残渣而获得的奶油乳清可以用作脂肪球膜成分。
因此，由于在这些酪乳和奶油乳清中含有足够量的脂肪球膜成分， 所以这些酪乳和奶油乳清可直接用作脂肪球膜成分，但是这些酪乳和 奶油乳清可以通过透析法、硫酸铵分级分离法、凝胶过滤法、等电点 沉淀法、离子交换色谱法、溶剂分馏、超滤法(UF)、微滤法(MF) 等方法来进一步纯化，从而提高脂肪球膜成分的纯度而使用。
例如，为了获得脂肪球膜成分的含量增加的组合物，可以使用通 过UF膜或MF膜的分离过滤技术。由于脂质部分不能透过UF膜或 MF膜，因此可以除去蛋白质、乳糖和矿物质。
UF膜的截留分子量和MF膜的孔径并无严格设定，本领域技术人 员可以基于试验来确定合适的值。例如，在MF法的情况下，孔径的暂 行标准为1.2μm或更小，优选为0.2μm或更小，在UF法的情况下， 截留分子量的暂行标准为10,000或更大，优选为50,000至100,000。
过滤的浓缩液可以被喷雾干燥以制得脂肪球膜成分的含量增加的 组合物，或者经UF膜或MF膜处理的浓缩液可以被均质化(100kg/cm2或更高)，然后经MF法或UF法处理和喷雾干燥以制得脂肪球膜成分 的含量进一步增加的组合物。
例如，可以按照下列方式获得脂肪球膜成分的粗制部分。通过使 用乙醇、甲醇等极性溶剂以及非极性溶剂和极性溶剂的组合(例如乙 醚-乙醇(1∶3V/V)、氯仿-甲醇(2∶1V/V)、氯仿-甲醇-水(1∶2∶0.8V/V) 等)来处理脂肪球膜成分的含量增加的组合物，从而萃取得到粗脂肪。 通过使用丙酮对该粗脂肪进行分级分离，可以获得富含脂肪球膜成分 的丙酮不溶性部分。
此外，奶油乳清(其为由乳脂制备乳脂肪的残渣)含有大量的脂 肪球膜成分，因此其是一种所需的材料。通过使用乙醇从这种奶油乳 清中萃取得到粗脂肪，可以使用通过利用丙酮对该粗脂肪进行分级分 离而获得的产物。另外，还可以使用己烷-乙醇-水的混合溶剂的萃取部 分(JP-A-7-173182)。另外，还可以使用衍生自市售的牛奶的脂肪球 膜成分。
关于在本发明的预防流感病毒感染的药剂和用于预防流感病毒感 染的食物或饮料中的脂肪球膜成分的混合量，在成年人的情况中，可 以按照这样的方式调节脂肪球膜成分的混合量，该方式使得可以每天 摄取约0.1mg至5000mg的量的脂肪球膜成分。通过设定在该范围内， 可以发挥对于流感病毒感染的预防作用。由于作为本发明的预防流感 病毒感染的药剂的活性成分的脂肪球膜成分是乳类成分，因此可以说 即使在大量摄取时也不会存在关于其安全性方面的问题。
(含有鞘氨醇的磷脂)
此外，本发明还涉及预防流感病毒感染的药剂，所述药剂包含含 有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、特别是鞘磷脂作为活性成分，并且本 发明还涉及这样的食物或饮料，所述食物或饮料通过与含有鞘氨醇的 磷脂和/或其衍生物、特别是鞘磷脂混合而具有预防流感病毒感染的作 用。
尽管在乳中存在大量占磷脂的20至30质量％的鞘磷脂，但是人 们对鞘磷脂作用的研究仍限于细胞水平，并且其在生物体中的生理学 作用的信息极度匮乏。因此，人们仍未认识到其作为营养物质的成分 的效果。
关于鞘磷脂的应用，已知消炎镇痛外用剂、脂质的消化吸收机能 改善剂、肠管运动机能不足性疾病治疗剂(JP-A-5-186330、 JP-A-11-269074、JP-A-2003-252765)等，但是并未披露其具有预防流 感病毒感染的作用，从而使得其并未用于预防流感病毒感染的目的。
另一方面，已经公开了为了通过乳化具有抗病毒作用的成分 (JP-T-2006-508045)(本文中使用的术语“JP-T”是指公开的PCT专 利申请的日文译文)和待用作疫苗的抗原(JP-A-5-339169)来形成脂 质体而使用鞘磷脂作为脂质成分的情况，但是并不知道鞘磷脂本身具 有抗流感病毒的活性。
另外，常规已知的是神经节苷脂(其为乳汁中所含的糖脂质)具 有抗流感的活性(JP-A-4-105616)，但是其组成成分唾液酸对于这种 作用而言是重要的，该作用是通过这样的机理来表达的机能，其中包 含唾液酸的糖脂质竞争性地抑制病毒与粘膜上皮细胞的结合。因此， 很明显并未披露不含唾液酸的鞘磷脂的机能。
本发明中使用的含有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物、特别是鞘磷脂 可以是纯化的或者可以以含有鞘磷脂的磷脂的形式来使用。
尽管动物脑和乳类脂肪中富含鞘磷脂，但是从实施本发明的观点 来考虑，乳源鞘磷脂是期望的。作为乳源鞘磷脂，期望的是使用生乳、 乳清蛋白质浓缩物(WPC)等作为材料。
作为从生乳、WPC等中获得含有鞘磷脂的磷脂部分的方法，例如 可以举出使用醚或丙酮进行萃取的方法(JP-A-3-47192)、使用通过加 热熔解奶油而获得的含有奶油凝乳或奶油乳清的水溶性部分等常规已 知的方法。通过使用这些材料和方法而获得的部分中的鞘磷脂含量分 别为约28质量％和约9质量％。
另外，通过透析法、硫酸铵分级分离法、凝胶过滤法、等电点沉 淀法、离子交换色谱法、溶剂分馏、超滤法(UF)、微滤法(MF)等 技术来纯化上述含有鞘磷脂的磷脂部分，可以获得纯度提高的鞘磷脂。
这些鞘磷脂和含有鞘磷脂的磷脂可以可任选地采用液体、粉末、 片等形式，并且可以直接口服施用。另外，不仅可以使用鞘磷脂，而 且可以使用含有人营养要求所限定的有效量的卵磷脂的磷脂组合物。
关于在本发明的预防流感病毒感染的药剂和用于预防流感病毒感 染的食物或饮料中的含有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生物的混合量，在成 年人的情况中，可以按照这样的方式调节混合量等，该方式使得可以 每天摄取约0.1mg至5000mg的量的含有鞘氨醇的磷脂和/或其衍生 物、特别是鞘磷脂。通过设定在该范围内，可以发挥对于流感病毒感 染的预防作用。由于作为本发明的预防流感病毒感染的药剂的活性成 分的含有鞘氨醇的磷脂、特别是鞘磷脂为乳类成分，因此可以说即使 在大量摄取时也不会存在关于其安全性方面的问题。
作为本发明的预防流感病毒感染的试剂的剂型，例如可以举出片 剂、胶囊剂、颗粒剂、粉末材料、粉末剂、溶液剂等。这些剂型可以 口服施用或者可以经鼻施用。另外，这些剂型可以通过常规已知的通 用方法来制备。例如，它们通过与药物制剂制备可接受的载体、填充 剂等混合来形成。
另外，作为本发明的具有预防流感病毒感染的作用的食物或饮料， 例如可以举出脂肪球膜成分或者磷脂和/或其衍生物与牛奶、乳类饮料、 咖啡饮料、果汁、果冻、饼干、面包、面条、香肠等食物和饮料、或 各种奶粉、以及旨在用于乳儿、婴儿、低出生体重儿等的营养组合物 混合的那些。由于可以按照通常的方式来摄取它们，因此可以预防流 感病毒感染。
下面将参照实施例和试验例来进一步详细地说明本发明，但是这 些说明仅仅是描述性的，本发明并不限于此。
实施例1
使用搅乳器来处理脂肪率被调节为40质量％的乳脂，并使之分离 成奶油颗粒和酪乳。此后，通过将由此获得的酪乳冷冻干燥来获得脂 肪球膜成分。
实施例2
向脂肪率被调节为40质量％的乳脂中加入相同量的水，混合，通 过离心分离来制备脂肪率为40质量％的乳脂，重复三次这样的操作以 从乳脂中除去无脂乳类成分，然后使用搅乳器来处理这样的乳脂，并 使之分离成奶油颗粒和酪乳。此后，通过将由此获得的酪乳冷冻干燥 来获得脂肪球膜成分。
实施例3
向脂肪率被调节为40质量％的乳脂中加入相同量的水，混合，通 过离心分离来制备脂肪率为40质量％的乳脂，重复三次这样的操作以 从乳脂中除去无脂乳类成分，然后使用搅乳器来处理这样的乳脂，并 使之分离成奶油颗粒和酪乳。此后，使用50％的饱和硫酸铵将该酪乳 过夜处理，然后离心分离以收集上清液。此后，使用水对由此获得的 上清液进行透析后，冷冻干燥从而获得高度浓缩的脂肪球膜部分。
[试验例1]
(口服施用脂肪球膜成分来预防流感病毒感染的效果的验证)
使用1×103pfu的病毒量的流感病毒PR 8(H1N1)来感染鼠(Balb/c， 雄性，6周龄)。在感染处理前，口服施用实施例2中获得的脂肪球膜 成分，并且通过在病毒感染3天后鼻腔清洗液中的病毒效价来判定其 感染预防效果。在进行口服施用中，通过将脂肪球膜成分粉末溶解在 蒸馏水中来对其进行使用。在判定中使用噬斑法(其使用MDCK细胞)。
结果列于表1中。在脂肪球膜成分施用组中鼻腔内病毒效价显著 降低。这表明脂肪球膜成分具有预防流感病毒感染的作用。
[表1]
实施例4
通过将5g在本发明的实施例3中获得的高度浓缩的脂肪球膜部 分溶解在200ml注射用蒸馏水中来制备用于鼻腔内喷射的溶液。
实施例5
将表2中所示的配方的材料混合，制成颗粒，然后填充到胶囊内， 从而制得用于预防流感病毒感染的胶囊。
[表2]
高度浓缩的脂肪球膜部分(实施例3) 20.0(质量％) 乳糖 24.5 可溶性淀粉 55.0 硬脂酸镁 0.5
实施例6
将表3中所示的配方的材料混合，填充到容器内，然后加热灭菌， 从而制得用于预防流感病毒感染的食物或饮料。
[表3]
高度浓缩的脂肪球膜部分(实施例3) 2.5(质量％) 蔗糖 7.5 柠檬酸 0.6 苹果汁 10.0 水 79.4
实施例7
使用氯仿-甲醇(2∶1)溶液萃取通过使蛋白酶作用于10质量％的 乳清蛋白质浓缩物(WPC)水溶液而获得的反应液，浓缩，然后使用 丙酮进一步萃取，从而获得复合脂质部分。然后，使用氟代甲硅烷基 柱色谱法来处理该复合脂质部分，并且使用氯仿-甲醇溶液来逐步萃取， 从而获得磷脂部分。使用硅胶色谱法来处理该磷脂部分，并且使用氯 仿-甲醇溶液来逐步萃取，将产物冷冻干燥，从而获得鞘磷脂。使用薄 层色谱法来处理该鞘磷脂，然后使用Dittmer试剂显色并通过光密度法 来进行测定，从而确定鞘磷脂含量为95.2质量％。可以直接使用按照 这种方式获得的鞘磷脂作为预防流感病毒感染的药剂。
[试验例2]
(预防A型流感病毒感染和B型流感病毒感染的效果的验证)
使用A/Guinzhou病毒作为A型流感病毒或者使用B/Ibaraki病毒 作为B型流感病毒来经鼻感染鼠(Balb/c，雄性，6周龄)，同时以鼻 腔内剂量为5μl的100μg/ml的实施例1中获得的鞘磷脂(SPM)的溶 液的剂量(剂量：0.5μg)经鼻施用，并且通过鼻腔清洗液中的病毒效 价来判定其对于流感病毒感染的预防效果。就此而言，制得使用各流 感病毒单独经鼻感染的组。在判定中使用噬斑法(其使用MDCK细胞)。
结果列于表4中。结果证实了施用鞘磷脂对于A型流感病毒感染 和B型流感病毒感染均具有预防效果。特别地，证实对于A型流感病 毒具有更显著的效果。
[表4]
[试验例3]
(口服施用鞘磷脂来预防流感病毒感染的效果的验证)
使用1×103pfu的病毒量的流感病毒PR 8(H1N1)来感染鼠(Balb/c， 雄性，6周龄)。在感染处理前，口服施用鞘磷脂，并且通过在病毒感 染3天后鼻腔清洗液中的病毒效价来判定其感染预防效果。在进行口 服施用中，通过将鞘磷脂分散在水中来对其进行使用。在判定中使用 噬斑法(其使用MDCK细胞)。
结果列于表5中。在鞘磷脂施用组中鼻腔内病毒效价显著降低。 这表明鞘磷脂具有预防流感病毒感染的作用。
[表5]
实施例8
通过将5g在实施例7中获得的鞘磷脂溶解在200ml注射用蒸馏 水中来制备用于鼻腔内喷射的溶液。
实施例9
将表6中所示的配方的材料混合，制成颗粒，然后填充到胶囊内， 从而制得用于预防流感病毒感染的胶囊。
[表6]
鞘磷脂(实施例7) 20.0(质量％) 乳糖 24.5 可溶性淀粉 55.0 硬脂酸镁 0.5
实施例10
将表7中所示配方的材料混合，填充到容器内，然后加热灭菌， 从而制得用于预防流感病毒感染的食物或饮料。
[表7]
鞘磷脂(实施例7) 2.5(质量％) 蔗糖 7.5 柠檬酸 0.6 苹果汁 10.0 水 79.4
尽管参照其具体实施方案对本发明进行了详细地说明，但对本领 域技术人员来说显而易见的是，可以在不偏离本发明的精神和范围的 条件下做出各种改变和修改。
本申请基于2006年8月4日提交的两个日本专利申请(日本专利 申请No.2006-223276和日本专利申请No.2006-213273)，其全部内容 以引用的方式并入本文中。