降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410463657.1 (22)申请日 2014.09.11 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104208118 A (43)申请公布日 2014.12.17 (73)专利权人 保定冀中药业有限公司 地址 071500 河北省保定市高阳工业城 (72)发明人 郭立佳 徐立萧 田继业 李定刚 邵谱 (74)专利代理机构 石家庄元汇专利代理事务所 (特殊普通合伙) 13115 代理人 刘闻铎 (51)Int.Cl. A61K 36/296(2006.01) A6。

2、1P 31/04(2006.01) A61K 35/744(2015.01) (56)对比文件 CN 103202391 A,2013.07.17, 高鹏飞.复合乳酸菌制剂在防治奶牛乳房炎 方面的应用研究. 中国畜牧杂志 .2014,第50卷 (第12期), 冯金英等.奶牛乳腺炎的防治. 农村实用科 技信息 .2007, (第06期), 审查员 周静 (54)发明名称 降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组 合及制备方法 (57)摘要 降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组 合， 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物60- 80份， 乳酸菌发酵制剂20-40份。 本发明还提供了 一种降低奶牛体。

3、细胞数的中药及微生态制剂组 合的制备方法。 淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂 隶属于中药和微生态制剂范畴， 是国家倡导的替 代抗生素等化学药产品的有利替代者， 具有安全 高效、 无残留、 不违禁等优势。 该组合通过间接增 强免疫功能、 直接杀菌作用、 以及提供营养成分， 快速起到降低奶牛体细胞数的效果， 而且， 本发 明的制备方法简单、 易操作， 最大程度的得到淫 羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂， 不破坏淫羊藿提 取物和乳酸菌发酵制剂的有效成分。 权利要求书1页 说明书6页 CN 104208118 B 2018.03.06 CN 104208118 B 1.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物，。

4、 其特征在于： 按重量比计， 由淫羊藿 提取物60-80份， 乳酸菌发酵制剂20-40份制成； 所述中药及微生态制剂组合物由下述方法 制备： A： 将淫羊藿药材粉碎， 得到粒度在10-20目的淫羊藿粉， 然后将淫羊藿粉置于8-10倍重 量的70%乙醇中， 回流提取两次， 每次30-60分钟， 将两次回流提取的浸提液合并， 得到合并 浸提液， 利用酒精回收塔回收乙醇， 并将合并浸提液通过浓缩罐于80-100进行浓缩， 直至 浓缩至合并浸提液总体积的1/15-1/10， 得到浓缩液， 然后将浓缩液进行喷雾干燥， 得淫羊 藿提取物， 备用； B： 将试管中保存的乳酸菌菌种接种于MRS液体种子培养基中。

5、， 厌氧培养48小时， 得乳酸 菌液体种子， 然后将该乳酸菌液体种子按体积百分比0.5%的接种量接种于液体改良MRS培 养基中， 于30-32厌氧发酵60-72小时， 发酵结束后， 将发酵液于40-50浓缩至发酵液原 体积的1/10-1/6， 得到发酵浓缩液， 将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥， 得乳酸菌发酵制剂， 备用； C： 将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂按比例混合均匀， 即得 降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物。 2.根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物， 其特征在于： 按重量比计， 淫羊藿提取物60份， 乳酸菌发酵制剂40份。 3.根据。

6、权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物， 其特征在于： 按重量比计， 淫羊藿提取物65份， 乳酸菌发酵制剂35份。 4.根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物， 其特征在于： 按重量比计， 淫羊藿提取物70份， 乳酸菌发酵制剂30份。 5.根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物， 其特征在于： 按重量比计， 淫羊藿提取物75份， 乳酸菌发酵制剂25份。 6.根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物， 其特征在于： 按重量比计， 淫羊藿提取物80份， 乳酸菌发酵制剂20份。 7.根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数。

7、的中药及微生态制剂组合物， 其特征在于： 所述的步骤A中粒度在10-20目的淫羊藿粉， 粒度分布为： 100%通过10目筛， 98.1-98.9%不通 过20目筛。 8.根据权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合物， 其特征在于： 所述的步骤B中乳酸菌菌种选自植物乳杆菌、 屎肠球菌、 嗜酸乳杆菌发酵中的一种。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 104208118 B 2 降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法。 背景技术 0002 乳房炎是困扰奶牛业的第一大疾病， 临床型乳房炎。

8、一般都是由隐性乳房炎进一步 发展所致。 而隐性乳房炎的一个主要特征往往是体细胞数的增加。 体细胞数越高， 隐性乳房 炎越严重， 越容易转化成临床型乳房炎。 0003 体细胞数增加， 说明有病原菌感染乳腺， 奶牛免疫系统启动并处理病原菌， 当免疫 系统不能完全清除病原菌时， 体细胞数会持续上升， 产奶量显著下降， 并朝乳房炎的方向发 展。 0004 现在， 越来越多的奶业公司开始关注体细胞数， 当牛奶中体细胞数超过一定数量 时， 会降价收奶或拒绝收奶。 因此开发降低体细胞数的产品尤为急迫。 目前市面上降低体细 胞数的产品主要为中药散剂、 左旋咪唑， 甚至是偷着添加的抗生素等。 中药散剂用量大， 。

9、生 物利用度低， 且效果不明显， 主要是以提高免疫力为主。 左旋咪唑已经禁止在奶牛药物中添 加。 抗生素由于残留问题更是明令禁止。 因此， 发明一种高效、 绿色、 无残留的产品， 能够快 速降低体细胞数， 并将其维持在较低水平， 从而减少牧场及奶农损失具有很高的经济价值。 发明内容 0005 本发明为解决现有技术中根据体细胞数增加的表现， 奶牛乳房炎导致产奶量下 降、 奶业经济效益降低， 现有技术降低体细胞数的药物效果不明显的技术问题， 设计了一种 安全、 效果明显的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法。 0006 本发明为实现其目的采用的技术方案是： 0007 降低奶牛体细胞数的。

10、中药及微生态制剂组合， 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提 取物60-80份， 乳酸菌发酵制剂20-40份。 0008 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物60份， 乳酸菌发酵制剂40份。 0009 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物65份， 乳酸菌发酵制剂35份。 0010 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物70份， 乳酸菌发酵制剂30份。 0011 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物75份， 乳酸菌发酵制剂25份。 0012 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物80份， 乳酸菌发酵制剂20份。 0013 制备权利要求1所述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合。

11、的方法， 包括 以下步骤： 0014 A： 将淫羊藿药材粉碎， 得到粒度在10-20目的淫羊藿粉， 然后将淫羊藿粉置于8-10 倍重量的70乙醇中， 回流提取两次， 每次30-60分钟， 将两次回流提取的浸提液合并， 得到 合并浸提液， 利用酒精回收塔回收乙醇， 并将合并浸提液通过浓缩罐于80-100进行浓缩， 直至浓缩至合并浸提液总体积的1/15-1/10， 得到浓缩液， 然后将浓缩液进行喷雾干燥， 得 淫羊藿提取物， 备用； 说 明 书 1/6 页 3 CN 104208118 B 3 0015 B： 将试管中保存的乳酸菌菌种接种于MRS液体种子培养基中， 厌氧培养48小时， 得 乳酸菌液。

12、体种子， 然后将该乳酸菌液体种子按体积百分比0.5的接种量接于液体改良MRS 培养基中， 于30-32厌氧发酵60-72小时， 发酵结束后， 将发酵液于40-50浓缩至发酵液 原体积的1/10-1/6， 得到发酵浓缩液， 将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥， 得乳酸菌发酵制 剂， 备用； 0016 C： 将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂按比例混合均匀， 即得。 0017 所述的步骤A中粒度在10-20目的淫羊藿粉， 粒度分布为： 100通过10目筛， 98.1- 98.9不通过20目筛。 0018 所述的步骤B中乳酸菌菌种选自植物乳杆菌、 屎肠球菌、 嗜酸乳杆菌发酵中的一 种。。

13、 0019 所述的步骤B中MRS液体种子培养基的配方为： 蛋白胨10.0g/L、 牛肉膏10.0g/L、 酵 母膏5.0g/L、 柠檬酸氢二铵2.0g/L、 葡萄糖20.0g/L、 吐温801.0mL/L、 乙酸钠5.0g/L、 磷酸 二氢钾2.0g/L、 硫酸镁0.58g/L、 硫酸锰0.25g/L， 溶剂为蒸馏水， pH值6.26.6； 液体改良 MRS培养基的配方为： 蛋白胨12.0g/L、 牛肉膏5.0g/L、 酵母膏6.0g/L、 柠檬酸氢二铵2.0g/L、 葡萄糖20.0g/L、 吐温801.0mL/L、 乙酸钠5.0g/L、 磷酸二氢钾2.0g/L、 硫酸镁0.2g/L、 硫酸 。

14、锰0.05g/L， 溶剂为蒸馏水， pH值6.2。 0020 本发明的有益效果是： 淫羊藿提取物中含有多糖和蛋白质等营养成分， 这些多糖 及蛋白等成分可以作为乳酸菌的发酵基质， 促进乳酸菌的快速增殖， 乳酸菌增殖过程中产 生乳酸、 乳酸菌素及抗菌肽等活性杀菌物质， 以及多种维生素等营养成分， 经过肠道吸收 后， 迅速发挥作用。 而多糖类成分经过乳酸菌转化， 分子结构转变， 副作用降低， 功效增强。 蛋白成分经过乳酸菌分解酶的降解作用， 生成小分子肽或氨基酸， 从而增强免疫及营养功 能。 0021 淫羊藿提取物还富含淫羊藿苷、 黄酮等物质， 通过和乳酸菌发酵制剂协同， 可增加 组织中巨噬细胞的数。

15、量， 显著增强巨噬细胞的吞噬活力； 可增强T淋巴细胞的增殖与转化； 另外， 其对NK细胞、 嗜酸性粒细胞、 嗜中性粒细胞、 嗜碱性粒细胞等也有明显的增强作用。 各 种免疫细胞的增强， 可以更快更高效的吞噬和杀灭侵入乳腺和机体的病原菌， 从而快速降 低体细胞数， 提高奶牛的机体免疫能力、 抑制体细胞数。 0022 该组合物具有增强机体的免疫功能、 直接杀灭入侵的病原菌， 以及生成维生素、 氨 基酸等营养成分三方面的功效， 通过这三种功效， 可快速降低体细胞， 加快患病奶牛的机体 恢复。 0023 淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂隶属于中药和微生态制剂范畴， 是国家倡导的替 代抗生素等化学药产品的有利。

16、替代者， 具有安全高效、 无残留、 不违禁等优势。 该组合通过 间接增强免疫功能、 直接杀菌作用、 以及提供营养成分， 快速起到降低奶牛体细胞数的效 果， 连续使用7-10天， 效果非常明显。 相较于现有技术不仅效果明显而且迅速， 通过本发明 的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合， 大大降低了奶牛体细胞数。 0024 本发明的制备方法简单、 易操作， 最大程度的得到淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制 剂， 不破坏淫羊藿提取物和乳酸菌发酵制剂的有效成分， 其中的制备参数是通过长期的研 究和严格的的实验总结得出的， 对本产品组合物的有效成分和药效有着关键的作用， 是综 说 明 书 2/6 页 4 CN。

17、 104208118 B 4 合组合物的生物利用度、 毒副作用、 理化性质以及结合后药效的发挥、 药物浓度、 奶牛的适 用性和安全性等多方面的考虑， 而且本发明的各参数使得制得的降低奶牛体细胞数的中药 及微生态制剂组合应用到奶牛中体细胞数大大降低， 相较于现有的产品效果明显而且迅 速。 具体实施方式 0025 本发明为解决现有技术中根据体细胞数增加的表现， 奶牛乳房炎导致产奶量下 降、 奶业经济效益降低， 现有技术降低体细胞数的药物效果不明显， 设计一种安全、 效果明 显的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合及制备方法。 下面结合具体实施例对本发 明作进一步说明。 0026 实施例1.降低奶。

18、牛体细胞数的中药及微生态制剂组合， 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物60份， 乳酸菌发酵制剂40份。 0027 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法， 包括以下步骤： 0028 A： 将7kg淫羊藿药材粉碎， 得到粒度在10-20目的淫羊藿粉， 粒度分布为： 100通 过10目筛， 98.1不通过20目筛， 然后将淫羊藿粉置于8倍重量的70乙醇中， 回流提取两 次， 每次30-60分钟， 将两次回流提取的浸提液合并， 得到合并浸提液163L， 利用酒精回收塔 回收乙醇， 并将合并浸提液通过浓缩罐于80进行浓缩， 直至合并浸提液浓缩至16L， 得到 浓缩液， 然后将浓缩。

19、液进行喷雾干燥， 得淫羊藿提取物1.38kg， 备用。 0029 B： 将试管中保存的植物乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中， 厌氧培养48小 时， 得植物乳杆菌液体种子， 然后将植物乳杆菌液体种子180mL按体积百分比0.5的接种 量接于液体改良MRS培养基中， 于30厌氧发酵62小时， 发酵结束后， 得到发酵液34.6L， 将 发酵液于45浓缩至4.7L， 得到发酵浓缩液， 将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥， 得植物乳杆 菌发酵制剂0.73kg， 备用。 0030 C： 将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和植物乳杆菌发酵制剂按比例， 称取 淫羊藿提取物1.1kg， 植物乳杆菌发酵制剂0。

20、.73kg， 混合均匀， 分装即得。 0031 实施例2.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合， 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物65份， 乳酸菌发酵制剂35份。 0032 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法， 包括以下步骤： 0033 A： 将10kg淫羊藿药材粉碎， 得到粒度在10-20目的淫羊藿粉， 粒度分布为： 100通 过10目筛， 98.3不通过20目筛， 然后将淫羊藿粉置于8.5倍重量的70乙醇中， 回流提取 两次， 每次30-60分钟， 将两次回流提取的浸提液合并， 得到合并浸提液185L， 利用酒精回收 塔回收乙醇， 并将合并浸提液通过浓缩罐于8。

21、5进行浓缩， 直至合并浸提液浓缩至15.1L， 得到浓缩液， 然后将浓缩液进行喷雾干燥， 得淫羊藿提取物1.8kg， 备用。 0034 B： 将试管中保存的屎肠球菌菌种接种于MRS液体种子培养基中， 厌氧培养48小时， 得屎肠球菌液体种子， 然后将屎肠球菌液体种子200mL按体积百分比0.5的接种量接于液 体改良MRS培养基中， 于30厌氧发酵64小时， 发酵结束后， 得到发酵液39.4L， 将发酵液于 45浓缩至5.5L， 得到发酵浓缩液， 将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥， 得屎肠球菌发酵制剂 0.87kg， 备用。 0035 C： 将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和屎肠球菌发酵制剂按比。

22、例， 称取淫 说 明 书 3/6 页 5 CN 104208118 B 5 羊藿提取物1.58kg， 屎肠球菌发酵制剂0.85kg， 混合均匀， 分装即得。 0036 实施例3.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合， 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物70份， 乳酸菌发酵制剂30份。 0037 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法， 包括以下步骤： 0038 A： 将15kg淫羊藿药材粉碎， 得到粒度在10-20目的淫羊藿粉， 粒度分布为： 100通 过10目筛， 98.8不通过20目筛， 然后将淫羊藿粉置于10倍重量的70乙醇中， 回流提取两 次， 每次30-60分。

23、钟， 将两次回流提取的浸提液合并， 得到合并浸提液277.2L， 利用酒精回收 塔回收乙醇， 并将合并浸提液通过浓缩罐于90进行浓缩， 直至合并浸提液浓缩至20.7L， 得到浓缩液， 然后将浓缩液进行喷雾干燥， 得淫羊藿提取物2.7kg， 备用。 0039 B： 将试管中保存的嗜酸乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中， 厌氧培养48小 时， 得嗜酸乳杆菌液体种子， 然后将嗜酸乳杆菌液体种子250mL按体积百分比0.5的接种 量接于液体改良MRS培养基中， 于30厌氧发酵67小时， 发酵结束后， 得到发酵液49.3L， 将 发酵液于48浓缩至5L， 得到发酵浓缩液， 将所得发酵浓缩液进行喷雾干。

24、燥， 得嗜酸乳杆菌 发酵制剂1.2kg， 备用。 0040 C： 将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和嗜酸乳杆菌发酵制剂按比例， 称取 淫羊藿提取物2.67kg， 屎肠球菌发酵制剂1.16kg， 混合均匀， 分装即得。 0041 实施例4.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合， 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物75份， 乳酸菌发酵制剂25份。 0042 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法， 包括以下步骤： 0043 A： 将12kg淫羊藿药材粉碎， 得到粒度在10-20目的淫羊藿粉， 粒度分布为： 100通 过10目筛， 98.5不通过20目筛， 然后将淫羊藿。

25、粉置于9倍重量的70乙醇中， 回流提取两 次， 每次30-60分钟， 将两次回流提取的浸提液合并， 得到合并浸提液232.3L， 利用酒精回收 塔回收乙醇， 并将合并浸提液通过浓缩罐于95进行浓缩， 直至合并浸提液浓缩至18.3L， 得到浓缩液， 然后将浓缩液进行喷雾干燥， 得淫羊藿提取物2.3kg， 备用。 0044 B： 将试管中保存的嗜酸乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中， 厌氧培养48小 时， 得嗜酸乳杆菌液体种子， 然后将嗜酸乳杆菌液体种子200mL按体积百分比0.5的接种 量接于液体改良MRS培养基中， 于30厌氧发酵69小时， 发酵结束后， 得到发酵液42.7L， 将 发酵液。

26、于50浓缩至4.3L， 得到发酵浓缩液， 将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥， 得嗜酸乳杆 菌发酵制剂1.03kg， 备用。 0045 C： 将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和嗜酸乳杆菌发酵制剂按比例， 称取 淫羊藿提取物2.1kg， 嗜酸乳杆菌发酵制剂0.7kg， 混合均匀， 分装即得。 0046 实施例5.降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合， 其成分包括： 按重量比计， 淫羊藿提取物80份， 乳酸菌发酵制剂20份。 0047 制备上述的降低奶牛体细胞数的中药及微生态制剂组合的方法， 包括以下步骤： 0048 A： 将13kg淫羊藿药材粉碎， 得到粒度在10-20目的淫羊藿粉， 粒度分布。

27、为： 100通 过10目筛， 98.7不通过20目筛， 然后将淫羊藿粉置于9.5倍重量的70乙醇中， 回流提取 两次， 每次30-60分钟， 将两次回流提取的浸提液合并， 得到合并浸提液245.7L， 利用酒精回 收塔回收乙醇， 并将合并浸提液通过浓缩罐于100进行浓缩， 直至合并浸提液浓缩至 16.4L， 得到浓缩液， 然后将浓缩液进行喷雾干燥， 得淫羊藿提取物2.43kg， 备用。 说 明 书 4/6 页 6 CN 104208118 B 6 0049 B： 将试管中保存的植物乳杆菌菌种接种于MRS液体种子培养基中， 厌氧培养48小 时， 得植物乳杆菌液体种子， 然后将植物乳杆菌液体种子2。

28、20mL按体积百分比0.5的接种 量接于液体改良MRS培养基中， 于30厌氧发酵72小时， 发酵结束后， 得到发酵液44.3L， 将 发酵液于48浓缩至7.3L， 得到发酵浓缩液， 将所得发酵浓缩液进行喷雾干燥， 得植物乳杆 菌发酵制剂1.12kg， 备用。 0050 C： 将步骤A和步骤B分别制得的淫羊藿提取物和植物乳杆菌发酵制剂按比例， 称取 淫羊藿提取物2.4kg， 植物乳杆菌发酵制剂0.6kg， 混合均匀， 分装即得。 0051 选取600头体细胞数较高的奶牛样本， 奶牛平均初始体细胞数为158.2万/mL， 随机 分成6组， 分别为对照组和实施例组， 每组100头奶牛， 按每头奶牛每。

29、天投喂产品50g， 对照组 投喂市场上现有的产品， 实施例组分别投喂上述5组实施例产品， 连用10天。 每天采用CMT检 测法进行体细胞数测定， 结果如下： 0052 投喂市场上现有产品的对照组奶牛的体细胞数测定值， 见表1： 0053 表1： 0054 0055 投喂实施例1产品的奶牛的体细胞数测定值， 见表2： 0056 表2： 0057 0058 投喂实施例2产品的奶牛的体细胞数测定值， 见表3： 0059 表3： 0060 0061 投喂实施例3产品的奶牛的体细胞数测定值， 见表4： 0062 表4： 说 明 书 5/6 页 7 CN 104208118 B 7 0063 0064 投。

30、喂实施例4产品的奶牛的体细胞数测定值， 见表5： 0065 表5： 0066 0067 投喂实施例5产品的奶牛的体细胞数测定值， 见表6： 0068 表6： 0069 0070 通过上述数据分析， 可以看出该发明产品在降低奶牛体细胞数上具有优良的效 果， 连续使用10天， 可将体细胞数降至原来的一半左右， 相较于市场上现有的降低奶牛体细 胞的产品， 水平明显提升， 根据奶牛体细胞数的下降， 表明隐性乳房炎减轻， 其转化成临床 型乳房炎的几率大大减小， 奶牛的体质更加健康， 产奶量也增加， 对奶业行业有着杰出的影 响。 0071 而且， 通过对比上述表1-6， 我们可以看到， 使用到8天时， 体细胞数的下降幅度趋 于稳定。 说明该组合用于降低奶牛体细胞的最佳使用时间为7-10天。 说 明 书 6/6 页 8 CN 104208118 B 8 。