微针涂敷用组合物及微针装置.pdf

摘要
申请专利号：	CN201480008603.4	申请日：	20140212
公开号：	CN104994880B	公开日：	20180403
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	A61K47/18,A61K9/70,A61K39/12,A61K47/12,A61P31/14	主分类号：	A61K47/18,A61K9/70,A61K39/12,A61K47/12,A61P31/14
申请人：	久光制药株式会社
发明人：	町田一哉,德本诚治,上仲一义,石川优二
地址：	日本佐贺县
优先权：	2013-025955
专利代理机构：	中国国际贸易促进委员会专利商标事务所	代理人：	吴宗颐
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内容摘要

本发明公开了一种微针涂敷用组合物，其含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，并且在将酸的价数设为N时，相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数大于1/(N+1)且小于2。

权利要求书

1.微针涂敷用组合物，其含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，上述酸为选自磷酸、乳酸、苯甲酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸和天冬氨酸中的至少1种酸，在将上述酸的价数设为N时，相对于上述碱性氨基酸1摩尔，上述酸的摩尔数大于1/(N+1)且小于2，上述碱性氨基酸的浓度以微针涂敷用组合物的总质量为基准，为20％w/w以上，上述酸的浓度以微针涂敷用组合物的总质量为基准，为5～50％w/w。 2.权利要求1所述的微针涂敷用组合物，其中，上述酸为熔点在40℃以上的酸。 3.权利要求1或2所述的微针涂敷用组合物，其中，上述碱性氨基酸为精氨酸。 4.权利要求1或2所述的微针涂敷用组合物，其含有赖氨酸或赖氨酸盐酸盐。 5.微针装置，其在微针上具备由权利要求1～4任一项所述的微针涂敷用组合物形成的涂层。 6.权利要求5所述的微针装置，其中，在上述微针的尖端部分形成上述涂层。

说明书

技术领域

本发明涉及一种微针涂敷用组合物及微针装置。

现有技术

作为经皮给药药物的手段之一，已知有微针装置。作为这样的装置，已知有形成了含有药物和增粘剂的涂层的装置(例如，专利文献1)。

另外，还已知有：含有生物学活性物质和用以提高粘度的抗衡离子的调制物的组合物(专利文献2)；以及，其中涂层配方物的pH约小于6并且含有至少1种低挥发性抗衡离子的组合物(专利文献3)。此外，还已知含有治疗有效量的肽药剂和至少一个抗衡离子的制剂的组合物(专利文献4)；一种组合物，其含有具有干燥后会增加的pH稳定性和溶解性的生物学有效成分和非挥发性的抗衡离子的制剂(专利文献5)。除了这些以外，还已知有一种物品，其是含有生物活性物质和添加剂的涂层，作为添加材料的一个例子，采用低含量的氨基酸(专利文献6)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利申请公开第2008/0213461号说明书

专利文献2：日本特表2007-511508号公报

专利文献3：日本特表2007-536988号公报

专利文献4：日本特表2008-528509号公报

专利文献5：日本特表2007-527392号公报

专利文献6：国际公开第2011/150144号

发明内容

发明要解决的课题

然而发现，即使含有在专利文献1和2中作为增粘剂例示的材料，则药剂中含有的蛋白质等生理活性物质的稳定性不充分。

因此，本发明的目的在于，提供一种可使含有的日本脑炎疫苗抗原稳定化的微针涂敷用组合物；以及一种具备由该组合物形成的涂层的微针装置。

解决课题的手段

本发明的微针涂敷用组合物含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，在将酸的价数设为N时，相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数大于1/(N+1)且小于2。

若相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数在1/(N+1)以下，则涂敷用组合物中的酸含量低，无法使碱性氨基酸溶解。另一方面，若相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数在2以上，则涂敷用组合物中的碱性氨基酸含量低，因此，日本脑炎疫苗抗原的稳定性降低。所以，通过将相对于碱性氨基酸1摩尔的酸的摩尔数设定在上述范围，可使所含的日本脑炎疫苗抗原稳定地存在。

在微针涂敷用组合物中，酸以熔点在40℃以上的酸为优选，以选自磷酸、乳酸、苯甲酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸和天冬氨酸中的至少1种酸为更优选，以选自磷酸、柠檬酸和酒石酸中的至少1种酸为进一步优选。通过使用这样的酸，可提高涂敷用组合物中的碱性氨基酸的浓度，可进一步提高所含的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。

在微针涂敷用组合物中，碱性氨基酸以精氨酸为优选。通过使用精氨酸作为碱性氨基酸，可显著提高涂敷用组合物中的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。

在微针涂敷用组合物中，优选含有赖氨酸或赖氨酸盐酸盐。通过含有赖氨酸或赖氨酸盐酸盐，可进一步提高日本脑炎疫苗抗原的稳定性。

另外，本发明还提供一种微针装置，其在微针上具备由上述微针涂敷用组合物形成的涂层。其中，涂层优选形成在微针的尖端部分，更优选仅形成在微针的尖端部分。

发明效果

根据本发明，可提供一种能够使所含的日本脑炎疫苗抗原稳定化的微针涂敷用组合物以及微针装置。

附图说明

图1是显示微针装置的一实施方式的立体图。

图2是图1的沿II-II线的剖面图。

图3的(a)、(b)和(c)是显示微针装置的制造方法的实施方式的图。

图4是表示赖氨酸盐酸盐对比活性的影响度的图。

实施方式

以下，参照附图说明优选的实施方式。予以说明，在附图的说明中，相同要素采用相同符号，省略重复说明。另外。为了使附图容易理解，将局部放大描绘，其尺寸比率未必与说明的一致。

图1是显示微针装置的一实施方式的立体图。图1所示的微针装置1具备：基板2、在基板2上呈二维配置的多个微针3、和形成在微针3上的涂层5。涂层5是由本发明的微针涂敷用组合物形成的，优选除去其挥发成分的至少一部分。

基板2是用来支持微针3的基座。基板2的面积优选为0.5～10cm2，更优选为1～5cm2，进一步优选为1～3cm2。也可通过连接多个该基板2来构成所希望大小的基板。

微针3为微小结构，其高度(长度)优选为50～600μm。在此，通过将微针3的长度设定在50μm以上，可以确实地给予微针涂敷用组合物中含有的日本脑炎疫苗抗原。另外，通过将微针3的长度设定在600μm以下，可避免微针接触到神经，能够确实地减少疼痛的可能性，同时确实地避免出血的可能性。另外，若微针3的长度在500μm以下，则能够有效地给予应注入皮内的量的日本脑炎疫苗抗原，也可以在不使基底膜穿孔的情况下给药。微针3的长度特别优选为300～500μm。

在此，微针3意指凸状结构物，且为广义的针状或包含针状的结构物。微针并不特别受限于具有尖锐前端的针状，也可以为前端不尖的形状。在微针3为圆锥状结构的情况，其基底的直径以50～200μm左右为优选。在本实施方式中的微针3为圆锥形，但也可以是四角锥等多角锥形、或其他形状的微针。

微针3典型地说为隔着间隔设置成在横列上的针的密度为每毫米(mm)约1～10根。一般地，相邻的横列仅以与横列内的针的间距基本上相等的距离互相分离，并且针密度为每1cm2具有100～10000根。若针密度为100根以上，则能够有效地穿孔皮肤。另一方面，在针密度大于10000根的情况，则难以保持微针3的强度。微针3的密度优选为200～5000根，更优选为300～2000根，进一步优选为400～850根。

基板2或微针3的材质可举出硅、二氧化硅、陶瓷、金属(不锈钢、钛、镍、钼、铬、钴等)以及合成或天然的树脂材料等，但若考虑微针的抗原性和材质的单价，则以聚乳酸、聚乙醇酸、聚丙交酯-乙交酯、茁霉多糖、己内酯、聚氨酯、聚酸酐等生物分解性聚合物、或作为非分解性聚合物的聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸、乙烯-乙酸乙烯酯、聚四氟乙烯、聚甲醛等合成或天然的树脂材料为特别优选。此外，还优选作为多糖类的透明质酸、透明质酸钠、茁霉多糖、葡聚糖、糊精或硫酸软骨素等。

基板2或微针3的制法可举出使用硅基板的湿式蚀刻加工或干式蚀刻加工、使用金属或树脂的精密机械加工(放电加工、激光加工、切割加工、热压加工、射出成型加工等)、机械切削加工等。通过这些加工方法，可使基板2与微针3一体化成型。使微针3中空的方法可举出在制作微针3后以激光等进行二次加工的方法。

微针装置1的微针3上具备涂层5，涂层5优选通过涂敷微针涂敷用组合物来形成。涂敷方法可举出喷涂和浸涂等，以浸涂为优选。予以说明，在图1中，在全部的微针3上均形成了涂层5，然而涂层5也可仅形成在多个存在的微针3的一部分上。另外，在图1中，涂层5仅形成在微针3的尖端部分，但也可以以覆盖整个微针3的方式形成。进而，涂层5也可以形成在基板2上。

图3的(a)、(b)和(c)是显示微针装置1的制造方法的一实施方式的图。在该方法中，首先如图3(a)所示，通过刮刀12将微针涂敷用组合物10在遮板11上沿箭头A的方向扫进。由此，在开口部13填充微针涂敷用组合物10。接着如图3(b)所示，将微针3插入遮板11的开口部13。然后如图3(c)所示，将微针3从遮板11的开口部13拉出。由此使微针涂敷用组合物10附着在微针3上。予以说明，微针涂敷用组合物10还可附着于基板2上。然后，通过风干、真空干燥或其组合等的方法，除去微针3上的微针涂敷用组合物10的挥发成分。由此，使涂层5坚固地附着于微针3上，典型地成为玻璃质或固体，制造出微针装置。涂层5的水分含量以涂层5的总量为基准，通常在55质量％以下，优选为30质量％以下，更优选为10质量％以下。通过上述方法，可防止附着的微针涂敷用组合物10发生液体滴垂，液体滴垂是指涂敷组合物从针尖垂落，意味着在图3(c)中H部分变长。

附着在微针3上的涂层5的高度H可通过图3(b)所示的净空区(间隙)C来调整。该净空区C定义为从微针3的基底至遮板11的表面的距离(与基板2的厚度无关)，可根据遮板11的张力和微针3的长度来设定。净空区C的距离范围优选为0～500μm。在净空区C的距离为0的情况，意指微针涂敷用组合物10涂敷在整个微针3上。附着于微针3上的微针涂敷用组合物10的高度H根据微针3的高度的不同而变动，可设定为0～500μm，通常为10～500μm，优选为30～300μm左右，特别优选为40～250μm左右。为了有效使用微针涂敷用组合物10中的日本脑炎疫苗抗原，优选集中存在于微针的一部分，即针的尖端部分，另外，从对皮肤刺激和药物转移至皮肤的转移率的观点考虑，优选存在于从尖端至200μm的部分。进一步从日本脑炎抗原疫苗的稳定性的观点考虑，在将日本脑炎疫苗抗原的浓度以涂层5的总质量为基准设为0.1～10％w/w的情况，以存在于从尖端至50～150μm为更优选。微针涂敷用组合物10可使碱性氨基酸以高浓度(例如20％w/w以上)溶解于水系溶液中而具有高粘度，因此，可在微针的一部分形成涂层5。以这种形式保持在微针3上的微针涂敷用组合物10，在将微针3穿刺皮肤时可同时插入皮内。

附着于微针3上的涂层5的干燥后的厚度优选小于50μm，更优选小于40μm，进一步优选为1～30μm。一般而言，附着在微针上的涂层5的厚度是指干燥后在整个微针3的表面测定的平均厚度。附着于微针3上的涂层5的厚度可通过采用多个微针涂敷用组合物10的膜来增大，即，可通过在附着微针涂敷用组合物10后反复进行附着工序来增大。

在使微针涂敷用组合物10附着于微针3时，优选将装置的设置环境的温湿度控制为一定。另外，在微针涂敷用组合物10含水的情况，也可根据需要充满水。由此，可极力防止微针涂敷用组合物10中的水分蒸发掉。

图2为沿图1的II-II线的剖面图。如图2所示，微针装置1具备：基板2、设置于基板2上的微针3、和设置于该微针3上的涂层5。附着于微针上的涂层5含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，可经由例如上述的工序来制造。

微针涂敷用组合物10含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，在将酸的价数设为N时，相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数大于1/(N+1)且小于2。相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数优选为1/N以上且1以下。

微针涂敷用组合物10中的日本脑炎疫苗抗原的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以0.01～30％w/w为优选，以0.02～20％w/w为更优选，以0.05～10％w/w为进一步优选。若日本脑炎疫苗抗原的浓度在0.01％w/w以上，则在给药至皮肤时可使有效量的日本脑炎疫苗抗原释放至皮内，而发挥出充分的药效。另外，将微针涂敷用组合物10涂敷至微针3，除去挥发成分后得到的涂层5的日本脑炎疫苗抗原的浓度，以涂层5的总质量为基准，以0.01～30％w/w为优选，以0.03～15％w/w为更优选，以0.1～10％w/w为进一步优选。

碱性氨基酸没有特别限定，可举出赖氨酸、组氨酸、精氨酸、鸟氨酸、肉碱等中的1种或2种以上，以其游离形式为优选。从上述酸的选择性更广泛的观点考虑，以精氨酸为优选。

从粘度和日本脑炎疫苗抗原的稳定性的观点考虑，微针涂敷用组合物10中的碱性氨基酸的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以20％w/w以上为优选，以30％w/w以上为更优选。通过将碱性氨基酸的浓度设定在20％w/w以上，可提高微针涂敷用组合物10中的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。另外，通过将碱性氨基酸的浓度设定在70％w/w以下，涂敷在微针3时的操作变得容易。另外，将微针涂敷用组合物10涂敷在微针3，除去挥发成分后得到的涂层5的碱性氨基酸的浓度，以涂层5的总质量为基准，以50～90％w/w为优选，以60～80％w/w为更优选。

微针涂敷用组合物10中，碱性氨基酸的配合量(质量)与日本脑炎疫苗抗原的配合量(质量)的比以1.8～2400为优选，以3.5～700为更优选，以5～500为进一步优选。通过将碱性氨基酸浓度与日本脑炎疫苗抗原浓度的比设定在上述范围，可提高日本脑炎疫苗抗原的稳定性。

微针涂敷用组合物10中的酸，优选为熔点在40℃以上的酸。通过使用这种酸，可使碱性氨基酸以高浓度(例如20％w/w以上)存在于微针涂敷用组合物10中，而能够提高微针涂敷用组合物10中的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。其中，优选选自磷酸、乳酸、苯甲酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸和天冬氨酸中的至少1种酸，更优选选自磷酸、柠檬酸和酒石酸中的至少1种酸。微针涂敷用组合物10中的酸的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以5～50％w/w为优选，以10～30％w/w为更优选。另外，将微针涂敷用组合物10涂敷在微针3并除去挥发成分后得到的涂层5中的酸浓度，以涂层5的总质量为基准，以5～50％w/w为优选，以10～30％w/w为更优选。

微针涂敷用组合物10除了含有上述日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸、酸以外，还可含有纯化水、生理盐水、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、柠檬酸-磷酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液等缓冲液等水系溶液。这些水系溶液的含量，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以5～75质量％为优选。若大于75质量％，则存在涂敷时得不到充分粘度的倾向，若小于5质量％，则存在难以使组合物溶解的倾向。

微针涂敷用组合物10还可以含有上述碱性氨基酸以及赖氨酸或赖氨酸的药学上可接受的盐。通过含有赖氨酸或赖氨酸的药学上可接受的盐，可进一步提高日本脑炎疫苗抗原的稳定性。

赖氨酸的药学上可接受的盐以盐酸盐为优选。赖氨酸盐酸盐的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，为0.1～20％w/w即可。若大于20％w/w，则存在赖氨酸盐酸盐无法溶解的情况，若小于0.1％w/w，则存在日本脑炎疫苗抗原的稳定性变得不充分的情况。另外，将微针涂敷用组合物10涂敷在微针3并除去挥发成分后得到的涂层5中的赖氨酸盐酸盐的浓度，以涂层5的总质量为基准，为0.1～20％w/w即可。

另外，还可进一步含有高分子载体(增粘剂)作为微针涂敷用组合物10的任意成分。高分子载体可举出聚环氧乙烷、聚羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚羟丙甲基纤维素、聚甲基纤维素、葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、茁霉多糖、羧甲基纤维素钠、硫酸软骨素、透明质酸、葡聚糖、阿拉伯胶等。予以说明，作为高分子载体所使用的聚乙二醇的重平均分子量优选为大于600且在500000以下。

高分子载体以与日本脑炎疫苗抗原的相容性(均匀相容的性质)高的载体为优选，以羟丙基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、茁霉多糖等为特别优选。

微针涂敷用组合物10中的高分子载体的含量，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，为0.005～30质量％，优选为0.01～20质量％，更优选为0.05～10质量％。另外，该高分子载体有时必须具有不使液体滴垂程度的粘性的情况，粘度在室温(25℃)下优选为100～100000mPa·s。更优选的粘度为500～60000mPa·s。

除了上述以外，微针涂敷用组合物10中还可根据需要添加：作为助溶剂或吸收促进剂的碳酸丙烯酯、克罗米通、L-薄荷脑、薄荷油、柠檬烯、己二酸二异丙酯等、或作为药效补充剂的水杨酸甲酯、水杨酸乙二醇酯、L-薄荷脑、百里酚、薄荷油、壬酸香草酰胺、辣椒提取物等。

进而，还可根据需要添加稳定剂、抗氧化剂、乳化剂、表面活性剂、盐类等化合物。表面活性剂可以是非离子型表面活性剂、离子表面活性剂(阳离子、阴离子、两性)的任一者，然而从安全性的方面考虑，希望为通常用于药物基剂的非离子型表面活性剂。这样的化合物可举出例如蔗糖脂肪酸酯等糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油。

其他已知的制剂补充物质，只要不对微针涂敷用组合物10的溶解性和粘度提高效果及附着在干燥后的微针3上的微针涂敷用组合物10的性状和物性带来不良影响，就可以将它们添加到微针涂敷用组合物10中。

微针涂敷用组合物10必须具有某程度的粘性，以使涂敷后的微针3上不发生液体滴垂。粘度为100～45000mPa·s左右，通过将微针涂敷用组合物10的粘度设设定在该范围，无需依赖微针的材质，即可一次性附着期望量的微针涂敷用组合物10。

微针涂敷用组合物10在25℃时的粘度为45000mPa·s以下的情况，带来剪切应力的上升，对物质间剥离的抵抗性增大。因此，在以浸渍法涂敷药液的情况，用于抵抗微针解离的个体的性质(凝集性)增强，而可在微针上保持更多的涂敷组合物。另一方面，若大于45000mPa·s，则附着在微针上的涂敷组合物中的日本脑炎疫苗抗原的含量降低，从经济性方面考虑不优选。在涂敷组合物的粘度为100mPa·s以上的情况，凝集性强，因此可在微针上保持更多的涂敷组合物。从这样的特征考虑，微针涂敷用组合物10在25℃时的粘度以100～45000mPa·s为优选，以300～35000mPa·s为更优选，以500～30000mPa·s为进一步优选，以600～15000mPa·s为特别优选。

实施例

以下示出本发明的实施例更具体地说明本发明，但本发明并不受这些实施例限定，在不脱离本发明技术思想的范围内可作各种变更。

＜精氨酸和酸的混合物对水的溶解性＞

将精氨酸与表1～3所示的酸(N价)以精氨酸：酸＝N：1的比率混合，并添加纯化水，调制成20％w/w的精氨酸-酸的稀释液，然后通过冷冻干燥使水分蒸发，制作冻干固体。以精氨酸和酸的混合物(Arg+酸)：水＝7：3的比率向该冻干固体中添加纯化水，制成精氨酸和酸的混合物(Arg+酸)的高浓度溶液。表中的“溶解性”表示其结果，将完全溶解而能够调制出高浓度溶液的情况评价为“○”，将部分溶解的情况评价为“△”。

[表1]

无机酸盐酸(1价) 硫酸(2价) 甲磺酸(1价) 磷酸(3价) 熔点(℃) -27.3 10 20 42.4 溶解性 △ △ △ ○

[表2]

[表3]

＜不同配比的精氨酸和酸的混合物对水的溶解性和粘度特性＞

将精氨酸和酸以表4、5所示的摩尔比混合，并添加纯化水，调制成20％w/w的精氨酸-酸的稀释液，然后通过冷冻干燥使水分蒸发，制作冻干固体。以精氨酸和酸的混合物(Arg+酸)：水＝7：3的比率向该冻干固体中添加纯化水，制成精氨酸和酸的混合物(Arg+酸)的高浓度溶液。表中的“溶解性”表示其结果，将完全溶解而能够调制出高浓度溶液的情况评价为“○”、将部分溶解的情况评价为“△”，将几乎不溶解的情况评价为“×”。另外，表中的“粘度”是使用微量样品粘度计(VROC，RheoSense公司制)测得的值，单位为“mPa·s”。

另外，将上述精氨酸和酸的混合物(Arg+酸、精氨酸：磷酸＝2：1、精氨酸：柠檬酸＝3：1、精氨酸：酒石酸＝2：1)的高浓度溶液涂敷在微针(高度约500μm，密度640根/cm2，四角锥形)上，使用显微镜(VH-8000，KEYENCE公司制)观察微针的针尖。由观察的结果确认，涂层形成在微针的尖端部分，判明精氨酸和酸的混合物适于涂敷针尖。

[表4]

Arg:磷酸(3价) 溶解性粘度 Arg:柠檬酸(3价) 溶解性粘度 1：1 ○ - 1：1 ○ - 2：1 ○ 1134 2：1 ○ - 3：1 ○ - 3：1 ○ 1331 4：1 △ - 4：1 △ -

[表5]

Arg:酒石酸(2价) 溶解性粘度 Arg:乳酸(1价) 溶解性粘度 1：1 ○ - 1：1 ○ - 2：1 ○ 792 2：1 △ - 3：1 △ - 3：1 × - 4：1 × - 4：1 × -

＜日本脑炎疫苗抗原的稳定性评价＞

将配合有精氨酸和酸的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针上，评价稳定性。

使用日本脑炎疫苗抗原的PBS(磷酸缓冲生理盐水)溶液作为原药。通过将该原药超滤浓缩，在浓缩液中添加精氨酸和酸的混合物的冻干固体(Arg+酸)、赖氨酸盐酸盐(Lys·HCl)并混合，或在浓缩时混合精氨酸、酸、赖氨酸盐酸盐来调制，冷冻干燥后使其再溶解，制成日本脑炎疫苗抗原涂敷液。予以说明，各成分的配比(单位：质量％)和Arg+酸的摩尔比如表6所示。

将得到的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针(高度约500μm，密度640根/cm2，四角锥形)上，干燥，得到配方物A～F。表6中，各成分的括号内的数值表示干燥后的配比(单位：质量％)。将配方物A～F与PharmaKeep(三菱气体化学株式会社，商品名)一起封入Moist Catch(共同印刷株式会社，商品名)内，在40℃下保存1个月。

稳定性的评价通过如下方法进行：通过微针在提取液(0.01质量％的吐温80/1质量％的海藻糖/PBS)中提取日本脑炎疫苗抗原，然后进行E抗原含量测定(ELISA法)和蛋白质定量(Lowry法)，将每单位蛋白质含量中的E抗原含量作为“比活性”，比较初始值与在40℃下1个月后的值。

[表6]

在配方物A～F中，在40℃下保存1个月的检体的比活性显示出与初始检体大致相同的值，未观察到活性降低。

＜赖氨酸盐酸盐的配合效果＞

将各成分的配比(单位：质量％)及精氨酸与酸的摩尔比如表7所示的配合有70质量％的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针上，使用L9正交表评价赖氨酸盐酸盐的配合效果。予以说明，在表7中，各成分的括号内的数值表示除去挥发成分后的配比(单位：质量％)。

以日本脑炎疫苗抗原的PBS溶液为原药，将其超滤浓缩，向其中添加规定量的添加剂并混合，以此作为微针的涂敷液。在相对湿度80～85％的环境下将其涂敷在聚乳酸制微针(高度约500μm，密度640根/cm2，四角锥形)的针尖。干燥后，与PharmaKeep(三菱气体化学株式会社，商品名)一起封入Moist Catch(共同印刷株式会社，商品名)内，评价各温度条件下的稳定性。通过微针在提取液(0.01％的吐温80/1％的海藻糖/PBS)中提取日本脑炎疫苗抗原，然后进行E抗原含量测定(ELISA法)和蛋白质定量(Lowry法)，评价每单位蛋白质含量中的E抗原含量作为“比活性”。关于在50℃下保存2周的检体的比活性值，通过最小二乘法分析赖氨酸盐酸盐的配合对比活性的影响度。图4表示赖氨酸盐酸盐对比活性的影响度的图。在配合赖氨酸盐酸盐2.5或5.0％的情况，在50℃下保存2周的检体对比活性的影响度高，因此确认，赖氨酸盐酸盐具有提高稳定性的效果。

[表7]

＜制剂用量不同的日本脑炎疫苗抗原的稳定性的评价＞

将配合有精氨酸和酸的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针上，评价4μg制剂和0.2μg制剂这两种用量的制剂的稳定性。这两种用量的制剂的制作是通过调整日本脑炎疫苗抗原涂敷液的抗原浓度和涂敷高度来进行的。

使用日本脑炎疫苗抗原的PBS(磷酸缓冲生理盐水)溶液作为原药。将该原药超滤浓缩，浓缩时混合精氨酸、磷酸和赖氨酸盐酸盐来进行制备，在冷冻干燥后，使其再溶解，由此制成日本脑炎疫苗抗原涂敷液。予以说明，各成分的配比(单位：质量％)和Arg+酸的摩尔比如表8所示。

将得到的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针(高度约500μm，密度640根/cm2，四角锥形)，得到涂敷高度125μm、假定含量4μg的配方物P，涂敷高度70μm、假定含量0.2μg的配方物Q，涂敷高度120μm、假定含量8μg的配方物R，涂敷高度60μm、假定含量2μg的配方物S，涂敷高度60μm、假定含量1μg的配方物T和涂敷高度60μm、假定含量0.032μg的配方物U。表8的各成分中，括号内的数值表示干燥后的配比(单位：质量％)。将配方物P～U与PharmaKeep(三菱气体化学株式会社，商品名)一起封入Moist Catch(共同印刷株式会社，商品名)内，在表9所示的各温度条件下，将配方物P～T保存3个月，配方物U保存4个月。

稳定性的评价通过如下方法进行：通过微针在提取液(0.01质量％的吐温80/1质量％的海藻糖/PBS)中提取日本脑炎疫苗抗原，然后进行E抗原含量测定(ELISA法)和蛋白质定量(Lowry法)，将每单位蛋白质含量中的E抗原含量作为“比活性”。予以说明，低用量的配方物Q、U的比活性，是代替由Lowry法测定蛋白质含量的方法，通过由氨基酸含量的测定值和配方物中的配比来计算而求得的。氨基酸含量是通过OPA(邻苯二甲醛)法测定的。

[表8]

[表9]

在配方物P～T中，在10、25、40、50℃的各温度下保存3个月的检体与初始检体相比，未观察到蛋白质含量和E抗原含量的下降。在配方物U中，在10、25、40、50℃的各温度下保存4个月的检体与初始检体相比，也未观察到蛋白质含量和E抗原含量的下降。另外，比活性也显示出大致相同的值，未观察到活性下降。

符号说明

1：微针装置

2：基板

3：微针

5：涂层

10：微针涂敷用组合物

11：遮板

12：刮刀

13：开口部

资源描述

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201480008603.4 (22)申请日 2014.02.12 (65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 104994880 A (43)申请公布日 2015.10.21 (30)优先权数据 2013-025955 2013.02.13 JP (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2015.08.13 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/JP2014/053198 2014.02.12 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2014/126105 JA 2014.。

2、08.21 (73)专利权人久光制药株式会社地址日本佐贺县 (72)发明人町田一哉德本诚治上仲一义石川优二 (74)专利代理机构中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 代理人吴宗颐 (51)Int.Cl. A61K 47/18(2006.01) A61K 9/70(2006.01) A61K 39/12(2006.01) A61K 47/12(2006.01) A61P 31/14(2006.01) (56)对比文件 US 2005/0106209 A1,2005.05.19, WO 2011/150144 A2,2011.12.01, 审查员康鹏程 (54)发。

3、明名称微针涂敷用组合物及微针装置 (57)摘要本发明公开了一种微针涂敷用组合物，其含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，并且在将酸的价数设为N时，相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数大于1/(N+1)且小于2。权利要求书1页说明书11页附图3页 CN 104994880 B 2018.04.03 CN 104994880 B 1.微针涂敷用组合物，其含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，上述酸为选自磷酸、乳酸、苯甲酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸和天冬氨酸中的至少1种酸，在将上述酸的价数设为N时，相对于上述碱性氨基酸1摩尔，上述酸的。

4、摩尔数大于1/(N+ 1)且小于2，上述碱性氨基酸的浓度以微针涂敷用组合物的总质量为基准，为20w/w以上，上述酸的浓度以微针涂敷用组合物的总质量为基准，为550w/w。 2.权利要求1所述的微针涂敷用组合物，其中，上述酸为熔点在40以上的酸。 3.权利要求1或2所述的微针涂敷用组合物，其中，上述碱性氨基酸为精氨酸。 4.权利要求1或2所述的微针涂敷用组合物，其含有赖氨酸或赖氨酸盐酸盐。 5.微针装置，其在微针上具备由权利要求14任一项所述的微针涂敷用组合物形成的涂层。 6.权利要求5所述的微针装置，其中，在上述微针的尖端部分形成上述涂层。权利要求书 1/1。

5、页 2 CN 104994880 B 2 微针涂敷用组合物及微针装置技术领域 0001 本发明涉及一种微针涂敷用组合物及微针装置。现有技术 0002 作为经皮给药药物的手段之一，已知有微针装置。作为这样的装置，已知有形成了含有药物和增粘剂的涂层的装置(例如，专利文献1)。 0003 另外，还已知有：含有生物学活性物质和用以提高粘度的抗衡离子的调制物的组合物(专利文献2)；以及，其中涂层配方物的pH约小于6并且含有至少1种低挥发性抗衡离子的组合物(专利文献3)。此外，还已知含有治疗有效量的肽药剂和至少一个抗衡离子的制剂的组合物(专利文献4)；一种组合物，其含。

6、有具有干燥后会增加的pH稳定性和溶解性的生物学有效成分和非挥发性的抗衡离子的制剂(专利文献5)。除了这些以外，还已知有一种物品，其是含有生物活性物质和添加剂的涂层，作为添加材料的一个例子，采用低含量的氨基酸(专利文献6)。 0004 现有技术文献 0005 专利文献 0006 专利文献1：美国专利申请公开第2008/0213461号说明书 0007 专利文献2：日本特表2007-511508号公报 0008 专利文献3：日本特表2007-536988号公报 0009 专利文献4：日本特表2008-528509号公报 0010 专利文献5：日本特表2007-527392。

7、号公报 0011 专利文献6：国际公开第2011/150144号发明内容 0012 发明要解决的课题 0013 然而发现，即使含有在专利文献1和2中作为增粘剂例示的材料，则药剂中含有的蛋白质等生理活性物质的稳定性不充分。 0014 因此，本发明的目的在于，提供一种可使含有的日本脑炎疫苗抗原稳定化的微针涂敷用组合物；以及一种具备由该组合物形成的涂层的微针装置。 0015 解决课题的手段 0016 本发明的微针涂敷用组合物含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，在将酸的价数设为N时，相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数大于1/(N+1)且小于2。 0017 若相对于碱性氨基。

8、酸1摩尔，酸的摩尔数在1/(N+1)以下，则涂敷用组合物中的酸含量低，无法使碱性氨基酸溶解。另一方面，若相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数在2以上，则涂敷用组合物中的碱性氨基酸含量低，因此，日本脑炎疫苗抗原的稳定性降低。所以，通过将相对于碱性氨基酸1摩尔的酸的摩尔数设定在上述范围，可使所含的日本脑炎疫苗抗原稳定地存在。说明书 1/11 页 3 CN 104994880 B 3 0018 在微针涂敷用组合物中，酸以熔点在40以上的酸为优选，以选自磷酸、乳酸、苯甲酸、马来酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸和天冬氨酸中的至少1种酸为更优选，。

9、以选自磷酸、柠檬酸和酒石酸中的至少1种酸为进一步优选。通过使用这样的酸，可提高涂敷用组合物中的碱性氨基酸的浓度，可进一步提高所含的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。 0019 在微针涂敷用组合物中，碱性氨基酸以精氨酸为优选。通过使用精氨酸作为碱性氨基酸，可显著提高涂敷用组合物中的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。 0020 在微针涂敷用组合物中，优选含有赖氨酸或赖氨酸盐酸盐。通过含有赖氨酸或赖氨酸盐酸盐，可进一步提高日本脑炎疫苗抗原的稳定性。 0021 另外，本发明还提供一种微针装置，其在微针上具备由上述微针涂敷用组合物形成的涂层。其中，涂层优选形成在微针的尖端部分，更。

10、优选仅形成在微针的尖端部分。 0022 发明效果 0023 根据本发明，可提供一种能够使所含的日本脑炎疫苗抗原稳定化的微针涂敷用组合物以及微针装置。附图说明 0024 图1是显示微针装置的一实施方式的立体图。 0025 图2是图1的沿II-II线的剖面图。 0026 图3的(a)、 (b)和(c)是显示微针装置的制造方法的实施方式的图。 0027 图4是表示赖氨酸盐酸盐对比活性的影响度的图。 0028 实施方式 0029 以下，参照附图说明优选的实施方式。予以说明，在附图的说明中，相同要素采用相同符号，省略重复说明。另外。为了使附图容易理解，将局部放大描绘，其尺寸比率。

11、未必与说明的一致。 0030 图1是显示微针装置的一实施方式的立体图。图1所示的微针装置1具备：基板2、在基板2上呈二维配置的多个微针3、和形成在微针3上的涂层5。涂层5是由本发明的微针涂敷用组合物形成的，优选除去其挥发成分的至少一部分。 0031 基板2是用来支持微针3的基座。基板2的面积优选为0.510cm2，更优选为1 5cm2，进一步优选为13cm2。也可通过连接多个该基板2来构成所希望大小的基板。 0032 微针3为微小结构，其高度(长度)优选为50600 m。在此，通过将微针3的长度设定在50 m以上，可以确实地给予微针涂敷用组合物中含有的日本脑。

12、炎疫苗抗原。另外，通过将微针3的长度设定在600 m以下，可避免微针接触到神经，能够确实地减少疼痛的可能性，同时确实地避免出血的可能性。另外，若微针3的长度在500 m以下，则能够有效地给予应注入皮内的量的日本脑炎疫苗抗原，也可以在不使基底膜穿孔的情况下给药。微针3的长度特别优选为300500 m。 0033 在此，微针3意指凸状结构物，且为广义的针状或包含针状的结构物。微针并不特别受限于具有尖锐前端的针状，也可以为前端不尖的形状。在微针3为圆锥状结构的情况，其基底的直径以50200 m左右为优选。在本实施方式中的微针3为圆锥形，但也可以是四角锥等。

13、多角锥形、或其他形状的微针。 0034 微针3典型地说为隔着间隔设置成在横列上的针的密度为每毫米(mm)约110根。说明书 2/11 页 4 CN 104994880 B 4 一般地，相邻的横列仅以与横列内的针的间距基本上相等的距离互相分离，并且针密度为每1cm2具有10010000根。若针密度为100根以上，则能够有效地穿孔皮肤。另一方面，在针密度大于10000根的情况，则难以保持微针3的强度。微针3的密度优选为2005000根，更优选为3002000根，进一步优选为400850根。 0035 基板2或微针3的材质可举出硅、二氧化硅、陶瓷、金属(不锈钢。

14、、钛、镍、钼、铬、钴等)以及合成或天然的树脂材料等，但若考虑微针的抗原性和材质的单价，则以聚乳酸、聚乙醇酸、聚丙交酯-乙交酯、茁霉多糖、己内酯、聚氨酯、聚酸酐等生物分解性聚合物、或作为非分解性聚合物的聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸、乙烯-乙酸乙烯酯、聚四氟乙烯、聚甲醛等合成或天然的树脂材料为特别优选。此外，还优选作为多糖类的透明质酸、透明质酸钠、茁霉多糖、葡聚糖、糊精或硫酸软骨素等。 0036 基板2或微针3的制法可举出使用硅基板的湿式蚀刻加工或干式蚀刻加工、使用金属或树脂的精密机械加工(放电加工、激光加工、切割加工、热压加工、射出。

15、成型加工等)、机械切削加工等。通过这些加工方法，可使基板2与微针3一体化成型。使微针3中空的方法可举出在制作微针3后以激光等进行二次加工的方法。 0037 微针装置1的微针3上具备涂层5，涂层5优选通过涂敷微针涂敷用组合物来形成。涂敷方法可举出喷涂和浸涂等，以浸涂为优选。予以说明，在图1中，在全部的微针3上均形成了涂层5，然而涂层5也可仅形成在多个存在的微针3的一部分上。另外，在图1中，涂层5仅形成在微针3的尖端部分，但也可以以覆盖整个微针3的方式形成。进而，涂层5也可以形成在基板2上。 0038 图3的(a)、 (b)和(c)是显示微针装置1的制造。

16、方法的一实施方式的图。在该方法中，首先如图3(a)所示，通过刮刀12将微针涂敷用组合物10在遮板11上沿箭头A的方向扫进。由此，在开口部13填充微针涂敷用组合物10。接着如图3(b)所示，将微针3插入遮板11的开口部13。然后如图3(c)所示，将微针3从遮板11的开口部13拉出。由此使微针涂敷用组合物10附着在微针3上。予以说明，微针涂敷用组合物10还可附着于基板2上。然后，通过风干、真空干燥或其组合等的方法，除去微针3上的微针涂敷用组合物10的挥发成分。由此，使涂层5坚固地附着于微针3上，典型地成为玻璃质或固体，制造出微针装置。涂层5的水分。

17、含量以涂层5的总量为基准，通常在55质量以下，优选为30质量以下，更优选为10质量以下。通过上述方法，可防止附着的微针涂敷用组合物10发生液体滴垂，液体滴垂是指涂敷组合物从针尖垂落，意味着在图3(c)中H部分变长。 0039 附着在微针3上的涂层5的高度H可通过图3(b)所示的净空区(间隙)C来调整。该净空区C定义为从微针3的基底至遮板11的表面的距离(与基板2的厚度无关)，可根据遮板11 的张力和微针3的长度来设定。净空区C的距离范围优选为0500 m。在净空区C的距离为0 的情况，意指微针涂敷用组合物10涂敷在整个微针3上。附着于微针3上的微针涂敷用组合。

18、物10的高度H根据微针3的高度的不同而变动，可设定为0500 m，通常为10500 m，优选为30300 m左右，特别优选为40250 m左右。为了有效使用微针涂敷用组合物10中的日本脑炎疫苗抗原，优选集中存在于微针的一部分，即针的尖端部分，另外，从对皮肤刺激和药物转移至皮肤的转移率的观点考虑，优选存在于从尖端至200 m的部分。进一步从日本脑炎抗原疫苗的稳定性的观点考虑，在将日本脑炎疫苗抗原的浓度以涂层5的总质量为基准设为0.110w/w的情况，以存在于从尖端至50150 m为更优选。微针涂敷用组合物10可说明书 3/11 页 5 CN 10499。

19、4880 B 5 使碱性氨基酸以高浓度(例如20w/w以上)溶解于水系溶液中而具有高粘度，因此，可在微针的一部分形成涂层5。以这种形式保持在微针3上的微针涂敷用组合物10，在将微针3穿刺皮肤时可同时插入皮内。 0040 附着于微针3上的涂层5的干燥后的厚度优选小于50 m，更优选小于40 m，进一步优选为130 m。一般而言，附着在微针上的涂层5的厚度是指干燥后在整个微针3的表面测定的平均厚度。附着于微针3上的涂层5的厚度可通过采用多个微针涂敷用组合物10的膜来增大，即，可通过在附着微针涂敷用组合物10后反复进行附着工序来增大。 0041 在使微针涂敷用组合物1。

20、0附着于微针3时，优选将装置的设置环境的温湿度控制为一定。另外，在微针涂敷用组合物10含水的情况，也可根据需要充满水。由此，可极力防止微针涂敷用组合物10中的水分蒸发掉。 0042 图2为沿图1的II-II线的剖面图。如图2所示，微针装置1具备：基板2、设置于基板2 上的微针3、和设置于该微针3上的涂层5。附着于微针上的涂层5含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，可经由例如上述的工序来制造。 0043 微针涂敷用组合物10含有日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸和酸，在将酸的价数设为N时，相对于碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数大于1/(N+1)且小于2。相对于。

21、碱性氨基酸1摩尔，酸的摩尔数优选为1/N以上且1以下。 0044 微针涂敷用组合物10中的日本脑炎疫苗抗原的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以0.0130w/w为优选，以0.0220w/w为更优选，以0.0510w/w为进一步优选。若日本脑炎疫苗抗原的浓度在0.01w/w以上，则在给药至皮肤时可使有效量的日本脑炎疫苗抗原释放至皮内，而发挥出充分的药效。另外，将微针涂敷用组合物10涂敷至微针3，除去挥发成分后得到的涂层5的日本脑炎疫苗抗原的浓度，以涂层5的总质量为基准，以0.0130w/w为优选，以0.0315w/w为更优选，以0.110w/。

22、w为进一步优选。 0045 碱性氨基酸没有特别限定，可举出赖氨酸、组氨酸、精氨酸、鸟氨酸、肉碱等中的1 种或2种以上，以其游离形式为优选。从上述酸的选择性更广泛的观点考虑，以精氨酸为优选。 0046 从粘度和日本脑炎疫苗抗原的稳定性的观点考虑，微针涂敷用组合物10中的碱性氨基酸的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以20w/w以上为优选，以30w/w 以上为更优选。通过将碱性氨基酸的浓度设定在20w/w以上，可提高微针涂敷用组合物10 中的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。另外，通过将碱性氨基酸的浓度设定在70w/w以下，涂敷在微针3时的操作变得容易。。

23、另外，将微针涂敷用组合物10涂敷在微针3，除去挥发成分后得到的涂层5的碱性氨基酸的浓度，以涂层5的总质量为基准，以5090w/w为优选，以60 80w/w为更优选。 0047 微针涂敷用组合物10中，碱性氨基酸的配合量(质量)与日本脑炎疫苗抗原的配合量(质量)的比以1.82400为优选，以3.5700为更优选，以5500为进一步优选。通过将碱性氨基酸浓度与日本脑炎疫苗抗原浓度的比设定在上述范围，可提高日本脑炎疫苗抗原的稳定性。 0048 微针涂敷用组合物10中的酸，优选为熔点在40以上的酸。通过使用这种酸，可使碱性氨基酸以高浓度(例如20w/w以上)存在于微。

24、针涂敷用组合物10中，而能够提高微针涂敷用组合物10中的日本脑炎疫苗抗原的稳定性。其中，优选选自磷酸、乳酸、苯甲酸、马来说明书 4/11 页 6 CN 104994880 B 6 酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、抗坏血酸和天冬氨酸中的至少1种酸，更优选选自磷酸、柠檬酸和酒石酸中的至少1种酸。微针涂敷用组合物10中的酸的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以550w/w为优选，以1030w/w为更优选。另外，将微针涂敷用组合物10 涂敷在微针3并除去挥发成分后得到的涂层5中的酸浓度，以涂层5的总质量为基准，以5 50w/w为优选，以103。

25、0w/w为更优选。 0049 微针涂敷用组合物10除了含有上述日本脑炎疫苗抗原、碱性氨基酸、酸以外，还可含有纯化水、生理盐水、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、柠檬酸-磷酸缓冲液、 Tris-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液等缓冲液等水系溶液。这些水系溶液的含量，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，以575质量为优选。若大于75质量，则存在涂敷时得不到充分粘度的倾向，若小于5质量，则存在难以使组合物溶解的倾向。 0050 微针涂敷用组合物10还可以含有上述碱性氨基酸以及赖氨酸或赖氨酸的药学上可接受的盐。通过含有赖氨酸或赖氨酸的药学上可接受的盐，。

26、可进一步提高日本脑炎疫苗抗原的稳定性。 0051 赖氨酸的药学上可接受的盐以盐酸盐为优选。赖氨酸盐酸盐的浓度，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，为0.120w/w即可。若大于20w/w，则存在赖氨酸盐酸盐无法溶解的情况，若小于0.1w/w，则存在日本脑炎疫苗抗原的稳定性变得不充分的情况。另外，将微针涂敷用组合物10涂敷在微针3并除去挥发成分后得到的涂层5中的赖氨酸盐酸盐的浓度，以涂层5的总质量为基准，为0.120w/w即可。 0052 另外，还可进一步含有高分子载体(增粘剂)作为微针涂敷用组合物10的任意成分。高分子载体可举出聚环氧乙烷、聚羟甲基纤维。

27、素、羟丙基纤维素、聚羟丙甲基纤维素、聚甲基纤维素、葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、茁霉多糖、羧甲基纤维素钠、硫酸软骨素、透明质酸、葡聚糖、阿拉伯胶等。予以说明，作为高分子载体所使用的聚乙二醇的重平均分子量优选为大于600且在500000以下。 0053 高分子载体以与日本脑炎疫苗抗原的相容性(均匀相容的性质)高的载体为优选，以羟丙基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、茁霉多糖等为特别优选。 0054 微针涂敷用组合物10中的高分子载体的含量，以微针涂敷用组合物10的总质量为基准，为0.00530质量，优选为0.0120质量，更优选为0.0。

28、510质量。另外，该高分子载体有时必须具有不使液体滴垂程度的粘性的情况，粘度在室温(25)下优选为100 100000mPas。更优选的粘度为50060000mPas。 0055 除了上述以外，微针涂敷用组合物10中还可根据需要添加：作为助溶剂或吸收促进剂的碳酸丙烯酯、克罗米通、 L-薄荷脑、薄荷油、柠檬烯、己二酸二异丙酯等、或作为药效补充剂的水杨酸甲酯、水杨酸乙二醇酯、 L-薄荷脑、百里酚、薄荷油、壬酸香草酰胺、辣椒提取物等。 0056 进而，还可根据需要添加稳定剂、抗氧化剂、乳化剂、表面活性剂、盐类等化合物。表面活性剂可以是非离子型表面活。

29、性剂、离子表面活性剂(阳离子、阴离子、两性)的任一者，然而从安全性的方面考虑，希望为通常用于药物基剂的非离子型表面活性剂。这样的化合物可举出例如蔗糖脂肪酸酯等糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油。说明书 5/11 页 7 CN 104994880 B 7 0057 其他已知的制剂补充物质，只要不对微针涂敷用组合物10的溶解性和粘度提高效果及附着在干燥后的微针3上的微针涂敷用组合物10的性状和物性带来不良影响，就可以将它们添加到微针涂敷用组合物10中。 0。

30、058 微针涂敷用组合物10必须具有某程度的粘性，以使涂敷后的微针3上不发生液体滴垂。粘度为10045000mPas左右，通过将微针涂敷用组合物10的粘度设设定在该范围，无需依赖微针的材质，即可一次性附着期望量的微针涂敷用组合物10。 0059 微针涂敷用组合物10在25时的粘度为45000mPas以下的情况，带来剪切应力的上升，对物质间剥离的抵抗性增大。因此，在以浸渍法涂敷药液的情况，用于抵抗微针解离的个体的性质(凝集性)增强，而可在微针上保持更多的涂敷组合物。另一方面，若大于 45000mPas，则附着在微针上的涂敷组合物中的日本脑炎疫苗抗原的含量降低，。

31、从经济性方面考虑不优选。在涂敷组合物的粘度为100mPas以上的情况，凝集性强，因此可在微针上保持更多的涂敷组合物。从这样的特征考虑，微针涂敷用组合物10在25时的粘度以100 45000mPas为优选，以30035000mPas为更优选，以50030000mPas为进一步优选，以60015000mPas为特别优选。实施例 0060 以下示出本发明的实施例更具体地说明本发明，但本发明并不受这些实施例限定，在不脱离本发明技术思想的范围内可作各种变更。 0061 精氨酸和酸的混合物对水的溶解性 0062 将精氨酸与表13所示的酸(N价)以精氨酸：酸N： 1的比率混合。

32、，并添加纯化水，调制成20w/w的精氨酸-酸的稀释液，然后通过冷冻干燥使水分蒸发，制作冻干固体。以精氨酸和酸的混合物(Arg+酸)：水7： 3的比率向该冻干固体中添加纯化水，制成精氨酸和酸的混合物(Arg+酸)的高浓度溶液。表中的 “溶解性” 表示其结果，将完全溶解而能够调制出高浓度溶液的情况评价为 “” ，将部分溶解的情况评价为 “” 。 0063 表1 0064 无机酸盐酸(1价)硫酸(2价)甲磺酸(1价)磷酸(3价) 熔点()-27.3102042.4 溶解性 0065 表2 0066 0067 表3 说明书 6/11 页 8 CN 104994880 B 。

33、8 0068 0069 不同配比的精氨酸和酸的混合物对水的溶解性和粘度特性 0070 将精氨酸和酸以表4、 5所示的摩尔比混合，并添加纯化水，调制成20w/w的精氨酸-酸的稀释液，然后通过冷冻干燥使水分蒸发，制作冻干固体。以精氨酸和酸的混合物 (Arg+酸)：水7： 3的比率向该冻干固体中添加纯化水，制成精氨酸和酸的混合物(Arg+酸) 的高浓度溶液。表中的 “溶解性” 表示其结果，将完全溶解而能够调制出高浓度溶液的情况评价为 “” 、将部分溶解的情况评价为 “” ，将几乎不溶解的情况评价为 “” 。另外，表中的 “粘度” 是使用微量样品粘度计(VROC， Rh。

34、eoSense公司制)测得的值，单位为 “mPas” 。 0071 另外，将上述精氨酸和酸的混合物(Arg+酸、精氨酸：磷酸2： 1、精氨酸：柠檬酸 3： 1、精氨酸：酒石酸2： 1)的高浓度溶液涂敷在微针(高度约500 m，密度640根/cm2，四角锥形)上，使用显微镜(VH-8000， KEYENCE公司制)观察微针的针尖。由观察的结果确认，涂层形成在微针的尖端部分，判明精氨酸和酸的混合物适于涂敷针尖。 0072 表4 0073 Arg:磷酸(3价)溶解性粘度Arg:柠檬酸(3价)溶解性粘度 1： 1-1： 1- 2： 111342： 1- 3： 1-3：。

35、11331 4： 1-4： 1- 0074 表5 0075 Arg:酒石酸(2价)溶解性粘度Arg:乳酸(1价)溶解性粘度 1： 1-1： 1- 2： 17922： 1- 3： 1-3： 1- 4： 1-4： 1- 0076 日本脑炎疫苗抗原的稳定性评价 0077 将配合有精氨酸和酸的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针上，评价稳定性。 0078 使用日本脑炎疫苗抗原的PBS(磷酸缓冲生理盐水)溶液作为原药。通过将该原药超滤浓缩，在浓缩液中添加精氨酸和酸的混合物的冻干固体(Arg+酸)、赖氨酸盐酸盐 (LysHCl)并混合，或在浓缩时混合精氨酸、酸、赖氨酸盐酸盐来调制，冷冻干燥后。

36、使其再溶解，制成日本脑炎疫苗抗原涂敷液。予以说明，各成分的配比(单位：质量)和Arg+酸的摩尔比如表6所示。 0079 将得到的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针(高度约500 m，密度640根/cm2，四角锥形)上，干燥，得到配方物AF。表6中，各成分的括号内的数值表示干燥后的配比(单说明书 7/11 页 9 CN 104994880 B 9 位：质量)。将配方物AF与PharmaKeep(三菱气体化学株式会社，商品名)一起封入Moist Catch(共同印刷株式会社，商品名)内，在40下保存1个月。 0080 稳定性的评价通过如下方法进行：通过微针。

37、在提取液(0.01质量的吐温80/1质量的海藻糖/PBS)中提取日本脑炎疫苗抗原，然后进行E抗原含量测定(ELISA法)和蛋白质定量(Lowry法)，将每单位蛋白质含量中的E抗原含量作为 “比活性” ，比较初始值与在40 下1个月后的值。 0081 表6 0082 0083 在配方物AF中，在40下保存1个月的检体的比活性显示出与初始检体大致相同的值，未观察到活性降低。 0084 赖氨酸盐酸盐的配合效果 0085 将各成分的配比(单位：质量)及精氨酸与酸的摩尔比如表7所示的配合有70质量的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针上，使用L9正交表评价赖氨酸盐酸盐的配合效果。予。

38、以说明，在表7中，各成分的括号内的数值表示除去挥发成分后的配比(单位：质量)。 0086 以日本脑炎疫苗抗原的PBS溶液为原药，将其超滤浓缩，向其中添加规定量的添加剂并混合，以此作为微针的涂敷液。在相对湿度8085的环境下将其涂敷在聚乳酸制微针(高度约500 m，密度640根/cm2，四角锥形)的针尖。干燥后，与PharmaKeep(三菱气体化学株式会社，商品名)一起封入Moist Catch(共同印刷株式会社，商品名)内，评价各温度条件下的稳定性。通过微针在提取液(0.01的吐温80/1的海藻糖/PBS)中提取日本脑炎疫苗抗原，然后进行E抗原含量测。

39、定(ELISA法)和蛋白质定量(Lowry法)，评价每单位蛋白质含量中的E抗原含量作为 “比活性” 。关于在50下保存2周的检体的比活性值，通过最小二乘法分析赖氨酸盐酸盐的配合对比活性的影响度。图4表示赖氨酸盐酸盐对比活性的影响度的图。在配合赖氨酸盐酸盐2.5或5.0的情况，在50下保存2周的检体对比活性的影响度高，因此确认，赖氨酸盐酸盐具有提高稳定性的效果。 0087 表7 说明书 8/11 页 10 CN 104994880 B 10 0088 0089 制剂用量不同的日本脑炎疫苗抗原的稳定性的评价 0090 将配合有精氨酸和酸的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针。

40、上，评价4 g制剂和 0.2 g制剂这两种用量的制剂的稳定性。这两种用量的制剂的制作是通过调整日本脑炎疫苗抗原涂敷液的抗原浓度和涂敷高度来进行的。 0091 使用日本脑炎疫苗抗原的PBS(磷酸缓冲生理盐水)溶液作为原药。将该原药超滤浓缩，浓缩时混合精氨酸、磷酸和赖氨酸盐酸盐来进行制备，在冷冻干燥后，使其再溶解，由此制成日本脑炎疫苗抗原涂敷液。予以说明，各成分的配比(单位：质量)和Arg+酸的摩尔比如表8所示。 0092 将得到的日本脑炎疫苗抗原涂敷液涂敷在微针(高度约500 m，密度640根/cm2，四角锥形)，得到涂敷高度125 m、假定含量4 g的配。

41、方物P，涂敷高度70 m、假定含量0.2 g的配方物Q，涂敷高度120 m、假定含量8 g的配方物R，涂敷高度60 m、假定含量2 g的配方物S，涂敷高度60 m、假定含量1 g的配方物T和涂敷高度60 m、假定含量0.032 g的配方物U。表8的各成分中，括号内的数值表示干燥后的配比(单位：质量)。将配方物PU与PharmaKeep (三菱气体化学株式会社，商品名)一起封入Moist Catch(共同印刷株式会社，商品名)内，在表9所示的各温度条件下，将配方物PT保存3个月，配方物U保存4个月。 0093 稳定性的评价通过如下方法进行：通过微针在提。

42、取液(0.01质量的吐温80/1质量的海藻糖/PBS)中提取日本脑炎疫苗抗原，然后进行E抗原含量测定(ELISA法)和蛋白质定量(Lowry法)，将每单位蛋白质含量中的E抗原含量作为 “比活性” 。予以说明，低用量的配方物Q、 U的比活性，是代替由Lowry法测定蛋白质含量的方法，通过由氨基酸含量的测定值和配方物中的配比来计算而求得的。氨基酸含量是通过OPA(邻苯二甲醛)法测定的。 0094 表8 说明书 9/11 页 11 CN 104994880 B 11 0095 0096 表9 0097 说明书 10/11 页 12 CN 104994880 B 12 0。

43、098 在配方物PT中，在10、 25、 40、 50的各温度下保存3个月的检体与初始检体相比，未观察到蛋白质含量和E抗原含量的下降。在配方物U中，在10、 25、 40、 50的各温度下保存4个月的检体与初始检体相比，也未观察到蛋白质含量和E抗原含量的下降。另外，比活性也显示出大致相同的值，未观察到活性下降。 0099 符号说明 0100 1：微针装置 0101 2：基板 0102 3：微针 0103 5：涂层 0104 10：微针涂敷用组合物 0105 11：遮板 0106 12：刮刀 0107 13：开口部说明书 11/11 页 13 CN 104994880 B 13 图1 图2 说明书附图 1/3 页 14 CN 104994880 B 14 图3 说明书附图 2/3 页 15 CN 104994880 B 15 图4 说明书附图 3/3 页 16 CN 104994880 B 16 。

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