相关申请案
本请要求于2013年3月15日提交的美国临时专利申请序列号 61/794,659的优先权，该临时专利申请的公开内容据此出于所有目的 全文以引用的方式并入本文中。
发明背景
ADAMTS(一种具有I型血栓反应素基序的去整合素和金属蛋白 酶)蛋白是包含许多保守结构域(包括锌依赖性催化结构域、富半胱 氨酸结构域、去整合素样结构域)和至少一个并在大多数情况下多个 I型血栓反应素重复序列的金属蛋白酶家族(有关综述，参见 Nicholson等,BMCEvolBiol.2005年2月4日；5(1):11)。在进化上与 金属蛋白酶的ADAM和MMP家族相关的这些蛋白(JonesGC,Curr PharmBiotechnol.2006年2月；7(1):25-31)是已与许多疾病和病症相 关的分泌酶，这些疾病和病症包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP) (MoakeJL,SeminHematol.2004年1月；41(1):4-14)、结缔组织障碍、 癌症、炎症(Nicholson等)和严重恶性疟原虫疟疾(Larkin等,PLoS Pathog.2009年3月；5(3):e1000349)。由于这些关联，ADAMTS酶已 被视为许多病变的潜在治疗靶标(JonesGC,CurrPharmBiotechnol. 2006年2月；7(1):25-31)。
一个ADAMTS家族成员，ADAMTS13，在残基Tyr1605与Met 1606之间裂解血管性血友病因子(vonWillebrandfactor,vWF)。 ADAMTS13活性的丧失已与许多病症，诸如TTP(MoakeJL,Semin Hematol.2004年1月；41(1):4-14)、急性和慢性炎症(Chauhan等,JExp Med.2008年9月1日；205(9):2065-74)以及最近与严重恶性疟原虫 疟疾(Larkin等,PLoSPathog.2009年3月；5(3):e1000349)相关。
血栓性血小板减少性紫癜(TTP)是一种特征在于血栓性微血管病 变、血小板减少和微血管血栓形成的障碍，其可导致各种程度的组织 缺血和梗塞。在临床上，TTP患者通过诸如以下方面的症状而诊断： 血小板减少、裂红细胞(红细胞碎片)和乳酸脱氢酶水平升高(Moake JL.Thromboticmicroangiopathies.NEnglJMed.2002；347:589-600； MoakeJL.vonWillebrandfactor,ADAMTS-13,andthrombotic thrombocytopenicpurpura.SeminHematol.2004；41:4-14；SadlerJE, MoakeJL,MiyataT,GeorgeJN.Recentadvancesinthrombotic thrombocytopenicpurpura.Hematology(AmSocHematolEduc Program).2004:407-423；SadlerJE.NewconceptsinvonWillebrand disease.AnnuRevMed.2005；56:173-191)。
存在两种主要类型的TTP：获得性(非遗传性/特发性)和家族 性(遗传性)(TsaiHM,LianEC.AntibodiestovonWillebrand factor-cleavingproteaseinacutethromboticthrombocytopenicpurpura. NEnglJ.Med.1998；339:1585-1594；FurlanM,LammleB.Deficiency ofvonWillebrandfactor-cleavingproteaseinfamilialandacquired thromboticthrombocytopenicpurpura.BaillieresClinHaematol.1998； 11:509-514)。ADAMTS13基因中的遗传突变导致家族性形式的TTP， 而患有获得性TTP的人不具有突变。相反，获得性TTP的特征在于 产生特异性抗体。
在1982年，Moake等在患有慢性复发性TTP的患者的血浆中发 现了异常大的血管性血友病因子(UL-vWF)多聚体(MoakeJL,RudyC K,TrollJH,WeinsteinMJ,ColanninoNM,AzocarJ,SederRH,Hong SL,DeykinD.UnusuallylargeplasmafactorVIII:vonWillebrandfactor multimersinchronicrelapsingthromboticthrombocytopenicpurpura.N EnglJMed.1982；307:1432-1435)。UL-vWF与TTP之间的关联随着 由Furlan等以及Tsai和Lian独立发现大多数罹患TTP的患者缺乏裂 解vWF的血浆金属蛋白酶(现已知为ADAMTS13)而得到支持 (FurlanM,RoblesR,SolenthalerM,WassmerM,SandozP,Laemmle B.DeficientactivityofvonWillebrandfactor-cleavingproteasein chronicrelapsingthromboticthrombocytopenicpurpura.Blood.1997； 89:3097-3103；TsaiHM,Sussman,II,GinsburgD,LankhofH,SixmaJ J,NagelRL.Proteolyticcleavageofrecombinanttype2Avon WillebrandfactormutantsR834WandR834Q:inhibitionbydoxycycline andbymonoclonalantibodyVP-1.Blood.1997；89:1954-1962；TsaiH M,LianEC.AntibodiestovonWillebrandfactor-cleavingproteasein acutethromboticthrombocytopenicpurpura.NEnglJMed.1998； 339:1585-1594)。
ADAMTS13蛋白酶是一种主要由肝脏产生的190kDa的糖基化 蛋白(LevyGG,NicholsWC,LianEC,ForoudT,McClintickJN, McGeeBM,YangAY,SiemieniakDR,StarkKR,GruppoR,SarodeR, ShurinSB,ChandrasekaranV,StablerSP,SabioH,BouhassiraEE, UpshawJD,Jr.,GinsburgD,TsaiHM.Mutationsinamemberofthe ADAMTSgenefamilycausethromboticthrombocytopenicpurpura. Nature.2001；413:488-494；FujikawaK,SuzukiH,McMullenB,Chung D.PurificationofhumanvonWillebrandfactor-cleavingproteaseandits identificationasanewmemberofthemetalloproteinasefamily.Blood. 2001；98:1662-1666；ZhengX,ChungD,TakayamaTK,MajerusEM, SadlerJE,FujikawaK.StructureofvonWillebrandfactor-cleaving protease(ADAMTS13),ametalloproteaseinvolvedinthrombotic thrombocytopenicpurpura.JBiolChem.2001；276:41059-41063； SoejimaK,MimuraN,HirashimaM,MaedaH,HamamotoT,Nakagaki T,NozakiC.Anovelhumanmetalloproteasesynthesizedintheliverand secretedintotheblood:possibly,thevonWillebrandfactor-cleaving protease；JBiochem(Tokyo).2001；130:475-480；GerritsenHE,Robles R,LammleB,FurlanM.Partialaminoacidsequenceofpurifiedvon Willebrandfactor-cleavingprotease.Blood.2001；98:1654-1661)。
已表明，ADAMTS13基因中的突变会导致TTP(LevyGG,Ni cholsWC,LianEC,ForoudT,McClintickJN,McGeeBM,Y angAY,SiemieniakDR,StarkKR,GruppoR,SarodeR,Shurin SB,ChandrasekaranV,StablerSP,SabioH,BouhassiraEE,U pshawJD,Jr.,GinsburgD,TsaiHM.Mutationsinamemberof theADAMTSgenefamilycausethromboticthrombocytopenicpurpu ra.Nature.2001；413:488-494)。通常因抑制ADAMTS-13活性的自 身抗体而引起的特发性TTP是一种发生在成人和大龄儿童中且可在1 1-36％的患者中定期复发的更常见的障碍(TsaiHM,LianEC.An tibodiestovonWillebrandfactor-cleavingproteaseinacutethrombo ticthrombocytopenicpurpura.NEnglJMed.1998；339:1585-159 4；FurlanM,LammleB.DeficiencyofvonWillebrandfactor-cleavi ngproteaseinfamilialandacquiredthromboticthrombocytopenicp urpura.BaillieresClinHaematol.1998；11:509-514)。
非中和自身抗体也可通过诱导从循环中清除而抑制ADAMTS活 性(ScheiflingerF,KnoblP,TrattnerB,PlaimauerB,MohrG,DockalM, DornerF,RiegerM.NonneutralizingIgMandIgGantibodiestovon Willebrandfactor-cleavingprotease(ADAMTS-13)inapatientwith thromboticthrombocytopenicpurpura.Blood.2003；102:3241-3243)。健 康成人中的血浆ADAMTS13活性在50％至178％的范围内(MoakeJL. Thromboticthrombocytopenicpurpuraandthehemolyticuremic syndrome.ArchPatholLabMed.2002；126:1430-1433)。在大多数患有 家族性或获得性TTP的患者中，血浆ADAMTS13活性不存在或小于 正常值的5％。在不治疗下，死亡率超过90％，但血浆疗法已将死亡 率降至约20％(MoakeJL.Thromboticthrombocytopenicpurpuraand thehemolyticuremicsyndrome.ArchPatholLabMed.2002； 126:1430-1433)。
在巨核细胞和内皮细胞中合成的vWF分别作为超大vWF(UL-v WF)储存在血小板颗粒和韦伯潘力氏小体(Weibel-Paladebody)中(M oakeJL,RudyCK,TrollJH,WeinsteinMJ,ColanninoNM, AzocarJ,SederRH,HongSL,DeykinD.Unusuallylargeplasm afactorVIII:vonWillebrandfactormultimersinchronicrelapsingt hromboticthrombocytopenicpurpura.NEnglJMed.1982；307:14 32-1435；WagnerDD,OlmstedJB,MarderVJ.Immunolocalizati onofvonWillebrandproteininWeibel-Paladebodiesofhumanen dothelialcells.JCellBiol.1982；95:355-360；WagnerDD,Bonfan tiR.vonWillebrandfactorandtheendothelium.MayoClinProc. 1991；66:621-627；SpornLA,MarderVJ,WagnerDD.vonWi llebrandfactorreleasedfromWeibel-Paladebodiesbindsmoreavidl ytoextracellularmatrixthanthatsecretedconstitutively.Blood.19 87；69:1531-1534；TsaiHM,NagelRL,HatcherVB,Sussman, II.Endothelialcell-derivedhighmolecularweightvonWillebrandf actorisconvertedintotheplasmamultimerpatternbygranulocyte proteases.BiochemBiophysResCommun.1989；158:980-985；Tsa iHM,NagelRL,HatcherVB,Sussman,II.Multimericcompo sitionofendothelialcell-derivedvonWillebrandfactor.Blood.1989 ；73:2074-2076)。一旦从内皮细胞分泌，这些UL-vWF多聚体即由 循环中的ADAMTS13在vWF分子内的特定裂解位点处裂解成一系 列较小的多聚体(TsaiHM,NagelRL,HatcherVB,Sussman,I I.Endothelialcell-derivedhighmolecularweightvonWillebrandfac torisconvertedintotheplasmamultimerpatternbygranulocytepr oteases.BiochemBiophysResCommun.1989；158:980-985；Dent JA,GalbuseraM,RuggeriZM.HeterogeneityofplasmavonWill ebrandfactormultimersresultingfromproteolysisoftheconstituent subunit.JClinInvest.1991；88:774-782；FurlanM,RoblesR,Af folterD,MeyerD,BaillodP,LammleB.Tripletstructureofvon Willebrandfactorreflectsproteolyticdegradationofhighmolecular weightmultimers.ProcNatlAcadSciUSA.1993；90:7503-7507)。
ADAMTS13在成熟vWF亚基的中心A2结构域中的 Tyr842-Met843键处裂解并需要锌或钙来实现活性(DentJA, BerkowitzSD,WareJ,KasperCK,RuggeriZM.Identificationofa cleavagesitedirectingtheimmunochemicaldetectionofmolecular abnormalitiesintypeIIAvonWillebrandfactor.ProcNatlAcadSciUSA. 1990；87:6306-6310)。vWF如通过电子显微术所见以“纱线球”和丝状 形式存在(SlayterH,LoscalzoJ,BockenstedtP,HandinRI.Native conformationofhumanvonWillebrandprotein.Analysisbyelectron microscopyandquasi-elasticlightscattering.JBiol.Chem.1985； 260:8559-8563)。此外，原子力显微术确认vWF在静态条件下以球状 构象存在并在暴露于剪应力之后以展开的丝状状态存在(SiedleckiC A,LestiniBJ,Kottke-MarchantKK,EppellSJ,WilsonDL,Marchant RE.Shear-dependentchangesinthethree-dimensionalstructureof humanvonWillebrandfactor.Blood.1996；88:2939-2950)。当vWF丝 的一端锚定于表面时，这也可在体内发生。
TTP患者的血栓由少量纤维蛋白并主要由vWF和血小板组成， 从而表明vWF介导的血小板聚集为血栓形成的原因(AsadaY,Sumiy oshiA,HayashiT,SuzumiyaJ,KaketaniK.Immunohistochemistry ofvascularlesioninthromboticthrombocytopenicpurpura,withsp ecialreferencetofactorVIIIrelatedantigen.ThrombRes.1985；3 8:469-479)。患有复发性TTP的患者在血浆中具有超大多聚体。UL- vWF多聚体随时间而累积，因为抑制剂(抗ADAMTS13Ab)的持 续存在会降低ADAMTS13活性。UL-vWF多聚体是极度活跃的并因 剪应力而展开，从而导致血小板聚集，这导致血管内血栓形成(Tsai HM.VonWillebrandfactor,ADAMTS13,andthromboticthromboc ytopenicpurpura.JMolMed.2002；80:639-647；TsaiHM.Defici encyofADAMTS-13inthromboticandthrombocytopenicpurpura. JThrombHaemost.2003；1:2038-2040；discussion2040-2035)。
据信，由于ADAMTS13缺乏而在血浆中存在过度反应性 UL-vWF多聚体可与冠心病相关的动脉血栓形成的风险升高相关联。 此外，ADAMTS13已与脑梗塞、心肌梗塞、缺血性/再灌注损伤、深 静脉血栓形成和弥散性血管内凝血相关。因此，对适于治疗与 ADAMTS13和VWF功能障碍相关的各种疾病和病症的ADAMTS13 蛋白的药物制剂存在需要。
然而，包含诸如ADAMTS13的非常大且不稳定的分子的药物制 剂一般仅可经静脉内施用。这是因为由于在经皮下、肌内和皮内给予 时的吸收不足和降解严重，此类药物制剂通常表现出极低的生物利用 率。因此，由于低生物利用率，通常经静脉内施用大且不稳定的蛋白 以提供供血流的直接可用性。
尽管ADAMTS13可静脉内施用以治疗与ADAMTS13和VWF 功能障碍相关的各种疾病和病症，但不便于且不易于患者处理。尤其 是，ADAMTS13制剂通常在患者的整个一生中定期施用。例如，患 有家族性(遗传性)TTP的患者在其生命的第一年开始用静脉内 ADAMTS13治疗。因此，将会有利的是皮下施用ADAMTS13的药 物组合物。然而，皮下施用大且不稳定的蛋白制剂的低生物利用率已 阻止开发此类皮下制剂。
先前的研究已报导了适于皮下施用的某些凝血因子VII、VIII和 IX。例如，PCT/SE95/00348报导了一种含有诸如水解明胶、透明质 酸和大豆油乳液的添加剂的高度纯化的因子VIII制剂。纯化和添加 剂使得因子VIII制剂可以高度浓缩。与在静脉内施用之后的生物利 用率相比，该高度浓缩的制剂在皮下、肌内或皮内施用之后产生至少 约15％且合适地为至少约30％的生物利用率。然而，与静脉内施用 相比，皮下施用的15-30％的生物利用率仍然极低且将不能有效地治 疗ADAMTS13障碍。
此外，先前的研究未提供皮下施用大且不稳定的蛋白的一般原 则。相反，先前的研究给出以下证据：大且不稳定的蛋白的皮下药物 组合物因组合物缺乏供皮下施用所必需的生物利用率而难以制备。
本文描述一种皮下施用ADAMTS13制剂以治疗与ADAMTS13 和VWF功能障碍相关的疾病或病症的方法。具体地讲，本文提供皮 下施用的ADAMTS13制剂具有高达约70％的出人意料得高的生物利 用率的证据。
发明概述
在一个方面，本公开提供一种用于治疗哺乳动物中的凝血障碍的 方法，该方法包括向对其有需要的哺乳动物皮下施用治疗有效量的包 含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有效量 包括20-4000个活性单位每千克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，凝血障碍选自：遗传性 TTP、获得性TTP、脑梗塞、心肌梗塞、缺血性/再灌注损伤、深静脉 血栓形成和败血症相关弥散性血管内凝血。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 50-80％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少50％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少55％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少60％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少65％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少70％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少75％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少80％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，出血发作(bleeding episode)为遗传性TTP。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，治疗有效量包括至少 20-160个活性单位每千克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，出血发作为获得性 TTP。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，治疗有效量包括至少 40-2000个活性单位每千克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，出血发作为脑梗塞和/ 或缺血再灌注损伤。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，治疗有效量包括至少 40-4000个活性单位每千克
在本文所提供的方法的一个实施方案中，出血发作为心肌梗塞和 /或缺血再灌注损伤。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，治疗有效量包括至少 40-2000个活性单位每千克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，ADAMTS13以单次推 注方式、每月、每两周、每周、一周两次、每日、每12小时、每8 小时、每六小时、每四小时或每两小时施用。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，ADAMTS13为重组的。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，ADAMTS13为血浆源 性的。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，哺乳动物为人类。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，组合物为即用于施用的 稳定水溶液。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，组合物为冻干的。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，组合物用适于注射的药 学上可接受的载体复原。
在一个方面，本公开提供一种用于治疗哺乳动物中的出血发作的 方法，该方法包括向对其有需要的哺乳动物皮下施用治疗有效量的包 含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有效量 包括如以每千克的活性单位数度量的用于特定适应症的标准静脉内 剂量的至少120-300％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，特定适应症为遗传性 TTP且标准静脉内剂量为10-80个活性单位每千克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，特定适应症为获得性 TTP且标准静脉内剂量为20-1000个活性单位每千克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，特定适应症为心肌梗塞 和/或缺血再灌注损伤且标准静脉内剂量为20-2000个活性单位每千 克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，特定适应症为脑梗塞和 /或缺血再灌注损伤且标准静脉内剂量为20-2000个活性单位每千克。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 50-80％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少50％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少55％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少60％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少65％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少70％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少75％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，与针对相同剂量归一化 的静脉内施用相比，在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为 至少80％。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，ADAMTS13以单次推 注方式、每月、每两周、每周、一周两次、每日、每12小时、每8 小时、每六小时、每四小时或每两小时施用。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，ADAMTS13为重组的。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，ADAMTS13为血浆源 性的。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，哺乳动物为人类。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，组合物为即用于施用的 稳定水溶液。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，组合物为冻干的。
在本文所提供的方法的一个实施方案中，组合物用适于注射的药 学上可接受的载体复原。
附图简述
图1.图1示出ADAMTS13活性的平均血浆浓度。在皮下施用 之后，ADAMTS13活性的中值Tmax为24h。
图2.图2示出ADAMTS13活性的平均血浆浓度。在皮下施用 之后，ADAMTS13抗原的中值Tmax为28h
图3.图3示出各个动物的观测(圆圈)和预测浓度(实线)。使 用二室模型拟合在静脉内施用之后的浓度，而使用具有一级吸收和一 级消除的一室模型拟合在皮下施用之后的浓度。两个模型均通过包括 对假定的恒定内源性ADAMTS13活性建模的额外协变量而改进。
图4.图4示出各个动物的针对边界值而校正的观测浓度和相应 的预测浓度。使用二室模型预测在静脉内施用之后的浓度，而使用具 有一级吸收和一级消除的一室模型预测在皮下施用之后的浓度。
发明详述
I.引言
ADAMTS13(A13)是一种裂解血管性血友病因子(VWF)多聚体 且下调这些多聚体在血小板聚集中的活性的血浆金属蛋白酶。 ADAMTS13与诸如以下方面的凝血障碍相关：遗传性血栓性血小板 减少性紫癜(TTP)、获得性TTP、脑梗塞、心肌梗塞、缺血性/再灌注 损伤、深静脉血栓形成和弥散性血管内凝血(DIC)，诸如败血症相关 DIC。
目前对这些凝血障碍的治疗涉及静脉内施用ADMTS13制剂。治 疗目前限于静脉内施用，因为ADAMTS13是一种大蛋白且大蛋白在 具有适于皮下施用的高生物利用率的制剂中一般不稳定。成熟的 ADAMTS13的计算分子质量为约145kDa，而纯化的血浆源性 ADAMTS13的表观分子质量为约180kDa，这可能是由于与在TSP1 重复序列中存在10个潜在N-糖基化位点以及若干O-糖基化位点和一 个C-甘露糖基化位点的共有序列一致的翻译后修饰。
由于制剂在皮下施用时的生物利用率较低，诸如ADAMTS13的 大且不稳定的蛋白和分子一般限于静脉内施用。例如，先前的研究报 导了因子VIII(一种170至300kDa的蛋白)一般经静脉内施用，原 因是由于在经皮下、肌内或皮内施用时的吸收不足和降解严重，因子 VIII制剂通常表现出极低的生物利用率。参见PCT/SE95/00348。
例如，已报导在有和无柠檬酸钠作为用于防止降解并增加吸收的 添加剂的情况下，肌内注射的因子VIII浓缩物产生的最大循环水平 仅为正常血浆水平的1.4％(Pool等,NewEnglandJ.Medicine,第275 卷,第10期,第547-548页,1966)。研究进一步揭露无论是否向制剂 中添加此类柠檬酸盐，在循环中回收的活性均不存在显著差异。在一 项随后的研究中，向血友病狗和人类志愿者经肌内施用高纯度的因子 VIII(Johnson等,Br.J.Hematology,第21卷,第21-41页,1971)。尽 管剂量比由Pool等使用的剂量大得多，但狗与人类志愿者均未显示 出血浆因子VIII水平的显著升高。实际上，血友病人类志愿者中的 血浆因子VIII浓度保持在正常血浆水平的1％以下，即在不存在增加 生物利用率的添加剂下，甚至在施用之后，重度A型血友病也盛行。
在皮下递送不如同大的、不稳定的蛋白(诸如因子VIII和 ADAMTS13)一般降解且聚集的小蛋白(诸如因子IX)方面已存在 一些成功。例如，从Berettini等，“SubcutaneousfactorIXadministration topatientswithhemophiliaB,”Am.J.Hematology,47(1):61-62,1994 中，已知在无添加剂的情况下皮下施用因子IX。然而，即使仅为56 kDa的因子IX也表现出较差且非常缓慢的向循环中的转运。
由于诸如如上所述的因子VIII和IX的蛋白的生物利用率较低， 一般不寻求皮下递送大且不稳定的蛋白的方法。相反，通常静脉内给 予此类蛋白以使得制剂直接在血流中可用。然而，如果药剂可皮下给 予，则将是有利的，因为皮下施用是一种微创的施用模式。皮下施用 也是可用于短期和长期疗法的最通用施用模式。皮下施用可通过注射 或通过在皮肤表面之下植入持续释放或定时释放装置而进行。当需要 多次注射或多个装置时，可以轮换注射或装置的部位。
因此，患者处理皮下制剂要容易得多，特别是因为制剂可能必须 在整个生命中(例如早在儿童生命的第一年即开始)定期采用。此外， 皮下递送的容易性和速度使得患者依从性可以增加且在需要时可以 更快地获取药物。因此，ADAMTS13的皮下制剂存在益处且对这些 制剂存在需要。
本发明基于出人意料地发现一种皮下施用纯化的ADAMTS蛋白 的液体和冻干制剂的成功方法。
II.定义
如本文所用，“ADAMTS13”或“A13”是指ADAMTS(具有I型血 栓反应素基序的去整合素和金属蛋白酶)家族的一种金属蛋白酶，其 在残基Tyr1605与Met1606之间裂解血管性血友病因子(vWF)。在本 发明的上下文中，“ADAMTS13蛋白”涵盖任何ADAMTS13蛋白，例 如得自哺乳动物诸如灵长类动物、人类(NP620594)、猴、兔、猪、牛 (XP610784)、啮齿动物、小鼠(NP001001322)、大鼠(XP342396)、仓 鼠、沙鼠、犬科动物、猫科动物、蛙(NP001083331)、鸡(XP415435) 的ADAMTS13，及其生物活性衍生物。如本文所用，“ADAMTS13 蛋白”是指重组和血浆源性ADAMTS13蛋白。也涵盖具有活性的突 变和变体ADAMTS13蛋白，以及ADAMTS13蛋白的功能性片段和 融合蛋白。此外，本发明的ADAMTS13蛋白可进一步包含有助于纯 化、检测或这两者的标签。本文所述的ADAMTS13蛋白可进一步用 治疗性部分或适于体外或体内成像的部分进行修饰。
人类ADAMTS13蛋白包括但不限于包含GenBank登录号NP 620594的氨基酸序列的多肽或其经加工的多肽，例如已移除信号肽 (氨基酸1至29)和/或前肽(氨基酸30-74)的多肽。人类ADAMTS13 的许多天然变体在本领域中是已知的，且由本发明的制剂所涵盖，其 中一些包括选自以下的突变：R7W、V88M、H96D、R102C、R193W、 T196I、H234Q、A250V、R268P、W390C、R398H、Q448E、Q456H、 P457L、P475S、C508Y、R528G、P618A、R625H、I673F、R692C、 A732V、E740K、A900V、S903L、C908Y、C951G、G982R、C1024G、 A1033T、R1095W、R1095W、R1123C、C1213Y、T12261、G1239V 和R1336W。另外，ADAMTS13蛋白包括天然蛋白和已例如因在非 必需氨基酸处的一个或多个保守性突变而突变的重组蛋白。优选地， ADAMTS13的酶活性所必需的氨基酸将不突变。这些氨基酸包括例 如已知或假定为金属结合所必需的残基(诸如残基83、173、224、 228、234、281和284)和存在于酶的活性位点中的残基(例如残基 225)。类似地，在本发明的上下文中，ADAMTS13蛋白包括替代性 异形体，例如缺乏全长人类蛋白的氨基酸275至305和/或1135至1190 的异形体。
同样，ADAMTS13蛋白可例如通过翻译后修饰(例如在一个或 多个选自人类残基142、146、552、579、614、667、707、828、1235、 1354的氨基酸处或任何其它天然或工程改造修饰位点处的糖基化) 或通过离体化学或酶修饰(包括但不限于糖基化、通过水溶性聚合物 实现的修饰(例如聚乙二醇化、唾液酸化、羟乙基淀粉化等)、加标 等)进行进一步修饰。
如本文所用，“凝血障碍”定义为包括血小板募集功能障碍以及中 性粒细胞募集功能障碍的障碍。“凝血障碍”的非限制性实例包括遗传 性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、获得性TTP、脑梗塞、心肌梗塞、 缺血性/再灌注损伤、深静脉血栓形成和弥散性血管内凝血(DIC)，诸 如败血症相关DIC。
如本文所用，“一个单位的ADAMTS13活性”定义为1ml混合的 正常人类血浆中的活性量，无论所用的测定法如何。例如，一个单位 的ADAMTS13FRETS-VWF73活性为裂解与由1ml混合的正常人类 血浆所裂解的相同量的FRETS-VWF73底物所需的活性量(Kokame 等,BrJHaematol.2005年4月；129(1):93-100)。其它活性测定法也可 用于测定一个单位的ADAMTS13的活性。例如，可进行直接 ADAMTS13活性测定法以使用SDS琼脂糖凝胶电泳检测全长VWF 分子或VWF片段的裂解，并且对ADAMTS13活性的间接检测可用 胶原蛋白结合测定法来检测。
如本文所用，术语“ADAMTS13”和“生物活性衍生物”也分别包括 经由重组DNA技术获得的多肽。或者，ADAMTS13也可以指从混合 的人类血液纯化的血浆源性ADAMTS13。例如重组人类ADAMTS13 ("r-hu-ADAMTS13")的重组ADAMTS13("rADAMTS13")可通过本领 域中已知的任何方法产生。关于产生重组ADAMTS13的方法的一个 具体实例在以引用方式并入本文中的WO02/42441中有所公开。这 可包括本领域中已知用于以下目的的任何方法：(i)通过遗传工程改 造，例如经由RNA的逆转录和/或DNA的扩增来产生重组DNA，(ii) 通过转染，即经由电穿孔或显微注射将重组DNA引入原核或真核细 胞中，(iii)例如以连续或分批方式培养所述转化的细胞，(iv)例如组成 型或在诱导后表达ADAMTS13，以及(v)例如从培养基或通过收获转 化的细胞来分离所述ADAMTS13以便(vi)例如经由阴离子交换层析 或亲和层析来获得基本上纯化的重组ADAMTS13。术语“生物活性衍 生物”也包括与Ig组合的嵌合分子，诸如ADAMTS13(或其生物活 性衍生物)，以便改善生物/药理学性质，诸如ADAMTS13在哺乳动 物(尤其是人类)的循环系统中的半衰期。Ig也可具有与任选地突变 的Fc受体的结合位点。
如本文所用，术语“血栓”是指血液凝块，特别是包含血小板的血 液凝块、微血栓和/或栓塞。所述血栓可以或可以不附着到动脉或静 脉血管，并可部分地或完全地阻断血液在动脉或静脉血管中的流动。
如本文所用，“治疗有效量或剂量”或“足够的量或剂量”是指产生 施用所要实现的效应的剂量。精确的剂量将取决于治疗目的，并将能 够由本领域的技术人员使用已知的技术确定(参见例如Lieberman, PharmaceuticalDosageForms(第1-3卷,1992)；Lloyd,TheArt,Science andTechnologyofPharmaceuticalCompounding(1999)；Pickar,Dosage Calculations(1999)；以及Remington:TheScienceandPracticeof Pharmacy,第20版,2003,Gennaro编,Lippincott,Williams&Wilkins)。
如本文所用，盐的“生理浓度”是指药学上可接受的盐在约100 mM与约200mM之间的盐浓度。药学上可接受的盐的非限制性实例 包括但不限于氯化钠和氯化钾、乙酸钠和乙酸钾、柠檬酸钠和柠檬酸 钾、磷酸钠和磷酸钾。
如本文所用，盐的“亚生理浓度”是指药学上可接受的盐低于约 100mM的盐浓度。在优选的实施方案中，盐的亚生理浓度低于约80 mM的药用盐。在另一个优选的实施方案中，盐的亚生理浓度低于约 60mM的药用盐。
如本文所用，术语“约”表示指定值加或减10％的大致范围。例如， 用语“约20％”涵盖18-22％的范围。如本文所用，约也包括精确量。 因此，“约20％”意指“约20％”也意指"20％"。
III.ADAMTS13组合物和制剂
在一个方面，本发明提供如美国专利申请公开号2011/0229455 中所述的血浆源性ADAMTS13和重组ADAMTS13(rADAMTS13)蛋 白的稳定化制剂。在其它实施方案中，本文所提供的制剂在长期储存 时保留显著的ADAMTS13活性。在另外其它实施方案中，本发明的 制剂减少或延迟ADAMTS13蛋白的二聚化、低聚化和/或聚集。
在一个实施方案中，本发明提供ADAMTS13的制剂，其包含治 疗有效量或剂量的ADAMTS13蛋白、亚生理至生理浓度的药学上可 接受的盐、稳定化浓度的一或多种糖和/或糖醇、非离子表面活性剂、 为制剂提供中性pH值的缓冲剂以及任选地钙和/或锌盐。一般来讲， 本文所提供的稳定化ADAMTS13制剂适于药物施用。在一个优选的 实施方案中，ADAMTS13蛋白是如美国专利申请公开号 2011/0229455中所述的人类ADAMTS13或其生物活性衍生物或片 段。
在某些实施方案中，ADAMTS13制剂为液体制剂。在其它实施 方案中，ADAMTS13制剂是如美国专利申请公开号2011/0229455中 所述的从液体制剂冻干的冻干制剂。在本文所提供的制剂的某些实施 方案中，ADAMTS13蛋白是如美国专利申请公开号2011/0229455中 所述的人类ADAMTS13或重组人类ADAMTS13或其生物活性衍生 物或片段。
在某些实施方案中，以约0.05mg/mL与约10mg/mL之间的治疗 有效剂量提供ADAMTS13。在其它实施方案中，ADAMTS13以约 0.1mg/mL与约10mg/mL之间的浓度存在。在另外其它实施方案中， ADAMTS13以约0.1mg/mL与约5mg/mL之间的浓度存在。在另一 个实施方案中，ADAMTS13以约0.1mg/mL与约2mg/mL之间的浓 度存在。在另外其它实施方案中，ADAMTS13可以约0.01mg/mL， 或以约0.02mg/mL、0.03mg/mL、0.04mg/mL、0.05mg/mL、0.06 mg/mL、0.07mg/mL、0.08mg/mL、0.09mg/mL、0.1mg/mL、0.2 mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、 0.8mg/mL、0.9mg/mL、1.0mg/mL、1.1mg/mL、1.2mg/mL、1.3 mg/mL、1.4mg/mL、1.5mg/mL、1.6mg/mL、1.7mg/mL、1.8mg/mL、 1.9mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL、3.5mg/mL、4.0 mg/mL、4.5mg/mL、5.0mg/mL、5.5mg/mL、6.0mg/mL、6.5mg/mL、 7.0mg/mL、7.5mg/mL、8.0mg/mL、8.5mg/mL、9.0mg/mL、9.5 mg/mL、10.0mg/mL或更高的浓度存在。在一个实施方案中，相对纯 的ADAMTS13制剂的浓度可通过光谱法(即在A280下测量的总蛋 白)或其它整体测定(例如Bradford测定法、银染色、冻干粉末的重 量等)加以测定。在其它实施方案中，可通过ADAMTS13ELISA测 定法来测定ADAMTS13的浓度(例如mg/mL抗原)。
在另外其它实施方案中，由本发明所提供的制剂中的 ADAMTS13的浓度可表示为酶活性水平。例如，在一个实施方案中， ADAMTS13制剂可含有约10个单位与约10,000个单位之间的 FRETS-VWF73活性或其它合适的ADAMTS13酶单位(IU)。在其它 实施方案中，该制剂可含有约20个单位与约8,000个单位之间的 FRETS-VWF73(UFV73)活性、或约30个与约6,000个之间的UFV73、 或约40个与约4,000个之间的UFV73、或约50个与约3,000个之间的 UFV73、或约75个与约2,500个之间的UFV73、或约100个与约2,000 个之间的UFV73、或约200个与约1,500个之间的UFV73、或约其中的 其它范围。在一个优选的实施方案中，本文所提供的ADAMTS13制 剂含有约20个与约10,000个之间的UFV73。在某些实施方案中，制 剂含有约10个单位的FRETS-VWF73活性、或约20、30、40、50、 60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、 600、700、800、900、1,000、1,100、1,200、1,300、1,400、1,500、 1,600、1,700、1,800、1,900、2,000、2,100、2,200、2,300、2,400、 2,500、2,600、2,700、2,800、2,900、3,000、3,100、3,200、3,300、 3,400、3,500、3,600、3,700、3,800、3,900、4,000、4,100、4,200、 4,300、4,400、4,500、4,600、4,700、4,800、4,900、5,000、5,100、 5,200、5,300、5,400、5,500、5,600、5,700、5,800、5,900、6,000、 6,100、6,200、6,300、6,400、6,500、6,600、6,700、6,800、6,900、 7,000、7,100、7,200、7,300、7,400、7,500、7,600、7,700、7,800、 7,900、8,000、8,100、8,200、8,300、8,400、8,500、8,600、8,700、 8,800、8,900、9,000、9,100、9,200、9,300、9,400、9,500、9,600、 9,700、9,800、9,900、10,000或更多个单位的FRETS-VWF73活性。
类似地，在某些实施方案中，ADAMTS13的浓度可表示为每单 位体积的酶活性，例如每毫升的ADAMTS13酶单位数(IU/mL)。例如， 在一个实施方案中，ADAMTS13制剂可每毫升含有约10个与约 10,000个之间的IU。在其它实施方案中，制剂可每毫升含有约20个 与约10,000个之间的IU、或每毫升含有约20个与约8,000个之间的 IU、或每毫升含有约30个与约6,000个之间的IU、或每毫升含有约 40个与约4,000个之间的IU、或每毫升含有约50与约3,000个之间 的IU、或每毫升含有约75个与约2,500个之间的IU、或每毫升含有 约100个与约2,000个之间的IU、或每毫升含有约200个与约1,500 个之间的IU、或约其中的其它范围。在一个优选的实施方案中，本 文所提供的ADAMTS13制剂每毫升含有约150个与约600个之间的 IU。在另一个优选的实施方案中，本文所提供的ADAMTS13制剂每 毫升含有约100个与约1,000个之间的IU。在某些实施方案中，制剂 含有约10IU/mL、或约20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、 200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900、1,000、 1,100、1,200、1,300、1,400、1,500、1,600、1,700、1,800、1,900、 2,000、2,100、2,200、2,300、2,400、2,500、2,600、2,700、2,800、 2,900、3,000、3,100、3,200、3,300、3,400、3,500、3,600、3,700、 3,800、3,900、4,000、4,100、4,200、4,300、4,400、4,500、4,600、 4,700、4,800、4,900、5,000、5,100、5,200、5,300、5,400、5,500、 5,600、5,700、5,800、5,900、6,000、6,100、6,200、6,300、6,400、 6,500、6,600、6,700、6,800、6,900、7,000、7,100、7,200、7,300、 7,400、7,500、7,600、7,700、7,800、7,900、8,000、8,100、8,200、 8,300、8,400、8,500、8,600、8,700、8,800、8,900、9,000、9,100、 9,200、9,300、9,400、9,500、9,600、9,700、9,800、9,900、10,000或 更多IU/mL。
在一些实施方案中，本文所提供的ADAMTS13制剂可进一步包 含一种或多种如美国专利申请号20110229455中所述的药学上可接 受的赋形剂、载剂和/或稀释剂。此外，在一个实施方案中，本文所 提供的ADAMTS13制剂具有的张力将在如美国专利申请公开号 2011/0229455中所述的范围内。
在另外的实施方案中，本发明提供ADAMTS13的制剂，其包括 美国专利申请公开号2011/0229455中的第III节(“ADAMTS13 CompositionsandFormulations”)中所述的示例性制剂。
在某些实施方案中，制备ADAMTS13制剂且其包含添加剂。如 美国专利申请公开号2011/0229455的第IV和V节中所述的 ADAMTS13制备方法及其组合物以引用的方式并入本文中。
IV.治疗方法
本文所述的制剂可皮下施用以用于治疗性或预防性治疗。一般来 讲，对于治疗性应用，以“治疗有效剂量”向患有与ADAMTS13或 VWF功能障碍相关的疾病或病症或另外有需要的受试者施用制剂。 有效用于这些用途的制剂和量将取决于疾病或病症的严重性和患者 的一般健康状态。可根据患者所需和耐受的剂量及频率施用单次或多 次制剂施用。
出于本发明的目的的“患者”或“受试者”既包括人类也包括其它 动物(尤其是哺乳动物)。因此，组合物、制剂和方法既适用于人类 疗法也适用于兽医学应用。在一个特定的实施方案中，患者为哺乳动 物，且在一个实施方案中，患者为人类。用于与ADAMTS13或VWF 功能障碍相关的病症的其它已知的治疗和疗法可与本发明所提供的 制剂和方法组合使用。
在某些实施方案中，皮下ADAMTS13制剂通过皮下注射施用。 在具体实施方案中，对于重复或连续注射，将皮下ADAMTS13制剂 皮下注射至患者的相同部位(例如向上臂、大腿前表面、腹下部或上 背施用)。在其它实施方案中，将皮下ADAMTS13制剂皮下注射至 患者的不同或轮换部位。在某些实施方案中，皮下ADAMTS13制剂 通过皮下植入装置施用。在某些实施方案中，植入装置提供 ADAMTS13制剂的定时释放。在某些实施方案中，植入装置提供 ADAMTS13制剂的连续释放。
在某些实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和预 防ADAMTS13和vWF功能障碍。在某些实施方案中，本文所述的 ADAMTS13制剂用于治疗和预防血栓性疾病和病症。在某些实施方 案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和预防梗塞。
在一个实施方案中，将ADAMTS13以20UFV73/千克体重至4000 UFV73/千克体重的剂量施用。在一个实施方案中，将ADAMTS13以 20UFV73/千克体重至2000UFV73/千克体重的剂量施用。在一个实施方 案中，将ADAMTS13以20UFV73/千克体重至1000UFV73/千克体重的 剂量施用。在一个实施方案中，将ADAMTS13以20UFV73/千克体重 至500UFV73/千克体重的剂量施用。在一个实施方案中，将 ADAMTS13以20UFV73/千克体重至200UFV73/千克体重的剂量施用。 在一个实施方案中，将ADAMTS13以20UFV73/千克体重至100UFV73/ 千克体重的剂量施用。在一个实施方案中，将ADAMTS13以40UFV73/ 千克体重至200UFV73/千克体重的剂量施用。在一个实施方案中，将 ADAMTS13以40UFV73/千克体重至100UFV73/千克体重的剂量施用。 在其它实施方案中，将ADAMTS13以约20UFV73/千克体重、30、40、 50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、 500、600、700、800、900、1,000、1,100、1,200、1,300、1,400、1,500、 1,600、1,700、1,800、1,900、2,000、2,100、2,200、2,300、2,400、 2,500、2,600、2,700、2,800、2,900、3,000、3,100、3,200、3,300、 3,400、3,500、3,600、3,700、3,800、3,900、4,000UFV73/千克体重或 其中间浓度或浓度范围施用。
一般来讲，向哺乳动物施用的ADAMTS13的剂量将尤其取决于 所治疗的疾病或病症、哺乳动物的物种、哺乳动物的年龄和哺乳动物 的总体健康状况。技术人员将容易地能够在不同的哺乳动物之间转换 剂量，例如从小鼠剂量转换成人类剂量。一种用于从动物剂量外推出 人类剂量的手段包括使用体表面积，其已知与不同哺乳动物中的若干 代谢参数(例如血容量、循环血浆和肾功能)良好相关。因此，使哺 乳动物的平均体重与平均体表面积相关联的转换因子(例如Km)可 用于使以哺乳动物的单位体重(例如kg)对应的蛋白单位数(例如 质量或活性)表示的用于第一类型的哺乳动物(例如小鼠)的药物剂 量(例如ADAMTS13的剂量)与第二类型的哺乳动物(例如人类) 中的相应剂量相关联。有关综述，参见Reagan-Shaw等,FASEB, 22:659-62(2007)。例如，这可通过以下方式进行：首先将向第一类型 的哺乳动物施用的药物剂量乘以针对该哺乳动物确定的转换因子，然 后将该乘积除以针对第二类型的哺乳动物确定的转换因子。此类转换 因子的实例在下表1中给出，该表采自美国卫生及公共服务部(U.S. DepartmentofHealthandHumanServices)关于估计治疗剂在成人健康 志愿者初步临床试验中的最大安全起始剂量的指导原则。
表1.动物剂量向人类等效剂量的基于体表面积的转换。
a假定60kg的人类。对于未列出的物种或对于超出标准范围的 重量，HED可由以下公式计算：
HED＝以mg/kg表示的动物剂量x(以kg表示的动物重量/以kg 表示的人类重量)0.33。
b提供该km值仅供参考，因为健康儿童将很少为1期试验的志愿 者。
c例如，食蟹猴、恒河猴和短尾猴。
在某些实施方案中，与针对相同剂量归一化的静脉内施用相比， 在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率在至少50％与至少80％ 之间。在某些实施方案中，与针对相同剂量归一化的静脉内施用相比， 在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率在至少60％与至少80％ 之间。在某些实施方案中，与针对相同剂量归一化的静脉内施用相比， 在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率在至少50％与70％之间。 在某些实施方案中，与针对相同剂量归一化的静脉内施用相比，在皮 下施用之后，ADAMTS13的生物利用率在至少55％与65％之间。在 某些实施方案中，与针对相同剂量归一化的静脉内施用相比，在皮下 施用之后，ADAMTS13的生物利用率在至少55％与70％之间。
在某些实施方案中，与针对相同剂量归一化的静脉内施用相比， 在皮下施用之后，ADAMTS13的生物利用率为至少40％、或至少 45％、或至少50％、或至少51％、或至少52％、或至少53％、或至 少54％、或至少55％、或至少56％、或至少57％、或至少58％、或 至少59％、或至少60％、或至少61％、或至少62％、或至少63％、 或至少64％、或至少65％、或至少66％、或至少67％、或至少68％、 或至少69％、或至少70％、或至少71％、或至少72％、或至少73％、 或至少74％、或至少75％、或至少76％、或至少77％、或至少78％、 或至少79％、或至少80％、或至少81％、或至少82％、或至少83％、 或至少84％、或至少85％。
在某些实施方案中，ADAMTS13制剂以单次推注方式皮下施用。 在某些实施方案中，ADAMTS13制剂每月皮下施用。在某些实施方 案中，ADAMTS13制剂每两周皮下施用。在某些实施方案中， ADAMTS13制剂每周皮下施用。在某些实施方案中，ADAMTS13制 剂一周两次皮下施用。在某些实施方案中，ADAMTS13制剂每日皮 下施用。在某些实施方案中，ADAMTS13制剂每12小时皮下施用。 在某些实施方案中，ADAMTS13制剂每8小时皮下施用。在某些实 施方案中，ADAMTS13制剂每六小时皮下施用。在某些实施方案中， ADAMTS13制剂每四小时皮下施用。在某些实施方案中，ADAMTS13 制剂每两小时皮下施用。
在一个实施方案中，ADAMTS13制剂以选自表2中的变化1至 1133的剂量和频率组合皮下施用。一般来讲，向哺乳动物施用的 ADAMTS13的剂量和频率将尤其取决于所治疗的疾病或病症、哺乳 动物的物种、哺乳动物的年龄和哺乳动物的总体健康状况。
表2.皮下施用的ADAMTS13剂量和频率的可用组合。
在某些实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数度量的用 于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 120-300％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约120％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约130％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约140％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约150％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约160％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约170％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约180％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单 位数度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量 的约190％。
在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数度量 的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 200％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 210％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 220％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 230％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 240％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 250％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 260％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 270％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 280％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 290％。在一个具体实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数 度量的用于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约 300％。
在某些实施方案中，皮下施用如以每千克的活性单位数度量的用 于特定适应症的ADAMTS13制剂标准静脉内剂量的量的约120％、 约122％、约125％、约127％、约130％、约132％、约135％、约137％、 约140％、约142％、约145％、约147％、约150％、约152％、约155％、 约157％、约160％、约162％、约165％、约167％、约170％、约172％、 约175％、约177％、约180％、约182％、约185％、约187％、约190％、 约192％、约195％、约97％、约200％、约202％、约205％、约207％、 约210％、约212％、约215％、约217％、约220％、约222％、约225％、 约227％、约230％、约232％、约235％、约237％、约240％、约242％、 约245％、约247％、约250％、约252％、约255％、约257％、约260％、 约262％、约265％、约267％、约270％、约272％、约275％、约277％、 约280％、约282％、约285％、约287％、约290％、约292％、约295％、 约297％或约300％。
在一个实施方案中，皮下施用ADAMTS13制剂以减轻由凝血障 碍(例如梗塞)引起的炎症，从而防止或降低组织损害(例如脑损害)， 和/或以通过防止白细胞浸润和损害来减轻再灌注损伤。在一个实施 方案中，皮下施用ADAMTS13制剂以防止由再灌注引起的对梗塞组 织(例如脑组织和心肌组织)的继发性损伤。
遗传性TTP
在一个实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和预 防遗传性TTP。遗传性TTP归因于ADAMTS13基因的遗传突变。遗 传性TTP可导致神经病学表现(例如精神状态、中风、癫痫、半身 不遂、感觉异常、视力障碍和失语)、疲劳和重度出血。若不治疗， 则获得性TTP可以为致命的或可导致持久的生理损害。此外，因为 遗传性TTP归因于遗传突变，所以需要终身治疗且需要患者依从性。 尽管静脉内递送ADAMTS13制剂有效治疗遗传性TTP，但静脉内递 送药物不易于患者处理(特别是患有遗传性TTP的儿童)且使患者 依从性降低。因此，将有益的是开发皮下ADAMTS13制剂和 ADAMTS13皮下递送方法。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至4000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至4000UFV73/kgADAMTS13约一个月施用 一次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13约一个 月施用两次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13 约一周施用一次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至4000 UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至4000UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施 方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至2000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至2000UFV73/kgADAMTS13约一个月施用 一次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13约一个 月施用两次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13 约一周施用一次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至2000 UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至2000UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施 方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至1000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至1000UFV73/kgADAMTS13约一个月施用 一次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13约一个 月施用两次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13 约一周施用一次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至1000 UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至1000UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施 方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至500个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至500UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将20至500 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至500UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至200UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将20至200 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至200UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至100个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至100UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将20至100 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至100UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为40至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将40UFV73至200UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将40至200 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 40至200UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的遗传性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量和给药频率选自表2中的变化1至1133。在一个具体实 施方案中，哺乳动物为人类。
获得性TTP
在具体实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和预 防获得性TTP。在获得性TTP中，由于产生针对ADAMTS13的自身 免疫抗体，患者具有低ADAMTS13活性。免疫复合的ADAMTS13 失活、被中和和/或从血流和患者血浆中清除。降低的ADAMTS13活 性导致大的未裂解的VWF多聚体累积，这些多聚体可自发粘附到血 小板并在微循环中产生富血小板VWF的血栓。如同遗传性TTP一样， 获得性TTP也可导致神经病学表现(例如精神状态、中风、癫痫、 半身不遂、感觉异常、视力障碍和失语)、疲劳和重度出血。若不治 疗，则获得性TTP可以为致命的或可导致持久的生理损害。因此， 患者对ADAMTS13施用的依从性是防止永久性损害和最终死亡所必 需的。因此，将有益的是开发皮下ADAMTS13制剂和ADAMTS13 皮下递送方法来增加如上所述的患者容易性和依从性。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至4000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至4000UFV73/kgADAMTS13约一个月施用 一次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13约一个 月施用两次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13 约一周施用一次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至4000 UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至4000UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施 方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至2000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至2000UFV73/kgADAMTS13约一个月施用 一次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13约一个 月施用两次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13 约一周施用一次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至2000 UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至2000UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施 方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至1000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至1000UFV73/kgADAMTS13约一个月施用 一次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13约一个 月施用两次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13 约一周施用一次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至1000 UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至1000UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施 方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至500个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至500UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将20至500 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至500UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至200UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将20至200 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至200UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为20至100个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将20UFV73至100UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将20至100 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 20至100UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量为40至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动 物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个 实施方案中，将40UFV73至200UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一 次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13约一个月 施用两次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13约 一周施用一次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13 约一周施用两次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13约每48小时施用一次。在一个实施方案中，将40至200 UFV73/kgADAMTS13约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将 40至200UFV73/kgADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的获得性TTP的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗 有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的 治疗有效量和给药频率选自表2中的变化1至1133。在一个具体实 施方案中，哺乳动物为人类。
心肌梗塞和再灌注损伤
在具体实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和预 防心肌梗塞。在具体实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于 治疗和预防缺血性/再灌注损伤。再灌注是血液恢复向归因于血液供 应降低而缺血的组织的供应。再灌注是一种通过使得有活力的缺血性 组织能够恢复从而限制进一步坏死来治疗梗塞(例如心肌梗塞和脑梗 塞)或其它缺血的过程。然而，再灌注自身可进一步损害缺血性组织， 从而导致再灌注损伤。例如，急性心肌梗塞(AMI)由冠状动脉的血栓 性阻塞引起。除在血流停止期间发生的即刻损伤之外，缺血性/再灌 注损伤也涉及在血流通过再灌注而恢复之后发生的组织损伤。
此外，已报导ADAMTS13具有防止或减轻在缺血性再灌注期间 的继发性损伤的抗炎作用。DeMeyer等(“Protectiveanti-inflammatory effectofADAMTS13onmyocardialischemia/reperfusioninjuryin mice,”Blood,2012,120(26):5217-5223)。如由DeMeyer等所述，VWF 和ADAMTS13牵涉在血小板粘附和血栓形成中，因为ADAMTS13 将大多数血栓形成性VWF多聚体裂解成较小且止血活性较低的 VWF片段。DeMeyer等还描述了ADAMTS在下调炎症反应中的作 用。也已表明ADAMTS13可减轻血栓形成和炎症(例如动脉粥样硬 化)。Chauhan等(“ADAMTS13:anewlinkbetweenthrombosisand inflammation,”JExpMed.,2008,205:2065-2074)；Chauhan等 (“SystemicantithromboticeffectsofADAMTS13,”JExpMed.,2006, 203:767-776；Gandhi等(“ADAMTS13reducesvascularinflammation andthedevelopmentofearlyatherosclerosisinmice,”Blood,2012, 119(10):2385-2391。
DeMeyer等提出ADAMTS13通过裂解VWF而防止缺血性心肌 中过度的VWF介导的血小板和白细胞募集。基于该假设，DeMeyer 等表明当将具有诱导的心肌梗塞的动物用ADAMTS13治疗时，这些 动物的心肌中的中性粒细胞浸润为九分之一。因此，DeMeyer等表 明ADAMTS13降低缺血性心肌中的炎症反应。该减轻的炎症还通过 防止白细胞浸润和损害来减轻再灌注损伤。因此，将有益的是向患者 皮下施用ADAMTS13制剂以避免在梗塞(例如心肌梗塞和脑梗塞) 和再灌注期间导致组织损害的炎症，因为皮下施用比通常由医疗专业 人员施用的静脉内组合物更易于且更快速施用。
在一些实施方案中，药物组合物在发现心肌梗塞后立刻，例如在 5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、 40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、90分钟、110分钟、 120分钟、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、 10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、 17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、 24小时、25小时或更多个小时或其任何组合内施用以治疗梗塞和/或 再灌注损伤。因此，重要的是具有可快速且易于施用的药物组合物。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的心肌梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效 量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗 有效量为20至4000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体 重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施 方案中，将20UFV73至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现 心肌梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的30分钟内施用。在一个实 施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的4小时内施用。在一个实 施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的心肌梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效 量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗 有效量为20至2000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体 重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施 方案中，将20UFV73至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现 心肌梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的30分钟内施用。在一个实 施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的4小时内施用。在一个实 施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的心肌梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效 量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗 有效量为20至1000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体 重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施 方案中，将20UFV73至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现 心肌梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的30分钟内施用。在一个实 施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的4小时内施用。在一个实 施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的心肌梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效 量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗 有效量为20至500个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体 重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施 方案中，将20UFV73至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心 肌梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的30分钟内施用。在一个实 施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的4小时内施用。在一个实 施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的心肌梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效 量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗 有效量为20至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体 重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施 方案中，将20UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心 肌梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的30分钟内施用。在一个实 施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的4小时内施用。在一个实 施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的心肌梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效 量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗 有效量为20至100个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体 重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施 方案中，将20UFV73至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心 肌梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的30分钟内施用。在一个实 施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的4小时内施用。在一个实 施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的心肌梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效 量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗 有效量为40至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体 重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施 方案中，将40UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心 肌梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的30分钟内施用。在一个实 施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的60分钟内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的4小时内施用。在一个实 施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现心肌 梗塞的12小时内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现心肌梗塞的24小时内施用。
脑梗塞
在一个实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和/ 或预防脑梗塞。通常称为中风的脑梗塞在血液向脑的一部分的流动受 阻时发生。脑梗塞可例如发生在向脑供应血液的血管由血液凝块阻塞 时。脑梗塞也可以是钝力创伤和机械损伤的结果。这可由脑动脉中的 凝块引起(血栓性中风)或由来自身体另一部分的行进至脑的凝块引 起(栓塞性中风)。因此，在一些实施方案中，本发明提供一种在脑 梗塞之后改善患者中的感觉和/或运动功能恢复(或减轻对感觉和/或 运动功能的损害)的方法，其包括以下步骤：向个体施用包含治疗有 效量的ADAMTS13蛋白或其生物活性衍生物的药物组合物，从而改 善个体在脑梗塞后的感觉和/或运动功能的恢复(或减轻对感觉和/或 运动功能的损害)。
在一些实施方案中，药物组合物在发现脑梗塞后立刻，例如在5 分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40 分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、90分钟、110分钟、120 分钟、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、 10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、 17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、 24小时、25小时或更多个小时或其任何组合内施用。因此，重要的 是具有可快速且易于施用的药物组合物。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的脑梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效量 的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有 效量为20至4000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重 (UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方 案中，将20UFV73至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑 梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的30分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的4小时内施用。在一个实施 方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的脑梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效量 的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有 效量为20至2000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重 (UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方 案中，将20UFV73至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑 梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的30分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的4小时内施用。在一个实施 方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的脑梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效量 的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有 效量为20至1000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重 (UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方 案中，将20UFV73至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑 梗塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的30分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的4小时内施用。在一个实施 方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的脑梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效量 的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有 效量为20至500个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重 (UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方 案中，将20UFV73至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗 塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的30分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的4小时内施用。在一个实施 方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的脑梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效量 的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有 效量为20至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重 (UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方 案中，将20UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗 塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的30分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的4小时内施用。在一个实施 方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的脑梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效量 的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有 效量为20至100个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重 (UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方 案中，将20UFV73至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗 塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的30分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的60分钟内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的4小时内施用。在一个实施 方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的12小时内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的脑梗塞的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治疗有效量 的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13的治疗有 效量为40至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重 (UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方 案中，将40UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗 塞的10分钟内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的30分钟内施用。在一个实施 方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的60分钟内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的4小时内施用。在一个实施 方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞 的12小时内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现脑梗塞的24小时内施用。
深静脉血栓形成
在一个实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和/ 或预防深静脉血栓形成(DVT)。DVT是在身体深处的静脉中形成的血 液凝块。尽管大多数深静脉凝块出现在小腿或大腿中，但其也可出现 在整个身体中。DVT是一种尤其危险的疾病，因为血液凝块可中断 血流且经由血流行进(栓塞)至例如心脏、肺或脑。此类栓塞可对器 官产生损害且可导致死亡。因此，如上所述，ADAMTS13制剂可用 于治疗DVT和所产生的栓塞。此外，因为DVT可快速产生且导致损 害，所以重要的是具有可快速且易于施用的药物组合物。因此，将有 益的是开发皮下ADAMTS13制剂和ADAMTS13皮下递送方法。
在一些实施方案中，ADAMTS13药物组合物在发现深静脉血栓 形成后立刻，例如在5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、 30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、 90分钟、110分钟、120分钟、3小时、4小时、5小时、6小时、7 小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小 时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小 时、22小时、23小时、24小时、25小时或更多个小时或其任何组合 内施用。因此，重要的是具有可快速且易于施用的药物组合物。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的深静脉血栓形成的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治 疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至4000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物 中发现深静脉血栓形成的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20 至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的30 分钟内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的60分钟内施用。在一个实施方 案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血 栓形成的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的12小时内施用。在 一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发 现深静脉血栓形成的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的深静脉血栓形成的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治 疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至2000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物 中发现深静脉血栓形成的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20 至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的30 分钟内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的60分钟内施用。在一个实施方 案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血 栓形成的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的12小时内施用。在 一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发 现深静脉血栓形成的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的深静脉血栓形成的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治 疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至1000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物 中发现深静脉血栓形成的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20 至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的30 分钟内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的60分钟内施用。在一个实施方 案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血 栓形成的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的12小时内施用。在 一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发 现深静脉血栓形成的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的深静脉血栓形成的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治 疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至500个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现深静脉血栓形成的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至 500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的30分 钟内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在 哺乳动物中发现深静脉血栓形成的60分钟内施用。在一个实施方案 中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓 形成的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的12小时内施用。在 一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发 现深静脉血栓形成的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的深静脉血栓形成的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治 疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现深静脉血栓形成的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至 200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的30分 钟内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在 哺乳动物中发现深静脉血栓形成的60分钟内施用。在一个实施方案 中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓 形成的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的12小时内施用。在 一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发 现深静脉血栓形成的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的深静脉血栓形成的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治 疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至100个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现深静脉血栓形成的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20至 100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的30分 钟内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在 哺乳动物中发现深静脉血栓形成的60分钟内施用。在一个实施方案 中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓 形成的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的12小时内施用。在 一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发 现深静脉血栓形成的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的深静脉血栓形成的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用治 疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为40至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将40UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现深静脉血栓形成的10分钟内施用。在一个实施方案中，将40至 200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的30分 钟内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在 哺乳动物中发现深静脉血栓形成的60分钟内施用。在一个实施方案 中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓 形成的4小时内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现深静脉血栓形成的12小时内施用。在 一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发 现深静脉血栓形成的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向其中有需要的 哺乳动物皮下施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合 物，其中ADAMTS13的治疗有效量为20至4000个单位的 FRETS-VWF73活性每千克哺乳动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实 施方案中，哺乳动物为人类。在一个实施方案中，将20UFV73至4000 UFV73/kgADAMTS13约一个月施用一次。在一个实施方案中，将 20至4000UFV73/kgADAMTS13约一个月施用两次。在一个实施方 案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13约一周施用一次。在一个 实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13约一周施用两次。 在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13约每48小 时施用一次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13 约每24小时施用一次。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物皮下 施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中 ADAMTS13的治疗有效量为20至2000个单位的FRETS-VWF73活 性每千克哺乳动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动 物为人类。在一个实施方案中，将20UFV73至2000UFV73/kg ADAMTS13约一个月施用一次。在一个实施方案中，将20至2000 UFV73/kgADAMTS13约一个月施用两次。在一个实施方案中，将 20至2000UFV73/kgADAMTS13约一周施用一次。在一个实施方案 中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13约一周施用两次。在一个实 施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一 次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13约每 24小时施用一次。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物皮下 施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中 ADAMTS13的治疗有效量为20至1000个单位的FRETS-VWF73活 性每千克哺乳动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动 物为人类。在一个实施方案中，将20UFV73至1000UFV73/kg ADAMTS13约一个月施用一次。在一个实施方案中，将20至1000 UFV73/kgADAMTS13约一个月施用两次。在一个实施方案中，将 20至1000UFV73/kgADAMTS13约一周施用一次。在一个实施方案 中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13约一周施用两次。在一个实 施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一 次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13约每 24小时施用一次。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物皮下 施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中 ADAMTS13的治疗有效量为20至500个单位的FRETS-VWF73活性 每千克哺乳动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物 为人类。在一个实施方案中，将20UFV73至500UFV73/kg ADAMTS13约一个月施用一次。在一个实施方案中，将20至500 UFV73/kgADAMTS13约一个月施用两次。在一个实施方案中，将 20至500UFV73/kgADAMTS13约一周施用一次。在一个实施方案 中，将20至500UFV73/kgADAMTS13约一周施用两次。在一个实 施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。 在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13约每24小时 施用一次。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13 约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物皮下 施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中 ADAMTS13的治疗有效量为20至200个单位的FRETS-VWF73活性 每千克哺乳动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物 为人类。在一个实施方案中，将20UFV73至200UFV73/kg ADAMTS13约一个月施用一次。在一个实施方案中，将20至200 UFV73/kgADAMTS13约一个月施用两次。在一个实施方案中，将 20至200UFV73/kgADAMTS13约一周施用一次。在一个实施方案 中，将20至200UFV73/kgADAMTS13约一周施用两次。在一个实 施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。 在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13约每24小时 施用一次。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13 约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物皮下 施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中 ADAMTS13的治疗有效量为20至100个单位的FRETS-VWF73活性 每千克哺乳动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物 为人类。在一个实施方案中，将20UFV73至100UFV73/kg ADAMTS13约一个月施用一次。在一个实施方案中，将20至100 UFV73/kgADAMTS13约一个月施用两次。在一个实施方案中，将 20至100UFV73/kgADAMTS13约一周施用一次。在一个实施方案 中，将20至100UFV73/kgADAMTS13约一周施用两次。在一个实 施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。 在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13约每24小时 施用一次。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13 约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物皮下 施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中 ADAMTS13的治疗有效量为40至200个单位的FRETS-VWF73活性 每千克哺乳动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物 为人类。在一个实施方案中，将40UFV73至200UFV73/kg ADAMTS13约一个月施用一次。在一个实施方案中，将40至200 UFV73/kgADAMTS13约一个月施用两次。在一个实施方案中，将 40至200UFV73/kgADAMTS13约一周施用一次。在一个实施方案 中，将40至200UFV73/kgADAMTS13约一周施用两次。在一个实 施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13约每48小时施用一次。 在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13约每24小时 施用一次。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13 约每12小时施用一次。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于预防性治疗处于发生深 静脉血栓形成风险中的哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物皮下 施用治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中 ADAMTS13的治疗有效量和给药频率选自表2中的变化1至1133。 在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。
弥散性血管内凝血
在具体实施方案中，本文所述的ADAMTS13制剂用于治疗和预 防弥散性血管内凝血(DIC)，具体地讲败血症相关DIC。DIC是一种 在整个身体的小血管中形成血液凝块的病症。这些血液凝块可降低或 阻断血液在整个身体中的流动且可对组织和器官产生损害。小血管中 的血液凝块由凝结活性的增加所致。此活性增加过度使用可用的血小 板和凝血因子，从而还通过耗尽可用的血小板和凝血因子源而增加严 重内部和外部出血的可能性。因此，具有DIC的患者将通常遭受血 液凝块和重度出血疾病。
诸如败血症、手术/创伤、癌症、分娩/妊娠的并发症、毒蛇咬伤 (响尾蛇和蝰蛇)、冻伤和烧伤的某些疾病可导致凝血因子变得具有 过度活性且可导致DIC。DIC也可以为急性的(在数小时或数天内快 速发生)或慢性的(在数周或数月内发生)。尽管两种类型的DIC都 需要医学治疗，但急性DIC必须立刻治疗以防止小血管中会快速导 致严重出血的过度凝血。因此，重要的是具有可快速且易于施用以治 疗DIC，特别是急性DIC，诸如败血症相关DIC的药物组合物。因 此，将有益的是开发皮下ADAMTS13制剂和ADAMTS13皮下递送 方法。
在一些实施方案中，药物组合物在发现弥散性血管内凝血后立 刻，例如在5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、 35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、90分钟、 110分钟、120分钟、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小 时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小 时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小 时、23小时、24小时、25小时或更多个小时或其任何组合内施用。 因此，重要的是具有可快速且易于施用的药物组合物。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的弥散性血管内凝血的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用 治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至4000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物 中发现弥散性血管内凝血的10分钟内施用。在一个实施方案中，将 20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血 的30分钟内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的60分钟内施用。 在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的4小时内施用。在一个实施方案中，将20 至4000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的 12小时内施用。在一个实施方案中，将20至4000UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的弥散性血管内凝血的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用 治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至2000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物 中发现弥散性血管内凝血的10分钟内施用。在一个实施方案中，将 20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血 的30分钟内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的60分钟内施用。 在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的4小时内施用。在一个实施方案中，将20 至2000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的 12小时内施用。在一个实施方案中，将20至2000UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的弥散性血管内凝血的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用 治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至1000个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物 中发现弥散性血管内凝血的10分钟内施用。在一个实施方案中，将 20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血 的30分钟内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的60分钟内施用。 在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的4小时内施用。在一个实施方案中，将20 至1000UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的 12小时内施用。在一个实施方案中，将20至1000UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的弥散性血管内凝血的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用 治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至500个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20 至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的 30分钟内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的60分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性 血管内凝血的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至500UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的12小时内施用。 在一个实施方案中，将20至500UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的弥散性血管内凝血的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用 治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20 至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的 30分钟内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的60分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性 血管内凝血的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的12小时内施用。 在一个实施方案中，将20至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的弥散性血管内凝血的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用 治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为20至100个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将20UFV73至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的10分钟内施用。在一个实施方案中，将20 至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的 30分钟内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的60分钟内施用。在一个实施 方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性 血管内凝血的4小时内施用。在一个实施方案中，将20至100UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的12小时内施用。 在一个实施方案中，将20至100UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的24小时内施用。
在一个实施方案中，本公开提供一种用于治疗对其有需要的哺乳 动物中的弥散性血管内凝血的方法，该方法包括向哺乳动物皮下施用 治疗有效量的包含经分离的ADAMTS13的组合物，其中ADAMTS13 的治疗有效量为40至200个单位的FRETS-VWF73活性每千克哺乳 动物体重(UFV73/kg)。在一个具体实施方案中，哺乳动物为人类。在一 个实施方案中，将40UFV73至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的10分钟内施用。在一个实施方案中，将40 至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的 30分钟内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13 在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的60分钟内施用。在一个实施 方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性 血管内凝血的4小时内施用。在一个实施方案中，将40至200UFV73/kg ADAMTS13在哺乳动物中发现弥散性血管内凝血的12小时内施用。 在一个实施方案中，将40至200UFV73/kgADAMTS13在哺乳动物中 发现弥散性血管内凝血的24小时内施用。
V.ADAMTS13药剂盒
在另一方面，提供了用于治疗与ADAMTS13或VWF功能障碍 相关的疾病或病症的药剂盒。在一个实施方案中，药剂盒包含 rADAMTS13的制剂。在一些实施方案中，本文所提供的药剂盒可包 含一个或多个剂量的如本文所提供的液体或冻干制剂。当药剂盒包含 冻干rADAMTS13制剂时，一般来讲，药剂盒也将包含适于液体制剂 的复原的液体，例如无菌水或药学上可接受的缓冲液。在一些实施方 案中，药剂盒包含预先包装在注射器中的供医疗保健专业人员皮下施 用或供家庭使用的ADAMTS13制剂。
在一个实施方案中，提供包含约10个单位与约10,000个单位之 间的FRETS-VWF73活性的药剂盒。在其它实施方案中，药剂盒可提 供例如约20个单位与约8,000个单位之间的FRETS-VWF73(UFV73) 活性、或约30个与约6,000个之间的UFV73、或约40个与约4,000个 之间的UFV73、或约50个与约3,000个之间的UFV73、或约75个与约 2,500个之间的UFV73、或约100个与约2,000个之间的UFV73、或约 200个与约1,500个之间的UFV73、或约其中的其它范围。在某些实施 方案中，药剂盒可提供约10个单位的FRETS-VWF73活性、或约20、 30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、 450、500、600、700、800、900、1,000、1,100、1,200、1,300、1,400、 1,500、1,600、1,700、1,800、1,900、2,000、2,100、2,200、2,300、 2,400、2,500、2,600、2,700、2,800、2,900、3,000、3,100、3,200、 3,300、3,400、3,500、3,600、3,700、3,800、3,900、4,000、4,100、 4,200、4,300、4,400、4,500、4,600、4,700、4,800、4,900、5,000、 5,100、5,200、5,300、5,400、5,500、5,600、5,700、5,800、5,900、 6,000、6,100、6,200、6,300、6,400、6,500、6,600、6,700、6,800、 6,900、7,000、7,100、7,200、7,300、7,400、7,500、7,600、7,700、 7,800、7,900、8,000、8,100、8,200、8,300、8,400、8,500、8,600、 8,700、8,800、8,900、9,000、9,100、9,200、9,300、9,400、9,500、 9,600、9,700、9,800、9,900、10,000、11,000、12,000、13,000、14,000、 15,000、16,000、17,000、18,000、19,000、20,000个或更多个单位的 FRETS-VWF73活性。
在某些实施方案中，药剂盒用于单次施用ADAMTS13或单次剂 量的ADAMTS13。在其它实施方案中，药剂盒可包含用于皮下施用 的多次剂量的ADAMTS13。在一个实施方案中，药剂盒可包含预先 包装在注射器中的供医疗保健专业人员皮下施用或供家庭使用的 ADAMTS13制剂。
VI.实施例
实施例1：rADAMTS13在静脉内和皮下施用时的药代动力学性 质
开展该研究以评估在静脉内(i.v.)或皮下(s.c.)施用之后，重组ADAMTS13在小型猪中的药代动力学性质。在该研究中，向4只雄性小型猪静脉内施用ADMTS13(“静脉内组”)且向4只雄性小型猪皮下施用ADMTS13(“皮下组”)。
将雄性小型猪在开始研究之前进行训练以配合研究程序。因此，在施用麻醉剂或测试项目和采集血样期间，动物不受限制。
使用由1.11mg/kg替来他明(tiletamine)、1.11mg/kg唑拉西泮 (zolazepam)、0.56mg/kg甲苯噻嗪、0.56mg/kg开他敏(ketamine)和0.11 mg/kg布托啡诺(butorphanole)组成的Zoletil混合物使动物麻醉(i.m.) 以植入导管。在必要时，将异氟烷用于维持麻醉。在手术期间，动物 经由面罩或气管内导管接受纯氧。将颈静脉区剃毛并消毒。使用 Seldinger技术将中心导管插入颅腔静脉中。在从麻醉中恢复之前，施 用4mg/kg卡洛芬以进行止痛。
静脉内组接受200FRETS-U/kgrADAMTS13静脉内(0.085mL/kg) 的标称剂量。皮下组接受1000FRETS-U/kgrADAMTS13s.c.(0.456 mL/kg)的标称剂量。在施用测试项目之前且在施用测试项目之后5分 钟、1h、3h、6h、9h、24h、32h、48h、56h和72h经由中心静 脉导管采集血样。如下制备血液样品：丢弃前0.5-0.7mL以避免被导 管锁定溶液(生理盐水)稀释。然后，收集0.8mL血液并与0.2mL 柠檬酸钠混合。以5700rpm(1x10分钟、1x5分钟)离心血样。即 将血浆储存在<-60℃下。
通过FRETS测定法测定ADAMTS13活性并通过ELISA测定抗 原。此外，评估了抗人类rADAMTS13的结合抗体的潜在开发以及 rADAMTS13对内源性VWF的多聚体模式的影响。
如所预期，在静脉内施用之后，中值Tmax(达到Cmax的时间)为 5分钟，从而表明即刻的生物利用率。在皮下施用之后，中值Tmax为 24小时(对于ADAMTS13活性)和28小时(对于ADAMTS13抗 原)。ADAMTS13活性的平均血浆浓度在图1中汇总而ADAMTS13 抗原的平均浓度在图2中汇总。
在静脉内施用之后，剂量调整的AUC0-tlast[h*U/mL/U/kg和 h*μg/mL/μg/kg]为0.306(对于活性)和0.373(对于抗原)。使用梯形 法则计算从时间点0至最后采样时间(tlast)的AUC0-tlast(Hauschke等 2007)。在皮下施用之后，剂量调整的AUC0-tlast为0.198(对于活性) 和0.243(对于抗原)。因此，在s.c.和静脉内施用之后，剂量调整的 AUC0-tlast的比率为0.646(对于活性)和0.651(对于抗原)。在静脉 内施用之后，IVR[％]为55.8(活性)和79.3(抗原)，而在皮下施用 之后，IVR[％]为13.8(活性)和17.3(抗原)。
因为在观测期间，rADAMTS13的血浆水平未充分下降，所以对 终末和初始半衰期的估计必须小心审视。因此，依赖性参数(MRT、 Vss、Cls、AUC0-inf)可能也不可靠。将进行跟踪研究以评估这些参 数。对于来自所有动物的所有样品，抗rADAMTS13的结合抗体的评 估均为阴性。
对小型猪的VWF多聚体模式的评估结果指示重组ADAMTS13 对内源性VWF的裂解极其有限(表3)。在接受皮下施用的动物中， 靠近低VWF聚合体的卫星谱带的强度随时间略微增加，但在接受静 脉内施用的动物中，并非如此。VWF多聚体模式的高度在任一组中 均不变化。
表3.通过低和高分辨率琼脂糖凝胶对重组ADAMTS13的多聚 体分析。
实施例2：rADAMTS13在静脉内和皮下施用时的药代动力学性 质
开展该研究以评估在静脉内(i.v.)或皮下(s.c.)施用之后，重组ADAMTS13在小型猪中的药代动力学性质。在该研究中，向4只雄性小型猪静脉内施用ADMTS13(“静脉内组”)且向4只雄性小型猪皮下施用ADMTS13(“皮下组”)。
使雄性小型猪适应研究程序且如实施例1中所述进行麻醉以植入导管。
该研究是每组使用3只和5只雄性小型猪进行的试验。两组均接受200FRETS-U/kgrADAMTS13的标称剂量。对三只动物进行i.v.给药，对另外五只动物进行s.c.给药。在施用测试项目之前且在施用测试项目之后5分钟、1h、2h、6h、5h、23h、30h、47h、54h、71h、78h、95h和102h经由中心静脉导管采集血样。
如下制备血液样品：丢弃前0.5-0.7mL以避免被导管锁定溶液 (生理盐水)稀释。然后，收集0.8mL血液并与0.2mL柠檬酸钠混 合。以5700rpm(1x10分钟、1x5分钟)离心血样。将血浆储存在 <-60℃下。
通过FRETS测定法测定ADAMTS13活性并通过ELISA测定抗 原。
如所预期，在静脉内施用之后，中值Tmax(达到Cmax的时间)为 5分钟，从而表明即刻的生物利用率。在皮下施用之后，中值Tmax为 30h。ADAMTS13活性的平均血浆浓度在图3中汇总而ADAMTS13 抗原的平均浓度在图4中汇总。
在静脉内施用之后，AUC0-tlast[U/mL/*h和μg/mL*h]为68.25(对 于活性)和39.81(对于抗原)。在皮下施用之后，AUC0-tlast为47.16 (对于活性)和26.23(对于抗原)。在静脉内施用之后，IVR[％]为 61.0(活性)和45.6(抗原)，而在皮下施用之后，IVR[％]为13.0(活 性)和9.6(抗原)。
在静脉内施用之后，终末半衰期[h]为46.96(对于活性)和48.83 (对于抗原)。在皮下施用之后，终末半衰期为56.76(对于活性)和 41.25(对于抗原)。在静脉内施用之后，MRT[h]为64.08(活性)和 66.26(抗原)，而在皮下施用之后，MRT[h]为104.2(活性)和77.52 (抗原)。
总之，相对于静脉内施用，皮下施用的生物利用率对于 ADAMTS13抗原和ADAMTS13活性而言分别为65.9％和69.1％。