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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410609145.1 (22)申请日 2014.10.31 103129255 2014.08.25 TW A61K 35/50(2006.01) (71)申请人 超康生物科技股份有限公司 地址 中国台湾台中市 申请人 超微体生医科技股份有限公司 (72)发明人 余哲仁 王璧娟 魏早辰 林华经 庄明熙 刘曲婷 游宜龙 彭秋莹 庄淋翔 (74)专利代理机构 北京北新智诚知识产权代理 有限公司 11100 代理人 郭佩兰 (54) 发明名称 分离胎盘中机能成分的方法 (57) 摘要 本发明提供一种分离胎盘中机能成分的方 法， 是运用超。
2、临界流体技术， 将胎盘粉末置于一萃 取槽内， 在预定压力及温度的操作条件下， 将超临 界状态溶剂通入该萃取槽， 去除胎盘粉末的鱼腥 味并能萃取胎盘粉末中的油脂， 再在前述相同的 操作条件下， 将去除鱼腥味与萃取胎盘油脂后的 胎盘粉末与超临界状态溶剂以预定体积流速比例 流入一吸附槽， 使胎盘粉末中的雌激素为该吸附 槽吸附， 去除雌激素的胎盘萃取物， 继而快速降压 分离超临界状态溶剂， 以获得胎盘粉末中的机能 成分。 本发明所述方法， 可分离出胎盘油脂与雌激 素， 无需繁复的溶剂去除与浓缩、 分离程序， 无溶 剂残留等问题， 成本低， 且能有效改善胎盘粉末产 品风味与营养， 提高胎盘胜肽的吸收效果。
3、及风味 口感。 (30)优先权数据 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 附图8页 CN 105362294 A 2016.03.02 CN 105362294 A 1/1 页 2 1.一种分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 运用超临界流体技术实施以下步 骤 ： 去味与萃取 ： 在预定温度与压力的操作条件下， 将胎盘粉末放置于一萃取槽内， 再将超 临界状态溶剂通入该萃取槽内， 用以去除胎盘粉末的鱼腥味与萃取胎盘粉末中的油脂 ； 吸附雌激素 ： 与前述相同的操作条件下， 将去除鱼腥味与萃取胎盘油脂后的胎盘粉末 与超临。
4、界状态溶剂以预定体积流速比例流入一吸附槽， 用以使胎盘粉末中的雌激素被该吸 附槽吸附， 获致去除雌激素的胎盘萃取物 ； 及 分离 ： 在预定温度与压力的操作条件下， 快速降压分离超临界状态溶剂， 以获得胎盘粉 末中的机能成分。 2.如权利要求 1 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 所述去味与萃取的 步骤中， 胎盘粉末为干燥的人体或羊、 猪、 鹿的胎盘粉末。 3.如权利要求 1 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 去味与萃取的步骤 中， 在压力2000-4000Psi、 温度40-60的操作条件下， 将1-2Kg胎盘素粉末放置于萃取槽， 超临界状态溶剂为超临界二氧化碳 。
5、/ 乙醇， 以 15 ： 1 的体积流速比例流入萃取槽， 萃取时间 为 2-3 小时。 4.如权利要求 1 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 分离的步骤中， 在压 力 1000-1200Psi 与温度 40的操作条件下， 快速降压分离超临界状态溶剂。 5.如权利要求 3 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 最适的操作条件为 ： 压力为 4000Psi、 温度为 60对油脂产率最大。 6.如权利要求 3 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 最适的操作条件为 ： 压力 4000Psi、 温度为 40可分离胎盘粉末中 90-95的雌激素成分， 且从胎盘粉中萃取分。
6、 离的机能成分， 最适合促进脂肪组织来源的干细胞的活化与再生能力。 7.如权利要求 3 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 最适的操作条件为 ： 压力3000Psi、 温度50下， 可从胎盘粉中萃取最高蛋白质含量、 压力4000Psi、 温度40或 60下， 从胎盘粉中萃取分离的蛋白质机能成分最高。 8.如权利要求 1 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 所述萃取槽为内径 60mm、 高度 745mm 的不锈钢槽体。 9.如权利要求 1 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 所述吸附槽为内径 60mm 与高度 450mm 的不锈钢槽体， 其内充填有可吸附雌激素。
7、的吸附剂。 10.如权利要求 8 所述的分离胎盘中机能成分的方法， 其特征在于， 所述吸附剂为硅 胶、 聚酰胺或树脂可吸附雌激素的吸附剂。 权 利 要 求 书 CN 105362294 A 2 1/5 页 3 分离胎盘中机能成分的方法 技术领域 0001 本发明属于分离胎盘中活性成分的技术领域， 更详而言之是指一种可分离出胎盘 中雌激素、 胜肽与维生素和微量元素等机能成分的方法。 背景技术 0002 胎盘为胎儿的营养来源， 含有必需的氨基酸及具有药理活性的胜肽、 维生素、 矿物 质和各种生长因子， 经科学研究发现， 其机能重要成份是免疫球蛋白和延缓衰老基因的胜 肽， 还含有丰富的卵磷脂、 脑磷。
8、脂、 脂多醣、 多种维生素和微量元素， 更有转移因子、 蛋白质 活性因子、 胶原蛋白素和核酸化合物等成分。 因此， 胎盘成分具有抗衰老、 靓丽肌肤、 提高免 疫力与调节内分泌等机能， 不过， 胎盘中的雌激素(estrogen)及黄体酮(progesterone)等 成分， 过量使用会造成心血管疾病与引发癌症等问题。 0003 已知萃取分离胎盘胜肽的方法， 有反复冻融法、 酸或碱水解法、 酶解法等， 如美 国发明公开 US20130072466A1 使用混合溶剂乙酸乙酯、 氯仿、 乙醚、 己烷等有机溶剂萃取 胎盘中雌激素等成分， 萃取后再加入碱性物质沉淀， 最后用酸性物中和萃取物， 此法制程 时。
9、间长， 会产生大量酸、 碱与有机溶剂等废液， 造成机能成分分解与毒性残留 ； 中国专利 CN101837005B 利用碱溶液水解猪胎盘预处理， 经蛋白酶水解， 再以有机溶剂沉淀胎盘中胎 盘脂多醣等机能性成分 ； 美国专利 US3041245 使用酸性水 - 丙酮有机溶剂萃取哺乳动物的 胎盘中白蛋白护肤成分 ； 美国发明公开 US20130072466A1 为使用混合有机溶剂， 萃取胎盘 中雌激素等成分。 0004 前述已知萃取胎盘成分的技术， 不是制程复杂耗时， 制程中常添加大量的酸、 碱、 有机溶剂， 有机溶剂可能会与机能成分产生化学反应， 完成后溶剂去除与浓缩过程中， 加 热蒸发溶剂， 易。
10、造成机能成分被部分破坏， 溶剂会残留于分离物或纯化物中， 皆无法一次简 单、 安全而有效率地分离与完整保留胎盘中雌激素、 胜肽与维生素和微量元素等机能成分。 发明内容 0005 本发明的主要目的在于提供一种分离胎盘中雌激素的方法， 可分离出胎盘油脂与 雌激素， 不需再经繁复的溶剂去除与浓缩、 分离程序， 且无溶剂残留等安全疑虑， 且成本低， 能有效改善胎盘粉末产品风味与营养， 提高胎盘胜肽的吸收效果及良好风味口感， 甚为环 保、 安全， 具实用价值。 0006 为达成前述的目的， 本发明提供一种分离胎盘中机能成分的方法， 其步骤包含有 ： 去味与萃取 ： 在预定温度与压力的操作条件下， 将胎盘。
11、粉末放置于一萃取槽内， 再将超临界 状态溶剂通入该萃取槽内， 用以去除胎盘粉末的鱼腥味与萃取胎盘粉末中的油脂 ； 吸附雌 激素 ： 与前述相同的操作条件下， 将去除鱼腥味与萃取胎盘油脂后的胎盘粉末与超临界状 态溶剂以预定体积流速比例流入一吸附槽， 用以使胎盘粉末中的雌激素被该吸附槽吸附， 获致去除雌激素的胎盘萃取物 ； 分离 ： 在预定温度与压力的操作条件下， 快速降压分离超 临界状态溶剂， 以获得胎盘粉末中的机能成分。 说 明 书 CN 105362294 A 3 2/5 页 4 0007 更进一步地， 所述去味与萃取的步骤中， 胎盘粉末可为干燥的人体或羊、 猪、 鹿等 动物的胎盘粉末。 0。
12、008 更进一步地， 去味与萃取的步骤中， 在压力 2000-4000Psi、 温度 40-60的操作条 件下， 将1-2Kg胎盘素粉末放置于萃取槽， 超临界状态溶剂为超临界二氧化碳/乙醇， 以15 ： 1 的体积流速比例流入萃取槽， 萃取时间为 2-3 小时。 0009 更进一步地， 分离的步骤中， 在压力 1000-1200Psi 与温度 40的操作条件下， 快 速降压分离超临界状态溶剂。 0010 更进一步地， 最适的操作条件为 ： 压力为 4000Psi、 温度为 60对油脂产率最大。 0011 更进一步地， 最适的操作条件为 ： 压力 4000Psi、 温度为 40可分离胎盘粉末中 。
13、90-95的雌激素成分， 且从胎盘粉中萃取分离的机能成分， 最适合促进脂肪组织来源的干 细胞的活化与再生能力。 0012 更进一步地， 最适的操作条件为 ： 压力 3000Psi、 温度 50下， 可从胎盘粉中萃取 最高蛋白质含量、 压力 4000Psi、 温度 40或 60下， 从胎盘粉中萃取分离的蛋白质机能成 分最高。 0013 更进一步地， 所述萃取槽为内径 60mm、 高度 745mm 的不锈钢槽体。 0014 更进一步地， 所述吸附槽为内径 60mm 与高度 450mm 的不锈钢槽体， 其内充填有可 吸附雌激素的吸附剂。 0015 更进一步地， 所述吸附剂为硅胶Silica gel、。
14、 Sephadex(聚酰胺)或Resin(树脂) 等可吸附雌激素的吸附剂。 0016 本发明的有益效果为 ： 通过本发明所述分离胎盘中雌激素的方法， 可分离出胎盘 油脂与雌激素， 不需再经繁复的溶剂去除与浓缩、 分离程序， 且无溶剂残留等安全疑虑， 且 成本低， 能有效改善胎盘粉末产品风味与营养， 提高胎盘胜肽的吸收效果及良好风味口感， 甚为环保、 安全， 具实用价值。 附图说明 0017 图 1 为本发明一较佳实施例的流程图。 0018 图 2 为本发明一较佳实施例中胎盘粉末在萃取槽中的油脂产率图。 0019 图 3 为本发明一较佳实施例中雌激素成分在萃取槽与吸附槽中被萃取分离的效 率分析图。
15、。 0020 图 4 为本发明一较佳实施例中 ADSC 存活率分析图。 0021 图 5 为本发明一较佳实施例中萃取蛋白质的含量分析图。 0022 图 6A 为本发明一较佳实施例中蛋白质分子量 58000 时的含量分析图。 0023 图 6B 为本发明一较佳实施例中蛋白质分子量 14600 时的含量分析图。 0024 图 7 为本发明一较佳实施例中蛋白质的胜肽机能成分的含量分析图。 具体实施方式 0025 以下， 举本发明一较佳实施例， 并配合附图做进一步的详细说明如后 ： 0026 首先， 请参阅图 1 所示， 本发明一较佳实施例分离胎盘中机能成分的方法 100， 可 去除胎盘粉末的鱼腥味、。
16、 萃取胎盘油脂、 雌激素、 胜肽与维生素和微量元素， 其第一步骤为 说 明 书 CN 105362294 A 4 3/5 页 5 去味与萃取 110 ： 在压力 2000-4000Psi、 温度 40-60的操作条件下， 将 1-2Kg 胎盘素粉末 放置于一萃取槽， 再将超临界状态溶剂通入萃取槽内， 进行萃取油脂流程， 萃取时间为 2-3 小时， 用以萃取胎盘粉末中的油脂， 将其收集于萃取槽底部。胎盘粉末可为干燥的人体或 羊、 猪、 鹿等动物的胎盘粉末， 超临界状态溶剂为超临界状态二氧化碳 SC-CO2/ 乙醇溶剂， 该 萃取槽为内径 60mm、 高度 745mm 的不锈钢槽体， 其内充填有不。
17、锈钢单体片。 0027 本发明的第二步骤为吸附雌激素 120 ： 在与前述相同的操作条件 ( 压力 2000-4000Psi、 温度 40-60 ) 下， 将去除鱼腥味与萃取胎盘油脂后的胎盘粉末， 与体积流 速比例为 15 ： 1 的超临界状态溶剂流入萃取槽， 并同时再经过一吸附槽内， 使胎盘粉末中的 雌激素被该吸附槽吸附， 吸附时间为 2-3 小时。该吸附槽为内径 60mm 与高度 450mm 的不锈 钢槽体， 内部充填有如硅胶 Silica gel、 Sephadex( 聚酰胺 ) 或 Resin( 树脂 ) 等可吸附雌 激素的吸附剂。 0028 本发明的第三步骤为分离 130 ： 在压力。
18、 1000-1200Psi 与温度 40的操作条件下， 快速降压分离超临界状态溶剂， 用以可从吸附槽底部收集胎盘粉末萃取的机能成分。 0029 以下， 利用不同的操作条件 ( 改变压力与超临界状态溶剂的体积流速比例 ) 实施 前述方法， 取胎盘粉末样品、 萃取槽底部的收集样品与吸附槽底部的收集样品， 分析定量以 下物化性质 ： (1)油脂产率、 (2)雌激素浓度、 (3)脂肪组织来源的干细胞(adipose derived stem cells ； ADSC) 的活化能力、 (4) 蛋白质浓度、 (5) 蛋白质电泳、 (6) 胜肽浓度。 0030 油脂产率的测量， 计算收集萃取槽底部的油脂质量。
19、， 比较放置于萃取槽中的胎 盘粉末质量， 以单位表示。雌激素浓度的测量， 计算吸附槽底部的收集样品， 比较放 置于萃取槽中的胎盘粉末样品， 以 ELISA 定量雌激素浓度， 计算去除雌激素的去除率 (Rejection, )。ADSC 活化能力的测量， 收集吸附槽底部的收集样品， 以细胞流式仪分析， 单位以表示。蛋白质浓度的测量， 分析吸附槽底部的收集样品， 以 Bradford 蛋白浓度测 定试剂定量分析， 单位以 mg/g dw 表示。蛋白质电泳分析， 分析吸附槽底部的收集样品， 以 SDS-PAGE蛋白质电泳胶体分析， 单位以mg/g dw表示。 胜肽浓度的测量， 分析吸附槽底部的 收集。
20、样品， 以 C18 管柱的 HPLC 定量分析， 单位以 mg/g dw 表示。 0031 实验结果分为四部分 ： (1) 油脂产率的最适萃取条件， (2) 胎盘中的雌激素成分 最适分离条件， (3)ADSC 化能力的萃取条件选择， (4) 蛋白质、 胜肽与活性成分浓度的萃 取条件选择， 数据分析如图 2 至图 7 所示。图 2 的曲线代表， 超临界状态溶剂在操作压力 2000-4000Psi 与温度 40-60下， 胎盘粉末在萃取槽的油脂产率。当将压力从 2000 增加至 为 4000psi， 温度从 40 增加至为 60， 油脂产率的效率显著增加。随着超临界状态溶剂操 作压力与密度的上升，。
21、 超临界状态溶剂与油脂的溶解度相对增加， 温度的升高也提升油脂 的蒸气压， 进而油脂的溶解度增大。因此， 图 2 显示压力 4000Psi 与温度 60对油脂产率 最大。图 3 的曲线显示， 以体积比例为 15 ： 1 的超临界状态溶剂， 在操作压力 2000-4000Psi 与温度 40-60下， 雌激素成分在萃取槽与吸附槽中被萃取分离的效率。6-7含量的乙醇 被当为超临界二氧化碳的共溶剂， 促进超临界状态溶剂容易渗透于胎盘粉中， 提高胎盘粉 中雌激素成分萃取率和分离效果。因此， 图 3 显示压力 4000Psi 下的高传质与低粘度等效 果， 配合温度 40操作条件下， 分离胎盘粉中 90-。
22、95的雌激素成分。相似的现象也在图 4 的实验结果显示， 分析收集吸附槽底部的样品的 ADSC 活化能力表现， 显示超临界状态溶 剂， 在操作压力 4000Psi 与温度 40下， 从胎盘粉中萃取分离的机能成分， 最适合促进脂肪 说 明 书 CN 105362294 A 5 4/5 页 6 组织来源的干细胞的活化与再生能力。图 5 实验图解中， 以超临界状态溶剂， 在操作压力 3000Psi 与温度 50下， 可以从胎盘粉中萃取最高蛋白质含量。以蛋白质电泳胶体分析相 同这些分离条件得到的样品， 对照标准的蛋白质分子量11,000至180,000与样品分析胶体 图谱， 分别于分子量 14,600。
23、 与 58,000 显示， 分析结果显示在图 6A 与图 6B 中。在操作压力 4000Psi 与温度 40与 60下， 从胎盘粉中萃取分离的蛋白质机能成分最高。比较图 5 与 图 6 的数据显示， 选择操作压力 4000Psi 与温度 60， 有利分子量 58,000 的蛋白质机能成 分的分离。图 7 的实验结果显示， 利用 HPLC 分析分离蛋白质中的胜肽机能成分， 选择操作 压力 4000Psi， 有利小分子量的胜肽机能成分的分离。 0032 运用超临界二氧化碳、 超临界二氧化碳与乙醇为溶剂， 具有高的溶解度及传质速 率， 且使用低温、 低粘度及高密度促进萃取机能成分的接触机会， 可加速。
24、且有选择性从胎盘 粉末中， 分离胎盘中如雌激素、 胜肽与维生素和微量元素等机能成分。因此， 本专利提出的 制备方法， 可避免已知以酸、 碱与酵素分解时， 使用大量有机溶剂进行水解雌激素成分结构 所产生的缺点。 0033 此外， 为比较本发明与已知传统透析萃取技术功效上的差异， 进行下列实验 ： (1) 胎盘粉末加入质量 20 倍的生理食盐水均质后， 以排拒分子量 (Molecular Weight Cutoff)14,000 透析管， 放置 5 倍均质液的 RO 水透析 6 小时， 得到萃取样品 ； (2) 本发明的 方法。将两种处理方式所得到的萃取液， 分析以下物化性质 ： (1) 颜色、 。
25、(2) 鱼腥味、 (3) 雌 激素浓度、 (4)ADSC 活性、 (5) 蛋白质浓度、 (6) 胜肽浓度。颜色变化以日本 Denshoku90 色差仪测量， 以 Hunter L， a， b 值表示。鱼腥味以专业人员闻萃取样品， 品评分数由 0 至 10 分， 10 分为最被认可， 0 分为最无法被接受。 0034 实验结果的数据分析如表一所示。 表一中显示本发明与传统透析处理的胎盘粉样 品中， 本发明所萃取得到样品的 L 值接近 94。Hunter L 值可由 0 至 100 表示， 越接近 100 时， 即表示其透明度与澄清度越高。当 Hunter a 值越高， 即表示其颜色的红色色度越深。
26、， 而 Hunter b 值越高时， 显示其颜色黄色浓度越浓， 透析处理的胎盘粉样品呈现深黄的混浊状， 因此传统透析处理的胎盘样品其外观、 颜色与澄清度均无法被接受。本发明制备的样品除 了具有清澈外观感觉， 样品也无鱼腥味与雌激素。 再如表一所示， 本发明制备的样品也具有 高含量蛋白质与胜肽浓度与高的 ADSC 活性能力。 0035 表一 ： 0036 说 明 书 CN 105362294 A 6 5/5 页 7 0037 由上可知， 本发明所提供分离胎盘中机能成分的方法， 其采用安全无毒的超临界 状态溶剂， 配合物理方式的去味与萃取、 吸附与分离的步骤， 在超临界状态溶剂的高溶解 度、 低粘。
27、度与高质传效率下， 可加速且有选择性从胎盘粉末中， 分离出如雌激素、 胜肽与维 生素和微量元素等机能成分， 且无溶剂残留等安全疑虑， 环保、 安全， 超临界状态溶剂更可 回收再利用， 相较于已知以酸、 碱与酵素分解再配合大量有机溶剂水解的方式， 导致有残留 溶剂的安全疑虑的缺点， 本发明显然更具进步性， 甚具实用价值。 说 明 书 CN 105362294 A 7 1/8 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 8 2/8 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 9 3/8 页 10 图 3 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 10 4/8 页 11 图 4 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 11 5/8 页 12 图 5 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 12 6/8 页 13 图 6A 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 13 7/8 页 14 图 6B 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 14 8/8 页 15 图 7 说 明 书 附 图 CN 105362294 A 15 。