一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油.pdf

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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201511014680.3 (22)申请日 2015.12.29 A61K 39/39(2006.01) A61P 31/14(2006.01) A61K 39/15(2006.01) (71)申请人 天津佐沐生物科技有限公司 地址 300000 天津市滨海新区经济技术开发 区洞庭路 220 号天津国际医药联合研 究院 14 层 S1401、 1421 室 (72)发明人 刘恒权 吴全忠 米娜 王寿山 高小光 张忠江 (54) 发明名称 一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油 (57) 摘要 本发明提供了一种低倾点的灭活疫苗佐剂专 用白油， 。

2、该技术方案研究发现， 限定原子数处于 15 26 范围内的烃类化合物能够在保证佐剂性 能的基础上降低白油的倾点， 进一步发现， 含 C20 以上馏分较多的矿物油抗体效价较低， 而馏分主 要集中在 C16-20 之间的抗体效价最高且副作用 比较小。 在此基础上， 本发明进一步研究了白油成 分微观结构对倾点及生物吸收效果的影响， 发现 当含有特定含量的链状烷烃且主链上严格带有 1 个甲基侧链时， 能够打破分子的规整性， 显著降低 分子低温结晶的概率， 同时在微观结构层面较为 接近正构烷烃， 满足了生物体对于正构烷烃的生 理需求。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12。

3、)发明专利申请 权利要求书1页 说明书9页 附图2页 CN 105497892 A 2016.04.20 CN 105497892 A 1.一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述白油由碳原子数为1526的 烃类化合物组成。 2.根据权利要求1所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述白油由碳 原子数为1520的烃类化合物组成。 3.根据权利要求1或2所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述烃类化 合物是烷烃。 4.根据权利要求3所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述烃类化合 物中链烷烃的含量为8090(w/w)。 5.根据权利要求4所述的低倾点的。

4、灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述链烷烃的 主链上具有1个甲基侧链。 6.根据权利要求5所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述链烷烃的 主链上不具有乙基及以上侧链。 7.根据权利要求6所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述链烷烃的 主链上不具有叔丁基结构。 8.根据权利要求7所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述白油中正 构烷烃含量为510(w/w)。 9.根据权利要求7所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述白油的倾 点为-24-3。 10.根据权利要求7所述的低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 其特征在于所述白油在40 时的运动粘度为3。

5、.55mm2/s。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105497892 A 2 一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油 技术领域 0001 本发明涉及疫苗佐剂技术领域， 具体涉及一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油。 背景技术 0002 佐剂， 又称免疫增强剂， 是与抗原一起或预先注入机体时可有效增强免疫应答的 强度或改变免疫应答的类型的非特异性免疫增强剂。 动物疫苗佐剂的种类有许多， 不同佐 剂对动物能产生不同的免疫效果， 选取适当的佐剂， 可以提高疫苗的免疫水平， 增强动物的 抗病能力。 0003 目前最常用的禽用灭活疫苗的佐剂是以白油为主的油乳佐剂， 如目前常用的禽流 感油乳剂灭活疫苗、。

6、 新城疫油乳剂灭活疫苗等。 0004 油乳佐剂可以使单一或者多种抗原产生高滴度抗体且免疫周期较长， 其作用机理 大致可作如下解释： 其一， 包被在油滴中的特异性抗原释放缓慢， 能连续刺激机体产生特异 性免疫应答； 其二， 油滴能诱发机体局部产生炎症反应， 有利于刺激免疫细胞的增殖， 增强 体液和细胞免疫应答； 其三， 特异性抗原包被在油滴中， 避免被体液中的酶迅速分解， 降低 抗原分解速度， 延长作用时间； 其四， 油乳剂能将注射部位的特异性抗原经淋巴系统运送至 全身的淋巴结和脾脏处产生一种新刺激诱生抗体。 0005 油乳佐剂的生物活性与其粘度、 乳状液类型、 乳化剂稳定性等有密切关系。 油乳。

7、佐 剂的粘度太大会影响乳滴表面活性剂的结构， 造成佐剂活性降低。 同时， 油乳剂粘稠度太 高， 倾点高给注射带来困难、 给冬季北方客户使用带来诸多不便， 另外， 白油乳剂灭活疫苗 还存在毒副反应较强(过敏)、 引起注射部位红肿、 化脓等现象， 因此如果能降低白油的倾点 则有可能解决上述问题， 然而要降低白油倾点则势必对其成分加以改进， 由于白油属于多 组分有机物， 因此在技术改进的过程中应当确保不影响其免疫促进作用， 同时还应当考虑 吸收效果及药物残留等问题。 发明内容 0006 本发明旨在针对现有技术的技术缺陷， 提供一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白 油， 以解决现有技术中用于疫苗佐剂的白油倾。

8、点较高的技术问题。 0007 本发明要解决的另一技术问题是现有技术中用于疫苗佐剂的白油免疫促进作用 较低。 0008 为实现以上技术目的， 本发明采用以下技术方案： 0009 一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 所述白油由碳原子数为1526的烃类化合 物组成。 0010 作为优选， 所述白油由碳原子数为1520的烃类化合物组成。 0011 在以上任一项技术方案基础上优选的， 所述烃类化合物是烷烃。 0012 进一步优选的， 所述烃类化合物中链烷烃的含量为8090(w/w)。 0013 进一步优选的， 所述链烷烃的主链上具有1个甲基侧链。 说 明 书 1/9 页 3 CN 105497892 A。

9、 3 0014 进一步优选的， 所述链烷烃的主链上不具有乙基及以上侧链。 0015 进一步优选的， 所述链烷烃的主链上不具有叔丁基结构。 0016 在此基础上可以进一步执行以下优选： 所述白油中正构烷烃含量为510(w/ w)； 所述白油的倾点为-24-3； 所述白油在40时的运动粘度为3.55mm2/s。 0017 在以上技术方案中， 所述链烷烃是指非环状烷烃； 所述乙基及以上侧链是指碳原 子数大于等于2的侧链基团。 在以上技术方案中， 用于白油制备的原料均属于常规有机化合 物， 可以利用有机化学领域的一般技术方法获得。 所述白油亦可依照本领域中通用的白油 制备方法制备。 0018 本发明研。

10、究发现， 限定原子数处于1526范围内的烃类化合物能够在保证佐剂性 能的基础上降低白油的倾点， 进一步发现， 含C20以上馏分较多的矿物油抗体效价较低， 而 馏分主要集中在C16-20之间的抗体效价最高且副作用比较小。 在此基础上， 本发明进一步 研究了白油成分微观结构对倾点及生物吸收效果的影响， 发现当含有特定含量的链状烷烃 且主链上严格带有1个甲基侧链时， 能够打破分子的规整性， 显著降低分子低温结晶的概 率， 同时在微观结构层面较为接近正构烷烃， 满足了生物体对于正构烷烃的生理需求。 0019 本发明提供的专用白油倾点低， 能够满足低灭活疫苗低温下的使用需求， 使疫苗 在寒冷的环境下使用。

11、不会导致结晶而破坏疫苗的整体稳定性， 易于注射， 效价高， 稳定不易 分层， 注射后副反应低， 能够长时间保持在一个较高的抗体水平， 较适于平时的预防接种。 附图说明 0020 图1是本发明实施例1中由不同白油佐剂所制备的呼肠孤病毒油乳灭活疫苗免疫 动物后， 其体内抗体变化曲线。 0021 图2是本发明实施例2由不同白油佐剂所制备的呼肠孤病毒油乳灭活疫苗免疫动 物后， 其体内抗体变化曲线。 0022 图3是本发明实施例3由不同白油佐剂所制备的呼肠孤病毒油乳灭活疫苗免疫动 物后， 其体内抗体变化曲线。 具体实施方式 0023 以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。 为了避免过多不必要的细节，。

12、 在 以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。 0024 以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述， 表明在不改变基本功能的情 况下可允许数量有一定的变动。 因此， 用 “大约” 、“左右” 等语言所修正的数值不限于该准确 数值本身。 在一些实施例中，“大约” 表示允许其修正的数值在正负百分之十(10)的范围 内变化， 比如，“大约100” 表示的可以是90到110之间的任何数值。 此外， 在 “大约第一数值到 第二数值” 的表述中， 大约同时修正第一和第二数值两个数值。 在某些情况下， 近似性语言 可能与测量仪器的精度有关。 0025 除有定义外， 以下实施例中所用的技术和科。

13、学术语具有与本发明所属领域技术人 员普遍理解的相同含义。 0026 以下实施例中所用的试验试剂耗材， 如无特殊说明， 均为常规生化试剂； 所述实验 方法， 如无特殊说明， 均为常规方法； 以下实施例中的定量试验， 均设置三次重复实验， 结果 说 明 书 2/9 页 4 CN 105497892 A 4 取平均值； 以下实施例中的， 如无特别说明， 均为质量百分含量。 0027 实施例1 0028 本实施例疫苗佐剂专用白油(ZY-WI)及作为对照的市售常规疫苗佐剂专用白油 (CK-I及CK-II)的特征指标如表1所示。 0029 表1本实施例三种白油佐剂理化指标 0030 0031 0032 根。

14、据 中华人民共和国兽药典兽医生物制品制造及检验规程 对白油佐剂的质 量要求， 对本发明提供的疫苗佐剂专用白油ZY-WI进行了生物安全性、 乳化性能、 粘度、 稳定 性检验， 并制备了呼肠孤病毒油乳灭活疫苗； 同时， 以相同的工艺、 同批次的抗原和实验动 物、 在同一时间， 用CK-I和CK-II为佐剂制备了呼肠孤病毒油乳灭活疫苗， 在完全相同的条 件下进行了免疫效果比较。 0033 稳定性实验。 用10mL刻度离心管加入10mL疫苗， 3000r/min离心20min， 观察是否有 水相析出； 将疫苗于37存放20d， 室温放置45d， 观察期是否破乳。 实验结果见表2。 0034 表2以本实。

15、施例三种白油佐剂所制备的呼肠孤灭活疫苗物理性状检测结果 0035 说 明 书 3/9 页 5 CN 105497892 A 5 0036 效力实验。 分别以ZY-WI和CK-I、 CK-II白油佐剂配制呼肠孤灭活疫苗， 相同条件下 于免疫20日龄SPF鸡， 20 L/只， 分不同时间段采血并分离血清， 进行呼肠孤抗体的检测， 从 而确定ZY-WI白油和CK-I、 CK-II制备疫苗的免疫效力， 同时对2批次呼肠孤灭活疫苗免疫后 SPF鸡所产生的最高抗体效价、 保护性抗体产生的时间及保护性抗体维持时间进行比较， 确 定2种白油佐剂的免疫效果差别。 实验结果如图1、 表3所示。 0037 表3以本。

16、实施例三种白油佐剂所制备的呼肠孤灭活疫苗免疫效果比较 0038 0039 本实施例白油(ZY-WI)的倾点为-26， 冬季使用方便， 即使在北方寒冷的冬季， 也 不影响疫苗使用。 与呼肠孤抗原混合， 稳定不易分层， 免疫SPF鸡后， 未有过敏和吸收不好的 症状， 效价水平较高， 并且能够长时间保持一个较高的效价水平。 0040 实施例2 说 明 书 4/9 页 6 CN 105497892 A 6 0041 本实施例疫苗佐剂专用白油(ZY-WII)及作为对照的市售常规疫苗佐剂专用白油 (CK-III及CK-IV)的特征指标如表4所示。 0042 表4本实施例三种白油佐剂理化指标 0043 00。

17、44 0045 根据 中华人民共和国兽药典兽医生物制品制造及检验规程 对白油佐剂的质 量要求， 对本发明提供的疫苗佐剂专用白油ZY-WII进行了生物安全性、 乳化性能、 粘度、 稳 定性检验， 并制备了呼肠孤病毒油乳灭活疫苗； 同时， 以相同的工艺、 同批次的抗原和实验 动物、 在同一时间， 用CK-III和CK-IV为佐剂制备了呼肠孤病毒油乳灭活疫苗， 在完全相同 的条件下进行了免疫效果比较。 0046 稳定性实验。 用10mL刻度离心管加入10mL疫苗， 3000r/min离心20min， 观察是否有 水相析出； 将疫苗于37存放20d， 室温放置45d， 观察期是否破乳。 实验结果见表5。

18、。 0047 表5以本实施例三种白油佐剂所制备的呼肠孤灭活疫苗物理性状检测结果 0048 说 明 书 5/9 页 7 CN 105497892 A 7 0049 效力实验。 分别以ZY-WII和CK-III、 CK-IV白油佐剂配制呼肠孤灭活疫苗， 相同条 件下于免疫20日龄SPF鸡， 20 L/只， 分不同时间段采血并分离血清， 进行呼肠孤抗体的检 测， 从而确定ZY-WII白油和CK-III、 CK-IV制备疫苗的免疫效力， 同时对2批次呼肠孤灭活疫 苗免疫后SPF鸡所产生的最高抗体效价、 保护性抗体产生的时间及保护性抗体维持时间进 行比较， 确定2种白油佐剂的免疫效果差别。 实验结果如图。

19、2、 表6所示。 0050 表6以本实施例三种白油佐剂所制备的呼肠孤灭活疫苗免疫效果比较 0051 0052 本实施例白油(ZY-WII)的倾点为-3， 与呼肠孤抗原混合， 稳定不易分层， 免疫 SPF鸡后， 未有过敏和吸收不好的症状， 效价水平较高， 并且能够长时间保持一个较高的效 价水平。 0053 实施例3 0054 本实施例疫苗佐剂专用白油(ZY-WIII)及作为对照的市售常规疫苗佐剂专用白油 说 明 书 6/9 页 8 CN 105497892 A 8 (CK-V及CK-VI)的特征指标如表7所示。 0055 表7本实施例三种白油佐剂理化指标 0056 0057 根据 中华人民共和国。

20、兽药典兽医生物制品制造及检验规程 对白油佐剂的质 量要求， 对本发明提供的疫苗佐剂专用白油ZY-WIII进行了生物安全性、 乳化性能、 粘度、 稳 定性检验， 并制备了呼肠孤病毒油乳灭活疫苗； 同时， 以相同的工艺、 同批次的抗原和实验 动物、 在同一时间， 用CK-V和CK-VI为佐剂制备了呼肠孤病毒油乳灭活疫苗， 在完全相同的 条件下进行了免疫效果比较。 0058 稳定性实验。 用10mL刻度离心管加入10mL疫苗， 3000r/min离心20min， 观察是否有 水相析出； 将疫苗于37存放20d， 室温放置45d， 观察期是否破乳。 实验结果见表8。 0059 表8以本实施例三种白油佐。

21、剂所制备的呼肠孤灭活疫苗物理性状检测结果 0060 0061 效力实验。 分别以ZY-WIII和CK-V、 CK-VI白油佐剂配制呼肠孤灭活疫苗， 相同条件 说 明 书 7/9 页 9 CN 105497892 A 9 下于免疫20日龄SPF鸡， 20 L/只， 分不同时间段采血并分离血清， 进行呼肠孤抗体的检测， 从而确定ZY-WIII白油和CK-V、 CK-VI制备疫苗的免疫效力， 同时对2批次呼肠孤灭活疫苗免 疫后SPF鸡所产生的最高抗体效价、 保护性抗体产生的时间及保护性抗体维持时间进行比 较， 确定2种白油佐剂的免疫效果差别。 实验结果如图3、 表9所示。 0062 表9以本实施例三。

22、种白油佐剂所制备的呼肠孤灭活疫苗免疫效果比较 0063 0064 0065 本实施例白油(ZY-WIII)的倾点为-3， 与呼肠孤抗原混合， 稳定不易分层， 免疫 SPF鸡后， 未有过敏和吸收不好的症状， 效价水平较高， 并且能够长时间保持一个较高的效 价水平。 0066 实施例4 0067 本实施例疫苗佐剂专用白油(ZY-WIV)及作为对照的市售常规疫苗佐剂专用白油 (CK-VII及CK-VIII)的特征指标如表10所示。 0068 表10本实施例三种白油佐剂理化指标 0069 说 明 书 8/9 页 10 CN 105497892 A 10 0070 本实施例白油(ZY-WIV)的倾点为-。

23、12， 冬季使用方便。 乳化后， 做成油包水乳液 后， 与呼肠孤抗原混合后， 稳定不易分层， 较低温度下容易注射， 未有过敏和吸收不好的症 状。 0071 实施例5 0072 一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 所述白油由碳原子数为1520的烷烃类化 合物组成。 其中链烷烃的含量为80(w/w)， 所述链烷烃的主链上具有1个甲基侧链， 其主链 上不具有乙基及以上侧链， 所述链烷烃的主链上不具有叔丁基结构。 0073 实施例6 0074 一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 所述白油由碳原子数为1526的烷烃类化 合物组成。 其中链烷烃的含量为90(w/w)， 所述链烷烃的主链上具有1个甲基侧链。 0075 实施例7 0076 一种低倾点的灭活疫苗佐剂专用白油， 所述白油由碳原子数为1526的烃类化合 物组成。 0077 以上对本发明的实施例进行了详细说明， 但所述内容仅为本发明的较佳实施例， 并不用以限制本发明。 凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、 等同替换和改进等， 均应 包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 9/9 页 11 CN 105497892 A 11 图1 图2 说 明 书 附 图 1/2 页 12 CN 105497892 A 12 图3 说 明 书 附 图 2/2 页 13 CN 105497892 A 13 。