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1、(10)申请公布号 CN 103998013 A (43)申请公布日 2014.08.20 CN 103998013 A (21)申请号 201180075734.0 (22)申请日 2011.12.21 A61K 8/40(2006.01) A61K 8/36(2006.01) A61K 8/33(2006.01) A61Q 11/00(2006.01) (71)申请人 高露洁棕榄公司 地址 美国 . 纽约州 (72)发明人 L.D. 张 杨政 黄兆胜 刘四军 (74)专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公 司 72001 代理人 孔青 庞立志 (54) 发明名称 上火和唾液分泌免疫球蛋白。
2、 (57) 摘要 本文描述评价患者的上火严重程度的方法， 所述方法包括检测唾液 S-IgA 水平， 已发现唾液 S-IgA 水平与上火程度负相关。本发明进一步提 供例如 (i.a.) 诊断试剂盒、 治疗方法和口腔护理 组合物用于治疗上火的用途。 (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2014.06.20 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/CN2011/002148 2011.12.21 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2013/091139 EN 2013.06.27 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 13 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明。
3、专利申请 权利要求书2页 说明书13页 (10)申请公布号 CN 103998013 A CN 103998013 A 1/2 页 2 1. 一种评价患者的上火严重程度的方法， 所述方法包括检测患者的唾液 S-IgA 水平， 其中与对照、 正常或基线值比较， 较低的 S-IgA 水平表示更严重的上火病症。 2. 权利要求 1 的方法， 所述方法进一步包括通过检查表 A 中列出的一种或多种症状来 评价患者 ： 表 A 症状值症状值症状值 口腔溃疡*23眼发痒*8低烧*15 口干*14眼睛分泌物*18失眠*8 口苦*15耳 鸣 (Tinnitus)( 耳 鸣 (earringing) *11发脾气。
4、*17 口臭*17咽干*13尿黄*9 牙龈肿胀、 疼痛或出血*17喉咙痛*15便秘*8 舌头发红*9粉刺*6闷气*6 鼻腔干燥*15头晕*6黄藓 (Yellowmusci)*15 流鼻血*10皮屑 ( 鳞状、 片状 )*6脉搏频弱*11 眼干*9干 - 热*17脉搏频强*13 并根据表 A 中显示的症状和指定的数值对患者计分， 其中较高计分表示更严重的上火 病症。 3. 前述权利要求中任一项的方法， 其中用 S-IgA 的抗体检测唾液 S-IgA 水平。 4. 前述权利要求中任一项的方法， 其中患者在检测唾液 S-IgA 之前经至少 1 小时没有 任何口腔摄入。 5. 前述权利要求中任一项的方。
5、法， 其中 S-IgA 的正常或基线水平考虑一年的季节计 算。 6.一种用于诊断上火的计算机辅助系统， 其中用户经由网站输入关于S-IgA水平、 表A 中列出的症状的存在或不存在的数据， 将数据上载至计算程序， 以便计算上火诊断计分， 然 后将上火诊断计分显示给用户， 并基于上火诊断计分将关于上火和合适治疗方法的信息提 供给用户。 7. 一种治疗方法， 所述方法包括根据任一前述权利要求将患者确诊为患有上火， 并且 通过施用包含有效量清火剂的口腔护理产品治疗患者。 8. 权利要求 7 的方法， 其中清火剂为一种或多种选自以下的清火剂 ： 来自黄连的黄连 素和药根碱、 来自黄芩的黄芩苷、 来自苦参。
6、的苦参碱和氧化苦参碱、 来自普通穿心莲的穿心 莲内酯、 来自鱼腥草的鱼腥草素亚硫酸氢钠、 来自知母的芒果苷， 和来自紫草的紫草素 ； 来 自野菊花的菊花内酯、 来自忍冬花的绿原酸、 来自茶叶的茶多酚， 和来自厚朴的厚朴酚。 9. 权利要求 7 的方法， 其中清火剂包含合成抗菌剂或消炎剂。 10. 权利要求 9 的方法， 其中清火剂选自三氯生、 柠檬酸锌、 氧化锌、 乳酸锌及其组合。 11. 权利要求 7 至 10 中任一项的方法， 其中口腔护理产品为牙膏。 12. 权利要求 7 至 11 中任一项的方法， 其中口腔护理产品至少每日施用至患者口腔达 至少一周时间或直至症状消退。 13. 一种包含。
7、有效量清火剂的口腔护理产品， 所述口腔护理产品用于权利要求 7 至 12 中任一项的治疗上火的方法。 14. 权利要求 13 的口腔护理产品， 其中清火剂为一种或多种选自下列的清火剂 ： 来自 黄连的黄连素和药根碱、 来自黄芩的黄芩苷、 来自苦参的苦参碱和氧化苦参碱、 来自普通穿 心莲的穿心莲内酯、 来自鱼腥草的鱼腥草素亚硫酸氢钠、 来自知母的芒果苷， 和来自紫草的 权 利 要 求 书 CN 103998013 A 2 2/2 页 3 紫草素 ； 来自野菊花的菊花内酯、 来自忍冬花的绿原酸、 来自茶叶的茶多酚， 和来自厚朴的 厚朴酚。 15. 权利要求 13 的口腔护理产品， 其中清火剂包含合。
8、成抗菌剂或消炎剂。 16. 权利要求 15 的口腔护理产品， 其中清火剂选自三氯生、 柠檬酸锌、 氧化锌、 乳酸锌 及其组合。 17. 权利要求 16 的口腔护理产品， 其中口腔护理产品选自 包含二氧化硅基质中的0.3%三氯生、 2%甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物和0.32%氟化 钠的洁齿剂， 和 包含二氧化硅基质中的 1.1% 单氟磷酸钠、 1.5% 甲基乙烯基醚 / 马来酸酐共聚物、 1.3% 焦磷酸盐和 2% 柠檬酸锌三水合物的洁齿剂。 权 利 要 求 书 CN 103998013 A 3 1/13 页 4 上火和唾液分泌免疫球蛋白 0001 发明背景 “上火 (heatiness)” 是。
9、用于描述与我们体内的过度 “内热” 有关的症状的术语， 这些症 状形成中医 (TCM) 中确认的综合征。上火的特征是口干、 发红、 肿胀、 发热和疼痛。已确认 不同的上火类型， 例如实火， 例如特征为面部 / 眼睛 / 舌头发红， 和脉搏快而强 ； 和虚火， 例 如失眠、 口干、 流鼻血和脉搏快而弱。从根本上说， 上火被认为是保持健康所需的阴阳平衡 的失调。根据 TCM 原理， 药物疗法的目标是调节身体的平衡从而恢复健康。 0002 根据 TCM 原理， 上火被视为外邪转热或内郁成火的临床表现。它在身体的不同部 位表现出的症状有所不同。 例如， 口腔内上火的常见症状如下 ： 舌唇起疮、 口苦和。
10、口臭、 口干 和唇干裂、 口舌生疮、 牙龈肿胀和微红、 牙痛和牙龈出血、 舌头发红伴有微黄舌苔、 舌缘微红 而无舌苔(furry coating)。 这些局部症状与西医中描述的疾病症状重叠， 所述疾病例如牙 龈炎、 牙周炎、 急性球菌感染性口腔炎、 疱疹性口腔炎、 舌乳头炎、 急性腮腺炎， 但在中医学 说中， 精神和身体被视为一个有机的整体， 因而口腔中的局部症状事实上无法与导致上火 的潜在系统失衡切断联系并单独治疗。因此， 西医确认的疾病和上火症状之间的简单一对 一对应相互关系是很难实现的。疾病状态的分类与西医是不同的， 并且上火的治疗一般涉 及特定的饮食和 / 或使用传统中草药。 0003。
11、 对上火的理解和治疗经历了很长的发展史， 尽管在西医中对于 TCM 原理缺乏认同 和理解， 但数百万人可证明 TCM 方法的功效。然而， 包括上火诊断的现有 TCM 方法在很大程 度上取决于个人经验、 主观看法和轶事报告 (anecdotal report)。现在仍缺乏症状观察和 半定量或定量诊断标准， 也缺乏生物标志物或其它客观和一致的物理标准， 其允许对上火 及其治疗的更严格和一致研究， 并且还允许对根据西医原理理解和治疗的疾病与根据 TCM 原理理解和治疗的上火之间的关系更好地综合分析和理解的。 0004 在西医有一些证据表明， 口腔健康可影响系统健康或受系统健康影响， 包括心血 管健康。
12、， 系统病症可增加一些口腔疾病的风险， 并且口腔组织可作为系统感染的通道。 口腔 由粘膜免疫系统防止感染， 粘膜免疫系统用于防止潜在的病原微生物侵入粘膜， 并防止抗 原摄取。 尽管对粘膜免疫性个体重要， 但作为针对大多数病原体和抗原的第一道防御， 它是 人类免疫学最少了解的领域之一。粘膜上皮中的活化 B 细胞产生由 J- 链连接并连接到分 泌成分 (SC) 的二聚型免疫球蛋白 A(IgA)。分泌成分促进从粘膜分泌复合物。这种分泌的 IgA(S-IgA) 是在粘膜分泌物 ( 包括唾液 ) 中发现的主要免疫球蛋白。 0005 发明概述 我们已意想不到地发现， 唾液中的 S-IgA 水平与患者的上火。
13、程度负相关。通常， 在人上 火时， 与正常对照比较， 唾液中的 S-IgA 值低。 0006 我们进行了一项临床研究， 包括用 TCM 原理诊断为患有上火的患者和正常患者， 以系统地和客观地记录上火症状。根据这项研究， 我们开发出给予不同症状不同权重的计 分系统， 并确定对应患有上火的患者的临界诊断计分。可进一步根据这些计分关于它们的 病症的严重程度和上火的类型将患者归类。在这项研究的过程中， 我们也检测在患者中的 唾液流速和唾液溶菌酶水平、 唾液淀粉酶和唾液 S-IgA。 说 明 书 CN 103998013 A 4 2/13 页 5 0007 我们发现， 在唾液中的 S-IgA 水平和上火。
14、的严重程度之间有显著负相关性。这是 意想不到的， 因为与唾液分析中检测的其它参数没有显著相关性。因此， 可用唾液 S-IgA 水 平作为临床参数诊断上火和评价清火治疗的有效性。 0008 我们发现， S-IgA 增加范围显著与上火案例中的诊断计分减少范围相关。 0009 我们发现， 用诊断计分表和 S-IgA 组合诊断上火可提高相对于临床医师结果的符 合率 (concordance rate)。 0010 因此， 在一个实施方案中， 本发明提供提高上火诊断符合率、 定量检测清火治疗效 果或诊断、 评价或监测上火的方法， 所述方法包括检测唾液中的 S-IgA 水平， 其中与正常或 基线水平相比较。
15、低水平的 S-IgA 分别相当于上火或上火病症恶化， 并且用于诊断的 S-IgA 与诊断计分表一起可提高诊断符合率， 本发明还提供用于此方法的试剂盒， 包括检测唾液 中 S-IgA 水平的工具 (means)， 例如使用 S-IgA 的抗体。 0011 在另一个实施方案中， 本发明提供治疗由此诊断的患者上火的方法， 包括施用口 腔护理产品， 例如牙膏或口腔清洗剂， 其包含清凉剂 ( 尤其 TCM 中草药 ) 和 / 或抗菌剂 ( 例 如三氯生或锌盐或氧化物， 例如氧化锌、 柠檬酸锌或乳酸锌 ) ； 以及这些产品用于此类治疗 的用途。 0012 通过以下提供的详述， 本发明适用性的其它方面将变得。
16、显而易见。 应了解， 虽然指 出了本发明的优选实施方案， 但详述和具体实施例只是为了说明目的， 不意味限制本发明 的范围。 0013 发明详述 以下优选实施方案描述只为示例性质， 不以任何方式限制本发明、 其应用或用途。 0014 在第一实施方案中， 本发明提供提高上火诊断符合率、 定量检测清火治疗效果、 诊 断、 评价或监测患者上火的方法 ( 方法 1)， 所述方法包括检测来自患者的唾液样品中的唾 液 S-IgA。 0015 例如， 本发明提供 1.1. 方法 1， 其中较低水平的唾液 S-IgA 与上火的严重程度负相关。 0016 1.2. 方法 1 或 1.1， 其中也针对根据以下表 A。
17、( 下表 ) 的症状评价患者。 0017 表 A 说 明 书 CN 103998013 A 5 3/13 页 6 症状值症状值症状值 口腔溃疡*23 眼发痒*8低烧*15 口干*14眼睛分泌物*18 失眠*8 口苦*15耳鸣 (Tinnitus)( 耳鸣 (earringing)*11 发脾气*17 口臭*17咽干*13 尿黄*9 牙龈肿胀、 疼痛或出血*17喉咙痛*15 便秘*8 舌头发红*9粉刺*6闷气*6 鼻腔干燥*15头晕*6黄藓 (Yellowmusci)*15 流鼻血*10皮屑 ( 鳞状、 片状 )*6脉搏频弱 (Frequentandweakpulse)*11 眼干*9干 - 热。
18、*17 脉搏频强 (Frequentandstrongpulse)*13 1.3. 前述方法， 其中给予所评价症状与表 A 中列出的数值近似对应或近似成比例的权 重。 0018 1.4. 前述方法， 其中给予患者上火诊断， 所述患者具有 (i) 相对低 ( 小于正常或 基线 ) 的唾液 S-IgA 值， 和 (ii) 使用表 A 中的数值或与该计分成比例或对应的值具有 60 说 明 书 CN 103998013 A 6 4/13 页 7 或更高的计分， 例如至少 63。 0019 1.5. 任何前述方法， 其中上火程度例如使用表 A 中的数值基于严重程度分类， 例 如， 普通、 严重， 或非常。
19、严重， 其中普通上火对应63120的计分 ； 严重上火对应121150的 计分 ； 并且非常严重的上火对应 150 的计分。 0020 1.6. 任何前述方法， 其中S-IgA的水平用S-IgA的抗体检测， 例如S-IgA的分泌成 分。 0021 1.7. 任何前述方法， 其中患者在检测唾液 S-IgA 之前经至少 1 小时没有任何口腔 摄入。 0022 1.8. 任何前述方法， 其中 S-IgA 的正常或基线水平考虑一年的季节计算。 0023 1.9. 任何前述方法， 其中用 S-IgA 作为辅助诊断指标以提高相对于临床医师在上 火诊断方面的符合率。 0024 1.10. 任何前述方法， 其。
20、中用 S-IgA 作为辅助评价指标连同作为主要评价指标的 诊断计分表而定量检测清火治疗效果。 0025 在另一个实施方案中， 本发明提供使用主要成分分析 (Prin) 对上火类型分类的 方法， 例如 2. 诊断特定上火类型的方法(方法2)， 所述方法包括针对表B中阐明的症状评价患者 ( 以下 )。 0026 表 B Prin上火类型主要上火症状 Prin1 实火口苦、 口臭、 鼻塞、 耳鸣、 头晕、 皮屑、 干 - 热、 发脾气、 尿黄、 黄藓、 脉搏频强 Prin2 虚火口干、 口臭、 龈肿、 鼻腔干燥、 喉咙痛、 头晕、 干 - 热、 低烧、 舌头发红、 脉搏频弱 Prin3 心火口腔溃疡。
21、、 眼睛干涩、 喉咙痛、 失眠、 黄藓 Prin4 肺胃实火口干、 龈肿、 耳鸣、 咽干、 粉刺、 便秘、 黄藓 Prin5 肝和肾阴虚火 龈肿、 耳鸣、 低烧、 发脾气、 便秘、 舌头发红、 黄藓、 脉搏频弱 Prin6 肺阴虚鼻塞、 粉刺、 舌头发红、 黄藓、 脉搏频弱 2.1. 方法2， 其中患者接受根据方法1及随后任何方法的上火诊断， 然后根据方法2评 价， 以定性诊断上火类型。 0027 2.2. 方法 2 或 2.1， 其中对于表 B 中的各主要成分 (Prin) 给予患者一个值， 其中 最高绝对值确定影响患者的上火类型。 0028 在另一个实施方案中， 本发明提供一种机器可读程序。
22、和计算机， 其中基于关于例 如表 A 中阐明的相关症状的存在或不存在的输入， 通过机器可读程序和计算机进行计算， 所述计算根据方法 1 及随后任何方法或方法 2 及随后任何方法确定上火和 / 或上火类型的 加权计分。 例如， 本发明提供用于自我诊断或由牙科从业人员诊断的计算机辅助系统， 其中 用户例如经由网站输入关于 S-IgA 水平和表 A 中列出的症状的存在或不存在的数据， 并且 将数据上载至计算程序， 例如电子表格程序， 例如 Microsoft Excel， 以便计算上火诊断计 分， 然后将计分显示给用户。也任选基于计分将关于上火和合适治疗方法的信息提供给用 户。 0029 在另一个实。
23、施方案中， 本发明提供 3. 治疗方法 ( 方法 3)， 所述方法包括根据方法 1 或 2 中任一项的方法诊断患者患有上 火， 并通过施用包含有效量清火剂(antiheatiness agent)的口腔护理产品(例如牙膏或漱 口剂 ) 来治疗患者。 说 明 书 CN 103998013 A 7 5/13 页 8 0030 3.1. 方法 3， 其中清火剂是 TCM 中确认的， 例如， 包含一种或多种选自下列的清火 剂 ： 来自黄连的黄连素和药根碱、 来自黄芩的黄芩苷、 来自苦参的苦参碱和氧化苦参碱、 来 自普通穿心莲的穿心莲内酯、 来自鱼腥草的鱼腥草素亚硫酸氢钠、 来自知母的芒果苷， 和来 自。
24、紫草的紫草素 ； 来自野菊花的菊花内酯、 来自忍冬花的绿原酸、 来自茶叶的茶多酚， 和来 自厚朴的厚朴酚。 0031 3.2. 方法 3 或 3.1， 其中清火剂包含合成抗菌剂或消炎剂。 0032 3.3. 方法 3.2， 其中清火剂选自三氯生、 柠檬酸锌、 乳酸锌、 氧化锌及其组合， 例如 包含 0.1-1% 三氯生和 / 或 1-3% 柠檬酸锌。 0033 3.4. 任何上述方法， 其中口腔护理产品至少每日施用至患者口腔达至少一周时 间或直至症状消退。 0034 在另一个实施方案中， 本发明提供带有使用说明书的检测、 诊断或监测 S-IgA 的 试剂盒， 包括 S-IgA 的抗体， 例如 。
25、S-IgA 的分泌成分 (SC)。 0035 在另一个实施方案中， 本发明提供包含有效量清火剂的口腔护理产品， 例如牙膏 或漱口剂， 用于治疗上火的方法， 例如以治疗根据方法1及随后任何方法或方法2及随后任 何方法诊断的患者， 例如， 其中清火剂是 TCM 中确认的， 例如， 包含一种或多种选自下列的清火剂 ： 来自黄连的黄 连素和药根碱、 来自黄芩的黄芩苷、 来自苦参的苦参碱和氧化苦参碱、 来自普通穿心莲的穿 心莲内酯、 来自鱼腥草的鱼腥草素亚硫酸氢钠、 来自知母的芒果苷， 和来自紫草的紫草素 ； 来自野菊花的菊花内酯、 来自忍冬花的绿原酸、 来自茶叶的茶多酚， 和来自厚朴的厚朴酚 ； 并且。
26、 / 或者 其中清火剂包含合成抗菌剂或消炎剂， 并且 / 或者 其中清火剂选自三氯生、 锌氧化物或盐 ( 氧化锌、 柠檬酸锌和 / 或乳酸锌 ) 及其组合， 例如包含 0.1-1% 三氯生和 / 或 1-3% 柠檬酸锌 ； 例如， 其中口腔护理产品选自 包含二氧化硅基质中的0.3%三氯生、 2%甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物和0.32%氟化 钠的洁齿剂， 和 包含二氧化硅基质中的 1.1% 单氟磷酸钠、 1.5% 甲基乙烯基醚 / 马来酸酐共聚物、 1.3% 焦磷酸盐和 2% 柠檬酸锌三水合物的洁齿剂。 0036 从始至终使用的范围用作用于描述在该范围内的每个和每一个值的简写。 可选择 在该范围。
27、内的任何值作为范围的端点。此外， 本文引用的所有参参考文献通过引用而全文 结合到本文中。在本公开中的定义与引用的参考文献冲突的情况下， 以本公开为准。 0037 除非另外说明， 否则本文和在说明书的其它地方表述的所有百分数和量应理解为 指重量百分数。给出的量基于材料的活性重量。 实施例 0038 实施例 1 ：S-IgA和上火之间的统计相关性的临床评价和确定 试验材料 仪器 ： SN-695B 放射免疫检测仪， 日环第一仪器厂 (Rihuan No.1 Instrument Factory)， 上海 说 明 书 CN 103998013 A 8 6/13 页 9 原子核研究所 (Shangha。
28、i Atomic Nucleus Research Institute) ； Olympus AU 5421， 日本 ； 紫光可见分光光度计 752 型， 上海。 0039 试剂 ： S-IgA 试剂盒， 北京北方生物技术研究所 (Beijing North BiotecHuology Research Institute)， 批号 061120, 061230, 070412, 070420 ； - 淀粉酶测定 (Diastasimetry) 试剂盒， 德国 HUMAN Co 公司， 批号 ： H100 ； LZM 试剂盒， 南京建成生物工程研究所(Nanjing Jiancheng Bio。
29、engineering Research Institute)， 批号 20060922, 20061025, 20070412。 0040 根据 TCM 专业临床医师的评价， 从志愿者中选择 121 个上火案例作为满足上火标 准。将 27 个上火症状确定为与上火的 TCM 评价统计学相关， 并根据与 TCM 诊断的相关度加 权， 以提供更客观的标准。根据下表， 基于对上火诊断的相对贡献对症状加权。将患者计分 63 或更高认为是患有上火。 0041 表 A 说 明 书 CN 103998013 A 9 7/13 页 10 症状值症状值症状值 口腔溃疡*23眼发痒*8低烧*15 口干*14眼睛分。
30、泌物*18 失眠*8 口苦*15耳鸣 (Tinnitus)( 耳鸣 (earringing)*11 发脾气*17 口臭*17咽干*13 尿黄*9 牙龈肿胀、 疼痛或出血*17喉咙痛*15 便秘*8 舌头发红*9粉刺*6闷气*6 鼻腔干燥*15头晕*6黄藓 (Yellowmusci)*15 流鼻血*10皮屑 ( 鳞状、 片状 )*6脉搏频弱*11 眼干*9干 - 热*17 脉搏频强*13 在患有上火的患者中， 将以自然方式痊愈的确定为自我对照组。收集他们的随访数据 (follow-up data)。同时， 选择 60 个健康案例作为空白对照组。项目的河南和湖南研究人 员严格采用与广州相同的案例筛。
31、选、 取样和检验方法。 在湖南选择121个上火案例、 61个健 康案例和70个自我对照案例， 而在河南选择143个上火案例、 74个健康案例和70个自我对 照案例。 说 明 书 CN 103998013 A 10 8/13 页 11 0042 在 9:0011:00am 和 2:004:00pm， 从健康、 上火和自然痊愈的案例取唾液样品。 在用水漱口后， 指示受试者静坐 3 分钟， 保持唾液自然分泌， 然后将所有唾液 ( 未刺激的全 唾液 ) 以 1 分钟间隔吐入管中。收集在 10 分钟期间分泌的唾液， 并计算唾液流速。如果 在 10 分钟期间分泌的唾液总量小于 3ml， 则可延长收集时间，。
32、 直到量达到 3ml。唾液流速 (SFR)(ml/min)= 在 10 分钟期间收集的唾液总量除以 10 分钟。将收集的唾液分成三批， 每 批1ml， 在-20保持。 然后检测唾液淀粉酶(AMS)、 唾液溶菌酶(LYZ)和分泌的免疫球蛋白 (S-IgA)。 0043 AMS ： 在冷冻和解冻处理后， 将样品用生理盐水稀释20倍， 用Olympus AU 5421进行 自动取样， 然后进行试剂盒检测。 0044 LYZ ： 用紫外可见分光光度计752型进行试剂盒检测。 在一定浓度的混浊细菌溶液 中， LYZ 使细菌细胞壁中的多肽水解， 以引起细菌裂解， 从而在透光度增加的同时减小浓度。 因此， 。
33、可根据浊度变化测定 LYZ 含量。 0045 在均匀搅拌后， 样品管在 37经历水浴 15 分钟。然后将它们立即取出放入低于 0冰冻水中。在水浴 3 分钟后， 将样品一管接一管倒在 1cm 光电比色管中。在 530nm， 用高 达 100的蒸馏水调节透光度。进行色度测量以检测透光度 T15， 这是在 37水浴 15 分钟 后的透光度。 0046 LYZ 含量 (g/ml)=( 检测的管透光度 UT15 空白管透光度 OT15 / ( 透光度 ST15 空白管透光度 OT15) * 标准管浓度 * 样品稀释倍数 S-IgA(g/ml) ： 利用 SN-695B 放射免疫仪 R， 并进行试剂盒检测。
34、。S-IgA 广泛存在于血 液和各种渗出物中。 作为渗出物中免疫蛋白的主要类型， 它是一种粘膜特异性防御因子。 此 试剂盒用双抗体夹心法测定血清和渗出物中的 S-IgA。利用双抗体旨在针对 S-IgA 中分泌 成分部分 (SC) 中的特异性抗体。这种方法具有高特异性、 灵敏性和可靠性。首先使包裹聚 苯乙烯纳米球的抗体与样品的 S-IgA 混合， 以形成免疫性复合抗体 -S-IgA。随着标记抗体 125I 抗体的加入， 形成三层夹心抗体 -S-IgA-125I- 抗体。检测球上的 125Icpm 值， 并用标 准曲线或标准值 cpm 将它们控制计数。然后知道样品中的 S-IgA 含量。 0047。
35、 在冷冻和解冻处理后， 将样品用生理水稀释至1:1000。 为了避免试验误差， 必须一 次完成试验。计算前， 应从各管扣除 S0cpm。要检测的样品浓度用计算机软件 IRMA 处理， 以 得到检测值作为 S-IgA 浓度。然后乘以稀释倍数。结果为样品的浓度。 0048 评价不同因子与这四个指标的统计相关性。在 AMS 中， 在两个性别之间有显著差 异， 然而标准偏差大， 这可能是由于取样、 个体差异和试验方法所致。 关于另外三种指标， 在 性别之间没有显著差异。所有四个指标随季节变化， 反映在四个季节中疾病的发病率。 0049 上火中 SFR、 LYZ、 AMS 和 S-IgA 变化的自配对比。
36、较 ： 通过利用随机表， 进行 121 个 上火案例的 60 个的随访研究。在这些案例自然痊愈后， 从他们取唾液。检测不同参数值。 自我对照具有避免个体偏差的优点。自我对照图经过 T 检验和 SPSS13.0 统计分析。结果 如下 ： 不同参数变化的自配对比较 (S) 说 明 书 CN 103998013 A 11 9/13 页 12 从研究结果看到， 在上火后痊愈之前和之后， SFR 显示没有差异。LYZ 在痊愈之前有显 著下降。AMS 在自然痊愈后有显著下降， 但 S-IgA 在痊愈后显著升高， 意味 S-IgA 可能是身 体中的保护蛋白。 0050 与 SFR、 LYZ、 AMS 和 S。
37、-IgA 的上火相关性 ： 根据诊断计分表计算案例的计分值。进 行相同单独案例的SFR、 LYZ、 AMS和S-IgA的值的秩和相对性检验， 这些值经统计学分析， 以 导出上火的诊断计分值与四个指标的相关性。( 在这些案例中， 缺少 7 的数据 )。 0051 上火的诊断计分与四个观察指标的相关性 注 ： P0.05 表示显著相关， R 表示相关系数。 0052 从以上分析清楚地看到， S-IgA 的变化与上火的严重程度负相关。上火越严重， S-IgA 的值越低。 0053 不同地区上火综合征的不同参数的自我对照比较 说 明 书 CN 103998013 A 12 10/13 页 13 *1 。
38、广州， *2 河南， *3 (Hu) 湖南 分析 ： 从上表看到， 在三个地区， 上火状态与健康状态的 S-IgA 显著不同。关于其它指 标， 这些区域有或没有显著差异， 没有规律可循。 0054 基于广州诊断计分表得到的不同指标与上火计分值的相关性 表 6 ： 不同检验指标与上火的相关性 在回顾性和前瞻性检查中， 广州诊断计分表显示最高的特异性和灵敏性。基于此表， 在三个地区收集的案例的上火计分值和检查中不同指标的相关性表明， 上火计分值和唾液 S-IgA一致性相关， 只有来自四个指标检测的S-IgA显示与三个地区的上火显著负相关。 这 表明， 可用唾液 S-IgA 作为临床参数以评价上火和。
39、检测清火治疗的有效性。 0055 不同指标的性别相关差异随地区而变， 但对于 S-IgA， 差异并不显著， 表明在检查 中关于 S-IgA 不需要考虑性别。 0056 对三个地区的患者之间的季节差异进行统计分析。 虽然春季、 夏季、 秋季和冬季为 季节标志， 但为了精确起见， 基于 24 个节气进行比较。 说 明 书 CN 103998013 A 13 11/13 页 14 0057 不同检验指标的季节差异 不同季节对 SFR、 LYZ 和 AMS 的比较呈现不同差异， 但 S-IgA 在不同的季节不同， 表明基 础免疫球蛋白随季节变化， 并且在用 S-IgA 作为诊断上火的指标时， 应考虑季。
40、节因素。 0058 在不同地区上火定量指标的比较 LYZ、 AMS 和 S-IgA 在不同的地区表现不规则差异， 但 SFR 在不同的地区是不同的。 0059 上火vs.SFR ： 临床上， 在大多数上火案例中存在口干。 它是引起SFR下降的直接表 示。这部分研究显示， 季节对 SFR 有显著影响， SFR 在不同的季节是不同的。因此， 应将唾 液分泌认为是动态过程。然而， 有多种因素影响唾液流速。1) 身体的总体水分条件 ： 身体 损失 8% 水， 唾液流速就可能减小到 0。然而， 随着身体水分的增加， 唾液流速也将增加。2) 身体姿态 & 照明条件 ： 唾液流速在站立姿势高于坐立姿势， 而。
41、任一种姿势均高于躺下姿势。 在黑暗中下降 30%-40%。3) 生理节律 ： 唾液流速峰值在下午和晚上。在夜里， 在睡眠中下降 接近 0。腮腺分泌在冬天最高， 在夏天下降。4) 对感官的刺激 ： 想像或看到食物给唾液流速 带来最大影响。5) 药物 ： 很多种药物对唾液腺有作用， 例如抗抑郁剂和用于帕金森综合征 的药物， 导致唾液流速下降。 0060 在此研究的初级阶段， 对处于坐姿的受试者进行取样。以有规律的间隔在非刺激 条件取唾液样品， 并排除药物影响， 以控制研究偏差。从研究结果看， 季节也是影响 SFR 的 重要因素。 0061 在研究中发现， SFR 在性别之间不显示显著差异。它未在上。
42、火综合征痊愈前后显 示差异。这是可能的， 因为有多种因素可能影响 SFR， 并且此项研究不能将它们中的很多置 于控制下。另一种可能性是， SFR 不一定与上火综合征相关， 这可从 SFR 与上火诊断计分值 的相关检查得出结论。 说 明 书 CN 103998013 A 14 12/13 页 15 0062 上火 vs.LYZ ： 已知 LYZ 在口腔粘膜炎产生过程中起作用。在 RAU 患者中， 唾液 LYZ 的活性在疾病痊愈前后都比正常案例低。然而， 只在疾病治疗前显著显示差异。这一事实 意味着 RAU 患者中唾液 LYZ 活性的下降显著减弱口腔自然防御。在复发性口疮患者中 LYZ 的活性显著。
43、低于正常人， 并随着疾病痊愈而升高。 在此研究部分还发现， 在上火患者中， LYZ 的活性在疾病痊愈之前显著低于疾病痊愈之后。这证明 LYZ 可能对身体具有防护作用。 0063 上火 vs.AMS ： 在二十世纪九十年代， AMS 是医学研究的焦点。在基础条件下， 脾虚 综合征患者具有高于正常的唾液AMS活性。 AMS的活性在性别之间未显示差异， 但随季节变 化， 表明季节对 AMS 的相关性具有重要影响。我们已发现， 在上火中 AMS 显著升高。与健康 状态比较， 它的升高是显著的。其变化机制尚未探究。 0064 上火 vs.S-IgA ： 在口腔免疫防御系统中， S-IgA 起重要作用， 。
44、它被认为是身体的重 要抗感染和抗过敏屏障。 在此研究中发现， 在上火中， S-IgA显著下降， 并且显著低于健康状 态， 表明这是一种生理防护机制。在 S-IgA 与上火综合征的严重程度相关性研究中发现， 综 合征的严重程度与 S-IgA 负相关， 即， 上火越严重， S-IgA 的活性越低。还发现性别对 S-IgA 没有显著影响。在春季与夏季、 春季与秋季的比较中， S-IgA 的活性显示显著差异。季节是 影响 S-IgA 活性的重要因素。检查 S-IgA 的性别之间的差异， 但未发现显著差异。 0065 实施例 2 ：用牙膏治疗上火 进行随机双盲研究， 其中向根据实施例 1 诊断有上火的患。
45、者施用不同的牙膏 ： 三天研究 ： 含有二氧化硅基质中的 1.1% 单氟磷酸钠、 1.5% PVM/MA 共聚物 (Gantrez)、 1.3% 焦磷酸盐、 2% 柠檬酸锌三水合物的洁齿剂制剂 ( 高露洁 360 全口腔健康 - 牙龈健康牙 膏 (Colgate 360 Whole Mouth Health-Gum Health Toothpaste) 对比对照 1， 所述对照 1 是 一种含有二氧化硅基质中的自称有助于减轻牙龈问题 ( 诸如出血、 牙龈疼痛 ) 等的草药的 冬青味市售牙膏 七天研究 ： 含有二氧化硅基质中的 0.3% 三氯生、 2% PVM/MA 共聚物 (Gantrez) 。
46、和 0.32% 氟化钠的洁齿剂制剂 ( 高露洁 Total 三氯生 /Gantrez 牙膏 (Colgate Total Triclosan / Gantrez Toothpaste) 对比含有二氧化硅基质中的 1.1% 单氟磷酸钠、 1.5% PVM/MA 共聚 物 (Gantrez)、 1.3% 焦磷酸盐、 2% 柠檬酸锌三水合物的洁齿剂制剂 ( 高露洁 360 全口腔健 康 - 牙龈健康牙膏 ) 对比对照 2， 所述 2 对照是一种含有碳酸钙基质中的 1.1% 单氟磷酸钠 的薄荷味市售牙膏 在使用 3 天后， 与那些使用对照 1 的人相比， 使用具有 2柠檬酸锌的高露洁 360 全口 腔。
47、健康-牙龈健康牙膏的人在减少上火诊断计分(DS)方面， 在统计上显示整体上更大的减 少。在 7 天使用中， 我们使用 LPP 增白牙膏作为对照。使用具有 2% 柠檬酸锌的高露洁 360 全口腔健康 - 牙龈健康牙膏的人在上火诊断计分方面， 在统计上显示整体更大的减少， 而 高露洁 Total 三氯生 /Gantrez 牙膏配方显示甚至更大的改善 ： 三天试验 (* 诊断计分表示为平均计分 +/- 标准偏差 ) 说 明 书 CN 103998013 A 15 13/13 页 16 七天试验 (* 诊断计分表示为平均计分 + / - 标准偏差 ) 。 说 明 书 CN 103998013 A 16 。