相关申请的交叉引用
本申请要求2008年6月9日提交的题目为“Melanocortin Receptor-Specific Peptides for Treatment of Sexual Dysfunction(用于治疗性 功能障碍的黑皮质素受体特异性肽)”的美国临时专利申请系列第 61/059,910号的文件的优先权和权益，并且该专利申请的说明书及其权利 要求书通过引用并入本文。
发明背景
发明领域(技术领域)：
本发明涉及可用于治疗黑皮质素受体介导的疾病、适应症、病症和综 合征的黑皮质素受体特异性环肽。
相关技术说明：
下面的讨论按作者和公布年份提到了大量出版物，并且由于接近的公 布日期，某些出版物不被认为是关于本发明的现有技术。本文的这些出版 物的讨论是为了使背景更完整而给出的，并且不应被理解为是为了确定专 利性而承认这些出版物是现有技术。
已经鉴定了一组黑皮质素受体类型和亚型，包括在正常人黑色素细胞 和黑素瘤细胞上表达的黑皮质素-1受体(MC1-R)、在肾上腺细胞中表达的 ACTH(促肾上腺皮质激素)的黑皮质素-2受体(MC2-R)、主要在下丘脑、 中脑和脑干的细胞中表达的黑皮质素-3和黑皮质素-4受体(MC3-R和 MC4-R)以及在广泛分布的外周组织中表达的黑皮质素-5受体(MC5-R)。
已经进行了大量工作来确定黑皮质素受体的结构，包括编码该受体的 核酸序列和构成该受体的氨基酸序列二者。MC4-R是G蛋白偶联的7次 跨膜受体，据信它主要在脑中表达。
据信MC4-R特异性的肽以及其次的MC3-R特异性的肽可用于调节哺 乳动物能量稳态，包括用作减少食物摄入和体重增加的剂。据信MC4-R 激动剂肽可用于治疗包括雄性勃起机能障碍的性功能障碍以及用于减少 食物摄入和体重增加，诸如用于治疗肥胖症。MC4-R激动剂肽还可用于减 少主动的乙醇消耗、治疗药瘾以及类似作用。这种肽以及MC1-R和MC3-R 激动剂肽还可用于治疗循环休克、局部缺血、出血性休克、炎性疾病和相 关疾病、适应症、病症和综合征。相反，据信MC4-R拮抗剂肽可用于体 重增加帮助，诸如用于治疗恶病质、肌肉衰减综合征(sarcopenia)、消耗 综合征(wasting syndrome)或疾病以及食欲缺乏。这种肽还可用于治疗抑 郁和相关疾患。
黑皮质素受体特异性肽包括环状α-促黑激素(″α-MSH″)类似物肽， 例如Ac-Nle-环(-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-NH2(SEQ ID NO：1)(参见美 国专利第5,674,839号和第5,576,290号)和Ac-Nle-环 (-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-OH(SEQ ID NO：2)(参见美国专利第 6,579,968号和6,794,489号)。这些和其他黑皮质素受体特异性肽一般含有 天然α-MSH的中心四肽序列，His6-Phe7-Arg8-Trp9(SEQ ID NO：3)，或其模 拟物或变型，包括用D-Phe取代Phe7。被确定对一种或多种黑皮质素受体 特异性的其他肽或肽样化合物公开于美国专利第5,731,408号、第 6,054,556号、第6,350,430号、第6,476,187号、第6,600,015号、第6,613,874 号、第6,693,165号、第6,699,873号、第6,887,846号、第6,951,916号、 第7,008,925号、和第7,176,279中；美国公布的专利申请公布第 2001/0056179号、第2002/0143141号、第2003/0064921号、第2003/0105024 号、第2003/0212002号、第2004/0023859号、第2005/0130901号、第 2005/0187164号、第2005/0239711号、第2006/0105951号、第2006/0111281 号、第2006/0293223号、第2007/0027091号、第2007/0105759号、第 2007/0123453号、第2007/0244054号和第2008/0039387号中；以及国际 专利申请第WO 98/27113号、第WO 99/21571号、第WO 00/05263号、 第WO 99/54358号、第WO 00/35952号、第WO 00/58361号、第WO 01/30808号、第WO 01/52880号、第WO 01/74844号、第WO 01/85930 号、第WO 01/90140号、第WO 02/18437号、第WO 02/26774号、第WO 03/006604号、第WO 2004/046166号、第WO 2005/000338号、第WO 2005/000339号、第WO 2005/000877号、第WO 2005/030797号、第WO 2005/060985号、第WO2006/048449号、第WO 2006/048450号、第WO 2006/048451号、第WO 2006/048452号、第WO 2006/097526号、第WO 2007/008684号、第WO 2007/008704号和第WO 2007/009894号中。
尽管科学文献中的大量论文以及大量专利申请和授权专利证明了对 黑皮质素受体特异性肽的强烈的科学关注和药学关注，但是还没有黑皮质 素受体特异性肽被批准为任何治疗适应症的药物。事实上，还没有任何治 疗适应症的任何黑皮质素受体特异性肽已发展到通过II期临床试验的报 告。仍存在对用于药学应用并且尤其是用于治疗性功能障碍的黑皮质素受 体特异性肽的显著的和大量的需要。本发明是在这种背景下进行的。
发明简述
在一个方面，本发明涉及式(I)的环肽或其药学上可接受的盐：
其中：
R是-C(＝O)-OH或-C(＝O)-NH2；
x是1或2；并且
Y是3或4。
环肽可以是式(II)之一：
因此环肽可以是
Ac-Arg-环(Asp-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-NH2(SEQ ID NO：4)、
Ac-Arg-环(Asp-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-OH(SEQ ID NO：5)、
Ac-Arg-环(Glu-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Orn)-NH2(SEQ ID NO：6)或
Ac-Arg-环(Glu-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Orn)-OH(SEQ ID NO：7)。
在另一方面，本发明提供包含本发明的环肽或其药学上可接受的盐以 及药学可接受载体的药物组合物。
在另一方面，本发明提供用于治疗黑皮质素受体介导的疾病、适应症、 病症和综合征的基于黑皮质素受体特异性肽的药物组合物。
在另一方面，本发明提供用于治疗性功能障碍和其他MC4-R相关疾 患的基于肽的黑皮质素受体特异性药物，其中所述肽是选择性的MC4-R 配体。
在另一方面，本发明提供对MC4-R特异性的肽，并且所述肽是激动 剂。
在另一方面，本发明提供用于治疗性功能障碍而没有明显的心血管副 作用的黑皮质素受体特异性药物，没有明显的心血管副作用包括没有明显 的血压增加。
在另一方面，本发明提供在大的剂量范围内有效的特异性MC4-R环 肽。
本发明的其他方面和新颖特征以及其他应用性范围将部分在下面的 详述中结合附图描述，并且部分地在本领域技术人员检查了下文之后变得 明显，或者可以由本发明的实践而得知。本发明的方面可以借助于具体由 所附的权利要求书所提出的手段和组合来实现和获得。
附图简述
并入说明书并形成说明书一部分的附图图解了本发明的一个或多个 实施方案，并且与说明书一起用于解释本发明的原理。附图仅为图解本发 明的一个或多个优选实施方案的目的，并且不应理解为限制了本发明。
图1是在施用媒介物(○)、通过静脉内注射施用剂量为1μmol/kg的布 美诺肽(bremelanotide)(□)、通过皮下注射施用剂量为0.84μmol/kg和3.0μmol/kg(△)的实施例8.1的环肽之后，在交叉研究中使用通过遥测 监测的手术植入的血压传感器测定的收缩压的曲线图。
图2是在通过皮下注射施用剂量为1mg/kg的两种不同批次的实施例 8.4的环肽(△，)和通过静脉内注射施用剂量为1mg/kg的布美诺肽(□)之 后，在交叉研究中使用通过遥测监测的手术植入的血压传感器测定的收缩 压的曲线图。
发明详述
1.0定义.
在进行本发明的说明之前，如本文所述定义某些术语。
在给出的关于根据本发明的肽的序列中，氨基酸残基具有如美国专利 商标局所公布的Manual of Patent Examining Procedure(美国专利审查程序手册)，第8版的第2400章中所给出的它们的常规意思。因此，“Nle”是 正亮氨酸，“Asp”是天冬氨酸，“His”是组氨酸，“Phe”是苯丙氨酸，“Arg” 是精氨酸、“Trp”是色氨酸，并且“Lys”是赖氨酸，等等。应理解“D”异构体 通过在三字母代码或氨基酸名称之前的“D”指示，因此例如D-Phe是D-苯 丙氨酸。上文未涵盖的氨基酸残基具有下列定义：
术语“Ac”意指乙酰基CH3-C(＝O)-。
“酰胺”包括具有与羰基连结的三价氮(-C(＝O)-NH2)的化合物，诸如甲 酰胺、乙酰胺、丙酰胺以及类似物。
“胺”包括含有氨基(-NH2)的化合物。
如在药物组合物中的术语“组合物”旨在涵盖包含活性成分和构成载体 的惰性成分的产品，以及直接或间接由下列过程产生的任何产品：任何两 种或更多种成分的组合、复合或聚集；或一种或多种成分的解离；或一种 或多种成分的其他类型的反应或相互作用。因此，本发明中所采用的药物 组合物涵盖通过混合活性成分和一种或多种药学上可接受的载体制备的 任何组合物。
所谓黑皮质素受体“激动剂”意指可以与黑皮质素受体相互作用并启动 药理学反应的内源物质、药物物质或化合物，包括诸如本发明的肽的化合 物，所述药理学反应包括但不限于腺苷酸环化酶激活、黑皮质素受体的特 征(characteristic)。对于本发明，是黑皮质素-4受体(MC4-R)的激动剂的 黑皮质素受体激动剂是优选的，但是对于某些应用，是MC4-R和黑皮质 素-1受体(MC1-R)的激动剂的黑皮质素受体激动剂是优选的，并且对于其 他应用，是MC1-R、黑皮质素-3受体(MC3-R)、MC4-R和黑皮质素-5受 体(MC5-R)的一个或多个的激动剂的黑皮质素受体激动剂是优选的。
所谓“α-MSH”意指肽 Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2(SEQ ID NO：8)及其类似物和同系物，包括但不限于NDP-α-MSH。
所谓“NDP-α-MSH”意指肽 Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2(SEQ ID NO：9)及其类似物和同系物。
所谓“EC50”意指产生激动剂的最大可能反应的50％的该激动剂摩尔浓 度，所述激动剂包括部分激动剂。举例而言，如在MC4-R细胞表达系统 中的cAMP测定所测得的，在72nM的浓度下产生测试化合物的最大可能 反应的50％的测试化合物具有72nM的EC50。除非另外指明，否则与EC50测定相关的摩尔浓度是以纳摩尔/升(nM)计的。
所谓“Ki(nM)”意指平衡抑制解离常数，它表示在不存在放射性配体或 其他竞争剂的条件下与平衡时受体结合位点的一半结合的竞争性化合物 的摩尔浓度。一般地，Ki的数值与化合物对受体的亲和力反相关，使得如 果Ki低，则亲和力高。Ki可以使用Cheng和Prusoff的公式确定(Cheng Y.， Prusoff W.H.，Biochem.Pharmacol.22：3099-3108，1973)：
其中“配体”是放射性配体的浓度，并且KD是放射性配体产生该放射性 配体的50％受体占有的受体亲和力的倒数。除非另外指明，否则与Ki测 定相关的摩尔浓度以nM计。Ki可以关于特定受体(例如，MC1-R、MC3-R、 MC4-R或MC5-R)和特定配体(例如，α-MSH或NDP-α-MSH)而表达。
所谓“抑制”意指在竞争性抑制测定中与已知的标准物相比受体结合的 百分比减弱或减少。因此，“1μM(NDP-α-MSH)的抑制”意指在诸如下文所 述的测定条件下，由添加确定量的待测化合物如1μM测试化合物引起的 NDP-α-MSH结合的百分比减少。举例而言，不抑制NDP-α-MSH结合的测 试化合物具有0％的抑制，并且完全抑制NDP-α-MSH结合的测试化合物具 有100％的抑制。通常，如下文所描述的，使用放射性测定进行竞争性抑 制测定，如用I125-标记的NDP-α-MSH；或者使用镧系螯合荧光测定，如用 Eu-NDP-α-MSH。然而，测试竞争性抑制的其他方法是已知的，包括使用 非放射性同位素的标记或标签系统，并且一般本发明可采用用于测试竞争 性抑制的本领域中已知的任何方法。因此，可以看到“抑制”是确定测试化 合物是否减弱α-MSH与黑皮质素受体的结合的一个量度。
所谓“结合亲和力”意指化合物或药物结合其生物靶的能力，在本文表 示为Ki(nM)。
所谓“内在活性”意指在指定的黑皮质素受体表达细胞系统中化合物可 达到的最大功能活性，例如，腺苷酸环化酶的最大刺激。将α-MSH或 NDP-α-MSH达到的最大刺激指定为内在活性为1.0(或100％)并且将能 够刺激α-MSH或NDP-α-MSH的最大活性的一半的化合物指定为具有0.5 (或50％)的内在活性。将在本文所述的测定条件下具有0.7(70％)或更 高的内在活性的本发明化合物归类为激动剂，具有0.1(10％)和0.7(70％) 之间的内在活性的化合物归类为部分激动剂，并且将具有低于0.1(10％) 的内在活性的化合物归类为无活性的或不具有内在活性。在一个方面，本 发明的环肽一般可以表征为关于α-MSH或NDP-α-MSH的MC4-R的部分 激动剂。
一般地，“功能活性”是在化合物刺激后受体信号传导的量度，或受体 相关的信号传导改变的量度，诸如黑皮质素受体并且尤其是MC4-R或 hMC4-R。黑皮质素受体通过激活异源三聚体G蛋白启动信号转导。在一 个方面，黑皮质素受体经GαS传导信号，GαS通过腺苷酸环化酶催化cAMP 的产生。因此，腺苷酸环化酶的刺激的测定如腺苷酸环化酶的最大刺激的 测定是功能活性的一种量度，并且是本文所例示的主要量度。然而，应理 解可以采用功能活性的替代性量度来实践本发明，并且所述替代性测量特 定地涵盖在并包括在本发明的范围内。因此，在一个实例中，可以测量细 胞内的游离钙，诸如下列文献中报道的和使用其中所公开的方法：Mountjoy K.G等人，Melanocortin receptor-medicated mobilization of intracellular free calcium in HEK293 cells(在HEK293细胞中黑皮质素受体介导的细胞内游 离钙动员).Physiol Genomics 5：11-19，2001；或Kassack M.U.等人， Functional screening of G protein-coupled receptors by measuring intracellular calcium with a fluorescence microplate reader(通过用荧光酶标仪测量细胞内 钙进行G蛋白偶联受体的功能筛选).Biomol Screening 7：233-246，2002。 还可能的是通过测量磷脂酰肌醇4，5-二磷酸的肌醇三磷酸或二酰甘油生成 来测量激活，例如通过使用放射性测定进行。又一种功能活性量度是调节 途径激活所导致的受体内化，诸如使用Nickolls S.A.等人，Functional selectivity of melanocortin 4 receptor peptide and nonpeptide agonists： evidence for ligand specific conformational states(黑皮质素4受体肽和非肽 激动剂的功能选择性：配体特异性构象状态的证据).J Pharm Exper Therapeutics 313：1281-1288，2005中所公开的方法。又一种功能活性量度 是与G蛋白受体激活相关的核苷酸的交换和交换率，例如G蛋白α亚基上 的GDP(鸟苷二磷酸)与GTP(鸟苷三磷酸)的交换，这可以通过任何数 目的方法测量，包括使用鸟苷5′-(γ-[35S]硫代)-三磷酸的放射性测定，如在 Manning D.R.，Measures of efficacy using G proteins as endpoints：differential engagement of G proteins through single receptors(使用G蛋白为终点的功 效量度：通过单个受体的G蛋白差异衔接).Mol Pharmacol 62：451-452， 2002中公开的。已经开发了多种基于基因的测定来测量G偶联蛋白的激 活，例如在下列文献中公开的那些：Chen W.等人，Acolorimetric assay from measuring activation of Gs-and Gq-coupled signaling pathways(测量Gs-和 Gq-偶联的信号传导途径激活的比色测定).Anal Biochem 226：349-354， 1995；Kent T.C.等人，Development of a generic dual-reporter gene assay for screening G-protein-coupled receptors(用于筛选G蛋白偶联受体的非专属 双报道基因的开发).Biomol Screening，5：437-446，2005；或Kotarsky K. 等人，Improved receptor gene assays used to identify ligands acting on orphan seven-transmembrane receptors(用于鉴定作用于孤儿七次跨膜受体的配体 的改良受体基因测定).Pharmacology & Toxicology 93：249-258，2003。已 经将Chen等人的比色测定改造成用于测量黑皮质素受体激活，如在Hruby V.J.等人，Cyclic lactam α-melanocortin analogues of Ac-Nle4-cyclo[Asp5，D-Phe7，Lys10]α-melanocyte-stimulating hormone-(4-10)-NH2with bulky aromatic amino acids at position 7shows high antagonist potency and selectivity at specific melanocortin receptors(在位置7 处具有大的芳族氨基酸的Ac-Nle4-cyclo[Asp5，D-Phe7，Lys10]α-促黑激素 -(4-10)-NH2的环状内酰胺α-黑皮质素类似物显示出高的拮抗效价和对特 定黑皮质素受体的选择性).J JMed Chem 38：3454-3461，1995中公开的。 一般地，可以通过任何方法测量功能活性，包括测定G-偶联受体的激活和 /或信号传导的方法，并且还包括可能在以后开发或报道的方法。上述论文 和本文所公开的方法的每一种均如同完整描述一样通过引用并入本文。
如本文所用的术语“治疗”(“treat”、“treating”和“treatment”)涵盖在患 者患指定的疾病或疾患时发生的降低该疾病或疾患的严重程度的作用。
如本文所用的术语“治疗有效量”意指在被医生或其他临床医师治疗的 哺乳动物中引发生物反应或医学反应的化合物的量，所述化合物包括本发 明的肽。
如本文所用，术语“预防有效的”或“预防”意指将防止或抑制患有医学 病症的哺乳动物的痛苦或减轻患有医学病症的哺乳动物的痛苦的化合物 的量，所述化合物包括本发明的肽，所述医学病症在患者开始患所指定的 疾病或疾患之前医生或其他临床医师已试图防止、抑制或减轻。
“性功能障碍”意指抑制或削弱正常性功能的任何病症，所述正常性功 能包括性交。该术语不限于生理病症并且包括心理病症或没有病理或疾患 的正式诊断的察觉的削弱。性功能障碍包括雄性哺乳动物中的勃起机能障 碍和雌性哺乳动物中的雌性性功能障碍。
“勃起机能障碍”是包括雄性哺乳动物无法达到功能勃起、射精或二者 的疾患。因此勃起机能障碍与阳痿同义，并且包括不能够获得或维持坚硬 至足以性交的勃起。勃起机能障碍的症状包括不能够达到或维持勃起、射 精失败、早泄或不能达到性高潮。勃起机能障碍的增加通常与年龄相关并 且可以由身体疾病引起或作为药物治疗的副作用引起。
“雌性性功能障碍”是包括性唤起障碍的疾患。术语“性唤起障碍”包括 持续或复发的无法获得或维持润滑-膨胀性兴奋反应，直至性活动完成。雌 性性功能障碍还可以包括抑制的性高潮和性交困难，性交困难是疼痛或困 难的性交。雌性性功能障碍包括但不限于大量的疾病、病症和疾患种类， 包括机能减退的性欲障碍、性快感缺乏、性唤起障碍、性交困难和阴道痉 挛。机能减退的性欲障碍包括其中性幻想和对性活动的渴望持续性或复发 性地较少或消失，从而引起显著的忧虑或交际困难。机能减退的性欲障碍 可能由长期关系中的厌倦或不幸福、抑郁、对酒精或精神活性药物的依赖、 处方药物的副作用或激素缺乏引起。性快感缺乏包括性活动中快感较少或 消失。性快感缺乏可能由抑郁、药物或人际因素引起。性唤起障碍可能由 减少的雌激素、疾病或使用利尿药物、抗组胺剂、抗抑郁剂或抗高血压剂 的治疗引起。性交困难和阴道痉挛是由插入所导致的疼痛表征的性交疼痛 疾病，并且可能由例如减少润滑的药物、子宫内膜异位症、盆腔炎症性疾 病、炎性肠病或尿道问题引起。
2.0临床适应症和效用.
本文所公开的组合物和方法可用于医学应用和动物饲养或兽医应用。 通常，方法用于人，但是也可用于其他哺乳动物。术语“患者”旨在表示哺 乳动物个体，并且遍及说明书和权利要求书中如此使用。本发明的主要应 用包括人患者，但是本发明可应用于实验室动物、农场动物、动物园动物、 野生动物、宠物、运动动物(sport animal)或其他动物。
本发明的肽、组合物和方法可用于治疗性功能障碍，包括雄性勃起机 能障碍和雌性性功能障碍二者。在一个具体实施方案中，本发明的肽、组 合物和方法用于雄性患者以增加勃起机能，包括但不限于增加勃起机能以 便容许阴道交合。在另一具体实施方案中，本发明的肽、组合物和方法用 于治疗雌性性功能障碍，包括但不限于唤起成功率、性欲成功率和唤起和 性欲水平的增加。对于雌性性功能障碍，终点可以但不必须由大量被验证 的手段的任一种来确定，所述手段包括但不限于：雌性性压抑量表(Female Sexual Distress Scale)、雌性性接触概况(Female Sexual Encounter Profile)、 雌性性功能指数和总体评估问卷。被治疗雌性性功能障碍的患者可以是绝 经前的女性或绝经后的女性。
3.0某些适应症的组合治疗。
本发明的肽、组合物和方法可以通过与一种或多种其他药物活性化合 物组合施用来用于治疗任何上述疾病、适应症、病症或综合征或黑皮质素 受体介导的任何疾病、适应症、病症或综合征。这种组合施用可以借助于 单一剂型，所述单一剂型包括本发明的肽和一种或多种其他药物活性化合 物二者，这种单一剂型包括片剂、胶囊、喷雾剂、吸入粉末、注射液体或 类似物。可选择地，组合施用可以借助于两种不同剂型的施用，一种剂型 含有本发明的肽并且另一种剂型包含另一药物活性化合物。在这种情况 下，剂型可以是相同的或不同的。下文示例了可以采用的某些组合治疗， 但不旨在限制组合治疗。
3.1性功能障碍的组合治疗.
有可能并且思考了使用与用于治疗性功能障碍的其他药物或剂组合 的本发明环肽。这些其他药物和剂可以包括诱导勃起活性的剂，包括磷酸 二酯酶-5(PDE-5)抑制剂、睾酮、前列腺素以及类似物。在本发明的优选实 施方案中，本发明的环肽与治疗有效量的环-GMP特异性磷酸二酯酶抑制 剂或α-肾上腺素能受体拮抗剂组合使用。题目为“Multiple Agent Therapy for Sexual Dysfunction(性功能障碍的多药剂治疗)”的美国专利申请号美国专 利好7,235,625的教导和公开内容如同完整描述一样通过引用并入本文。
因此，本发明提供治疗性功能障碍的方法，所述方法包括给具有性功 能障碍或具有性功能障碍风险的患者施用治疗有效量的本发明环肽与治 疗有效量的第二性功能障碍药剂的组合的步骤。本发明的环肽可以在治疗 有效量的第二性功能障碍药剂施用的同时、之前或之后施用。优选地，在 施用治疗有效量的第二性功能障碍药剂的一小时内，优选小于半小时之内 施用本发明的肽。然而，对于某些形式的组合治疗，诸如与治疗有效量的 激素或激素相关性功能障碍药剂的组合，所述激素或激素相关的性功能障 碍药剂可以独立的时间表施用，以便在本发明肽和所述激素和激素相关的 性功能障碍药剂施用之间没有固定的或特定的时间关系。因此，当患者希 望或需要时，例如，激素或激素相关的性功能障碍药剂可以每日一次或以 其他剂量或借助于贴剂或其他连续施用方案与本发明肽的施用一起施用。
因此，本发明提供治疗性功能障碍的方法，所述方法包括给具有性功 能障碍或具有性功能障碍风险的患者施用治疗有效量的本发明环肽与可 用于治疗性功能障碍的另一化合物的组合的步骤。在组合治疗的优选实施 方案中，性功能障碍是雌性性功能障碍。在组合治疗的尤其优选的实施方 案中，性功能障碍是勃起机能障碍。
本发明还提供了包含本发明的环肽和可用于治疗性功能障碍的第二 化合物的药物组合物。在组合物的实施方案中，可用于治疗性功能障碍的 其他化合物优选选自但不限于由下列组成的组：磷酸二酯酶抑制剂；环 -GMP-特异性磷酸二酯酶抑制剂；前列腺素；阿朴吗啡；催产素调节剂；α- 肾上腺素能拮抗剂；雄激素；选择性雄激素受体调节剂(SARM)；安非他 酮(buproprion)；血管活性肠肽(VIP)；中性内肽酶抑制剂(NEP)；和神 经肽Y受体拮抗剂(NPY)。
在方法和组合物的实施方案中，第二性功能障碍药剂是睾酮。
在组合治疗的另一实施方案中，第二性功能障碍药剂是V型磷酸二酯 酶(PDE-5)抑制剂。例如，PDE-5抑制剂可以是昔多芬的商标； 伐地那非一盐酸盐的商标；或他达拉非(tadalafil)的 商标。其他PDE-5抑制剂公开于2007年6月22日授权的并且题目为 “Multiple Agent Therapy for Sexual Dysfunction(性功能障碍的多药剂治 疗)”的美国专利第7,235,625号中，通过引用并入本文。
在上述组合物的另一实施方案中，可用于治疗性功能障碍的化合物是 雌激素激动剂/拮抗剂。在一个实施方案中，雌激素激动剂/拮抗剂是(-)-顺 -6-苯基-5-[-4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氢-萘-2-醇(还称为拉 索昔芬)或其光学异构体或几何异构体；药学上可接受的盐、N-氧化物、 酯、季铵盐；或其前药。更优选地，雌激素激动剂/拮抗剂是D-酒石酸盐 的形式。
在上述组合物的又一实施方案中，雌激素激动剂/拮抗剂选自由下列组 成的组：他莫昔芬、4-羟基他莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、 森可曼(centchroman)、碘昔芬、6-(4-羟基-苯基)-5-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)- 苄基]-萘-2-醇、{4-[2-(2-氮杂-二环[2.2.1]庚-2-基)-乙氧基]-苯基}-[6-羟基 -2-(4-羟基-苯基)-苯并[b]噻吩-3-基]-甲酮、EM-652、EM-800、GW 5368、 GW 7604、TSE-424或其光学异构体或几何异构体；以及药学上可接受的 盐、N-氧化物、酯、季铵盐；及其前药。
在又一实施方案中，本发明的环肽可以与任何已知的机械辅助设备或 装置组合使用。
本发明还提供用于治疗性功能障碍(包括勃起机能障碍)的药盒，所 述药盒包括：包含本发明的环肽的第一药物组合物；包含可用于治疗性功 能障碍的第二化合物的第二药物组合物；以及用于第一组合物和第二组合 物的容器。
4.0施用和使用方法.
施用和使用的方法依据具体的本发明肽的特征、待治疗的疾病、适应 症、病症或综合征、以及本领域中已知的其他因素而变化。一般地，本领 域中已知的或以后开发的任何施用和使用方法可用于本发明的肽。不限制 上文，下列施用和使用方法对指定的适应症具有特定应用。
可以通过皮下注射施用包含一种或多种本发明的肽的组合物。在一个 方面，将本发明的环肽与诸如聚乙二醇3350的聚乙二醇和任选的一种或 多种另外的赋形剂和防腐剂一起配制以用于制剂的深肌内注射，例如在臀 肌或三角肌中，所述赋形剂和防腐剂包括但不限于诸如盐、聚山梨酸酯80、 调节pH的氢氧化钠或盐酸以及类似物等赋形剂。在另一方面，本发明的 环肽可以与聚(原酸酯)和任选的一种或多种另外的赋形剂一起配制，所述 聚(原酸酯)可以是自催化的聚(原酸酯)，在聚合物骨架中具有任何可变百分 比的乳酸。在一个方面，采用聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物。一般地， 大量注射的和生物蚀解的聚合物的任一种可用于持续释放注射制剂中，所 述注射的和生物蚀解的聚合物优选还是粘性聚合物。可选择地，可以采用 其他持续释放制剂，包括容许皮下注射的制剂，所述其他制剂可以包括下 列的一种或多种：毫微球/微球(例如，包含PLGA聚合物的组合物)、脂 质体、乳液(例如油包水乳液)、凝胶、可溶性盐或在油中的悬浮液。制 剂可以是依据环肽的浓度和量、所采用材料的持续释放速率和本领域的那 些技术人员已知的其他因素而需要每日一次、每周一次、每月一次或基于 其他间隔而注射的制剂。
包含一种或多种本发明的肽的组合物可以以诸如片剂或胶囊的单剂 型口服施用。在一个方面，单剂型包括肠溶包衣和任选的一种或多种增加 摄入的剂、降低蛋白酶降解的剂、增加细胞透性的剂以及类似物。
对于性功能障碍，在优选的方面，本发明的一种或多种肽被配制为使 得它可以根据需要在诸如预期的性活动之前约小于1小时、小于2小时或 小于约4小时施用。在一个方面，将组合物配制为用于皮下注射。在另一 方面，将组合物配制为用于多种经皮施用途径的任一种，包括含服施用、 经鼻施用、吸入施用以及类似途径。在另一方面，将组合物配制为用于经 鼻施用，例如借助于递送约20至约200μL体积的含水组合物的计量喷雾 装置，所述含水组合物包含多种其他剂的任一种，包括透性增强剂。
5.0制备方法.
一般地，可以通过固相合成来合成本发明的肽并根据本领域中已知的 方法纯化。可以使用采用多种树脂和试剂的大量熟知程序的任一种来制备 本发明的肽。
可以通过用于形成氨基酸之间的肽键的已知常规程序来容易地合成 本发明的环肽。这种常规程序包括：例如，容许在羧基和其他反应性基团 被保护的氨基酸或其残基的游离α氨基与氨基或其他反应性基团被保护的 另一氨基酸或其残基的游离α羧基之间进行缩合的任何液相程序。在优选 的常规程序中，可以通过固相合成来合成本发明的环肽并根据本领域中已 知的方法纯化。可以使用采用多种树脂和试剂的大量熟知程序的任一种来 制备本发明的肽。
合成环肽的方法可以通过其中将期望序列中的每个氨基酸一次一个 连续添加至另一氨基酸或其残基的程序进行；或者通过其中具有首先常规 合成具有期望的氨基酸序列的肽片段并然后缩合以提供期望的肽的程序。 然后将所得肽环化以产生本发明的环肽。
固相肽合成方法是在本领域中熟知的和实践的。在这种方法中，本发 明的肽的合成可以根据固相方法的一般原则通过将期望的氨基酸残基一 次一个顺序掺入到增长的肽链中来进行这些方法公开于大量参考文献 中，包括Merrifield，R.B.，Solid phase synthesis(Nobel lecture)(固相合成 (诺贝尔讲座)).Angew Chem 24：799-810(1985)以及Barany等人，ThePeptides，Analysis，Synthesis and Biology(肽、分析、合成和生物学)，第2 卷，Gross，E.和Meienhofer，J.，编辑.Academic Press 1-284(1980)。
在肽的化学合成中，用合适的保护基团保护多个氨基酸残基的反应性 侧链基团，所述保护基团保护该位点不发生化学反应直到该保护基团被移 除。还常见的是在实体在羧基处反应时保护氨基酸残基或片段的α氨基， 随后选择性移除α氨基保护基团以容许在该位点发生后续反应。特异性保 护基团已经被公开并且是固相合成方法和液相合成方法中已知的。
可以用合适的保护基团保护α氨基，包括尿烷型保护基团，例如苄氧 羰基(Z)和取代的苄氧羰基，如对-氯苄氧羰基(Z-Cl)、对-硝基苄氧羰基 (X-NO2)、对-溴苄氧羰基(Z-Br)、对-联苯基-异丙氧羰基、9-芴基甲氧羰基 (Fmoc)和对-甲氧基苄氧羰基(Moz)；以及脂肪族尿烷型保护基团，例如叔 -丁氧羰基(Boc)、二异丙基甲氧羰基、异丙氧羰基和烯丙氧羰基(Alloc)。 Fmoc优选用于α氨基保护。
可以用下列合适的保护基团保护胍基：例如，硝基、对-甲苯磺酰基 (Tos)、Z、五甲基色烷磺酰基(Pmc)、金刚烷基氧基羰基、五甲基二氢苯 并呋喃-5-磺酰基(Pbf)和Boc。Pbf和Pmc是Arg的优选保护基团。
本文所述的本发明的肽是使用固相合成制备的，例如借助于Symphony Multiplex Peptide Synthesizer(Rainin Instrument Company)自动化肽合成仪， 使用如厂家提供的编程模块并根据厂家的手册中所描述的方案进行。
固相合成是通过将被保护的α氨基偶联至合适的树脂上而从肽的C-末 端开始的。如下制备这种起始材料：经由酯键将α氨基被保护的氨基酸附 连到对苄氧基苄醇(Wang)树脂、2-氯三苯甲基氯树脂或肟树脂上；通过 Fmoc-连接物如对-[(R，S)-α-[1-(9H-氟-烯-9-基)甲氧基甲酰胺基]-2，4-二甲 氧基苄基]-苯氧乙酸(Rink连接物)与二苯甲胺(BHA)树脂之间的酰胺键； 或者通过本领域中熟知的其他方法。Fmoc-连接物-BHA树脂载体是商购获 得的并且一般在可行时使用。通过按需要顺序添加氨基酸的重复循环加载 树脂。在碱性条件下移除α氨基Fmoc保护基团。在N，N-二甲基甲酰胺 (DMF)中的哌啶、哌嗪、二乙胺或吗啉(20-40％v/v)可用于这种目的。
在移除α氨基保护基团之后，以期望顺序逐步偶联后续的被保护的氨 基酸以获得中间物保护的肽-树脂。在肽的固相合成中用于偶联氨基酸的激 活试剂是本领域中熟知的。在肽合成后，如果期望，可以使用本领域中熟 知的方法移除被正交保护的侧链保护基团以便进一步衍生肽。
通常，正交保护基团在适当时使用。例如，本发明的肽含有多个具有 含氨基侧链的氨基酸。在一个方面，Allyl-Alloc保护方案用于通过氨基酸 的侧链形成内酰胺桥接的氨基酸并且在不同的反应条件下可裂解的正交 保护基团用于具有含氨基侧链的其他氨基酸。因此，例如 Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Orn(Alloc)-OH、Fmoc-Dap(Alloc)-OH、 Fmoc-Dab(Alloc)-OH、Fmoc-Asp(OAll)-OH或Fmoc-Glu(OAll)-OH氨基酸 可用于环化后形成内酰胺桥接的位置，而具有含氨基侧链的其他氨基酸具 有不同的正交保护基团，例如具有Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Pbf)-OH、 Fmoc-Dab(Pbf)-OH或类似保护基团。可以类似地采用其他保护基团，例如 但不限于：Mtt/OPp(4-甲基三苯甲基/2-苯基异丙基)可用于在环化后形成 内酰胺桥接的侧链，正交保护基团用于不可以使用适于Mtt/OPp裂解的条 件裂解的其他位置。
可以在固相合成期间或在从树脂上移除之后选择性地修饰肽中的反 应性基团。例如，可以在位于树脂上时修饰肽以获得N-末端修饰，如乙酰 化，或者可以使用裂解剂从树脂上移除，然后修饰。类似地，用于修饰氨 基酸侧链的方法是肽合成的领域中的那些技术人员所熟知的。对肽上所存 在的反应性基团进行的修饰的选择将部分地由肽中所期望的特征所确定。
在本发明的肽中，在一个优选的实施方案中，N-末端基团是通过引入 N-乙酰基而修饰的。在一个方面，采用如下的方法：其中在移除N-末端的 保护基团之后，使树脂结合的肽在存在诸如二异丙基乙胺的有机碱的条件 下与在二氯甲烷中的乙酸酐反应。N-末端乙酰化的其他方法是本领域中已 知的，包括液相乙酰化，并且可以采用这些方法。
在一个实施方案中，可以在从肽树脂上裂解之前将肽环化。对于通过 反应性侧链部分的环化，将期望的侧链脱保护，并将肽悬浮于合适的溶剂 中并添加环化偶联剂。合适的溶剂包括：例如DMF、二氯甲烷(DCM)或 1-甲基-2-吡咯酮(NMP)。合适的环化偶联剂包括：例如，2-(1H-苯并三唑 -1-基)-1，1，3，3-四甲基四氟硼酸脲(TBTU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3- 四甲基六氟磷酸脲(HBTU)、苯并三唑-1-基-氧基-三(二甲氨基)六氟磷酸鏻 (BOP)、苯并三唑-1-基-氧基-三(吡咯烷)六氟磷酸鏻(PyBOP)、2-(7-氮杂-1H- 苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基四氟硼酸脲(TATU)、2-(2-氧代-1(2H)-吡啶 基)-1，1，3，3-四甲基四氟硼酸脲(TPTU)或N，N′-二环己基碳二亚胺/1-羟基苯 并三唑(DCCI/HOBt)。偶联常规上是通过使用如下的合适的碱启动的，例 如N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)、对称-可力丁(sym-collidine)或N-甲基吗啉 (NMM)。
然后可以使用如下的任何合适试剂将环化的肽从固相上裂解：在DCM 中的乙胺或诸如三氟乙酸(TFA)、三异丙基硅烷(TIS)、二甲氧基苯 (DMB)、水以及类似物等剂的多种组合。干燥所得的粗肽并且若存在剩余 的氨基酸侧链保护基团，则使用如下的任何合适的试剂将其裂解，例如(在 存在水的条件下的TFA、TIS、2-巯基乙烷(2-mercaptopethane，ME)和/或 1，2-乙烷二硫醇(EDT)。通过添加冷的醚沉淀终产物并且通过过滤收集。 通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)使用诸如C18柱子的合适的柱子进行最 终的纯化，或者还可以采用分离或纯化的其他方法，例如基于肽的大小或 电荷的方法。纯化后，可以通过任何数目的方法表征肽，例如高效液相色 谱(HPLC)、氨基酸分析、质谱以及类似方法。
尽管主要参考固相Fmoc化学法描述了合成，但是应理解可以采用其 他化学方法和合成方法来制备本发明的环肽，例如但不限于：采用Boc化 学法、溶液化学法和其他的化学方法的方法和合成方法。
6.0制剂.
包含一种或多种本发明的环肽的组合物的制剂可以依据期望的施用 途径而变化。因此，制剂可以适于皮下注射、或静脉内注射、用于局部应 用、用于眼部应用、用于鼻腔喷雾应用、用于吸入应用、用于其他经皮应 用和类似应用。
6.1本发明的环肽的盐形式.
本发明的环肽可以呈任何药学上可接受的盐的形式。术语“药学上可接 受的盐”是指由药学上可接受的无毒性碱或酸制备的盐，所述药学上可接受 的无毒性碱或酸包括无机碱或有机碱和无机酸或有机酸。由无机碱衍生的 盐包括：铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、 亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐以及类似盐。尤其优选的是：铵盐、钙盐、锂 盐、镁盐、钾盐和钠盐。由药学上可接受的无机无毒性碱衍生的盐包括下 列物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺、包括天然存在的取代的胺的取代的胺、 环状胺、和碱性离子交换树脂，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′- 二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、二 乙胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺 (glucosamine)、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡 萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙 胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇以及类似物。
当本发明的环肽是碱性的时，可以由药学上可接受的无毒性酸制备酸 加成盐，所述无毒性酸包括无机酸和有机酸。这种酸包括：乙酸、苯磺酸、 苯甲酸、樟脑磺酸、羧酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、葡糖酸、谷 氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺 酸、丙二酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、硫酸、酒 石酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸以及类似酸。本发明的肽的酸加成盐是在合 适的溶剂中由肽和过量的下列酸制备的：例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、 乙酸、三氟乙酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、琥珀酸或甲磺酸。乙酸盐、 乙酸铵和三氟乙酸盐形式是尤其有用的。在本发明的肽包含酸性部分时， 合适的药学上可接受的盐可以包括碱金属盐，如钠盐或钾盐；或碱土金属 盐，如钙盐或镁盐。
6.2药物组合物.
本发明提供包含本发明的环肽和药学上可接受的载体的药物组合物。 载体可以是液体制剂，并且优选是缓冲溶液、等渗溶液、含水溶液。如下 文所描述的，药学上可接受的载体还包括诸如稀释剂、载体以及类似物的 赋形剂；和诸如稳定剂、防腐剂、增溶剂、缓冲剂以及类似物的添加剂。
如可能期望的，可以将本发明的环肽组合物配制或化合成包含至少一 种本发明的环肽以及一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物，所述 药学上可接受的载体包括诸如稀释剂、载体以及类似物的赋形剂和诸如稳 定剂、防腐剂、增溶剂、缓冲剂和类似物的添加剂。制剂的赋形剂可以包 括聚乙烯吡咯酮、明胶、羟基纤维素、阿拉伯胶、聚乙二醇、甘露醇 (manniton)、氯化钠和柠檬酸钠。对于注射或其他液体施用制剂，含至少一 种或多种缓冲组分的水是优选的，并且还可以采用稳定剂、防腐剂和增溶 剂。对于固体施用制剂，可以采用多种增稠性添加剂、填充添加剂、膨胀 添加剂和载体添加剂的任一种，例如淀粉、糖、脂肪酸和类似物。对于局 部施用制剂，可以采用多种乳剂、软膏、凝胶、洗剂以及类似形式的任一 种。对于大多数药物制剂，按重量或体积计，非活性成分将组成制剂的较 大部分。对于药物制剂，还构思了多种控释(measured-release)、缓释或延 时释放(time-release)的任一种并且可以采用添加剂，以便可以配制计量 以实现本发明的肽在一段时间内的递送。
一般地，施用给患者的本发明的环肽的实际量将依据施用模式、使用 的制剂以及期望的反应而在相当广泛的范围内变化。
在具体应用中，可以根据常规的药物化合技术将本发明的环肽作为活 性成分以混合物形式与药物载体组合。载体可以依据期望用于施用的制剂 形式而采取多种形式，例如，口服、肠胃外(包括静脉内)、尿道、阴道、 直肠、经鼻、含服、舌下或类似形式。在制备用于口服剂型的组合物中， 可以采用任何常见的药物介质，诸如，水、二醇、油、醇、调味剂、防腐 剂、着色剂以及在口服液体制剂如悬浮液、酏剂和溶液情况下的类似物； 或载体，例如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、粒化剂、润滑剂、粘合剂、 崩解剂以及在口服固体制剂如粉剂、硬胶囊和软胶囊以及片剂情况下的类 似物。
由于片剂和胶囊易于施用，所以它们代表了有利的口服剂量单元形 式。如果需要，可以通过标准的含水或不含水技术包被片剂。在这种治疗 上有用的组合物中活性肽的量是使得将获得有效剂量的量。在另一有利的 剂量单元形式中，可以采用舌下构造，例如薄片、圆片、片剂或类似物。
片剂、丸剂、胶囊以及类似形式还可以含有粘合剂，例如西黄蓍胶、 阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米 淀粉、土豆淀粉或海藻酸；润滑剂，例如硬脂酸镁；以及甜味剂，例如蔗 糖、乳糖或糖精。当剂量单元形式是胶囊时，除了上述类型的材料外它还 可以含有液体载体，如脂肪油。
可以采用多种其他材料作为包衣或用于改变剂量单元的物理形式。例 如，可以用虫胶、糖或二者来包被片剂。除了活性成分外，糖浆或酏剂可 以含有：作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯 甲酸丙酯、染料和如樱桃味或橙味的调味剂。
还可以肠胃外施用环肽。可以在水中与诸如羟丙基纤维素的表面活性 剂适当混合而制备这些活性肽的溶液或悬浮液。还可以在甘油、液体聚乙 二醇和它们在油中的混合物中制备分散液。这些制剂可以任选地含有防腐 剂以防止微生物的生长。
适于注射用途的药物形式包括无菌水溶液或分散液以及用于临时制 备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。在所有情况下，形式必须是无菌的 并且必须是流动的，流动的程度为可以通过注射器施用的程度。形式必须 在制造和储存的条件下是稳定的，并且必须保存在抵抗诸如细菌和真菌等 微生物的污染作用的条件下。载体可以是含有下列物质的溶剂或分散介 质，例如水；乙醇；多元醇，例如甘油、丙二醇或液体聚乙二醇；他们的 合适混合物以及植物油。
可以借助于经鼻施用而治疗性地应用本发明的环肽。所谓“经鼻施用” 意指任何本发明的环肽的鼻内施用的任何形式。肽可以在含水溶液中，例 如包含盐水、柠檬酸盐或其他常见赋形剂或防腐剂的溶液。肽还可以呈干 燥制剂或粉末制剂形式。
本发明的环肽可以与增加药物的有效的经鼻吸收的多种剂的任一种 一起配制，所述药物包括肽药物。这些剂应增加经鼻吸收而没有不可接受 的粘膜损伤。美国专利第5,693,608号、第5,977,070号和第5,908,825号 以及其他专利教导了可以采用的大量药物组合物，所述药物组合物包含吸 收促进剂，并且上述专利和本文引用的所有参考文献和专利的每一个的教 导均通过引用并入。
如果是在含水溶液中，则可以借助于盐水、乙酸盐、磷酸盐、柠檬酸 盐、乙酸盐或可以在任何生理上可接受的pH的其他缓冲剂适当地缓冲环 肽，所述生理上可接受的pH一般为约pH 4至约pH 7。还可以采用缓冲剂 的组合，例如磷酸盐缓冲盐水、盐水和乙酸盐缓冲剂以及类似物。在盐水 的情况下，可以采用0.9％盐水溶液。在乙酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐以及类 似物的情况下，可以采用50mM溶液。除了缓冲剂外，可以采用合适的防 腐剂来防止或限制细菌和其他微生物生长。可以采用的一种此类防腐剂是 0.05％苯扎氯铵。
在替代性实施方案中，可以将本发明的环肽直接施用至肺中。可以借 助于计量剂量吸入器来进行肺内施用，计量剂量吸入器是容许在吸气期间 被患者启动时自我施用本发明肽的计量推注的装置。在这种实施方案的一 个方面，环肽可以呈干燥的颗粒形式，例如在约0.5和6.0μm之间的粒子， 以便使粒子具有足以停留在肺表面并且不会被呼出的质量，但是还小得足 以使它们不会在到达肺之前沉积在气道表面上。可以使用多种不同技术的 任一种来制备干粉微粒，包括但不限于：微研磨、喷雾干燥和快速冷冻气 雾剂然后冻干。经由微粒，可以将肽沉积到深肺，从而能够快速和有效地 吸入到血流中。另外，经由这种方法，不需要渗透促进剂，渗透促进剂在 经皮、经鼻或口服粘膜递送途径中有时是需要的。可以采用多种吸入器的 任一种，包括基于推进剂的气雾剂、喷雾器、单剂量干粉吸入器和多剂量 干粉吸入器。目前使用的常见装置包括计量剂量吸入器，它用于递送用于 治疗哮喘、慢性阻塞性肺疾病以及类似疾病的药物。优选的装置包括被设 计为形成粒度通常小于约6.0μm的细粉的烟或气雾剂的干粉吸入器。
可以借助于制备方法来控制微粒大小，包括平均大小分布。对于微研 磨，研磨头的大小、转子的速度、加工时间以及类似参数控制微粒大小。 对于喷雾干燥，喷嘴大小、流速、干燥器热度以及类似参数控制微粒大小。 对于借助于快速冷冻气雾剂、然后冻干的制备，喷嘴大小、流速、气雾化 溶液的浓度以及类似参数控制微粒大小。可以采用这些参数和其他参数来 控制微粒大小。
本发明的环肽可以借助于注射来治疗性地施用，通常是延时释放注射 制剂的深肌内注射，例如在臀肌或三角肌中。在一个实施方案中，本发明 的环肽与诸如聚乙二醇3350的聚乙二醇和任选的一种或多种另外的赋形 剂和防腐剂一起配制，所述赋形剂和防腐剂包括但不限于诸如盐、聚山梨 酸酯80、调节pH的氢氧化钠或盐酸以及类似物等赋形剂。在另一实施方 案中，本发明的环肽可以与聚(原酸酯)和任选的一种或多种另外的赋形剂 一起配制，所述聚(原酸酯)可以是自催化的聚(原酸酯)，在聚合物骨架中具 有任何可变百分比的乳酸。在一个实施方案，采用聚(D，L-丙交酯-共-乙交 酯)聚合物。一般地，大量注射的和生物蚀解的聚合物的任一种可用于延时 释放注射制剂中，所述注射的和生物蚀解的聚合物优选还是粘性聚合物。 制剂可以是依据环肽的浓度和量、聚合物的生物侵蚀率以及本领域的那些 技术人员已知的其他因素而需要每周一次、每月一次或基于其他间隔而注 射的制剂。
6.3本发明的肽的口服制剂
在一个方面，将本发明的环肽配制为用于口服递送。优选将肽配制和 制备为使得其包装在肠道推进剂中，更优选使得其在片剂或胶囊经过胃并 且任选进一步经过小肠的一部分之前不被释放。在这种应用的上下文中， 应理解，术语肠道包衣或材料是指将基本上完整地通过胃但是在小肠中迅 速崩解释放活性药物的包衣或材料。可以使用的一种肠道包衣溶液包含乙 酸邻苯二甲酸纤维素和任选的其他成分，例如氢氧化铵、三醋汀、乙醇、 亚甲蓝和纯化水。已经将乙酸邻苯二甲酸纤维素用于制药工业中以用于肠 道包衣单剂型，例如片剂和胶囊，并且其在小于约5.8的pH下不溶于水。 包含乙酸邻苯二甲酸纤维素的肠道包衣提供抵抗胃的酸性环境的保护，但 是在十二指肠的环境(pH为约6-6.5)中开始溶解，并且在剂型到达回肠 (pH为约7-8)之时完全溶解。除了乙酸邻苯二甲酸纤维素之外，其他肠 道包衣材料是已知的并且可用于本发明的肽，包括但不限于琥珀酸羟丙基 甲基乙基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸 酯和甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物。所采用的肠道包衣促进剂型主要 在胃外的部位溶解，并且可以选择其使得肠道包衣在约至少6.0的pH下溶 解，更优选在约6.0至约8.0的pH下溶解。在一个优选的方面，肠道包衣 在接近回肠处溶解并分解。
可以采用多种渗透促进剂的任一种来增加肠道包衣溶解后肠中的摄 入。在一个方面，渗透促进剂增加细胞旁或跨细胞运输系统。细胞旁运输 的增加是通过打开细胞的紧密连接达到的；跨细胞运输的增加可能是通过 增加细胞膜的流动性达到的。这种渗透促进剂的代表性非限制实例包括钙 螯合剂、胆汁盐(例如胆酸钠)和脂肪酸。本发明的肽可以为在肠道包衣 胶囊中包含脂肪酸以增加细胞胖运输的肠道包衣单剂型，所述脂肪酸例如 油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、癸酸钠或共轭亚油酸。
在一个方面，诸如片剂或胶囊的单剂型任选还包含已知的常见大小和 量的下列物质：诸如聚维酮的常见药物粘合剂、稀释剂、助流剂、诸如微 晶纤维素的填充剂、诸如硬脂酸镁的润滑剂、诸如交联羧甲基纤维素钠的 崩解剂、防腐剂、着色剂以及类似物。在一些实施方案中，进一步添加充 当肠蛋白酶底物的肽或多肽。
6.4施用途径.
如果包含本发明的一种或多种环肽的组合物是通过注射施用的，则注 射可以是静脉内的、皮下的、肌内的、腹膜内的或本领域中已知的其他方 式。本发明的肽可以通过本领域中已知的任何方式配制，包括但不限于如 下制剂：片剂、胶囊、锭剂、悬浮剂、粉剂、冻干制剂、栓剂、滴眼液、 皮肤贴剂、口服可溶性制剂、喷雾、气雾剂以及类似制剂，并且本发明的 肽可以与缓冲剂、粘合剂、赋形剂、稳定剂、抗氧化剂和本领域中已知的 其他剂一起混合和配制。一般地，可以采用跨细胞的表皮层将本发明的肽 引入的任何施用途径。因此施用方式可以包括通过粘膜的施用、含服施用、 口服施用、皮肤施用、吸入施用、经鼻施用、尿道施用、阴道施用、直肠 施用以及类似方式。
6.5治疗有效量.
一般地，施用给患者的本发明的环肽的实际量将依据施用模式、使用 的制剂以及期望的反应而在相当广泛的范围内变化。通过上述方式的任一 种或本领域中已知的任何其他方式施用足以带来期望的治疗效果的量的 用于治疗的剂量。因此，治疗有效量包括足以治疗性地减轻患者的性功能 障碍或预防或延缓性功能障碍的发病或复发的本发明肽或药物组合物的 量。
一般地，本发明的环肽是高活性的。例如，环肽可以依据所选择的具 体肽、期望的治疗反应、施用途径、制剂和本领域中的那些技术人员已知 的其他因素而以约0.1、0.5、1、5、50、100、500、1000或5000μg/kg体 重施用。
7.0在本发明的肽的评定中所采用的测试和测定.
可以通过测定结合、功能状态和功效的多种测定系统和动物模型来测 试本发明的黑皮质素受体特异性环肽。
7.1使用[I125]-NDP-α-MSH的竞争性抑制测定.
竞争性抑制结合测定使用由表达重组的hMC4-R、hMC3-R或hMC5-R 的HEK-293细胞制备的膜匀浆和由B-16小鼠黑素瘤细胞(含有内源 MC1-R)制备的膜匀浆进行。在一些情况下，采用表达重组hMC1-R的 HEK-293细胞。在下面的实例中，所有的MC3-R、MC4-R和MC5-R值均 是人重组受体的值。MC1-R值是B-16小鼠黑素瘤细胞的值，除非标题是 “hMC1-R”，在这种情况下该值是人重组MC1-R的值。在预涂覆0.5％牛血 清白蛋白(Fraction V)的96孔GF/B Millipore multiscreen滤板(MAFB NOB10)中进行测定。用在缓冲液中的0.2nM(对于hMC4-R)、0.4nM(对 于MC3-R和MC5-R)或0.1nM(对于小鼠B16 MC1-R或hMC1-R) [I125]-NDP-α-MSH(Perkin Elmer)和递增浓度的本发明环肽孵育膜匀浆，所 述缓冲液含有具有100mM NaCl、2mM CaCl2、2mM MgCl2、0.3mM 1，10- 菲咯啉和0.2％牛血清白蛋白的25mM HEPES缓冲液(pH 7.5)。在37℃孵 育60分钟后，过滤测定混合物并用冰冷的缓冲液洗涤膜三次。干燥滤器 并在伽玛计数仪中计数结合的放射活性。通过在存在1μM NDP-α-MSH的 情况下[I125]-NDP-α-MSH结合的抑制来测量非特异性结合。最大的特异性 结合(100％)定义为在不存在和存在1μM NDP-α-MSH的情况下与细胞膜 结合的放射活性(cpm)之差。将在存在测试化合物的条件下获得的放射活性 (cpm)相对于100％特异性结合标准化以测定[I125]-NDP-α-MSH结合的百分 比抑制。一式三份进行各测定并且记述实际的平均值，小于0％的结果报 道为0％。使用Graph-Pad曲线拟合软件测定本发明的环肽的Ki值。 本文报道的与hMC1-R和hMC4-R结合的数据采用了[I125]-NDP-α-MSH， 与hMC3-R结合的一些数据也如此。
7.2使用Eu-NDP-α-MSH的竞争性结合测定.
可选择地，采用Eu-NDP-α-MSH(PerkinElmer Life Sciences目录号 AD0225)通过镧系螯合物的时间分辨荧光法(TRF)测定来进行竞争性抑制 结合测定。在与[I125]-NDP-α-MSH的比较研究中，获得了在实验误差范围 内的百分比抑制和ki相同值。通常，测定Ki值的竞争实验通过用在含有 下列物质的溶液中的9种不同浓度的本发明环肽和1nM Eu-NDP-α-MSH 孵育由HEK-293细胞制备的膜匀浆而进行：具有100mM NaCl、2mM CaCl2、2mM MgCl2、0.1％BSA和0.3 mM 1，10-菲咯啉的25mM HEPES 缓冲液。在37℃孵育90分钟滞后，通过经由AcroWell 96孔滤板(Pall Life Sciences)的过滤终止反应。用200μL冰冷的磷酸盐缓冲盐水洗涤滤板4次。 添加DELFIA增强液(PerkinElmer Life Sciences)至各孔。将板在振荡器上孵 育15分钟并在340nm激发波长和615nm发射波长下读数。一式两份进 行每个测定并采用平均值。通过用Graph-Pad软件使用单点定斜率 竞争结合模型测定ki值。本文所报道的关于与hMC5-R结合的数据和关于 hMC3-R和hMC4-R的一些数据采用了Eu-NDP-α-MSH。
7.3使用[I125]-AgRP(83-132)的竞争性结合测定.
使用[I125]-AgRP(83-132)的竞争性结合研究使用自表达hMC4-R的细 胞分离的膜匀浆进行。在预涂覆0.5％牛血清白蛋白(Fraction V)的96孔 GF/B Millipore multiscreen滤板(MAFB NOB10)中进行测定。测定混合物 含有具有下列物质的25mM HEPES缓冲液(pH 7.5)：100mM NaCl、2mM CaCl2、2mM MgCl2、0.3mM 1，10-菲咯啉、0.5％牛血清白蛋白、膜匀浆、 放射性配体[I125]-AgRP(83-132)(Perkin Elmer)和总体积为200μL的递增浓 度的本发明肽。在0.2nM的放射性配体浓度下测量结合。在37℃孵育1 小时后，过滤反应混合物并用含有500mM NaCl的测定缓冲液洗涤。从板 上冲压出干燥的圆片并在伽玛计数仪上计数。总的放射性配体结合不超过 添加至反应混合物中的总数的10％。使用Graph-Pad曲线拟合软件 测定本发明的环肽的Ki值。
7.4激动剂活性的测定.
检测细胞内cAMP的积累，将其作为本发明的环肽引发表达MC4-R 的HEK-293细胞中的功能反应的能力的量度。通过在不含酶的细胞解离缓 冲液中孵育而使表达重组hMC4-R的汇合的HEK-293细胞从培养板脱离。 将分散的细胞悬浮在含有下列物质的Earle’s平衡盐溶液中：10mM HEPES (pH 7.5)、1mM MgCl2、1mM谷氨酰胺、0.5％白蛋白和0.3mM 3-异丁基 -1-甲基-黄嘌呤(IBMX)、磷酸二酯酶抑制剂。将细胞以0.5×105个细胞/孔 的密度在96孔板中铺板并预孵育30分钟。在37℃下将细胞暴露于本发明 的测试环肽中，所述环肽以200μL的总测定体积，0.05-5000nM的浓度 范围溶解在DMSO中(DMSO终浓度为1％)。使用NDP-α-MSH作为参考 激动剂。在孵育阶段结束时，通过添加50μL裂解缓冲液(cAMP EIA试 剂盒，Amersham)然后剧烈吸打来破坏细胞。使用cAMP EIA试剂盒 (Amersham)测定裂解物中cAMP的水平。通过用Graph-Pad软件的 非线性回归分析进行数据分析。将本发明环肽的最大功效与参考黑皮质素 激动剂NDP-αMSH所达成的最大功效进行比较。
7.5食物摄入和体重改变.
对于通过静脉内(IV)或皮下注射途径施用的选择的肽进行了食物摄入 和体重改变的评定。雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠自Hilltop Lab Animals， Inc.(Scottsdale，PA)或其他卖主获得。将动物分别圈养在常规的聚苯乙烯吊 笼中并保持受控的12小时开/关光周期。随意提供水和丸状食物。向大鼠 静脉内给药媒介物或选择的肽(0.3至1.0mg/kg)，或皮下给药媒介物或选 择的肽(最多30mg/kg的剂量)。在给药后24小时的时间内测定体重和食 物摄入的改变。还测量了给药后48小时和72小时的时间内的体重和食物 摄入改变，以测定出体重和食物摄入改变的影响回复至基线水平的逆转。
7.6阴茎勃起的诱导.
用选择的肽评定了本发明的肽诱导雄性大鼠阴茎勃起(PE)的能力。在 具有随意的食物和水的条件下，将重量为250-300g的雄性SD大鼠保持在 12小时开/关光周期中。所有的行为研究均在上午9点至下午4点之间进 行。经由静脉内途径给6-8只大鼠的小组施用多种剂量。处理后，立即将 大鼠放置在单独的聚苯乙烯笼(27cm长，16cm宽且25cm高)中进行行 为观察，通常通过远程录像监测。观察大鼠1小时，以10分钟仓(bin) 记录打哈欠次数、理毛行为发作次数和PE次数。
8.0本发明的肽
式(I)中所涵盖的环肽含有一个或多个不对称元素，例如立体中心、立 体轴以及类似物，以便使式(I)中所涵盖的肽可以以不同的立体异构形式存 在。对于包括式(I)中涵盖的肽在内的具体的肽和一般性描述的肽，在所有 的手性中心或其他异构中心的所有异构体形式都旨在涵盖在本文中，所述 异构体形式包括对映体和非对映体。本发明的肽每种包含多个手性中心， 并且除了对映纯的制剂的本发明肽的使用外，还可以作为外消旋混合物或 富对映体混合物使用。通常，使用诸如指定的L-氨基酸或D-氨基酸的手 性纯的试剂采用使得能保持异构体纯度的试剂、条件和方法来合成本发明 的肽，但是还可能且构思的是可以制备外消旋混合物。任选地可以使用熟 知的技术来分离这种外消旋混合物，并且可以单独地使用各对映体。在其 中肽可以以互变异构形式存在的情况和温度、溶剂和pH具体条件下，各 互变异构形式无论呈平衡形式还是主要呈一种形式都被构思为包括在本 发明中。因此光学活性形式的式(I)肽的单个对映体可以通过不对称合成、 由光学上纯的前体合成或通过外消旋体拆分获得。
式(II)肽是式(I)肽的具体立体异构形式，但本发明不应被理解为局限于 (II)所涵盖的立体异构形式。
本发明还旨在包括本发明肽的前药，所述前药在施用后通过代谢过程 进行化学转化，然后变为活性的药理肽。一般地，这种前药是本发明肽的 功能衍生物，它在体内易于转化为式(I)的肽。前药是在体内释放活性的式 (I)母体肽药物的任何共价键合的化合物。用于选择和制备合适的前药衍生 物的常规程序描述于例如″Design of Prodrugs(前药设计)″，编辑H. Bundgaard，Elsevier，1985中。前药的典型实例在官能部分具有生物学不稳 定的保护基团，例如通过羟基、羧基或氨基官能团的酯化。因此例如但不 限于，前药包括其中采用酯前药形式的式(I)肽，诸如，式(I)的R基团的低 级烷基酯，例如其中R是-OH，所述低级烷基酯在烷基中可以包括1-8个 碳；或者在芳烷基中具有6-12个碳的芳烷基酯。泛泛地说，前药包括可以 在体内被氧化、还原、胺化、脱氨化、羟化、脱羟基化、水解、脱水、烷 化、脱烷基化、酰化、脱酰化、磷酸化、脱磷酸化而产生式(I)的活性母体 肽药物的化合物。
本发明还包括与式(I)中所描述的肽相同，但是情况如下的肽：式(I)中 描绘的一个或多个原子被原子质量或质量数与天然常见的原子质量或质 量数不同的原子取代。可以掺入本发明的化合物中的同位素的实例包括 氢、碳、氮和氧的同位素，例如分别为2H、3H、13C、14C、15N、18O和17O。 含有上述同位素和/或其他原子的其他同位素的本发明肽和所述化合物的 药学上可接受的盐或溶剂合物在本发明的范围内。某些同位素标记的本发 明化合物，例如掺入了诸如3H和14C的放射活性同位素的那些化合物，可 能在多种测定中有用，例如药物和/或基底组织分布测定。较重的同位素的 取代，例如用氘(2H)取代一个或多个氢原子，可以在某些情况下提供药理 优点，包括增加的代谢稳定性。同位素标记的式(I)肽一般可以通过用同位 素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。
8.1合成下列结构的肽：
此肽具有氨基酸序列Ac-Arg-环(Asp-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-NH2。实 施例8.1的环肽是作为乙酸盐(AcOH)和三氟乙酸(TFA)盐形式制备的。 实施例8.1的环肽具有分子式C48H71N17O9，并且具有1030.19的计算分子 量。乙酸盐形式的实施例8.1环肽的分子量为1210.34，并且TFA盐形式 的分子量是1372.25。
在使用NDP-α-MSH的竞争性研究中评定了实施例8.1的环肽对 MC1-R、MC3-R、MC4-R和MC5-R的结合，并且发现其对MC4-R是选 择性的，对MC4-R的Ki值为4.0nM(4次研究的平均值)，对MC1-R的 Ki值为9nM(5次研究的平均值)，对MC3-R的Ki值为150nM(2次研 究的平均值)并且对MC5-R的Ki值为2270nM(2次研究的平均值)。在 功能研究中，测得实施例8.1的环肽是MC4-R的激动剂，对MC4-R的内 在活性为91％，其中NDP-α-MSH是100％，并且EC50是0.3nM(5次研 究的平均值)。
在大鼠阴茎勃起研究中，使用布美诺肽(bremelanotide)(式Ac-Nle- 环(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-OH)的非特异性MC4-R激动剂)作为阳性 对照，发现与媒介物对照相比实施例8.1的环肽在大鼠模型中导致观察到 的自发勃起统计学上显著地增加。通过皮下途径仅施用媒介物导致了1小 时内每只大鼠平均0.429±0.202的自发勃起(n＝7)，而皮下施用剂量为0.3 mg/kg的实施例8.1的环肽导致了1小时内每只大鼠平均2.286±0.286的 自发勃起(n＝7)并且剂量为1.0mg/kg时导致1小时内每只大鼠平均4.571± 1.088的自发勃起(n＝7)。以1mg/kg的剂量静脉内施用阳性对照布美诺肽 导致了1小时内每只大鼠平均4±0.535的自发勃起(n＝7)。
令人吃惊地和有利地，发现在使用通过遥测监测的手术植入的压力传 感器的收缩压大鼠模型中，实施例8.1的环肽导致了与在阴茎勃起研究中 产生相当结果的剂量的布美诺肽相比较少的收缩压增加。图1显示了交叉 研究的结果，该研究使用8只植入了传感器的动物，所述动物通过皮下注 射接受剂量为0.84μmol/kg和3.0μmol/kg的实施例8.1的环肽和静脉内注 射的剂量为1μmol/kg的布美诺肽，其中在相伴的研究中，相同剂量和施 用途径的每只大鼠每小时的阴茎勃起显示与1μmol/kg的布美诺肽相比3.0 μmol/kg的实施例8.1的环肽具有相同或更高的阴茎勃起结果。在包括通过 相同施用途径的相同量的实施例8.1的环肽和布美诺肽的比较的其他研究 中，获得了基本上类似的结果。
8.2合成下列结构的肽：
此肽具有氨基酸序列Ac-Arg-环(Asp-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-OH。实 施例8.2的环肽是作为TFA盐形式制备的。实施例8.2的环肽具有分子式 C48H70N16O10，并且具有1031.17的计算分子量。TFA盐形式的实施例8.2 的环肽的分子量为1373.23。
在使用NDP-α-MSH的竞争性研究中评定了实施例8.2的环肽对 MC1-R、MC3-R、MC4-R和MC5-R的结合，并且发现其对MC4-R是选 择性的，对MC4-R的Ki值为57nM(2次研究的平均值)，对MC1-R的 Ki值为234nM(3次研究的平均值)，对MC3-R的Ki值为5804nM(2 次研究的平均值)并且对MC5-R的Ki值超过10,000nM(2次研究的平均 值)。在功能研究中，测得实施例8.1的环肽是MC4-R的激动剂，对MC4-R 的内在活性为91％，其中NDP-α-MSH是100％，并且EC50是4nM(4次 研究的平均值)。
8.3合成下列结构的肽：
此肽具有氨基酸序列Ac-Arg-环(Glu-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Orn)-NH2。实 施例8.3的环肽是作为TFA盐形式制备的。实施例8.3的环肽具有分子式 C48H71N17O9，并且具有1030.19的计算分子量。TFA盐形式的实施例8.3 的环肽的分子量为1372.25。
在使用NDP-α-MSH的竞争性研究中评定了实施例8.3的环肽对 MC1-R、MC3-R、MC4-R和MC5-R的结合，并且发现其对MC4-R的Ki 值为0.65nM(2次研究的平均值)，对MC1-R的Ki值为1nM(3次研究 的平均值)，对MC3-R的Ki值为74nM(2次研究的平均值)并且对MC5-R 的Ki值为300nM(2次研究的平均值)。在功能研究中，测得实施例8.3 的环肽是MC4-R的激动剂，对MC4-R的内在活性为94％，其中 NDP-α-MSH是100％，并且EC50是0.3nM(5次研究的平均值)。
8.4合成下列结构的肽：
此肽具有氨基酸序列Ac-Arg-环(Glu-Dab-D-Phe-Arg-Trp-Orn)-OH。实 施例8.4的环肽是作为乙酸盐和TFA盐形式制备的。实施例8.4的环肽具 有分子式C48H70N16O10，并且具有1031.17的计算分子量。乙酸盐形式的实 施例8.4环肽的分子量为1211.32，并且TFA盐形式的分子量是1373.23。
在使用NDP-α-MSH的竞争性研究中评定了实施例8.4的环肽对 MC1-R、MC3-R、MC4-R和MC5-R的结合，并且发现其对MC4-R的Ki 值为8nM(2次研究的平均值)，对MC1-R的Ki值为4nM(1次研究)， 对MC3-R的Ki值为410nM(1次研究)并且对MC5-R的Ki值为2366nM (2次研究的平均值)。在功能研究中，测得实施例8.4的环肽是MC4-R 的激动剂，对MC4-R的内在活性为91％，其中NDP-α-MSH是100％，并 且EC50是3nM(9次研究的平均值)。
在大鼠阴茎勃起研究中，使用布美诺肽为阳性对照，发现与媒介物对 照相比实施例8.4的环肽在大鼠模型中导致观察到的自发勃起统计学上显 著地增加。通过皮下途径仅施用媒介物导致了1小时内每只大鼠平均0.429 ±0.202的自发勃起(n＝7)，而皮下施用剂量为0.3mg/kg的实施例8.4的环 肽导致了1小时内每只大鼠平均2.571±0.685的自发勃起(n＝7)并且剂量 为1.0mg/kg时导致1小时内每只大鼠平均5.286±0.918的自发勃起(n＝ 7)。以1mg/kg的剂量静脉内施用布美诺肽的阳性对照导致了1小时内每 只大鼠平均4±0.535的自发勃起(n＝7)。
令人吃惊地和有利地，发现在使用通过遥测监测的手术植入的压力传 感器的收缩压大鼠模型中，实施例8.4的环肽导致了与在阴茎勃起研究中 产生相当结果的剂量的布美诺肽相比较少的收缩压增加。图2显示了交叉 研究的结果，该研究使用8只植入了传感器的动物，所述动物通过皮下注 射接受剂量为1mg/kg的实施例8.4的环肽和静脉内注射的剂量为1mg/kg 的布美诺肽，其中在相伴的研究中，相同剂量和施用途径的每只大鼠每小 时的阴茎勃起显示出与1mg/kg的布美诺肽相比1mg/kg的实施例8.4的环 肽具有相同或更高的阴茎勃起结果。在包括相同施用途径的相同量的实施 例8.4的环肽和布美诺肽的比较的其他研究中，获得了基本上类似的结果。
尽管具体参考这些优选的实施方案详细描述了本发明，但是其他实施 方案可以达到相同的结果。本发明的改变和修改对于本领域的那些技术人 员来说是明显的并且本发明旨在涵盖所有这些修改和等同物。上文所引用 的所有参考文献、申请、专利和公布的整个公开内容均通过引用并入本文。