《一种麦角甾醇的用途及其制备的麦角甾醇脂质体.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种麦角甾醇的用途及其制备的麦角甾醇脂质体.pdf（7页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610140628.0 (22)申请日 2016.03.11 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105769878 A (43)申请公布日 2016.07.20 (73)专利权人 浙江中医药大学 地址 310053 浙江省杭州市滨江区滨文路 548号 (72)发明人 黄绳武 黄挺 (74)专利代理机构 杭州杭诚专利事务所有限公 司 33109 代理人 尉伟敏 赵越剑 (51)Int.Cl. A61K 31/575(2006.01) A61K 9/127(200。
2、6.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 11/00(2006.01) (56)对比文件 EP 1857112 A1,2007.11.21, CN 101584662 A,2009.11.25, B.Eleazar Cohen.Concentration- and time-dependence of amphotericin-B induced permeability changes across ergosterol- containing liposomes. Biochimica et Biophysica Acta .1986,第857卷第117-122页. 宋。
3、明杰等.椭圆嗜蓝孢孔菌中四种甾类化合 物的抗肿瘤活性及构效关系分析. 菌物学报 .2015,第34卷(第2期),第293-300页. 审查员 董潜 (54)发明名称 一种麦角甾醇的用途及其制备的麦角甾醇 脂质体 (57)摘要 本发明公开了一种麦角甾醇的用途及其制 备的麦角甾醇脂质体， 具体为麦角甾醇治疗肺癌 的用途， 一种用于治疗肺癌的麦角甾醇脂质体， 所述麦角甾醇脂质体中麦角甾醇的载药量为5- 20wt， 所述脂质体由卵磷脂与胆固醇组成， 卵 磷脂与胆固醇的摩尔比为1:1-7:1。 本发明的麦 角甾醇脂质体， 具有明显的抗肺癌作用， 且细胞 毒性低， 对人体的伤害小， 具有靶向性。 权利要求。
4、书1页 说明书5页 CN 105769878 B 2018.08.10 CN 105769878 B 1.一种用于治疗肺癌的麦角甾醇脂质体， 其特征在于： 所述麦角甾醇脂质体中麦角甾 醇的载药量为10wt， 所述脂质体由卵磷脂与胆固醇组成， 卵磷脂与胆固醇的摩尔比为5 1； 所述麦角甾醇脂质体的制备方法为： 称取卵磷脂、 胆固醇、 麦角甾醇， 加入氯仿溶解， 旋 转蒸发成薄膜， 真空干燥， 水化， 超声脱膜， 冰浴下探头超声处理， 过滤， 高压挤出得麦角甾 醇脂质体； 其中， 探头超声处理的参数为： 超声时间20min， 超声2s， 停1s， 超声功率900W； 高压挤出 的压力为400-50。
5、0psi。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105769878 B 2 一种麦角甾醇的用途及其制备的麦角甾醇脂质体 技术领域 0001 本发明涉及一种治疗肺癌药物， 特别涉及一种麦角甾醇的用途及其制备的麦角甾 醇脂质体。 背景技术 0002 牛樟芝中主要含有多糖、 三萜类化合物、 蛋白质、 维生素、 微量元素等化学成分， 另 外， 还有超氧岐化酶(SOD)、 腺苷、 核算、 凝集素、 氨基酸、 固醇类、 木质素、 血压稳定物质等。 三萜类化合物被认为是牛樟芝苦味的只要来源之一， 存在于菌丝体和子实体中。 到目前为 止， 发现了近30种三萜类化合物， 主要为羊毛甾烷和麦角甾烷两大母体结。
6、构。 0003 牛樟芝最早被人食用是用来缓解宿醉和治疗肝部疾病， 近年来也被广泛研究， 进 一步对牛樟芝抗肝癌、 保肝作用进行了确认。 牛樟芝研究的另一个热点是牛樟芝的抗肿瘤 作用， 除了肝癌， 还包括乳腺癌、 结肠癌、 口腔癌等。 徐泰浩等人对1992-2010年台湾樟芝相 关硕博论文进行了概括分析发现， 对牛樟芝的生物活性研究可分为24类， 见表1， 研究最多 的前5类依次排序为： (1)抗肿瘤， (2)保肝， (3)抗氧化， (4)免疫调节， (5)抗发炎， 显示了牛 樟芝主要的药理活性， 另外， 牛樟芝对心脑血管疾病、 降血糖、 降血脂等方面也显示了一定 的药理活性。 虽然现有技术报道。
7、了牛樟芝可以抗肝癌、 乳腺癌、 结肠癌、 口腔癌等， 但是并未 发现其具有良好的抗肺癌作用， 此外， 虽然认知到牛樟芝具有抗癌作用， 但是， 由于牛樟芝 成分复杂， 人们并未清楚具体何种成分在发挥针对性的抗癌作用， 这极大阻碍了抗癌药物 的研究。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种麦角甾醇治疗肺癌的用途。 0005 本发明还提供了一种麦角甾醇脂质体， 具有明显的抗肺癌作用， 且细胞毒性低， 对 人体的伤害小， 具有靶向性。 0006 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 0007 一种麦角甾醇治疗肺癌的用途。 0008 一种用于治疗肺癌的麦角甾醇脂质体， 所述麦角甾醇脂质体中麦角。
8、甾醇的载药量 为5-20wt， 所述脂质体由卵磷脂与胆固醇组成， 卵磷脂与胆固醇的摩尔比为1:1-7:1。 麦 角甾醇的载药量为麦角甾醇的重量除以麦角甾醇+脂质体的重量之和。 0009 发明人经过长期研究， 意外发现麦角甾醇具有明显的抗肺癌作用， 且细胞毒性低， 对人体的伤害小。 而单纯的麦角甾醇在进入人体后并不能有效直达病灶， 因此， 将麦角甾醇 包封于脂质体， 使其能到达病灶发挥功效， 脂质体的靶向性， 使得麦角甾醇能更好发挥抗肺 癌作用。 0010 作为优选， 所述麦角甾醇脂质体中麦角甾醇的载药量为8-15wt。 0011 作为优选， 所述麦角甾醇脂质体中麦角甾醇的载药量为10wt。 0。
9、012 作为优选， 卵磷脂与胆固醇的摩尔比为3:1-6:1。 说 明 书 1/5 页 3 CN 105769878 B 3 0013 作为优选， 卵磷脂与胆固醇的摩尔比为5:1。 0014 作为优选， 所述麦角甾醇脂质体的制备方法为： 称取卵磷脂、 胆固醇、 麦角甾醇， 加 入氯仿溶解， 旋转蒸发成薄膜， 真空干燥， 水化， 超声脱膜， 冰浴下探头超声处理， 过滤， 高压 挤出得麦角甾醇脂质体。 0015 作为优选， 超声处理的参数为： 超声时间20min， 超声2s， 停1s， 超声功率900W。 0016 作为优选， 高压挤出的压力为400-500psi。 0017 作为优选， 所述麦角甾。
10、醇的制备方法如下： 0018 麦角甾醇脂质体作为治疗肺癌药物的用途， 所述麦角甾醇脂质体中麦角甾醇的载 药量为10wt， 所述脂质体由卵磷脂与胆固醇组成， 卵磷脂与胆固醇的摩尔比为5:1。 0019 本发明的有益效果是： 具有明显的抗肺癌作用， 且细胞毒性低， 对人体的伤害小， 具有靶向性。 具体实施方式 0020 下面通过具体实施例， 对本发明的技术方案作进一步的具体说明。 0021 本发明中， 若非特指， 所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。 下述实施例中的方法， 如无特别说明， 均为本领域的常规方法。 0022 实施例1 0023 一种麦角甾醇治疗肺癌的用途。 0024 。
11、实施例2 0025 一种用于治疗肺癌的麦角甾醇脂质体， 所述麦角甾醇脂质体中麦角甾醇(市售， 美 国Sigma公司)的载药量为5-20wt， 所述脂质体由卵磷脂与胆固醇组成， 卵磷脂与胆固醇 的摩尔比为1:1-7:1。 0026 麦角甾醇脂质体最佳制备工艺 0027 1、 单因素考察 0028 1.1卵磷脂与胆固醇摩尔比考察 0029 本实验考察了麦角甾醇载药5时， 卵磷脂与胆固醇的比例(摩尔比)， 设置二者比 例为1:1、 3:1、 5:1、 7:1， 其包封率分别为71.59、 89.15、 92.58、 96.62。 二者比例为 1:1时， 由于胆固醇的比例较高， 脂质体的刚性增强， 而。
12、二者为7:1时， 放置后容易出现沉淀。 0030 1.2探头超声时间考察 0031 薄膜分散法制备脂质体后(称取卵磷脂、 胆固醇、 麦角甾醇， 加入氯仿溶解， 旋转蒸 发成薄膜， 真空干燥， 水化， 超声脱膜)， 通过探头超声将大粒径的脂质体整粒成小粒径脂质 体。 本实验考察了不同探头超声时间对于麦角甾醇脂质体包封率的影响。 设置探头超声时 间为10min、 20min、 30min、 40min， 其包封率分别为79.45、 91.73、 95.86、 95.94。 随 着时间增加， 包封率随之增大， 30min时包封率不再变化， 且探头超声时间过长， 容易导致脂 质体破裂。 0032 1.。
13、3麦角甾醇载药量考察 0033 本实验考察了不同麦角甾醇载药量对包封率的影响。 麦角甾醇载药量为5、 10、 15、 20， 其包封率分别为90.76、 85.81、 69.79、 73.09。 0034 2响应面试验 说 明 书 2/5 页 4 CN 105769878 B 4 0035 2.1星点设计 0036 单因素试验结果表明卵磷脂与胆固醇比例、 探头超声时间和载药量3个因素对麦 角甾醇包封率具有显著影响。 根据星点设计原理， 选择卵磷脂与胆固醇比例、 探头超声时间 和载药量为自变量， 每个自变量确定3个水平， 分别用代码1， 0， 1表示， 共15个试验点(3个 中心点)。 每个试验。
14、平行3次进行。 以麦角甾醇脂质体包封率为评价指标， 采用星点设计(表 1)优选制备工艺条件。 0037 表1麦角甾醇脂质体制备工艺星点试验安排(n3) 0038 0039 2.2模型的建立与方差分析 0040 运用Design-Expert.V 8.0.6.1软件对表中数据进行二次多元回归拟合， 得自变 量与因变量间的回归方程Y90.40+17.87X12.58X2+4.14X37.62X1X2+6.28X1X3+ 3.03X2X321.95X124.29X222.44X32。 对该回归模型进行显著性检验。 表2结果表明X1， X12 对响应值的线性效应极显著， X2， X3， X22对响应值。
15、的曲面效应作用显著， 交互项X1X2、 X1X3作用 显著。 该模型的F82.84， P0.0001， 表明该二次多元回归模型极显著， 回归方程相关系数 (r)0.9967， 说明模型能解释99.67响应值的变化， 拟合情况良好。 0041 表2回归模型方差分析 说 明 书 3/5 页 5 CN 105769878 B 5 0042 0043 2.3响应面分析 0044 根据回归方程， 在保持1个因素编码值为0时， 运用Design-Expert.V8.0.6.1软件 绘制另2个因素与麦角甾醇包封率关系的三维响应面图。 响应面为响应值对两两交互因素 所构成的三维空间曲线图， 效应面曲线越陡峭，。
16、 说明各自变量对响应值的影响越明显。 取回 归模型最大值点， 对应的实测值为卵磷脂与胆固醇比例为5:1， 探头超声时间为20min， 麦角 甾醇载药量为10。 0045 2.4验证试验 0046 为验证模型方程的适用性， 精密称取卵磷脂98mg， 胆固醇10mg， 麦角甾醇12mg， 共3 份， 按以下最佳制备工艺条件进行验证试验， 结果3批脂质体包封率的平均值为90.49， RSD 2.64， 与预测值90.40的偏差0.10， 表明建立的数学模型具有良好的预测性， 优 选的工艺条件重复性好。 0047 麦角甾醇脂质体最佳制备工艺为： 卵磷脂与胆固醇摩尔比5:1， 麦角甾醇载药 10、 探头。
17、超声20min。 0048 具体工艺条件： 卵磷脂98mg、 胆固醇10mg以及麦角甾醇12mg， 用10mL氯仿充分溶解 后， 置于40水浴的旋转蒸发仪上旋干， 真空干燥2h， 加入10mL蒸馏水于室温下置于水平摇 床上水化30min， 转速140rpmmL-1。 水化后， 超声脱膜， 将脂质体放置于冰浴下， 探头超声 20min， 超声2s， 停1s， 超声功率900W。 依次采用0.8 m、 0.45 m、 0.22 m微孔滤膜过滤， 最后用 0.1 m的聚碳酸酯膜高压挤出(压力为400-500psi)， 即得。 0049 麦角甾醇抗肺癌效果验证 0050 (一)麦角甾醇肺癌A549细胞。
18、增殖抑制作用研究(MTT试验) 0051 取对数生长期A549非小细胞肺癌细胞(市售， 中国科学院生命科学研究院细胞 库)， 用含0.25EDTA的胰酶消化后调整细胞悬液浓度为5104个mL-1。 800rpmmin-1离 心5min后， 用3mL一次性吸管吹打混匀成单细胞悬液， 每孔加入100 L于96孔培养板， 于37 、 5CO2培养箱中培养至细胞融合80后加药处理。 其中给药组(麦角甾醇组)加入100 L 说 明 书 4/5 页 6 CN 105769878 B 6 不同浓度不含FBS的药物溶液， 正常对照组加入100 L不含FBS培养液。 每个浓度各设5个复 孔， 分别于加药后第12。
19、、 24、 48、 72h后进行MTT检测。 每孔加入MTT溶液20 L， 37孵育4h后， 采用酶标仪于492nm处测定各孔吸光度OD值， 结果见表3。 并计算不同时间点下各个药物的 半数抑制率IC50值， 结果见表4。 本实验重复3次进行。 0052表3不同作用时间点下的A549细胞抑制率 0053 0054 表4不同作用时间点下的IC50值 0055 0056 由表3和表4的结果可知， 麦角甾醇能抑制A549细胞的生长且呈浓度依赖性， 药物 作用12h， 麦角甾醇对A549细胞的IC50为36.94 gmL-1； 药物作用24h， 麦角甾醇对A549细胞 的IC50为8.96 gmL-1； 作用48h IC50为18.92 gmL-1； 72h为9.82 gmL-1。 0057 以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案， 并非对本发明作任何形式上的 限制， 在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。 说 明 书 5/5 页 7 CN 105769878 B 7 。